RU2433404C1

RU2433404C1 - Method of differential diagnostics of tick-borne encephalitis, ixodid tick-borne borreliosis and their mixed infections of children

Info

Publication number: RU2433404C1
Application number: RU2010123311/15A
Authority: RU
Inventors: Валентина Александровна Шаркова (RU); Валентина Александровна Шаркова; Альвина Васильевна Гордеец (RU); Альвина Васильевна Гордеец; Анастасия Анатольевна Черникова (RU); Анастасия Анатольевна Черникова
Priority date: 2010-06-07
Filing date: 2010-06-07
Publication date: 2011-11-10

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: method includes determining complex of serum cytokines in period of disease beginning. In case of tick-born encephalitis level of interleukin-1 α is determined in interval 298-358 pg/ml, interferon-γ-295-350 pg/ml and interleukin-10-115-150 pg/ml; at ixodid tick-borne borreliosis - interleukin-1 α 178-270 pg/ml, interferon-γ 125-190 pg/ml and interleukin 10-11.5-18 pg/ml; in case of mixed infection, generated by virus of tick-borne encephalitis and borrelia - interleukin-1 α- 30-75 pg/ml, interferon-γ 115-130 pg/ml and interleukin-10 -22-65 pg/ml.

EFFECT: method is simple, makes it possible to determine disease causative agent reliably and accurately in short terms.

1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням у детей.The invention relates to medicine, namely to infectious diseases in children.

Инфекции, возбудители которых передаются детям иксодовыми клещами Ixodes persulcatus и Ixodes ricinus, составляют достаточно большую группу инфекционных заболеваний, разнообразных как по этиологии, так и по своим клиническим проявлениям. Среди них наибольшую актуальность для здравоохранения на территории Российской Федерации представляют клещевые энцефалиты (КЭ) и иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ), что обусловлено их широкой распространенностью, большой социально-экономической значимостью из-за высокой заболеваемости детского населения и нерешенности многих вопросов диагностики. В последние годы участились случаи сочетанных вирусных и бактериальных заболеваний: клещевого энцефалита в сочетании с иксодовым клещевым боррелиозом - микстинфекциями. Эти сочетанные инфекции характеризуются повсеместной распространенностью на территории Российской Федерации, полиморфизмом клинических проявлений и сложностью диагностики в первые дни заболевания. Улучшение диагностики в ранние сроки заболевания и лечение занимают в последнее время значительное место в проблеме изучения клещевых инфекций в России (Ранний цитокиновый и иммунный ответ при иксодовом клещевом боррелиозе у детей. / Г.Ф.Железникова, Н.В.Скрипченко, Ю.П.Васильева и др. // Мед. иммунология. - 2002. - Т.4, №3. - С.459-466; Самаров М.Н., Воробьева Н.Н., Мерзлова Н.Б. Микст-инфекции, передающиеся клещами, у детей Пермского края. / Медицина в Кузбассе - 2008. - №5. - С.138-139).Infections, the causative agents of which are transmitted to children by ixodid ticks Ixodes persulcatus and Ixodes ricinus, constitute a fairly large group of infectious diseases that are diverse both in etiology and in their clinical manifestations. Among them, tick-borne encephalitis (TBE) and ixodic tick-borne borreliosis (IKB) are of the greatest relevance for healthcare in the Russian Federation, due to their widespread prevalence, great socio-economic significance, due to the high incidence of the child population and the unresolved many diagnostic issues. In recent years, cases of combined viral and bacterial diseases have become more frequent: tick-borne encephalitis in combination with tick-borne tick-borne borreliosis - mixed infections. These combined infections are characterized by widespread prevalence on the territory of the Russian Federation, polymorphism of clinical manifestations and the complexity of diagnosis in the early days of the disease. Improving the diagnosis in the early stages of the disease and treatment have recently occupied a significant place in the problem of studying tick-borne infections in Russia (Early cytokine and immune response in children with tick-borne tick-borne borreliosis. / G.F.Zheleznikova, N.V. Skripchenko, Yu.P. Vasilyeva et al. // Medical immunology. - 2002. - T.4, No. 3. - P.459-466; Samarov MN, Vorobyeva NN, Merzlova NB Mixed infections, transmitted by ticks in children of the Perm Territory./ Medicine in Kuzbass - 2008. - No. 5. - S.138-139).

Клинические проявления клещевых микстинфекций разнообразны, что создает определенные трудности в своевременной и правильной диагностике, а также при дифференциально-диагностическом разграничении его от других заболеваний, передающихся при укусе клеща (Диагностика, лечение и профилактика клещевого энцефалита, болезни Лайма и их микст-инфекций. / Т.А.Захарычева, Г.М.Воронкова, Т.В.Мжельская и др.: пособие для врачей. - Хабаровск, 2003. - 64 с.).The clinical manifestations of tick-borne mixed infections are diverse, which creates certain difficulties in timely and correct diagnosis, as well as in the differential-diagnostic differentiation of it from other diseases transmitted by a tick bite (Diagnosis, treatment and prevention of tick-borne encephalitis, Lyme disease and their mixed infections. / T.A. Zakharycheva, G.M. Voronkova, T.V. Mzhelskaya and others: a manual for doctors. - Khabarovsk, 2003. - 64 p.).

Методы диагностики клещевых инфекций не стандартизированы. Разработаны способы выявления каждой инфекции в отдельности. Наиболее распространенным методом диагностики клещевого энцефалита и иксодового клещевого боррелиоза является метод иммуноферментного анализа (ИФА). Но серологическое обследование имеет существенные недостатки. Одним из них является невозможность установления диагноза на раннем этапе инфекции при отсутствии антител у больного (Бедарева Т.Ю., Попонникова Т.В., Вахраммева Т.Н. Изменение цитокинового статуса и уровня антимикробных пептидов при клещевых нейроинфекциях у детей. / Сибирский медицинский журнал - 2008. - №7. - С.22-25).Methods for the diagnosis of tick-borne infections are not standardized. Methods have been developed to identify each infection individually. The most common diagnostic method for tick-borne encephalitis and ixodic tick-borne borreliosis is the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). But serological examination has significant drawbacks. One of them is the impossibility of establishing a diagnosis at an early stage of infection in the absence of antibodies in the patient (Bedareva T.Yu., Poponnikova T.V., Vakhrammeva T.N. Change in the cytokine status and level of antimicrobial peptides in tick-borne neuroinfection in children. / Siberian Medical Journal - 2008. - No. 7. - S.22-25).

