RU2426545C1 - Method of obtaining fluorescent derivatives of dexrans - Google Patents
Method of obtaining fluorescent derivatives of dexrans Download PDFInfo
- Publication number
- RU2426545C1 RU2426545C1 RU2010116514/15A RU2010116514A RU2426545C1 RU 2426545 C1 RU2426545 C1 RU 2426545C1 RU 2010116514/15 A RU2010116514/15 A RU 2010116514/15A RU 2010116514 A RU2010116514 A RU 2010116514A RU 2426545 C1 RU2426545 C1 RU 2426545C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dextran
- fluorescein
- oxidized dextran
- oxidized
- fluorescent
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии, в частности к способу получения меченых полисахаридов, предназначенных для изучения транспорта биологически активных веществ через клеточные мембраны и изучения механизмов действия лекарственных препаратов на клеточном и субклеточном уровнях.The invention relates to experimental medicine and biology, in particular to a method for producing labeled polysaccharides intended for studying the transport of biologically active substances through cell membranes and studying the mechanisms of action of drugs at the cellular and subcellular levels.
В экспериментальной медицине широко используются флуоресцентные производные полисахаридов, в частности декстрана, для изучения транспорта биологически активных веществ через клеточные мембраны (1). Особый интерес для фармакологии представляют окисленные декстраны, так как они обладают высокой биосовместимостью, иммуномодулирующей активностью и могут использоваться в качестве перспективной матрицы для иммобилизации биологически активных веществ с целью их адресной доставки в различные клетки-мишени (2). Окисленные декстраны представляют собой производные декстрана, полученные путем его химического или радиационного окисления и содержащие карбонильные группы. С помощью окисленных декстранов получены перспективные лекарственные композиции (конъюгаты) для лечения туберкулеза (3), системных микозов (4) и вирусных заболеваний (5). Однако механизм действия окисленных декстранов до настоящего времени изучен недостаточно, так как отсутствуют способы получения их флуоресцентных производных. Основная проблема при создании указанных производных состоит в сохранении карбонильных групп, образующихся при окислении декстранов и обусловливающих их специфические биологические свойства.In experimental medicine, fluorescent derivatives of polysaccharides, in particular dextran, are widely used to study the transport of biologically active substances through cell membranes (1). Of particular interest to pharmacology are oxidized dextrans, since they have high biocompatibility, immunomodulating activity and can be used as a promising matrix for the immobilization of biologically active substances with the aim of their targeted delivery to various target cells (2). Oxidized dextrans are derivatives of dextran obtained by its chemical or radiation oxidation and containing carbonyl groups. Using oxidized dextrans, promising medicinal compositions (conjugates) have been obtained for the treatment of tuberculosis (3), systemic mycoses (4) and viral diseases (5). However, the mechanism of action of oxidized dextrans has not yet been adequately studied, since there are no methods for producing their fluorescent derivatives. The main problem in the creation of these derivatives is the preservation of carbonyl groups formed during the oxidation of dextrans and their specific biological properties.
