RU2383888C1 - Method of evaluating irritating action and activity of natural, synthetic substances and ready preparations on chick embryos by method of ultrasonic dopplerography - Google Patents
Method of evaluating irritating action and activity of natural, synthetic substances and ready preparations on chick embryos by method of ultrasonic dopplerography Download PDFInfo
- Publication number
- RU2383888C1 RU2383888C1 RU2008133560/15A RU2008133560A RU2383888C1 RU 2383888 C1 RU2383888 C1 RU 2383888C1 RU 2008133560/15 A RU2008133560/15 A RU 2008133560/15A RU 2008133560 A RU2008133560 A RU 2008133560A RU 2383888 C1 RU2383888 C1 RU 2383888C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood flow
- membrane
- heart rate
- flow velocity
- angle
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к экспериментальной и клинической фармакологи, в частности к исследованию или анализу природных и синтетических субстанций, медицинских препаратов, пищевых продуктов и биологически активных добавок при определении безопасности их применения и биологической активности.The invention relates to experimental and clinical pharmacologists, in particular to the study or analysis of natural and synthetic substances, medicines, food products and biologically active additives in determining the safety of their use and biological activity.
Для оценки безопасности фармакологических средств необходимо изучение раздражающего действия веществ.To assess the safety of pharmacological agents, it is necessary to study the irritating effect of substances.
К методам контроля безопасности применения и действия веществ относится ХЕТ-КАМ тест на хориоаллантоисной оболочке (ХАО) куриного эмбриона.The HET-KAM test on the chorioallantoic membrane (HAO) of a chicken embryo belongs to methods for monitoring the safety of the use and action of substances.
Куриный эмбрион является классическим объектом эмбриологических и токсикологических исследований, а его хориоаллантоисная мембрана обеспечивает естественную окружающую среду для сосудов и их взаимодействия с эмбрионом. К 9-10 дню развития у куриного эмбриона окончательно формируется аллантоис с мелкопетлистой сетью сосудов и лежащая поверх него хориоаллантоисная оболочка. Сосуды аллантоиса проходят в мезодерме, окружая желток. Кровь к аллантоису поступает по двум аллантоисным артериям, которые являются продолжением первичной аорты, и после распространения через капилляры возвращаются к первичному сердцу по двум венам. С этого момента поверхность аллантоиса и сосудистой сети уже не изменяются, что создает стабильные условия для экспериментов на сосудах. Однако, начиная с 11-12 дня развития зародыша, происходит утолщение белочной оболочки и более плотное прилегание ее к поверхности ХАО. Поэтому при вскрытии яйца и удалении белочной оболочки возможны значительные кровотечения, что делает невозможным дальнейшие исследования. Таким образом, эмбрион в возрасте 10 суток является наиболее адекватной и удобной моделью для изучения сосудов и их реакции на различные влияния.Chicken embryo is a classic object of embryological and toxicological research, and its chorioallantoic membrane provides a natural environment for blood vessels and their interaction with the embryo. By the 9-10th day of development, an allantois with a finely looped network of blood vessels and a chorioallantois membrane lying on top of it is finally formed in the chicken embryo. Allantois vessels pass in the mesoderm, surrounding the yolk. Blood flows to the allantois through two allantoic arteries, which are a continuation of the primary aorta, and after spreading through the capillaries return to the primary heart through two veins. From this moment, the surface of allantois and the vasculature do not change anymore, which creates stable conditions for experiments on vessels. However, starting from the 11th-12th day of embryo development, a thickening of the protein membrane and a more tight fit to the surface of the CAO occurs. Therefore, when opening an egg and removing the protein coat, significant bleeding is possible, which makes further research impossible. Thus, an embryo at the age of 10 days is the most adequate and convenient model for studying blood vessels and their reactions to various influences.
Во время проведения теста раствор исследуемого вещества наносится на ХАО, и визуально оценивается степень повреждения сосудов. Например, в «Экспериментальном изучении гастропротекторной активности комбинированной лекарственной формы на основе облепихового масла» (Зацепина Е.Е. Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.б.н., ВГМУ, 29.04.2008) оценка раздражающего действия бетулина проводилась с помощью теста на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест). Однако визуальная оценка эксперимента не позволяет точно и объективно интерпретировать результаты исследования.During the test, a solution of the test substance is applied to the HAO, and the degree of vascular damage is visually assessed. For example, in the “Experimental study of the gastroprotective activity of a combined dosage form based on sea buckthorn oil” (Zatsepina E.E. Abstract of dissertation for the degree of candidate of biological sciences, Voronezh State Medical University, 04.29.2008), the irritating effect of betulin was evaluated using a test for chorion-allantoic membrane of the chicken embryo (HET-KAM test). However, a visual assessment of the experiment does not allow an accurate and objective interpretation of the results of the study.