Специфические иммуноглобулины класса М при клещевом энцефалите определяются с конца первой-второй, при иксодовом клещевом боррелиозе с третьей-четвертой недели заболевания (Современные представления о диагностике клещевых инфекций. / А.Н.Усков, К.Д.Байгеленов, О.А.Бургасова, Н.Е.Гринченко. / Сибирский медицинский журнал - 2008. - №7. - С.148-152).Specific class M immunoglobulins in tick-borne encephalitis are determined from the end of the first or second, in case of tick-borne tick-borne borreliosis from the third to fourth week of the disease (Modern ideas about the diagnosis of tick-borne infections. / A.N. Uskov, K.D. Baygelenov, O.A. Burgasova , N.E. Grinchenko. / Siberian Medical Journal - 2008. - No. 7. - S.148-152).

Известны способы экспресс-диагностики клещевого энцефалита, основанные на исследовании сыворотки крови методом полярограммы надосадочной жидкости («Способ диагностики клещевого энцефалита» Самоделкин Е.И., патент РФ №2095814 от 10.11.1997 г.), однако он требует большой трудоемкости и позволяет определять только вирус клещевого энцефалита. В способе экспресс-диагностики КЭ по наличию в лейкоцитарной массе в сыворотке крови с гепарином специфических антигенов клещевого энцефалита («Способ экспресс-диагностики клещевого энцефалита» Леонова Г.Н., Борисович В.Г., Гагач Г.Ф., Сирант И.В., Филина О.В. патент РФ №2217758 от 27.11.2003 г.) также есть существенный недостаток - способность идентифицировать только антиген вируса КЭ.Known methods for the rapid diagnosis of tick-borne encephalitis based on the study of blood serum by the polarogram method of the supernatant ("Method for the diagnosis of tick-borne encephalitis" Samodelkin EI, RF patent No. 2095814 from 10.11.1997), but it requires a lot of labor and allows to determine tick-borne encephalitis virus only. In the method of rapid diagnosis of TBE by the presence in the leukocyte mass in blood serum with heparin of specific tick-borne encephalitis antigens (“The method of rapid diagnosis of tick-borne encephalitis” Leonova GN, Borisovich VG, Gagach GF, Sirant I. V., Filina O.V. RF patent No. 2217758 of 11/27/2003) there is also a significant drawback - the ability to identify only the antigen of the TBE virus.

Для экспресс-диагностики ИКБ в последние годы широко применяется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя. Однако многие авторы описывают низкую чувствительность метода от 40 до 70% и невысокую специфичность, т.к. могут быть ложноположительные результаты в случае наличия других спирохетозных заболеваний у человека (Диагностика, лечение и профилактика клещевого энцефалита, болезни Лайма и их микст-инфекций. / Т.А.Захарычева, Г.М.Воронкова, Т.В.Мжельская и др.: пособие для врачей. - Хабаровск, 2003. - 64 с.). Метод ПЦР диагностики при КЭ не стандартизирован и, по мнению ряда авторов, считается вспомогательным к серологическому обследованию (Марьина Н.М., Шетекаури С.А., Ольховский И.А. Возможности ранней лабораторной диагностики клещевых нейроинфекций: клещевого энцефалита и Лайм-боррелиоза. // Бюллетень сибирской медицины. - Приложение 1. Новосибирск, 2008. - С.55-57; Миронов И.Л. Диагностика клещевого энцефалита на современном этапе. // Инфекционные болезни - 2006. - Т.4, №1. - С.90-93).In recent years, the method of polymerase chain reaction (PCR) has been widely used for rapid diagnosis of ICD, which allows one to determine the presence of a pathogen, even if only a few DNA molecules are present in the sample. However, many authors describe the low sensitivity of the method from 40 to 70% and low specificity, because there may be false positive results in the presence of other spirochetal diseases in humans (Diagnosis, treatment and prevention of tick-borne encephalitis, Lyme disease and their mixed infections. / T.A. Zakharycheva, G.M. Voronkova, T.V. Mzhelskaya and others. : a manual for doctors. - Khabarovsk, 2003. - 64 p.). The PCR diagnostic method for CE is not standardized and, according to some authors, is considered auxiliary to serological examination (Maryina N.M., Shetekauri S.A., Olkhovsky I.A. Possibilities of early laboratory diagnosis of tick-borne neuroinfection: tick-borne encephalitis and Lyme borreliosis // Bulletin of Siberian medicine. - Appendix 1. Novosibirsk, 2008. - P.55-57; IL Mironov. Diagnosis of tick-borne encephalitis at the present stage // Infectious diseases - 2006. - V. 4, No. 1. - S.90-93).

Таким образом, улучшение диагностики клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза, микстинфекций на первой неделе заболевания может иметь неоценимое значение для постановки правильного диагноза. Этот недостаток устраняется в предлагаемом способе.Thus, improving the diagnosis of tick-borne encephalitis, ixodic tick-borne borreliosis, mixed infections in the first week of the disease can be invaluable for making the correct diagnosis. This disadvantage is eliminated in the proposed method.