Известен способ получения флуоресцентных производных полисахаридов, в частности декстрана, включающий получение G-, R- или F-производных декстрана; проведение реакции взаимодействия G-производного декстрана с флуоресцентным красителем, содержащим R-функциональную группу, или реакции R-производного декстрана с флуоресцентным красителем, содержащим G-функциональную группу, или реакции F-производного декстрана с флуоресцентным красителем, содержащим G-функциональную группу, и со связующим реагентом, например карбодиимидом; очистку флуоресцентного производного декстрана от примесей (свободного красителя и свободного декстрана) путем фильтрации и последующего хроматографического разделения, где R - реакционно-способные группы, например сукцинимидные группы, карбоксильные, изотиоцианатные, галогенацетамидные, малеимидные, азидные, альдегидо- и кетогруппы или сульфгидрильные группы, G и F - комплементарные функциональные группы, например карбоксильные, альдегидные, кето-, амино- или сульфгидрильные группы (6). Недостатком известного способа является его непригодность для получения флуоресцентных производных окисленных декстранов, т.к. это может привести к полной потере карбонильных групп, обусловливающих специфические биологические свойства окисленных декстранов.A known method for producing fluorescent derivatives of polysaccharides, in particular dextran, comprising obtaining G-, R- or F-derivatives of dextran; carrying out a reaction for the interaction of a G-derivative dextran with a fluorescent dye containing a R-functional group, or a reaction of an R-derivative dextran with a fluorescent dye containing a G-functional group, or a reaction of an F-derivative dextran with a fluorescent dye containing a G-functional group, and with a binder reagent, for example carbodiimide; purification of the fluorescent derivative of dextran from impurities (free dye and free dextran) by filtration and subsequent chromatographic separation, where R are reactive groups, for example, succinimide groups, carboxyl, isothiocyanate, haloacetamide, maleimide, azide, aldehyde and keto groups, or sulfide G and F are complementary functional groups, for example, carboxyl, aldehyde, keto, amino, or sulfhydryl groups (6). The disadvantage of this method is its unsuitability for obtaining fluorescent derivatives of oxidized dextrans, because this can lead to a complete loss of carbonyl groups, which determine the specific biological properties of oxidized dextrans.
Наиболее близким к заявленному является способ получения флуоресцентного производного декстрана, включающий активацию декстрана путем реакции с бромпропиламином, осаждение полученного аминопроизводного декстрана этанолом; очистку аминопроизводного декстрана диализом; проведение реакции аминопроизводного декстрана с 5-([4,6-дихлоротриазин-2-ил]амино)-флуоресцеином путем конденсации в буферном растворе; отделение полученного флуоресцентного производного декстрана от свободного 5-([4,6-дихлоротриазин-2-ил]амино)-флуоресцеина ультрафильтрацией, в частности, диализом; очистку флуоресцентного аминопроизводного декстрана путем хроматографического разделения (7).Closest to the claimed is a method of obtaining a fluorescent derivative of dextran, including activation of dextran by reaction with bromopropylamine, precipitation of the obtained amino derivative of dextran with ethanol; purification of the amino derivative of dextran by dialysis; carrying out the reaction of an amino derivative of dextran with 5 - ([4,6-dichlorotriazin-2-yl] amino) -fluorescein by condensation in a buffer solution; separating the obtained fluorescent derivative of dextran from free 5 - ([4,6-dichlorotriazin-2-yl] amino) -fluorescein by ultrafiltration, in particular by dialysis; purification of the fluorescent amino derivative of dextran by chromatographic separation (7).
Недостатком способа-прототипа является его непригодность для получения флуоресцентного производного окисленного декстрана. Это обусловлено тем, что активация окисленного декстрана бромпропиламином может привести к полной потере карбонильной емкости (карбонильных групп) окисленного декстрана, что также приведет к изменению его биологических свойств. Используемый в способе флуоресцентный краситель - 5-([4,6-дихлоротриазин-2-ил]амино)-флуоресцеин - также может реагировать с карбоксильными группами окисленного декстрана и изменять его биологические свойства. Кроме того, 5-([4,6-дихлоротриазин-2-ил]амино)-флуоресцеин обладает токсичностью, не является коммерческим продуктом, что требует дополнительных затрат на его синтез.The disadvantage of the prototype method is its unsuitability for obtaining a fluorescent derivative of oxidized dextran. This is due to the fact that activation of oxidized dextran with bromopropylamine can lead to a complete loss of the carbonyl capacity (carbonyl groups) of oxidized dextran, which will also lead to a change in its biological properties. The fluorescent dye used in the method, 5 - ([4,6-dichlorotriazin-2-yl] amino) fluorescein, can also react with the carboxyl groups of oxidized dextran and change its biological properties. In addition, 5 - ([4,6-dichlorotriazin-2-yl] amino) fluorescein has toxicity and is not a commercial product, which requires additional costs for its synthesis.
Задачей, на решение которой направлено изобретение, является получение флуоресцентного производного окисленного декстрана с сохранением в его составе карбонильных групп, обусловливающих его специфические биологические свойства, упрощение способа.The problem to which the invention is directed, is to obtain a fluorescent derivative of oxidized dextran with the preservation of carbonyl groups in its composition, which determine its specific biological properties, simplification of the method.