Известно также использование ХЕТ-КАМ теста для оценки раздражающего действия композиций для лечения угрей и других заболеваний кожи (US 6168798, 2001). Тест проводился на 10-дневных куриных эмбрионах домашних кур породы белый леггорн. Перед началом эксперимента куриные эмбрионы инкубируют при 37,8-38,0°С в течение суток. Далее яйцо помещают на фиксирующую подставку. От скорлупы освобождают всю воздушную камеру, после чего поверхность подскорлуповой оболочки смачивают физиологическим раствором. После этого удаляют подскорлуповую оболочку так, чтобы не повредить ХАО, и наслаивают 400 мкл физиологического раствора для предотвращения высыхания. Изображение сосудов ХАО регистрировалось на протяжении 5 минут с контрольными точками 30 секунд, 2 минуты, 5 минут, после чего проводилась статистическая обработка данных. Известный способ коммерчески широко применим и соответствует современным этическим требованиям, однако его чувствительность недостаточна для оценки широкого круга веществ.It is also known to use the HET-KAM test to evaluate the irritating effect of compositions for treating acne and other skin diseases (US 6168798, 2001). The test was conducted on 10-day-old white leggorn chicken domestic chicken embryos. Before the experiment, chicken embryos are incubated at 37.8-38.0 ° C for a day. Next, the egg is placed on a fixing stand. The entire air chamber is freed from the shell, after which the surface of the shell shell is moistened with physiological saline. After that, the shell shell is removed so as not to damage the CAO, and 400 μl of physiological saline is layered to prevent drying. The image of the HAO vessels was recorded for 5 minutes with control points of 30 seconds, 2 minutes, 5 minutes, after which statistical processing of the data was carried out. The known method is commercially widely applicable and meets modern ethical requirements, however, its sensitivity is insufficient to evaluate a wide range of substances.
Технический результат, достигаемый при использовании настоящего изобретения, состоит в повышении точности ХЕТ-КАМ теста и объективности интерпретирования результатов исследования, универсальности применения теста для широкого круга препаратов, повышении экономичности, быстроте получения результатов и соответствии современным этическим требованиям, а также в возможности одновременной оценки биологического действия субстанций на сосуды хориоаллантоисной оболочки куриных эмбрионов.The technical result achieved by using the present invention consists in increasing the accuracy of the HET-KAM test and objectivity in interpreting the results of the study, the universality of the test for a wide range of drugs, increasing efficiency, speed of obtaining results and meeting modern ethical requirements, as well as the possibility of simultaneous assessment of biological the action of substances on the vessels of the chorioallantoic membrane of chicken embryos.
Указанный результат достигается тем, что в способе оценки раздражающего действия и активности природных, синтетических субстанций и готовых препаратов на сосуды хориоаллантоисной оболочки куриных эмбрионов путем наслаивания исследуемого вещества на хориоаллантоисную оболочку 10-дневного куриного эмбриона и оценки повреждения сосудов оболочки, оценку проводят в динамике посредством ультразвуковой допплерографии, при этом ультразвуковой датчик первоначально располагают на поверхности хориоаллантоисной оболочки под углом к исследуемому венозному сосуду, а затем погружают вглубь белка к расположенным на желточном мешке артериям под углом к ним и получают венозную и артериальную допплерограммы соответственно, контрольное измерение проводят до наслаивания исследуемого вещества, а по полученным допплерограммам определяют линейную скорость кровотока Vs и частоту сердечных сокращений.This result is achieved by the fact that in the method for assessing the irritating effect and activity of natural, synthetic substances and finished preparations on the vessels of the chorioallantoic membrane of chicken embryos by layering the test substance on the chorioallantoic membrane of a 10-day-old chicken embryo and assessing damage to the vessels of the membrane, the assessment is carried out in dynamics using ultrasound Dopplerography, while the ultrasonic sensor is initially placed on the surface of the chorioallantoic membrane at an angle to the probe the venous vessel, and then immersed deep into the protein to the arteries located on the yolk sac at an angle to them and receive venous and arterial Dopplerograms, respectively, the control measurement is performed before layering the test substance, and the linear blood flow velocity Vs and heart rate are determined from the obtained Dopplerograms.
Предпочтительно для получения наиболее четко различимых изображений ультразвуковой датчик располагают на поверхности хориоаллантоисной оболочки под углом 60° к исследуемому венозному сосуду и под углом 60° к расположенным на желточном мешке артериям.Preferably, to obtain the most clearly distinguishable images, an ultrasound probe is placed on the surface of the chorioallantoic membrane at an angle of 60 ° to the venous vessel under investigation and at an angle of 60 ° to the arteries located on the yolk sac.