Прототипом заявленного способа является статья Бедаревой Т.Ю. с соавт. «Состояние цитокинового статуса у детей с клещевыми инфекциями в Кузбассе» (Мать и Дитя в Кузбассе - 2008. - №3 (34). - С.26-29). Сущность способа заключается в том, что для мониторинга клещевых инфекций определяют комплекс цитокинов в первые 3 дня заболевания - интерлейкин-6 (ИЛ-6), интерлейкин-8 (ИЛ-8), интерлейкин-10 (ИЛ-10), интерферон-α (ИФНα), интерферон-γ (ИФНγ). Однако набор указанных пептидов не позволяет точно охарактеризовать патогенетические механизмы, возникающие в первые дни заболевания при клещевых инфекциях. Так, в наборе Бедаревой Т.Ю. с соавт. отсутствует интерлейкин-1 альфа, считающийся ответственным за пирогенные реакции при клещевом энцефалите и ведущим сывороточным пептидом при формировании мигрирующей эритемы в месте укуса клеща при ИКБ. Также авторы определяют ИЛ-6, который относится как к про-, так и противовоспалительным цитокинам, и его уровень при клещевых инфекциях зависит от уровня ИЛ-1α, который ученые не определяли. Хемокин ИЛ-8 наиболее целесообразно определять в случае наличия тяжелых бактериальных осложнений у инфекционных больных, которые достаточно редки у пациентов с клещевыми инфекциями. Следует отметить, что клиническая картина микстинфекций в Кемеровской области отличается преобладанием лихорадочных и менингеальных форм, тогда как на территории остальной России в случае микстинфекций доминирует клиника боррелиоза, что мы и зафиксировали в своих наблюдениях. Авторы устанавливают следующие уровни этих цитокинов: при ИКБ ИФНα - от 4,5±1,1 пг/мл до 43,3±3,6 пг/мл, при КЭ - от 1,1±0,2 пг/мл до 15,1±3,2 пг/мл, при микстинфекции от 12,5±3,2 пг/мл при лихорадочных формах до 15,8±3,2 пг/мл при менингеальной. ИФНγ при ИКБ от 194±35,4 пг/мл до 436,6±25,8 пг/мл, при КЭ от 55,6±9,2 пг/мл (при лихорадочной форме КЭ) и 87,9±22,1 пг/мл (при менингоэнцефалитической) до 237,5±13,2 пг/мл при менингеальной форме КЭ, при микстинфекции - от 235,2±12,8 пг/мл при лихорадочных формах до 237,5±13,6 пг/мл при менингеальных. ИЛ-6 при ИКБ от 296,7±15,2 пг/мл до 305,4±15,9 пг/мл, при менингеальной форме КЭ - 260,2±9,4 пг/мл, при лихорадочной форме - 253,2±1,5 пг/мл, при менингоэнцефалитической 252±0,6 пг/мл, при микстинфекции - от 302,8±12,3 пг/мл при лихорадочной форме до 311,4±16,7 пг/мл при менингеальной. Интерлейкин-8 при ИКБ от 102,5±38,4 пг/мл до 180,3±47,5 пг/мл, при лихорадочной форме КЭ 40,6±4,3 пг/мл, при менингеальной - 54,2±5,6 пг/мл, при менингоэнцефалитической 48,5±3,2 пг/мл, при микстинфекции при лихорадочной форме - 128,3±37,2 пг/мл, при менингеальной - 152,3±47,5 пг/мл. ИЛ-10 при ИКБ от 9,6±1,4 пг/мл до 16,5±3,7 пг/мл, при лихорадочной форме КЭ 2,7±0,4 пг/мл, при менингеальной - 3,6±0,7 пг/мл, при менингоэнцефалитической 2,4±0,5 пг/мл, при микстинфекции при лихорадочной форме 10,8±2,7 пг/мл, при менингеальной - 12,6±3,1 пг/мл.The prototype of the claimed method is an article Bedareva T.Yu. et al. “The status of the cytokine status in children with tick-borne infections in Kuzbass” (Mother and Child in Kuzbass - 2008. - No. 3 (34). - P.26-29). The essence of the method lies in the fact that to monitor tick-borne infections, a complex of cytokines is determined in the first 3 days of the disease — interleukin-6 (IL-6), interleukin-8 (IL-8), interleukin-10 (IL-10), interferon-α (IFNα), interferon-γ (IFNγ). However, the set of these peptides does not accurately characterize the pathogenetic mechanisms that arise in the early days of the disease with tick-borne infections. So, in the set Bedareva T.Yu. et al. there is no interleukin-1 alpha, which is considered responsible for pyrogenic reactions in tick-borne encephalitis and the leading serum peptide in the formation of migratory erythema at the site of a tick bite in IKB. The authors also determine IL-6, which refers to both pro- and anti-inflammatory cytokines, and its level in tick-borne infections depends on the level of IL-1α, which scientists have not determined. Chemokine IL-8 is most appropriate to determine in the case of severe bacterial complications in infectious patients, which are quite rare in patients with tick-borne infections. It should be noted that the clinical picture of mixed infections in the Kemerovo region is characterized by a predominance of febrile and meningeal forms, while in the rest of Russia, in the case of mixed infections, the clinic of borreliosis dominates, which we recorded in our observations. The authors establish the following levels of these cytokines: with IFNα IKB - from 4.5 ± 1.1 pg / ml to 43.3 ± 3.6 pg / ml, with CE - from 1.1 ± 0.2 pg / ml to 15 , 1 ± 3.2 pg / ml, with mixed infection from 12.5 ± 3.2 pg / ml with febrile forms to 15.8 ± 3.2 pg / ml with meningeal. IFNγ with ICD from 194 ± 35.4 pg / ml to 436.6 ± 25.8 pg / ml, with CE from 55.6 ± 9.2 pg / ml (with febrile form of CE) and 87.9 ± 22, 1 pg / ml (with meningoencephalitis) up to 237.5 ± 13.2 pg / ml with meningeal form of EC, with mixed infection - from 235.2 ± 12.8 pg / ml with febrile forms up to 237.5 ± 13.6 pg / ml for meningeal. IL-6 with an ICD from 296.7 ± 15.2 pg / ml to 305.4 ± 15.9 pg / ml, with a meningeal form of CE - 260.2 ± 9.4 pg / ml, with a febrile form - 253, 2 ± 1.5 pg / ml, with meningoencephalitis 252 ± 0.6 pg / ml, with mixed infection - from 302.8 ± 12.3 pg / ml with febrile form to 311.4 ± 16.7 pg / ml with meningeal . Interleukin-8 with ICD from 102.5 ± 38.4 pg / ml to 180.3 ± 47.5 pg / ml, with febrile EC 40.6 ± 4.3 pg / ml, with meningeal - 54.2 ± 5.6 pg / ml, with meningoencephalic 48.5 ± 3.2 pg / ml, with mixed infection with febrile form - 128.3 ± 37.2 pg / ml, with meningeal - 152.3 ± 47.5 pg / ml . IL-10 with ICD from 9.6 ± 1.4 pg / ml to 16.5 ± 3.7 pg / ml, with febrile form of CE 2.7 ± 0.4 pg / ml, with meningeal - 3.6 ± 0.7 pg / ml, with meningoencephalitis 2.4 ± 0.5 pg / ml, with mixed infection with a febrile form 10.8 ± 2.7 pg / ml, with meningeal - 12.6 ± 3.1 pg / ml.