Поставленная техническая задача достигается тем, что в качестве производного декстрана используют окисленный декстран, в качестве флуоресцентного красителя используют флуоресцеин, в качестве активирующего реагента - 1,1'-карбонилдиимидазол, активацию окисленного декстрана производят путем добавления 1,1'-карбонилдиимидазола в реакционную смесь окисленного декстрана с флуоресцеином; при этом используют окисленный декстран с молекулярной массой 35-65 кДа, предварительно растворенный в боратном буферном растворе с рН 9,2-11,0; соотношение компонентов реакционной смеси флуоресцеин - окисленный декстран составляет 1:(110-120) в пересчете на массу сухого вещества; соотношение компонентов 1,1'-карбонилдиимидазол - окисленный декстран составляет 1:(21,0-21,5) в пересчете на массу сухого вещества.The stated technical problem is achieved in that oxidized dextran is used as a dextran derivative, fluorescein is used as a fluorescent dye, 1,1'-carbonyldiimidazole is used as an activating reagent, oxidized dextran is activated by adding 1,1'-carbonyldiimidazole to the oxidized reaction mixture dextran with fluorescein; using oxidized dextran with a molecular weight of 35-65 kDa, previously dissolved in a borate buffer solution with a pH of 9.2-11.0; the ratio of the components of the reaction mixture fluorescein - oxidized dextran is 1: (110-120) in terms of dry weight; the ratio of the components 1,1'-carbonyldiimidazole - oxidized dextran is 1: (21.0-21.5) in terms of dry weight.
Описание сущности изобретенияDescription of the invention
Способ получения флуоресцентного производного декстрана включает проведение реакции окисленного декстрана с флуоресцеином, для активации окисленного декстрана в ходе проведения указанной реакции в реакционную смесь добавляют 1,1'-карбонилдиимидазол, очистку целевого продукта от примесей осуществляют методом ультрафильтрации.A method of obtaining a fluorescent derivative of dextran involves carrying out a reaction of oxidized dextran with fluorescein, 1,1'-carbonyldiimidazole is added to the reaction mixture to activate oxidized dextran during the reaction, the target product is purified from impurities by ultrafiltration.
Для осуществления заявленного способа сухой окисленный декстран с молекулярной массой 35-65 кДа предварительно растворяют в боратном буферном растворе с рН 9,2-11,0 до концентрации 10%.To implement the inventive method, dry oxidized dextran with a molecular weight of 35-65 kDa is pre-dissolved in a borate buffer solution with a pH of 9.2-11.0 to a concentration of 10%.
Флуоресцеин смешивают с полученным раствором окисленного декстрана в весовом соотношении 1:(110-120) из расчета на сухую массу веществ. Для запуска реакции в реакционную смесь добавляют 1,1'-карбонилдиимидазол в качестве активирующего реагента в весовом соотношении с декстраном 1:(21,0-21,5) в пересчете на массу сухого вещества. 1,1'-карбонилдиимидазол способствует взаимодействию окисленного декстрана с флуоресцеином путем активации гидроксильных групп окисленного декстрана. Реакцию проводят при слабом перемешивании при комнатной температуре в течение 18-24 часов.Fluorescein is mixed with the resulting solution of oxidized dextran in a weight ratio of 1: (110-120) based on the dry weight of the substances. To start the reaction, 1,1'-carbonyldiimidazole is added to the reaction mixture as an activating reagent in a weight ratio with dextran 1: (21.0-21.5) based on the dry weight. 1,1'-carbonyldiimidazole promotes the interaction of oxidized dextran with fluorescein by activating the hydroxyl groups of oxidized dextran. The reaction is carried out with gentle stirring at room temperature for 18-24 hours.