Данные гистологических исследований, проведенных в МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, показали, что на поверхности ХАО располагаются сосуды венозного типа, а на желточном мешке - артериального, что впоследствии было также подтверждено ультразвуковой допплерографией.Data histological studies conducted in MGAVMiB them. K.I. Scriabin showed that venous vessels are located on the surface of the CAO, and arterial vessels are located on the yolk sac, which was subsequently confirmed by Doppler ultrasound.
В ультразвуковой допплерографии основными процессами являются распространение и отражение ультразвуковых колебаний - если есть движение среды (кровотока), следовательно, есть допплеровский сигнал. С помощью ультразвукового сигнала возможен как визуальный, так и акустический контроль установки датчика в точке локации; определение по форме кривой типа сосудов (артериальный, венозный или смешанный), а по спектру - распределение частиц крови с разными скоростями движения, оценка направления кровотока. В предлагаемом способе степень прилегания датчика к сосуду не влияет на результат измерений, так как сигнал обеспечивается через контактную среду (физиологический раствор).In Doppler ultrasound, the main processes are the propagation and reflection of ultrasonic vibrations - if there is movement of the medium (blood flow), therefore, there is a Doppler signal. Using an ultrasonic signal, both visual and acoustic monitoring of the sensor installation at the location point is possible; determination by the shape of the curve of the type of vessels (arterial, venous or mixed), and by the spectrum - the distribution of blood particles with different speeds, an estimate of the direction of blood flow. In the proposed method, the degree of adherence of the sensor to the vessel does not affect the measurement result, since the signal is provided through the contact medium (physiological saline).
Одним из важнейших показателей функционирования как макро-, так и микрососудов является скорость кровотока. Скорость кровотока магистральных сосудов имеет большие перепады, а на более удаленных звеньях сердечно-сосудистой системы наблюдается снижение перепадов давления и более равномерное течение кровотока. Известно, что линейная скорость кровотока Vs прямо пропорциональна давлению крови, тем самым изменение скорости кровотока может являться свидетельством изменения кровяного давления. Таким образом, используя метод ультразвуковой допплерографии на сосудах ХАО 10-дневного куриного эмбриона, возможно проводить исследования биологической активности веществ, обладающих потенциальным гипер- или гипотензивным действием.One of the most important indicators of the functioning of both macro- and microvessels is the speed of blood flow. The blood flow velocity of the main vessels has large differences, and at more distant parts of the cardiovascular system a decrease in pressure drops and a more uniform flow of blood are observed. It is known that the linear blood flow velocity Vs is directly proportional to blood pressure, and thus a change in blood flow velocity may be evidence of a change in blood pressure. Thus, using the method of ultrasonic dopplerography on the vessels of the Khanty-Mansi Autonomous Okrug of a 10-day-old chicken embryo, it is possible to conduct studies of the biological activity of substances with potential hyper- or hypotensive effects.
Предлагаемый способ применим для исследования образцов:The proposed method is applicable for the study of samples:
1. Водных, водно-спиртовых и масляных экстрактов растений.1. Water, water-alcohol and oil extracts of plants.
2. Веществ с чистотой не менее 80% синтетического происхождения (БАД, фармпрепараты).2. Substances with a purity of at least 80% of synthetic origin (dietary supplements, pharmaceuticals).
3. Веществ с чистотой не менее 80%, выделенных из природного сырья (БАД, фармпрепараты).3. Substances with a purity of at least 80% isolated from natural raw materials (dietary supplements, pharmaceuticals).
4. Продуктов питания (напитки, алкогольная продукция).4. Food (drinks, alcoholic beverages).
5. Масел и масляных композиций.5. Oils and oil compositions.
6. Средств гигиены полости рта.6. Oral hygiene products.
7. Все вышеперечисленные позиции, полученные с применением нанотехнологий.7. All of the above items obtained using nanotechnology.
Для планирования эксперимента необходимы сведения о растворимости образца, стабильности раствора.To plan an experiment, information is needed on the solubility of the sample and the stability of the solution.
Исследуемые гидрофильные соединения растворяют в физиологическом растворе. Растворение гидрофобных соединений возможно с помощью диметилсульфоксида (ДМСО) или 96%-ного этилового спирта. Допустимая концентрация ДМСО составляет 3,0%; этилового спирта - 5,0%. При исследовании гидрофильных соединений в качестве пассивного контроля используют физиологический раствор. При тестировании гидрофобных субстанций в качестве контроля применяют растворители, которые используют при растворении исследуемых субстанций.The studied hydrophilic compounds are dissolved in physiological saline. Dissolution of hydrophobic compounds is possible using dimethyl sulfoxide (DMSO) or 96% ethanol. The permissible concentration of DMSO is 3.0%; ethyl alcohol - 5.0%. In the study of hydrophilic compounds, physiological saline is used as a passive control. When testing hydrophobic substances, solvents are used as a control, which are used to dissolve the investigated substances.