К недостаткам указанного метода относится несовершенство набора цитокинов и отсутствие случаев микстинфекции с доминированием клиники ИКБ, неполный набор цитокинов - отсутствует ИЛ-1α. Определение ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИФНα, ИФНγ требует больших финансовых вложений, трудоемко, не отличается в описанном способе точностью исследований (большая ошибка, недостоверные различия в уровнях сывороточных цитокинов как внутри одного заболевания, так и между различными этиологиями), поэтому для диагностики в первые три дня заболевания КЭ, ИКБ и микстинфекции не может использоваться.The disadvantages of this method include the imperfection of the set of cytokines and the absence of mixed infections with a predominance of the ICD clinic, an incomplete set of cytokines - IL-1α is absent. The determination of IL-6, IL-8, IL-10, IFNα, IFNγ requires large financial investments, time-consuming, does not differ in the accuracy of the studies described (big error, unreliable differences in the levels of serum cytokines both within the same disease and between various etiologies ), therefore, for diagnosis in the first three days of the disease, TBE, ICD and mixed infection cannot be used.

Задача изобретения - усовершенствование способа дифференциальной диагностики мистинфекций клещевого энцефалита с иксодовым клещевым боррелиозом (от моноинфекций) у детей в первые три дня заболевания, что крайне важно для прогноза развития патологии и позволяет своевременно назначить этиотропную и патогенетическую терапию.The objective of the invention is the improvement of the method for the differential diagnosis of tick-borne encephalitis misinfections with tick-borne tick-borne borreliosis (from mono-infections) in children in the first three days of the disease, which is extremely important for predicting the development of pathology and allows for timely administration of etiotropic and pathogenetic therapy.

Технический результат настоящего изобретения состоит в том, что метод прост, доступен. Использование способа дает возможность одновременного обследования большого количества проб, позволяет в ранние сроки косвенно определить возбудителя болезни, что крайне важно для прогноза развития заболевания и позволяет своевременно назначить этиотропную и патогенетическую терапию.The technical result of the present invention is that the method is simple, affordable. Using the method allows the simultaneous examination of a large number of samples, allows you to indirectly determine the causative agent of the disease in the early stages, which is extremely important for predicting the development of the disease and allows you to timely assign etiotropic and pathogenetic therapy.

Авторами не найдены в литературе данные по ранней диагностике клещевых инфекций на основе анализа цитокинов.The authors did not find in the literature data on early diagnosis of tick-borne infections based on the analysis of cytokines.

Заявленный способ диагностики возбудителей клещевых инфекций с использованием сывороточных цитокинов имеет следующие общие признаки с прототипом:The claimed method for the diagnosis of tick-borne pathogens using serum cytokines has the following common features with the prototype:

1. Методика забора исследуемого материала кровь из локтевой вены не более 3-5 мл двукратно).1. The method of sampling the test material blood from the ulnar vein no more than 3-5 ml twice).

2. Определение сывороточных цитокинов у детей больных клещевым энцефалитом, иксодовым клещевым боррелиозом и их микстинфекциями.2. Determination of serum cytokines in children with tick-borne encephalitis, tick-borne tick-borne borreliosis and their mixed infections.

Отличительными от прототипа признаками заявляемого способа являются:Distinctive features of the prototype of the features of the proposed method are:

1. Определение уровня трех цитокинов в сыворотке крови - ИЛ-1α, ИФНγ, ИЛ-10.1. Determination of the level of three cytokines in blood serum - IL-1α, IFNγ, IL-10.