Затем реакционную смесь очищают от низкомолекулярных компонентов реакционной смеси (непрореагировавших флуоресцеина и 1,1'-карбонилдиимидазола, а также компонентов боратного буфера) методом ультрафильтрации в режиме диафильтрации с использованием в качестве растворителя воды на мембранах, позволяющих отсекать низкомолекулярные соединения с М.м. 10 кДа или 5 кДа. В результате получают очищенный раствор флуоресцентного производного окисленного декстрана. Примеси не содержат свободного окисленного декстрана, поскольку 1,1'-карбонилдиимидазол реагирует с гидроксильными группами окисленного декстрана, которых не менее 5 на каждое глюкопиранозное кольцо, при этом флуоресцеин и 1,1'-карбонилдиимидазол берутся в избытке в соответствии с указанными выше пропорциями.Then the reaction mixture is purified from low molecular weight components of the reaction mixture (unreacted fluorescein and 1,1'-carbonyldiimidazole, as well as borate buffer components) by ultrafiltration in diafiltration mode using water on membranes as a solvent to cut off low molecular weight compounds with M.m. 10 kDa or 5 kDa. The result is a purified solution of a fluorescent derivative of oxidized dextran. The impurities do not contain free oxidized dextran, since 1,1'-carbonyldiimidazole reacts with hydroxyl groups of oxidized dextran, of which at least 5 for each glucopyranose ring, with fluorescein and 1,1'-carbonyldiimidazole taken in excess in accordance with the above proportions.
Определяющим существенным отличием заявляемого способа от способа-прототипа является то, что для обеспечения взаимодействия с флуоресцеином активацию окисленного декстрана проводят с помощью 1,1'-карбонилдиимидазола, который не вступает в реакцию с карбонильными группами окисленного декстрана, отвечающими за его биологические свойства. Используемый в заявленном способе флуоресцентный краситель флуоресцеин не обладает нежелательными побочными эффектами, является коммерческим продуктом, что в отличие от прототипа не требует дополнительных затрат на его синтез. Кроме того, заявленный способ содержит меньшее количество операций по очистке конечного продукта от примесей (не требуется хроматографического разделения). Все вышеуказанное делает его более простым в исполнении.The determining significant difference of the proposed method from the prototype method is that to ensure interaction with fluorescein, the activation of oxidized dextran is carried out using 1,1'-carbonyldiimidazole, which does not react with the carbonyl groups of oxidized dextran, which are responsible for its biological properties. Used in the inventive method, the fluorescent dye fluorescein does not have undesirable side effects, it is a commercial product, which, unlike the prototype, does not require additional costs for its synthesis. In addition, the claimed method contains fewer operations to purify the final product from impurities (chromatographic separation is not required). All of the above makes it easier to execute.
Примеры конкретного выполненияCase Studies
Пример 1.Example 1
Сухой окисленный декстран с молекулярной массой 65 кДа растворяют в боратном буферном растворе с рН 9,2 до концентрации 10%. В 200 мл полученного 10%-ного раствора окисленного декстрана вносят навеску флуоресцеина массой 0,18 г и перемешивают смесь до полного растворения флуоресцеина (соотношение флуоресцеин - окисленный декстран - 1:110 в пересчете на массу сухого вещества). В полученный раствор вносят навеску 1,1'-карбонилдиимидазола массой 0,930 г (соотношение 1,1'-карбонилдиимидазол - окисленный декстран равно 1:21,5 в пересчете на массу сухого вещества), реакционную смесь перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 часов при слабом перемешивании. Затем проводят диафильтрацию на мембранном модуле Vivaflow 200 с отсекающей М.м. 10 кДа (активная мембранная поверхность 200 см2), используя в качестве замещающего раствора 4 л дистиллированной воды. Получают раствор флуоресцентного производного окисленного декстрана. Чистоту конечного продукта контролируют методом капиллярного электрофореза. Выход целевого продукта составляет 92% от расчетного значения.Dry oxidized dextran with a molecular weight of 65 kDa is dissolved in a borate buffer solution with a pH of 9.2 to a concentration of 10%. A weighed 0.18 g of fluorescein is added to 200 ml of the obtained 10% solution of oxidized dextran and the mixture is stirred until the fluorescein is completely dissolved (the ratio of fluorescein to oxidized dextran is 1: 110, calculated on the dry weight). A weighed portion of 1,1'-carbonyldiimidazole weighing 0.930 g (the ratio of 1,1'-carbonyldiimidazole - oxidized dextran is 1: 21.5, calculated on the dry weight basis) is added to the resulting solution, the reaction mixture is stirred and left at room temperature for 20 hours with gentle stirring. Then diafiltration is carried out on a Vivaflow 200 membrane module with a cut-off M.m. 10 kDa (active membrane surface 200 cm 2 ) using 4 l of distilled water as a replacement solution. A solution of a fluorescent derivative of oxidized dextran is obtained. The purity of the final product is controlled by capillary electrophoresis. The yield of the target product is 92% of the calculated value.