В качестве активного контроля (референтного образца) используют растворы стандартных вазоконстрикторов или вазодилятаторов (например, норадреналин в концентрации 10-11-10-3 М, атенолол в концентрации 10-5-10-1 М).As an active control (reference sample), solutions of standard vasoconstrictors or vasodilators (for example, norepinephrine at a concentration of 10 -11 -10 -3 M, atenolol at a concentration of 10 -5 -10 -1 M) are used.
Все исследуемые рабочие и контрольные растворы должны быть преинкубированы при температуре 37,8-38,0°С в течение 2 часов.All tested working and control solutions should be incubated at a temperature of 37.8-38.0 ° C for 2 hours.
В экспериментах используются 10-дневные куриные эмбрионы домашних кур породы белый леггорн.The experiments use 10-day-old chicken leggorn chicken domestic embryos.
В качестве материально-технического обеспечения способа могут быть использованы ультразвуковые допплеровские сканеры типа «Минимакс-Допплер-К» фирмы «СП Минимакс» (Санкт-Петербург), оснащенный датчиком с частотой 25 МГц, и термостат с температурой 37,8-38,0°С.As the material and technical support of the method, ultrasonic Doppler scanners of the Minimax-Doppler-K type from SP Minimax (St. Petersburg) equipped with a sensor with a frequency of 25 MHz and a thermostat with a temperature of 37.8-38.0 can be used ° C.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
Перед началом эксперимента куриные эмбрионы выдерживают в термостате при температуре 37,8-38,0°С в течение суток тупым концом вверх. Далее яйцо помещают на фиксирующую подставку тупым концом вверх, в центре которого начинают вскрытие. От скорлупы освобождают всю воздушную камеру, после чего поверхность подскорлуповой оболочки смачивают физиологическим раствором. После этого удаляют подскорлуповую оболочку так, чтобы не повредить ХАО, и наслаивают 400 мкл физиологического раствора (для предотвращения высыхания). Яйцо помещают в термостат на 20 мин для снятия травматического шока.Before the experiment, chicken embryos are kept in a thermostat at a temperature of 37.8-38.0 ° C for a day with a blunt end up. Next, the egg is placed on a fixing stand with a blunt end up, in the center of which an autopsy begins. The entire air chamber is freed from the shell, after which the surface of the shell shell is moistened with physiological saline. After that, the shell shell is removed so as not to damage the CAO, and 400 μl of physiological saline is layered (to prevent drying). The egg is placed in a thermostat for 20 minutes to relieve traumatic shock.
Если происходит повреждение ХАО или возникают кровотечения, то яйцо отбраковывается.If HAO damage occurs or bleeding occurs, the egg is rejected.
Следующим этапом является непосредственное допплерографическое исследование кровеносных сосудов ХАО куриных эмбрионов.The next step is a direct Dopplerographic study of the blood vessels of the Khao chicken embryos.
Выбрав наиболее крупный венозный сосуд на поверхности ХАО, датчик располагают так, чтобы он находился под углом 60° к исследуемому сосуду. Изменяя положение датчика, добиваются слабых по амплитуде, без острых пиков, пульсаций (медленно меняющаяся волна) допплерограмм, отображающихся на мониторе прибора.Having selected the largest venous vessel on the surface of the CAO, the sensor is positioned so that it is at an angle of 60 ° to the vessel under investigation. By changing the position of the sensor, they achieve weak in amplitude, without sharp peaks, pulsations (slowly changing wave) Dopplerograms displayed on the monitor of the device.
Артериальные сосуды исследуют, погружая датчик вглубь белка, к располагающимся на желточном мешке артериям, также под углом 60°. При этом наблюдается остропиковая форма кривой (быстрая систола сердечных сокращений) и более пологая кривая (диастолическая скорость кровотока) допплерограмм, а также четко прослушивается восходящий и нисходящий звук, соответствующий пульсациям сосуда.Arterial vessels are examined by immersing the sensor deep into the protein, to the arteries located on the yolk sac, also at an angle of 60 °. At the same time, an ostropic curve shape (fast systole of heart contractions) and a flatter curve (diastolic blood flow velocity) of Dopplerograms are observed, and an ascending and descending sound corresponding to the pulsations of the vessel is clearly heard.
Допплерография проводится в динамике следующих промежутках времени: 0; 5; 10; 30 и 60 минут. Нулевая точка соответствует показателям, полученным после снятия травматического шока. По окончании каждого измерения яйцо помещают обратно в термостат.Dopplerography is carried out in the dynamics of the following time intervals: 0; 5; 10; 30 and 60 minutes. The zero point corresponds to the indicators obtained after the removal of the traumatic shock. At the end of each measurement, the egg is placed back into the thermostat.
В зависимости от целей исследования возможны три режима исследования.Three study modes are possible depending on the objectives of the study.