2. Определение статистически достоверных различий в секреции ИЛ-1α, ИФНγ, ИЛ-10 объясняется тем, что авторы определяли вышеуказанные цитокины при иных формах клещевых инфекций у детей.2. The determination of statistically significant differences in the secretion of IL-1α, IFNγ, IL-10 is explained by the fact that the authors determined the above cytokines in other forms of tick-borne infections in children.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе дифференциальной диагностики клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза и их микстинфекций у детей, включающий оценку иммунологических параметров методом иммуноферментного анализа, на ранних стадиях заболевания определяют комплекс сывороточных цитокинов: интерлейкин-1 альфа (ИЛ-1α), интерферон-гамма (ИФНγ), интерлейкин-10 (ИЛ-10), устанавливают уровни этих цитокинов: при значении интерлейкин-1 альфа (ИЛ-1α) выше 298 пг/мл, интерлейкин-10 (ИЛ-10) выше 115 пг/мл и интерферон-гамма ИФНγ выше 295 пг/мл диагностируют клещевой энцефалит, а при значении интерлейкин-1 альфа (ИЛ-1α) выше 178 пг/мл, интерферон-гамма (ИФНγ) выше 125 пг/мл, интерлейкин-10 (ИЛ-10) выше 11,5 пг/мл диагностируют иксодовый клещевой боррелиоз, при этом их мистинфекции диагностируют при значении интерлейкин-1 альфа (ИЛ-1α) выше 30 пг/мл, интерферон-гамма (ИФНγ) выше 115 пг/мл, интерлейкин-10 (ИЛ-10) выше 22 пг/мл.The specified technical result is achieved by the fact that in the method of differential diagnosis of tick-borne encephalitis, ixodic tick-borne borreliosis and their mixed infections in children, including the evaluation of immunological parameters by enzyme immunoassay, in the early stages of the disease, a complex of serum cytokines is determined: interleukin-1 alpha (IL-1α), interferon-gamma (IFNγ), interleukin-10 (IL-10), the levels of these cytokines are established: with the value of interleukin-1 alpha (IL-1α) above 298 pg / ml, interleukin-10 (IL-10) above 115 pg / ml and interferon-gum If IFNγ is higher than 295 pg / ml, tick-borne encephalitis is diagnosed, and when the value of interleukin-1 alpha (IL-1α) is higher than 178 pg / ml, interferon-gamma (IFNγ) is higher than 125 pg / ml, interleukin-10 (IL-10) is higher 11.5 pg / ml is diagnosed with tick-borne tick-borne borreliosis, while their misinfections are diagnosed with interleukin-1 alpha (IL-1α) above 30 pg / ml, interferon-gamma (IFNγ) above 115 pg / ml, interleukin-10 (IL -10) above 22 pg / ml.

Клещевой энцефалит в Приморье, также как и на различных территориях Российской Федерации (Северо-Западном регионе, Новосибирской области, Красноярском крае, в Приангарье) часто протекает в виде очаговых форм, которые в аналоге были представлены всего в 6% случаев. В наших исследованиях очаговые формы клещевого энцефалита встречались в 45,6% наблюдений. ИКБ, анализируемый в аналоге, характеризуется практически полным отсутствием эритемных форм болезни (6%), тогда как на большинстве территорий РФ идет наоборот преобладание типичных форм заболевания с развитием мигрирующей эритемы в месте укуса клеща и в наших наблюдениях она встречалась также достаточно часто (в 47,5% случаев). Микстинфекция в Приморье отличается преобладанием в клинической картине клиники боррелиоза, так же как и в большинстве субъектов Российской Федерации, тогда как Кемеровскую область можно отнести к региону исключению - на территории Кузбасса сочетанные формы клещевого энцефалита с боррелиозом протекают с доминированием клиники энцефалита и признаками поражения ЦНС, что не характерно для ранних проявлений микстинфекций на других эндемичных территориях.Tick-borne encephalitis in Primorye, as well as in various territories of the Russian Federation (Northwest region, Novosibirsk region, Krasnoyarsk Territory, and the Angara region) often proceeds in the form of focal forms, which in the analogue were represented in only 6% of cases. In our studies, focal forms of tick-borne encephalitis were found in 45.6% of cases. IKB, analyzed in an analogue, is characterized by an almost complete absence of erythema forms of the disease (6%), whereas in most territories of the Russian Federation the prevalence of typical forms of the disease with the development of migratory erythema at the site of a tick bite is opposite, and in our observations it was also quite common (in 47 , 5% of cases). Mixed infection in Primorye is distinguished by the predominance of the clinical picture of the clinic of borreliosis, as well as in most constituent entities of the Russian Federation, while the Kemerovo region can be classified as an exception - in the Kuzbass, combined forms of tick-borne encephalitis with borreliosis occur with the dominance of the clinic of encephalitis and signs of central nervous system damage, which is not typical for the early manifestations of mixed infections in other endemic areas.

Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.

С помощью метода сэндвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем производства Санкт-Петербургской фирмы ООО «Цитокин» определяли в сыворотке крови больного комплекс цитокинов - интерлейкин-1α, интерферон-γ, интерлейкин-10. Были обследованы 3 группы пациентов с клещевыми инфекциями: 17 пациентов с клещевым энцефалитом, 18 пациентов с иксодовым клещевым боррелиозом и 13 детей с сочетанной формой клещевого энцефалита и иксодового клещевого боррелиоза (микстинфекцией). В качестве контроля при исследовании уровня цитокинов в сыворотке крови использовались образцы сыворотки здоровых детей, не имеющих хронических заболеваний, взятые в зимние месяцы, что позволило исключить факт укуса клеща. Оценку результатов проводили с использованием статистических приемов для малых выборок. Статистическая обработка полученных материалов произведена с применением прикладной программы Statistica 6,0. с использованием непараметрических критериев Манна-Уитни и коэффициента ранговой корреляции Спирмена.Using the sandwich method of the enzyme-linked immunosorbent assay using commercial test systems manufactured by the St. Petersburg company Cytokin LLC, a complex of cytokines — interleukin-1α, interferon-γ, interleukin-10 — was determined in the patient's blood serum. Three groups of patients with tick-borne infections were examined: 17 patients with tick-borne encephalitis, 18 patients with tick-borne tick-borne borreliosis and 13 children with a combined form of tick-borne encephalitis and tick-borne tick-borne borreliosis (mixed infection). As a control, when studying the level of cytokines in the blood serum, we used the serum samples of healthy children without chronic diseases taken in the winter months, which made it possible to exclude the fact of a tick bite. Evaluation of the results was carried out using statistical techniques for small samples. Statistical processing of the obtained materials was carried out using the Statistica 6.0 application program. using non-parametric Mann-Whitney criteria and Spearman's rank correlation coefficient.