Пример 2.Example 2
Сухой окисленный декстран с молекулярной массой 35 кДа растворяют в боратном буферном растворе с рН 11,0 до концентрации 10%. В 200 мл полученного 10%-ного раствора окисленного декстрана вносят навеску флуоресцеина массой 0,167 г (соотношение флуоресцеин - окисленный декстран - 1:120 в пересчете на сухое вещество) и перемешивают смесь до полного растворения флуоресцеина. В полученный раствор вносят навеску 1,1'-карбонилдиимидазола массой 0,952 г (соотношение 1,1'-карбонилдиимидазол -окисленный декстран равно 1:21,0 в пересчете на массу сухого вещества), реакционную смесь перемешивают 10 минут и оставляют при комнатной температуре на 18 часов при слабом перемешивании. Затем проводят диафильтрацию на мембранном модуле Vivaflow 200 с отсекающей М.м. 5 кДа (активная мембранная поверхность 200 см2), используя в качестве замещающего раствора 3,5 л дистиллированной воды. Получают раствор флуоресцентного производного окисленного декстрана. Чистоту конечного продукта контролируют методом капиллярного электрофореза. Выход целевого продукта составляет 94% от расчетного значения.Dry oxidized dextran with a molecular weight of 35 kDa is dissolved in a borate buffer solution with a pH of 11.0 to a concentration of 10%. In 200 ml of the obtained 10% solution of oxidized dextran, a weighed portion of fluorescein weighing 0.167 g (the ratio of fluorescein - oxidized dextran - 1: 120 in terms of dry matter) is added and the mixture is stirred until fluorescein is completely dissolved. A weighed portion of 1,1'-carbonyldiimidazole weighing 0.952 g (the ratio of 1,1'-carbonyldiimidazole-oxidized dextran is 1: 21.0 in terms of dry weight) is added to the resulting solution, the reaction mixture is stirred for 10 minutes and left at room temperature for 18 hours with gentle stirring. Then diafiltration is carried out on a Vivaflow 200 membrane module with a cut-off M.m. 5 kDa (active membrane surface 200 cm 2 ), using 3.5 l of distilled water as a replacement solution. A solution of a fluorescent derivative of oxidized dextran is obtained. The purity of the final product is controlled by capillary electrophoresis. The yield of the target product is 94% of the calculated value.