I режим - моновоздействие:I mode - single action:
0,4 мл раствора исследуемого вещества наносят на ХАО сразу после измерения показателей нулевой точки. Дальнейшие измерения проводят во временные промежутки, описанные ранее.0.4 ml of a solution of the test substance is applied to the HAO immediately after measuring the zero point. Further measurements are carried out at time intervals described previously.
II режим - профилактический:II mode - preventive:
раствор исследуемого препарата наносят сразу после измерения показателей нулевой точки (без воздействия). Растворы стандартных вазоконстрикторов или вазодилятаторов наносят на 5 минуте (после проведения измерения). Далее проводят измерения в динамике.the solution of the test drug is applied immediately after measuring the zero point (without exposure). Solutions of standard vasoconstrictors or vasodilators are applied at 5 minutes (after measurement). Next, measurements are made in dynamics.
III режим - лечебный:III mode - therapeutic:
раствор стандартного вазоконстриктора или вазодилятатора наносят на ХАО сразу после измерения показателей нулевой точки. Раствор исследуемого вещества - на 5 минуте после начала этой серии исследования (после измерения показателей). Далее проводятся измерения в динамике.a solution of a standard vasoconstrictor or vasodilator is applied to the HAO immediately after measuring the zero point. The solution of the test substance - at 5 minutes after the start of this series of studies (after measuring indicators). Next, measurements are made in dynamics.
В медицинской практике для анализа допплерограмм существует множество индексов и показателей: линейная скорость кровотока Vs (см/сек), объемная скорость кровотока Qs (мл/сек), средневзвешенная скорость кровотока по огибающей Vam. Показатели объемной скорости кровотока (Qs и Vam) коррелируют с линейной скоростью кровотока Vs. Таким образом, для изучения влияния исследуемых веществ достаточно оценки одного из параметров.In medical practice, for the analysis of Dopplergrams, there are many indices and indicators: linear blood flow velocity Vs (cm / sec), volumetric blood flow velocity Qs (ml / sec), weighted average blood flow velocity over the envelope Vam. Volumetric blood flow rates (Qs and Vam) correlate with linear blood flow velocity Vs. Thus, to study the influence of the studied substances, it is sufficient to evaluate one of the parameters.
Наиболее показательными и адекватными являются параметр Vs, относящийся к линейной скорости кровотока, определяемый по венозным допплерограммам; и частота сердечных сокращений, которая определяется по артериальным допплерограммам.The most indicative and adequate are the parameter Vs, related to the linear velocity of blood flow, determined by venous dopplerograms; and heart rate, which is determined by arterial dopplerograms.
Линейная скорость находится в прямой зависимости от изменения артериального давления. Повышение давления приводит к усилению гемодинамики.Linear speed is directly dependent on changes in blood pressure. An increase in pressure leads to increased hemodynamics.
На допплерограмме венозного сосуда выбирается необходимый участок. На экране монитора ультразвукового сканера отображается измеряемый показатель Vs - максимальная систолическая скорость по кривой максимальной скорости (огибающей) (см/сек).On the dopplerogram of the venous vessel, the required area is selected. On the monitor screen of the ultrasound scanner, the measured value Vs is displayed - the maximum systolic velocity along the curve of the maximum velocity (envelope) (cm / sec).
Частоту сердечных сокращений (ЧСС) вычисляют по количеству пиков на допплерограмме за 12 секунд. Таким образом проводят анализ допплерограмм, полученных в динамике, в течение всего эксперимента.Heart rate (HR) is calculated by the number of peaks on the Dopplergram in 12 seconds. Thus, the analysis of Dopplergrams obtained in dynamics is carried out throughout the experiment.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводят с помощью компьютерной программы Exel, при этом определяют следующие показатели: среднее арифметическое значение, стандартная ошибка.Statistical processing of experimental data is carried out using the Exel computer program, and the following indicators are determined: arithmetic mean value, standard error.
Оценку раздражающего действия исследуемой субстанции вычисляют в процентах от начальной точки измерения по формулам:Assessment of the irritating effect of the test substance is calculated as a percentage of the starting point of measurement by the formulas:
Изменение скорости кровотока (%)=[(Vs)o-(Vs)n]/(Vs)o × 100%.The change in blood flow velocity (%) = [(Vs) o- (Vs) n] / (Vs) o × 100%.
Изменение ЧСС (%)=[(ЧСС)о-(ЧСС)n]/(ЧСС)о × 100%,Change in heart rate (%) = [(heart rate) o- (heart rate) n] / (heart rate) o × 100%,
где (Vs)o и (ЧСС)о - скорость кровотока и частота сердечных сокращений соответственно в нулевой точке измерения; (Vs)n и (ЧСС)n - скорость кровотока и частота сердечных сокращений соответственно в исследуемой точке измерения.where (Vs) o and (heart rate) o - blood flow velocity and heart rate, respectively, at the zero point of measurement; (Vs) n and (heart rate) n - blood flow velocity and heart rate, respectively, at the studied measurement point.