При изучении цитокинов сыворотки крови при клещевых инфекциях (таблица 1) содержание ИЛ-1α, регулятора Th1 иммунного воспаления, в сыворотке крови в острый период зависело от вида возбудителя. Если при КЭ наблюдалось увеличение концентрации ИЛ-1α в 9,2 раза (от 298 до 358 пг/мл в среднем 323,2±25,9 пг/мл против 35,3±5,9 пг/мл у здоровых, р<0,001), то при ИКБ уровень сывороточного ИЛ-1α повышался менее значительно, но при этом в 7,6 раза превышал контроль (от 178 до 270 пг/мл, в среднем 235,7±30,3 пг/мл против 35,3±5,9 пг/мл у здоровых, р<0,001). Уровень ИЛ-1α при микстинфекции варьировал от 30 до 80 пг/мл, в среднем 53,4±19,9 пг/мл, незначительно превышая показатели контрольной группы (р>0,05), но значительно ниже уровня моноинфекции (в 10,6 раза).When studying serum cytokines in tick-borne infections (Table 1), the content of IL-1α, a regulator of Th1 immune inflammation, in the blood serum in the acute period depended on the type of pathogen. If in CE there was an increase in the concentration of IL-1α by 9.2 times (from 298 to 358 pg / ml on average 323.2 ± 25.9 pg / ml versus 35.3 ± 5.9 pg / ml in healthy patients, p < 0.001), then with IKB the level of serum IL-1α increased less significantly, but at the same time it was 7.6 times higher than the control (from 178 to 270 pg / ml, on average 235.7 ± 30.3 pg / ml against 35.3 ± 5.9 pg / ml in healthy individuals, p <0.001). The level of IL-1α during mixed infection varied from 30 to 80 pg / ml, on average 53.4 ± 19.9 pg / ml, slightly exceeding the parameters of the control group (p> 0.05), but significantly lower than the level of monoinfection (10, 6 times).

Уровень сывороточного ИФНγ при КЭ был от 295 до 350 пг/мл, в среднем 320,8±25,9 пг/мл, что в 4,2 раза выше уровня контроля (75,0±4,1 пг/мл, р0,001).The level of serum IFNγ with CE was from 295 to 350 pg / ml, on average 320.8 ± 25.9 pg / ml, which is 4.2 times higher than the control level (75.0 ± 4.1 pg / ml, p0, 001).

При ИКБ данный цитокин повышался менее значительно (от 125 до 190 пг/мл, в среднем составив 162,1±13,3 пг/мл против 75,0±4,1 пг/мл, р<0,001), что в 2,2 раза выше контроля и в 2,4 - ниже уровня при КЭ и выше, чем при микстинфекции. При которой он составил от 115 до 130 пг/мл, в среднем 120,2±5,5 пг/мл, что несколько превышало уровень здоровых детей (р<0,01).With ICD, this cytokine increased less significantly (from 125 to 190 pg / ml, averaging 162.1 ± 13.3 pg / ml versus 75.0 ± 4.1 pg / ml, p <0.001), which in 2, 2 times higher than the control and 2.4 times lower than with CE and higher than with mixed infection. At which it ranged from 115 to 130 pg / ml, an average of 120.2 ± 5.5 pg / ml, which slightly exceeded the level of healthy children (p <0.01).

Показателен мониторинг одного из ранних медиаторов иммунного воспаления Th2 типа, ИЛ-10. В острый период болезни у больных с КЭ наблюдалась его гиперсекреция: от 115 до 150, в среднем составляя - 138,6±29,8 пг/мл против контрольных величин 14,6±1,8 пг/мл (р<0,001, выше в 9,6 раза). При ИКБ этот процесс протекал менее активно: уровень сывороточного цитокина практически равен контролю (от 11,5 до 18 пг/мл, в среднем 16,6±5,1 пг/мл), ниже, чем при микстинфекции (в 2 раза) и в 10 раз, чем при КЭ. У детей больных сочетанной формой уровень сывороточного ИЛ-10 не выше уровня контрольной группы (от 22 до 65 пг/мл, в среднем 41,1±19,7 пг/мл против 14,6±1,8 пг/мл, р>0,05), и не выше, чем у больных ИКБ (41,1±19,7 пг/мл против 16,6±5,1 пг/мл, р>0,05), но достоверно ниже, чем при КЭ (41,1±19,7 пг/мл против 138,6±29,8 пг/мл, р<0,01).Monitoring of one of the early mediators of Th2 type immune inflammation, IL-10, is indicative. In the acute period of the disease, patients with CE had its hypersecretion: from 115 to 150, averaging 138.6 ± 29.8 pg / ml against the control values of 14.6 ± 1.8 pg / ml (p <0.001, higher 9.6 times). With IBD, this process was less active: the level of serum cytokine is almost equal to the control (from 11.5 to 18 pg / ml, on average 16.6 ± 5.1 pg / ml), lower than with mixed infection (2 times) and 10 times than with CE. In children with a combined form, the level of serum IL-10 is not higher than the level of the control group (from 22 to 65 pg / ml, on average 41.1 ± 19.7 pg / ml against 14.6 ± 1.8 pg / ml, p> 0.05), and not higher than in patients with ICD (41.1 ± 19.7 pg / ml versus 16.6 ± 5.1 pg / ml, p> 0.05), but significantly lower than with CE (41.1 ± 19.7 pg / ml versus 138.6 ± 29.8 pg / ml, p <0.01).

Нашими исследованиями определены статистически достоверные различия в секреции ИЛ-1α, ИФНγ и ИЛ-10 у больных клещевыми инфекциями разной этиологии (КЭ и ИКБ и их сочетанный вариант), что позволяет проводить косвенную диагностику данных возбудителей.Our studies determined statistically significant differences in the secretion of IL-1α, IFNγ and IL-10 in tick-borne infections of various etiologies (TBE and IKB and their combined variant), which allows for indirect diagnosis of these pathogens.

Способ можно проиллюстрировать на конкретных примерах.The method can be illustrated with specific examples.