Пример 3.Example 3
Сухой окисленный декстран с молекулярной массой 60 кДа растворяют в боратном буферном растворе с рН 10,0 до концентрации 10%. В 200 мл 10%-ного раствора окисленного декстрана вносят навеску флуоресцеина массой 0,174 г (соотношение флуоресцеин - окисленный декстран - 1:114,9 в пересчете на сухое вещество) и перемешивают смесь до полного растворения флуоресцеина. В полученный раствор вносят навеску 1,1'- карбонилдиимидазола массой 0,937 г (соотношение 1,1'- карбонилдиимидазол - окисленный декстран равно 1:21,3 в пересчете на массу сухого вещества), реакционную смесь перемешивают 10 минут и оставляют при комнатной температуре на 24 часа при слабом перемешивании. Затем проводят диафильтрацию на мембранном модуле Vivaflow 200 с отсекающей М.м. 5 кДа (активная мембранная поверхность 200 см2), используя в качестве замещающего раствора 3,5 л дистиллированной воды. Получают раствор флуоресцентного производного окисленного декстрана. Чистоту конечного продукта контролируют методом капиллярного электрофореза. Выход целевого продукта составляет 93% от расчетного значения.Dry oxidized dextran with a molecular weight of 60 kDa is dissolved in a borate buffer solution with a pH of 10.0 to a concentration of 10%. In 200 ml of a 10% solution of oxidized dextran, a weighed portion of fluorescein weighing 0.174 g (ratio of fluorescein - oxidized dextran - 1: 114.9 in terms of dry matter) is added and the mixture is stirred until fluorescein is completely dissolved. A weighed portion of 1,1'-carbonyldiimidazole weighing 0.937 g (the ratio of 1,1'-carbonyldiimidazole - oxidized dextran is 1: 21.3, calculated on the dry weight basis) is added to the resulting solution, the reaction mixture is stirred for 10 minutes and left at room temperature for 24 hours with gentle stirring. Then diafiltration is carried out on a Vivaflow 200 membrane module with a cut-off M.m. 5 kDa (active membrane surface 200 cm 2 ), using 3.5 l of distilled water as a replacement solution. A solution of a fluorescent derivative of oxidized dextran is obtained. The purity of the final product is controlled by capillary electrophoresis. The yield of the target product is 93% of the calculated value.
Источники информацииInformation sources
1. Shimizu N, Kawazoe Y. - A new method for permeabilization of the plasma membrane of cultured mammalian cells. III. Intemalization of fluorescent dextrans into cultured mammalian cells by vortex-stirring in the presence of high molecular weight polyacrylic acid. - Biol Pharm Bull. 1996 Aug; 19(8); 1023-5.1. Shimizu N, Kawazoe Y. - A new method for permeabilization of the plasma membrane of cultured mammalian cells. III. Intemalization of fluorescent dextrans into cultured mammalian cells by vortex-stirring in the presence of high molecular weight polyacrylic acid. - Biol Pharm Bull. 1996 Aug; 19 (8); 1023-5.
2. Shkurupii V.A., Arkhipov S.A., Troitskii A.V., Luzgina N.G., Zaikovskaja M.V., Gulyaeva E.P., Bystrova T.N., Ufimtseva E.G., Il'in D.A., Akhramenko E.S. In vitro effect of oxidizeg dextrans of peritoneal cells // Bulletin of Experimental Biology and Medicine, Supplement 1. - 2008. - P.120-122.2. Shkurupii V.A., Arkhipov S.A., Troitskii A.V., Luzgina N.G., Zaikovskaja M.V., Gulyaeva E.P., Bystrova T.N., Ufimtseva E.G., Il'in D.A., Akhramenko E.S. In vitro effect of oxidizeg dextrans of peritoneal cells // Bulletin of Experimental Biology and Medicine, Supplement 1. - 2008. - P.120-122.
3. Shkurupii V.A., Archipov S.A., Tkachev V.O., Troitskii A.V, Luzgina N.G., Zaikovskaya M.V.,. Gulyaeva E.P, Bystrova T.N., Ufimtseva E.G. In Vitro Effects of Molecular Nanosomal Hybrid Compositions with Oxidized Dextrans, Conjugated with Isonicotinic Acid Hydrazine on Peritoneal Macrophages // Bulletin of Experimental Biology and Medicine - 2008 - Vol.146. - No.5 - P.627-629.3. Shkurupii V.A., Archipov S.A., Tkachev V.O., Troitskii A.V., Luzgina N.G., Zaikovskaya M.V.,. Gulyaeva E.P., Bystrova T.N., Ufimtseva E.G. In Vitro Effects of Molecular Nanosomal Hybrid Compositions with Oxidized Dextrans, Conjugated with Isonicotinic Acid Hydrazine on Peritoneal Macrophages // Bulletin of Experimental Biology and Medicine - 2008 - Vol.146. - No.5 - P.627-629.