Далее приведены примеры исследования различных субстанций с использованием заявляемого способа. Результаты проведенных исследований представлены в таблицах.The following are examples of studies of various substances using the proposed method. The results of the studies are presented in tables.
Пример 1. Растительные экстракты.Example 1. Plant extracts.
Оценка влияния экстракта листа оливы на скорость кровотока в сосудах хориоалантоисной оболочки куриных эмбрионов. Assessment of the effect of olive leaf extract on the blood flow velocity in the vessels of the chorioalantoic membrane of chicken embryos.
Как видно из представленных данных, экстракт листа оливы снижает скорость венозного кровотока в среднем на 15-20% в течение 60 мин. При сочетанном применении с норадреналином (НА) отмечено протективное действие экстракта. Так, НА увеличивал скорость кровотока на 50% (10 мин наблюдения), при лечебном режиме применения экстракта листа оливы скорость кровотока снижалась на 25% относительно НА, а при профилактическом - на 35%.As can be seen from the data presented, olive leaf extract reduces the speed of venous blood flow by an average of 15-20% for 60 minutes. When combined with norepinephrine (HA), the protective effect of the extract is noted. Thus, NA increased the blood flow rate by 50% (10 min observation), with the therapeutic regimen of olive leaf extract, the blood flow rate decreased by 25% relative to HA, and with prophylactic - by 35%.
Частота сердечных сокращений под влиянием экстракта листа оливы практически не менялась. Полученные данные свидетельствуют о выраженном влиянии экстракта листа оливы на скорость кровотока, что позволяет предположить наличие гипотензивных свойств у этого экстракта.The heart rate under the influence of olive leaf extract remained virtually unchanged. The data obtained indicate a pronounced effect of the olive leaf extract on the blood flow velocity, which suggests the presence of hypotensive properties in this extract.
Пример 2. Оценка влияния экстракта бадана на скорость кровотока в сосудах хориоалантоисной оболочки куриных эмбрионов.Example 2. Evaluation of the influence of badan extract on the blood flow velocity in the vessels of the chorioalanthoid membrane of chicken embryos
Экстракт бадана, напротив, усиливал скорость венозного кровотока, однако оказывал также протективное действие на сосуды куриного эмбриона и при сочетанном применении с НА снижал скорость кровотока.Badan extract, on the contrary, increased the speed of venous blood flow, however, it also had a protective effect on the vessels of the chicken embryo and, when combined with HA, reduced the speed of blood flow.
Учитывая тонизирующее действие экстракта бадана при моноприменении, было показано, что изменение частоты сердечных сокращений в группе, где применялся экстракт бадана, происходило медленнее, чем в контрольной группе.Considering the tonic effect of badan extract when used alone, it was shown that the change in heart rate in the group where the badan extract was used was slower than in the control group.
Вещества, выделенные из растительных экстрактов.Substances isolated from plant extracts.
Пример 3. В качестве примера представлены данные исследования влияния на скорость кровотока таксифолина (чистота 99,95%) и выделенных хроматографически 4-х фракций сушеницы.Example 3. As an example, research data on the effect on the blood flow rate of taxifolin (purity 99.95%) and 4 dried fractions chromatographically isolated are presented.
Представленные данные свидетельствуют о наличии у таксифолина гипотензивных свойств.The data presented indicate the presence of hypotensive properties in taxifolin.
Пример 4. Оценка влияния 4-х фракций сушеницы на скорость кровотока в сосудах хориоалантоисной оболочки куриных эмбрионов.Example 4. Evaluation of the effect of 4 fractions of dried mash on the blood flow velocity in the vessels of the chorioalanthoid membrane of chicken embryos.
Полученные данные свидетельствуют, что разные фракции сушеницы оказывают различное действие на скорость кровотока. Данный метод был использован для скрининга соединений, выделенных из сушеницы и обладающих потенциальным гипотензивным действием.The data obtained indicate that different fractions of dried cinnamon have a different effect on blood flow. This method was used for screening compounds isolated from dried mash and having a potential antihypertensive effect.
Химически чистые вещества.Chemically pure substances.
Пример 5. В качестве примера представлен стандартный вазоконстриктор - норадреналин. Его применяют также для моделирования повышенного давления, так как он стабильно усиливает скорость кровотока на 40% к 5 мин воздействия и на 50% - к 10 мин. Норадреналин также повышал частоту сердечных сокращений в эти же промежутки времени.Example 5. As an example, a standard vasoconstrictor - norepinephrine is presented. It is also used to simulate high blood pressure, since it steadily enhances blood flow by 40% by 5 min of exposure and by 50% by 10 min. Norepinephrine also increased heart rate at the same intervals.