Пример 1Example 1

Больной Е., 9 лет, история болезни №1844. Предварительный диагноз - Клещевой энцефалит.Patient E., 9 years old, medical history No. 1844. Preliminary diagnosis - Tick-borne encephalitis.

Поступил в ГКБ №2 в ДИО 2 на 2 день болезни с жалобами на повышение температуры тела до 39,0°С, вялость, выраженную головную боль, многократную рвоту.He entered the City Clinical Hospital No. 2 in DIO 2 on the 2nd day of illness with complaints of fever up to 39.0 ° C, lethargy, severe headache, repeated vomiting.

При поступлении состояние тяжелое за счет неврологической симптоматики, гипертензионного, интоксикационного синдрома, температура тела 39,5°С, в зеве вялая разлитая гиперемия. Тоны сердца приглушены, при беспокойстве - аритмичные с ЧСС - 110-120 в минуту. Печень пальпируется на 1,0 см ниже реберной дуги. Менингеальные симптомы положительные: ригидность затылочных мышц - 2 п/п, симптом Кернига - 140°. Очаговые симптомы: сглаженность левой носогубной складки, девиация языка влево. В клиническом анализе крови: лейкоциты - 5,5×10⁹/л, нейтрофилез - 57%, СОЭ - 19 мм/час.Upon admission, the condition is serious due to neurological symptoms, hypertension, intoxication syndrome, body temperature 39.5 ° C, sluggish spilled hyperemia in the throat. Heart sounds are muffled, with anxiety - arrhythmic with heart rate - 110-120 per minute. The liver is palpated 1.0 cm below the costal arch. Meningeal symptoms are positive: stiff neck - 2 p / p, Kernig symptom - 140 °. Focal symptoms: smoothness of the left nasolabial fold, deviation of the tongue to the left. In the clinical analysis of blood: leukocytes - 5.5 × 10 ⁹ / l, neutrophilia - 57%, ESR - 19 mm / hour.

Ликвор бесцветный, прозрачный, вытекал частыми каплями. Цитоз - 57 клеток (2/3 -лимфоциты, 1/3 - нейтрофилы), реакция Панди - положительная, белок - 0,8 г/л, сахар -2,9 ммоль/л, Cl - 125 ммоль/л.Liquor is colorless, transparent, flowed out with frequent drops. Cytosis - 57 cells (2/3 lymphocytes, 1/3 - neutrophils), Pandy reaction - positive, protein - 0.8 g / l, sugar -2.9 mmol / l, Cl - 125 mmol / l.

В крови выявлены маркеры КЭ: в ИФА IgM на 5-й день заболевания. Антитела к ИКБ в ИФА не обнаружены.CE markers were detected in the blood: in ELISA IgM on the 5th day of the disease. Antibodies to IKB were not detected in ELISA.

Исследование цитокинового спектра:The study of the cytokine spectrum:

2 день болезни: ИЛ-1α - 350 пг/мл, ИФНγ - 300 пг/мл, ИЛ-10 - 116 пг/мл.Day 2 of the disease: IL-1α - 350 pg / ml, IFNγ - 300 pg / ml, IL-10 - 116 pg / ml.

Окончательный диагноз: Клещевой энцефалит, менингоэнцефалитическая форма.Final diagnosis: Tick-borne encephalitis, meningoencephalitis form.

Пример 2Example 2

Больной В., 4 года, история болезни №1983. Предварительный диагноз: Укус клеща.Patient V., 4 years old, medical history No. 1983. Preliminary diagnosis: Tick bite.

Поступил в ГКБ №2 в ДИО 2 во вторые сутки заболевания с жалобами на повышение температуры тела до 37,5°С, вялость, головные боли, боли в сердце, сноговорение.He was admitted to City Clinical Hospital No. 2 in DIO 2 on the second day of the disease with complaints of fever up to 37.5 ° C, lethargy, headaches, heart pain, concomitation.

При поступлении состояние средней тяжести за счет симптомов интоксикации. Кожные покровы бледно-розовые. В зеве яркая разлитая гиперемия, задняя стенка глотки зерниста.Upon receipt, a moderate condition due to symptoms of intoxication. The skin is pale pink. In the throat, bright diffuse hyperemia, the posterior wall of the pharynx of the granular.

Место укуса клеща без особенностей. Тоны сердца приглушены, аритмичны, систолический шум на верхушке I степени. ЧСС - 65-93 в 1 минуту, экстрасистолия.A tick bite site without features. Heart sounds are muffled, arrhythmic, systolic murmur at the top of I degree. Heart rate - 65-93 in 1 minute, extrasystole.

Печень на 1,0 см ниже края реберной дуги.The liver is 1.0 cm below the edge of the costal arch.

В клиническом анализе крови: лейкоциты 7,4×10⁹/л, лимфоцитоз до 51%, СОЭ - 2 мм/час.In a clinical blood test: white blood cells 7.4 × 10 ⁹ / l, lymphocytosis up to 51%, ESR - 2 mm / hour.

В крови выявлены маркеры иксодового клещевого боррелиоза в ИФА IgM на 20 день болезни, клещевого энцефалита в ИФА отрицательные. Исследование цитокинового спектра:Markers of ixodic tick-borne borreliosis in ELISA IgM on day 20 of the disease, tick-borne encephalitis in ELISA negative. The study of the cytokine spectrum:

2 день болезни: ИЛ-1α - 240 пг/мл, ИФНγ - 132 пг/мл, ИЛ-10 - 12 пг/мл.Day 2 of the disease: IL-1α - 240 pg / ml, IFNγ - 132 pg / ml, IL-10 - 12 pg / ml.

Окончательный диагноз: Иксодовый клещевой боррелиоз, безэритемная форма, средней степени тяжести.The final diagnosis: Ixodes tick-borne borreliosis, non-erythema form, moderate.

Пример 3Example 3

Больной Л., 10 лет, история болезни №1529. Предварительный диагноз: Иксодовый клещевой боррелиоз, эритемная форма, средней степени тяжести.Patient L., 10 years old, medical history No. 1529. Preliminary diagnosis: Ixodid tick-borne borreliosis, erythema form, moderate severity.