4. Шкурупий В.А., Селятицкая В.Г., Цырендоржиев Д.Д., Пальчикова Н.А., Курилин В.В., Травин М.А., Надев А.П., Троицкий А.В. Эффекты модифицированного амфотерицина В при системном кандидозе в эксперименте. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2007 - Т.143. - №4 - С.367-370.4. Skurupy V. A., Selyatitskaya V. G., Tsyrendorzhiev D. D., Palchikova N. A., Kurilin V. V., Travin M. A., Nadev A. P., Troitsky A. V. Effects of modified amphotericin B in systemic candidiasis in an experiment. // Bulletin of experimental biology and medicine. - 2007 - T.143. - No. 4 - S.367-370.
5. Шкурупий В.А., Шаркова Т.В., Потапова О.В., Шестопалов A.M. Регенераторно-пластические процессы в печени млекопитающих при гриппе птиц A/H5N1 и его профилактике модифицированным декстраном. // IV Всероссийская научно-практическая конференция «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов». - Новосибирск, 2009. - С.289.5. Skurupy V.A., Sharkova T.V., Potapova O.V., Shestopalov A.M. Regenerative plastic processes in the liver of mammals with avian influenza A / H5N1 and its prevention with modified dextran. // IV All-Russian scientific-practical conference "Fundamental aspects of compensatory-adaptive processes." - Novosibirsk, 2009 .-- P.289.
6. Патент США №5877310 «Glycoconjugated fluorescent labeling reagents», опубликован 1997.04.25, МПК С07Н 17/00 (20060101); С09В 23/02 (20060101); С09В 23/00 (20060101); C12Q 1/68 (20060101); С08В 37/02 (20060101); С08В 37/00 (20060101); С08 В 37/16 (20060101); С07Н 17/02 (20060101); G01N 33/533(20060101); G01N 33/58 (20060101); С07Н 021/02 (); С07Н 017/08 (); C07H 021/04(); G01N 033/53 ().6. US patent No. 5877310 "Glycoconjugated fluorescent labeling reagents", published 1997.04.25, IPC C07H 17/00 (20060101); C09B 23/02 (20060101); С09В 23/00 (20060101); C12Q 1/68 (20060101); C08B 37/02 (20060101); C08B 37/00 (20060101); C08 B 37/16 (20060101); СНН 17/02 (20060101); G01N 33/533 (20060101); G01N 33/58 (20060101); C07H 021/02 (a); С07Н 017/08 (); C07H 021/04 (a); G01N 033/53 ().
7. Prigent-Richard S., Cansell M., Vassy J., Viron A., Puvion E., Jozefonvicz J., Letourneur D. - Fluorescent and radiolabeling of polysaccharides: Binding and internalization experiments on vascular cells. - J Biomed Mater Res, 1998, 40, 275-281.7. Prigent-Richard S., Cansell M., Vassy J., Viron A., Puvion E., Jozefonvicz J., Letourneur D. - Fluorescent and radiolabeling of polysaccharides: Binding and internalization experiments on vascular cells. - J Biomed Mater Res, 1998, 40, 275-281.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010116514/15A RU2426545C1 (en) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Method of obtaining fluorescent derivatives of dexrans |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010116514/15A RU2426545C1 (en) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Method of obtaining fluorescent derivatives of dexrans |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2426545C1 true RU2426545C1 (en) | 2011-08-20 |
Family
ID=44755758
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010116514/15A RU2426545C1 (en) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Method of obtaining fluorescent derivatives of dexrans |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2426545C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2537246C1 (en) * | 2013-10-17 | 2014-12-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр клинической и эскпериментальной медицины" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук ФГБУ "НЦКЭМ" СО РАМН | Method for preparing biotinylated derivative of oxidised dextran |
| RU2690380C1 (en) * | 2019-02-12 | 2019-06-03 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины" (ФИЦ ФТМ) | Method of producing oxidised dextran, suitable for its visualization in blood serum |
| RU2768707C1 (en) * | 2021-05-31 | 2022-03-24 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Сибирский федеральный университет" | Method for producing fluorescent derivatives of arabinogalactan |
-
2010