Пример 6. Пищевая продукция.Example 6. Food products.
Нами были исследованы энергетические напитки, экстракты зеленого чая и кофе различных сортов. Все исследуемые образцы оказывали влияние на скорость кровотока в большей или меньшей степени. Для примера представлены данные влияния на скорость кровотока энергетического напитка и кофе.We have investigated energy drinks, extracts of green tea and coffee of various varieties. All test samples had an effect on the blood flow to a greater or lesser extent. For example, data on the influence on the blood flow velocity of an energy drink and coffee are presented.
Оценка влияния энергетического напитка на скорость кровотока в сосудах хориоалантоисной оболочки куриных эмбрионов.Assessment of the influence of an energy drink on the blood flow velocity in the vessels of the chorioalanthoid membrane of chicken embryos.
Как видно из представленных данных, энергетические напитки значительно усиливают скорость кровотока. Их действие сравнимо с действием норадреналина на 5 мин наблюдения. При моделировании повышенного давление (совместное действие с норадреналином) происходит потенциирование эффекта.As can be seen from the data presented, energy drinks significantly increase the speed of blood flow. Their effect is comparable to that of norepinephrine at 5 min of observation. When modeling high blood pressure (joint action with norepinephrine), the effect is potentiated.
На частоту сердечных сокращений энергетически напиток практически не оказывает влияния.The drink has practically no effect on the heart rate.
Оценка влияния кофе (молотый) на скорость кровотока в сосудах хориоалантоисной оболочки куриных эмбрионов.Assessment of the effect of coffee (ground) on the blood flow velocity in the vessels of the chorioalanthoid membrane of chicken embryos.
Кофе повышает скорость кровотока приблизительно на 10% в течение 60 мин. При моделировании повышенного артериального давления кофе практически не повышает действие норадреналина. В тоже время кофе повышает частоту сердечных сокращений в сравнении с контрольной группой.Coffee increases blood flow by approximately 10% over 60 minutes. When modeling high blood pressure, coffee practically does not increase the effect of norepinephrine. At the same time, coffee increases the heart rate in comparison with the control group.
Пример 7. Глазные капли.Example 7. Eye drops.
Нами было проведено исследование капель для глаз «Тауфон».We conducted a study of eye drops “Taufon”.
Глазые капли стабильно снижают скорость кровотока как при моноприменении, так и при моделировании повышенного артериального давления. Причем действие их в профилактическом режиме выражено сильнее. Такая же тенденция наблюдается и в отношении частоты сердечных сокращений.Eye drops steadily reduce blood flow velocity both during mono-use and when modeling high blood pressure. Moreover, their action in the prophylactic mode is more pronounced. The same trend is observed with respect to heart rate.
Пример 8. Масляные эмульсии.Example 8. Oil emulsions.
В качестве примера приведены исследования масляного раствора дигидрокверцетина (ДКВ).As an example, studies of an oil solution of dihydroquercetin (DHQ) are given.
Дигидрокверетин (ДКВ) в масляном растворе имеет более высокую биодоступность. Увеличение его концентрации в масле приводит к усилению гипотензивного действия ДКВ.Dihydroqueretin (DHQ) in oil solution has a higher bioavailability. An increase in its concentration in oil leads to an increase in the hypotensive effect of DHQ.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет оценивать влияние различных веществ синтетического и природного происхождения на скорость кровотока кровеносных сосудов.Thus, the proposed method allows to evaluate the effect of various substances of synthetic and natural origin on the blood flow velocity of blood vessels.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008133560/15A RU2383888C1 (en) | 2008-08-18 | 2008-08-18 | Method of evaluating irritating action and activity of natural, synthetic substances and ready preparations on chick embryos by method of ultrasonic dopplerography |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008133560/15A RU2383888C1 (en) | 2008-08-18 | 2008-08-18 | Method of evaluating irritating action and activity of natural, synthetic substances and ready preparations on chick embryos by method of ultrasonic dopplerography |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2383888C1 true RU2383888C1 (en) | 2010-03-10 |
Family
ID=42135351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008133560/15A RU2383888C1 (en) | 2008-08-18 | 2008-08-18 | Method of evaluating irritating action and activity of natural, synthetic substances and ready preparations on chick embryos by method of ultrasonic dopplerography |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2383888C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2471185C1 (en) * | 2011-09-19 | 2012-12-27 | Учреждение Российской академии наук Тюменский научный центр Сибирского отделения РАН (ТюмНЦ СО РАН) | Method for preparing test object of chicken embyo's corneal cells for assessing drug cytotoxicity |