Поступил в ГКБ №2 в ДИО в первые сутки заболевания с жалобами на повышение температуры тела до 38,5°С, вялость, головную боль, головокружение, отечность, покраснение мошонки (место укуса клеща), увеличение паховых лимфатических узлов.He was admitted to City Clinical Hospital No. 2 in DIO on the first day of the disease with complaints of fever up to 38.5 ° C, lethargy, headache, dizziness, swelling, redness of the scrotum (the site of a tick bite), an increase in inguinal lymph nodes.

При поступлении состояние средней тяжести за счет симптомов интоксикации. Кожные покровы бледные, гиперемия лица и верхней половины туловища, на мошонке эритема в месте укуса клеща до 2 см в d. Пальпируются паховые лимфоузлы до 1,5 см, единичные, безболезненные не спаянные с окружающими тканями. Менингеальные симптомы отр.Upon receipt, a moderate condition due to symptoms of intoxication. The skin is pale, hyperemia of the face and upper body, on the scrotum of erythema at the site of a tick bite, up to 2 cm in d. Inguinal lymph nodes up to 1.5 cm are palpated, single, painless not fused with surrounding tissues. Meningeal symptoms neg.

В клиническом анализе крови: лейкоциты верхняя граница нормы - 9,8×10⁹/л, лимофоцитоз - 49%, СОЭ - 5 мм/час.In the clinical analysis of blood: leukocytes, the upper limit of the norm is 9.8 × 10 ⁹ / l, limophocytosis - 49%, ESR - 5 mm / hour.

В крови выявлены маркеры ИКБ: в ИФА IgM на 9 день болезни, антитела к КЭ IgM на 24 день болезни.Markers of ICB were detected in the blood: in ELISA IgM on the 9th day of illness, antibodies to EC IgM on the 24th day of illness.

3 день болезни: ИЛ-1α - 50 пг/мл, ИФНγ - 125 пг/мл, ИЛ-10 - 38 пг/мл.3rd day of illness: IL-1α - 50 pg / ml, IFNγ - 125 pg / ml, IL-10 - 38 pg / ml.

Окончательный диагноз: Микстинфекция. Иксодовый клещевой боррелиоз, эритемная форма средней степени тяжести. Клещевой энцефалит, лихорадочная форма.Final diagnosis: Mixed infection. Tick-borne tick-borne borreliosis, erythema form of moderate severity. Tick-borne encephalitis, febrile form.

Таким образом, настоящий способ диагностики клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза и микстинфекции у детей позволяет своевременно предположить возбудителя данного заболевания. Диагностика осуществляется сразу при поступлении в клинику, на основе комплексного анализа цитокинового статуса. Обоснованием выбора трех указанных цитокинов является: наличие двух провоспалительных: интерлейкин-1 альфа (ИЛ-1α), интерферон-гамма (ИФНγ) и одного противовоспалительного - интерлейкин-10 (ИЛ-10). ИЛ-1α - является ведущим цитокином в формировании кожного маркера боррелиоза - мигрирующей эритемы, также он пирогенный цитокин и играет важную роль в развитии лихорадки при клещевых инфекциях. Повышение количества определяемых цитокинов не дает дополнительных качественных результатов и увеличивает финансовые затраты. Таким образом, выбор трех цитокинов необходим, достаточен и экономически выгоден. Полученные значения позволяют с высокой точностью диагностировать клещевой энцефалит, иксодовый клещевой боррелиоз, а также микстинфекцию (сочетание КЭ с ИКБ). Метод доступен и укорачивает сроки определения возбудителей клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза, что крайне важно для прогноза развития заболевания и позволяет своевременно назначить этиотропную и патогенетическую терапию.Thus, the present method for the diagnosis of tick-borne encephalitis, ixodic tick-borne borreliosis and mixed infection in children allows us to promptly suggest the causative agent of this disease. Diagnosis is carried out immediately upon admission to the clinic, based on a comprehensive analysis of the cytokine status. The rationale for the choice of these three cytokines is: the presence of two pro-inflammatory: interleukin-1 alpha (IL-1α), interferon-gamma (IFNγ) and one anti-inflammatory - interleukin-10 (IL-10). IL-1α - is a leading cytokine in the formation of a skin marker of borreliosis - migratory erythema, it is also a pyrogenic cytokine and plays an important role in the development of fever in tick-borne infections. An increase in the number of determined cytokines does not give additional qualitative results and increases financial costs. Thus, the choice of three cytokines is necessary, sufficient and economically viable. The obtained values make it possible to diagnose tick-borne encephalitis, ixodic tick-borne borreliosis, as well as mixed infection (a combination of TBE and IKB) with high accuracy. The method is available and shortens the time for determining the causative agents of tick-borne encephalitis, tick-borne tick-borne borreliosis, which is extremely important for predicting the development of the disease and allows for the timely appointment of etiotropic and pathogenetic therapy.

Claims

A method for differential diagnosis of tick-borne infections of various etiologies, including the evaluation of immunological parameters by enzyme-linked immunosorbent assay, characterized in that at the early stages of the disease, a complex of serum cytokines IL-1α, IFNγ, IL-10 is determined, the levels of these cytokines are established during the onset of the disease with tick-borne encephalitis interleukin -1α in the range of 298-358 pg / ml, interferon-γ - 295-350 pg / ml and interleukin-10 - 115-150 pg / ml; with tick-borne tick-borne borreliosis in the range of interleukin-1α 178-270 pg / ml, interferon-γ 125-190 pg / ml and interleukin-10 - 11.5-18 pg / ml; with mixed infection caused by tick-borne encephalitis virus and borrelia, interleukin-1α in the range of 30-75 pg / ml, interferon-γ 115-130 pg / ml and interleukin-10 - 22-65 pg / ml.