- 2010-04-26 RU RU2010116514/15A patent/RU2426545C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| G.S.BETHELL AND J.S.AYERS «Investigation of the activation of various insoluble polysaccharides with 1,1'-carbonyldiimidazole and of the properties of the activated matrices»Journal of Chromatography, Vol.219, №3, 1987, pp.361-371, реферат. * |
| S.PRIGENT-RICHARD «Fluorescent and radiolabeling of polysaccharides: Binding and internalization experiments on vascular cells», J Biomed Mater Res, 40, 1998, с.275-281. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2537246C1 (en) * | 2013-10-17 | 2014-12-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр клинической и эскпериментальной медицины" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук ФГБУ "НЦКЭМ" СО РАМН | Method for preparing biotinylated derivative of oxidised dextran |
| RU2690380C1 (en) * | 2019-02-12 | 2019-06-03 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины" (ФИЦ ФТМ) | Method of producing oxidised dextran, suitable for its visualization in blood serum |
| RU2768707C1 (en) * | 2021-05-31 | 2022-03-24 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Сибирский федеральный университет" | Method for producing fluorescent derivatives of arabinogalactan |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11337930B2 (en) | Modified alginates for cell encapsulation and cell therapy | |
| Kumar et al. | Enhanced chitosan–DNA interaction by 2-acrylamido-2-methylpropane coupling for an efficient transfection in cancer cells | |
| CN104434791B (en) | A kind of preparation of modified bletilla polysaccharide derivates nanometer carrier and application technology | |
| CN102575244B (en) | Dissociation method and dissociation agent for avidin and biotin | |
| CN102145173B (en) | Human serum albumin complex hydrophobically modified pullulan nanoparticles and preparation method thereof | |
| KR102237234B1 (en) | Integrated nanosystem for co-transporting genes/drugs with liver targeting and method for manufacturing the same | |
| Zhao et al. | Self-assembled pH-responsive polymeric nanoparticles based on lignin-histidine conjugate with small particle size for efficient delivery of anti-tumor drugs | |
| EP2103662B1 (en) | Multiple modified derivatives of gelatin and crosslinked material thereof | |
| US20220202949A1 (en) | Ligand-targeted cell conjugate (ltcc)-based anti-tumor immune cell, as well as preparation method and use thereof | |
| Tian et al. | Preparation and characterization of galactosylated alginate–chitosan oligomer microcapsule for hepatocytes microencapsulation | |
| CN111534475B (en) | Method for coupling antibody on cell surface and application thereof | |
| CN102698279A (en) | Preparation method of amphipathic gama-polyglutanmic acid nanodrug carrier | |
| RU2426545C1 (en) | Method of obtaining fluorescent derivatives of dexrans | |
| US20240052097A1 (en) | Synthesis of peg-based thiol-norbornene hydrogels with tunable hydroylitic degradation properties | |
| KR102172222B1 (en) | Photo-crosslinked microgel for protein drug delivery and fabrication method thereof | |
| KR20100137146A (en) | Photoreactive chitosan derivatives and their uses | |
| CN113599504B (en) | Carrier-free protein intracellular delivery prodrug, and preparation method and application thereof | |
| RU2537246C1 (en) | Method for preparing biotinylated derivative of oxidised dextran | |
| CN106046385B (en) | PH responds chitosan gene vector and its preparation method and application | |
| CN111848975B (en) | Phosphorylated protein, intracellular delivery system based on phosphorylated protein, preparation method and application | |
| JP5721130B2 (en) | Asymmetric nanotube-forming asymmetric double-headed lipid molecule, asymmetric nanotube formed by the lipid molecule, and drug encapsulated product using the asymmetric nanotube | |
| CN112569366B (en) | Oral nano polymer targeted delivery system for encapsulating biological macromolecule medicine | |
| RU2690380C1 (en) | Method of producing oxidised dextran, suitable for its visualization in blood serum | |
| CN102010508A (en) | Cationic polymer and preparation method and application thereof | |
| CN114177302B (en) | Glycosaminoglycan modified substance for antitumor drug delivery, and preparation method and application thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190427 |