| WO2013122495A1 (en) * | 2012-02-13 | 2013-08-22 | Girina Marina Borisovna | Device and method for assessing regional blood circulation |
-
2008
- 2008-08-18 RU RU2008133560/15A patent/RU2383888C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Методические указания по оценке раздражающего действия фармакологических веществ с помощью теста на хорионаллантоисной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест). Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000, с.87-89. SHINTANI S. et al. A new method to determine the irritation of drugs after intramuscular injection in rabbits. Toxicology and Appl. Pharmacology, 1967, vol.11, issue 2, p.293-295, реф., найдено в Интернет: http://linkingub.elsevier.com/retrieve/pii/0041008X67900725. Alternatives to animal use in testing. Constantine Zervos Food and Drug Administration Safety Evacuation and Regulation of Chemicals 2, D.Homburger (cd.) (Base:Karger, 1985). Найдено в Интернет: http://www.princeton.edu/~ota/disk2/1986/8601/860110.pdf. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2471185C1 (en) * | 2011-09-19 | 2012-12-27 | Учреждение Российской академии наук Тюменский научный центр Сибирского отделения РАН (ТюмНЦ СО РАН) | Method for preparing test object of chicken embyo's corneal cells for assessing drug cytotoxicity |
| WO2013122495A1 (en) * | 2012-02-13 | 2013-08-22 | Girina Marina Borisovna | Device and method for assessing regional blood circulation |
| RU2580895C2 (en) * | 2012-02-13 | 2016-04-10 | Марина Борисовна Гирина | Method for estimating regional blood circulation, tissue microcirculation and saturation of blood with oxygen and device for estimation of regional blood circulation, tissue microcirculation and saturation of blood with oxygen |
| EP2815697B1 (en) * | 2012-02-13 | 2019-09-11 | Girina, Marina Borisovna | Device for assessing regional blood circulation |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Emelianov et al. | Elasticity imaging for early detection of renal pathology | |
| Park et al. | Elevated arterial shear rate increases indexes of endothelial cell autophagy and nitric oxide synthase activation in humans | |
| ÇiftçI et al. | Light cigarette smoking and vascular function | |
| Gijsbers et al. | Effects of sodium and potassium supplementation on endothelial function: a fully controlled dietary intervention study | |
| An et al. | Quantitative comparisons between optical coherence tomography angiography and matched histology in the human eye | |
| Skrzypczyk et al. | Methods to evaluate arterial structure and function in children–State-of-the art knowledge | |
| Buczinski | Cardiovascular ultrasonography in cattle | |
| RU2383888C1 (en) | Method of evaluating irritating action and activity of natural, synthetic substances and ready preparations on chick embryos by method of ultrasonic dopplerography | |
| Thijssen et al. | Acoustic parameters of ocular tissues | |
| Silverman et al. | Effect of corneal hydration on ultrasound velocity and backscatter | |
| Fiore et al. | Ultrasonographic measurement of liver, portal vein, hepatic vein and perivisceral adipose tissue in high-yielding dairy cows with fatty liver during the transition period | |
| Ha et al. | Effects of chronically elevated pulmonary arterial pressure and flow on right ventricular afterload | |
| Lucitti et al. | Increased arterial load alters aortic structural and functional properties during embryogenesis | |
| Faita et al. | Ultrasonographic characterization of the db/db mouse: an animal model of metabolic abnormalities | |
| Almeida et al. | Influence of estrous cycle and gestation on cardiovascular system of bitches | |
| Insana et al. | Effects of endothelin-1 on renal microvasculature measured using quantitative ultrasound | |
| Ursem et al. | Dorsal aortic flow velocity in chick embryos of stage 16 to 28 | |
| Gardiner et al. | Volume blood flow estimation in the normal and growth-restricted fetus | |
| Bianchini et al. | The assessment of flow-mediated dilation (FMD) of the brachial artery | |
| LARRY KAGEMANN et al. | Basics and limitations of color Doppler imaging | |
| Akhundova et al. | Acute effects of consumption of low-caffeine energy drinks on endothelial functions in healthy volunteers | |
| Belcaro et al. | Microcirculatory studies in erectile disorders | |
| Bednarski et al. | Renal tubulointerstitial tissue damage, central pressure and vascular function in patients with untreated primary arterial hypertension | |
| Santelices et al. | Experimental system for ex vivo measurement of murine aortic stiffness | |
| Di Lascio et al. | Alterations in Carotid Parameters in ApoE–/–Mice Treated with a High-Fat Diet: A Micro-ultrasound Analysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: SUBSEQUENT PLEDGE Effective date: 20151019 Free format text: PLEDGE Effective date: 20151019 |
|
| QC41 | Official registration of the termination of the licence agreement or other agreements on the disposal of an exclusive right |
Free format text: SUBSEQUENT PLEDGE FORMERLY AGREED ON 20151019 Effective date: 20160311 Free format text: PLEDGE FORMERLY AGREED ON 20151019 Effective date: 20160311 |