RU2383024C1

RU2383024C1 - Method of differentiated diagnostics of chronic viral hepatitis and liver cirrhosis

Info

Publication number: RU2383024C1
Application number: RU2008150685/15A
Authority: RU
Inventors: Владимир Валерьевич Щекотов (RU); Владимир Валерьевич Щекотов; Алевтина Павловна Щекотова (RU); Алевтина Павловна Щекотова; Ирина Анатольевна Булатова (RU); Ирина Анатольевна Булатова
Priority date: 2008-12-22
Filing date: 2008-12-22
Publication date: 2010-02-27

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention relates to medicine, namely to laboratory diagnostics of internal diseases. In order to realise the method of differential diagnostics of chronic viral hepatitis and liver cirrhosis in patients' blood plasma activity of von Willebrand factor (vWF) is determined, which is evaluated on aggregometre by induced by examined plasma agglutination of standard platelet preparation. If vWF value is less or equal 102% chronic viral hepatitis is diagnosed, if vWF is higher than 102% - liver cirrhosis.

EFFECT: application if invention allows to realise available, non-traumatic, sensitive, specific and efficient differential diagnostics of chronic viral hepatitis and liver cirrhosis of viral genesis by degree of endothelium injury.

1 tbl, 4 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике во внутренних болезнях.The invention relates to medicine, namely to laboratory diagnostics in internal diseases.

Известный лабораторный способ дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита и цирроза печени заключается в прижизненном морфологическом исследовании биоптатов печени (Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты в клинической практике. СПб, «ТЕЗА», 1996, с.31-32; The role of liver biopsy in chronic hepatitis C. Saadeh S., Cammell G., Corey W.D. et al. Hepatology, 2001, v. 33, p. 196-200; Nainon O., Xiq G., Vanghan G. Diagnosis of hepatitis a virus infection: a molecular approach. Clin. Microbiol. Rev., 2006, №19(1), p.63-79).A well-known laboratory method for the differential diagnosis of chronic viral hepatitis and cirrhosis of the liver consists in intravital morphological study of liver biopsy specimens (Sorinson S. N. Viral hepatitis in clinical practice. St. Petersburg, "TEZA", 1996, p.31-32; The role of liver biopsy in chronic hepatitis C. Saadeh S., Cammell G., Corey WD et al. Hepatology, 2001, v. 33, p. 196-200; Nainon O., Xiq G., Vanghan G. Diagnosis of hepatitis a virus infection: a molecular approach. Clin. Microbiol. Rev. 2006, No. 19 (1), p. 63-79).

Недостатки способа диагностики: несмотря на высокую информативность, метод пункционной биопсии печени является трудоемким, достаточно травматичным, имеется техническая сложность получения материала и значительная вероятность развития тяжелых осложнений.The disadvantages of the diagnostic method: despite the high information content, the method of puncture biopsy of the liver is time-consuming, rather traumatic, there is a technical difficulty in obtaining the material and a significant likelihood of severe complications.

Технический результат: снижение травматичности, повышение доступности и простоты исполнения при высокой чувствительности, специфичности и эффективности.EFFECT: reduced morbidity, increased availability and ease of execution with high sensitivity, specificity and effectiveness.

Способ дифференциальной диагностики заключается в следующем: у больных количественно определяют активность фактора Виллебранда (vWF) в плазме крови на агрегометре 230 LA НПФ Биола (г.Москва) набором для количественного определения vWF фирмы НПО «Ренам» (г.Москва) с целью оценки наличия и степени повреждения эндотелия. Метод количественного определения vWF основан на его способности в присутствии антибиотика ристоцетина вызывать агглютинацию фиксированных и лиофильно высушенных тромбоцитов. Активность vWF в исследуемой плазме оценивается по вызываемой этой плазмой агглютинации стандартизованного препарата тромбоцитов. При значении vWF менее или равном 102% диагностируют хронический вирусный гепатит, при концентрации vWF более 102% - цирроз печени.The method of differential diagnosis is as follows: in patients, the activity of von Willebrand factor (vWF) in plasma is quantitatively determined using a 230 LA NPF Biola aggregometer (Moscow) with a kit for the quantitative determination of vWF from Renam NPO (Moscow) in order to assess the presence of and the extent of endothelial damage. The method of quantitative determination of vWF is based on its ability in the presence of the antibiotic ristocetin to cause agglutination of fixed and freeze-dried platelets. The vWF activity in the test plasma is evaluated by the agglutination caused by this plasma by the standardized platelet preparation. With a vWF value of less than or equal to 102%, chronic viral hepatitis is diagnosed, with a vWF concentration of more than 102%, liver cirrhosis.

Способ осуществляют следующим образом: кровь из локтевой вены в количестве 4 мл забирают в вакуумную пробирку со стабилизатором цитратом натрия и центрифугируют для получения бедной тромбоцитами плазмы 15 мин при 3000 об/мин. После приготовления реагентов строят калибровочную кривую, построение которой проводится непосредственно перед проведением исследований. Для этого используется стандартная плазма без разведения и разведения в 2,5 и 10 раз цитратным солевым раствором. Построение калибровки осуществляется автоматически с помощью программы AGGRWB на агрегометре 230 LA НПФ Биола. В кювету для агрегометра вносят 0,25 мл суспензии фиксированных тромбоцитов и инкубируют 2 мин при 37°С. Затем кювету переносят в измерительное гнездо агрегометра и вносят 0,025 мл раствора ристоцетина. Через 1 мин включают режим измерения и еще через 1 мин добавляют 0,025 мл стандартной неразведенной плазмы. Измерения выполняют также в плазме, разведенной в 2,5 и 10 раз. Регистрацию проводят в течение 15 мин. Последующий расчет активности vWF в исследуемой плазме осуществляется автоматически с помощью программы AGGRWB. При значении vWF менее или равном 102% диагностируют хронический вирусный гепатит, при концентрации vWF более 102% - цирроз печени.The method is as follows: blood from the ulnar vein in an amount of 4 ml is collected in a vacuum tube with a stabilizer of sodium citrate and centrifuged to obtain platelet-poor plasma for 15 minutes at 3000 rpm. After the preparation of the reagents, a calibration curve is built, the construction of which is carried out immediately before the studies. To do this, use standard plasma without dilution and dilution of 2.5 and 10 times with citrate saline. Calibration is built automatically using the AGGRWB program on the 230 LA NPF Biola aggregometer. 0.25 ml of a suspension of fixed platelets are added to a cuvette for an aggregometer and incubated for 2 min at 37 ° C. Then the cuvette is transferred to the measuring socket of the aggregometer and 0.025 ml of ristocetin solution is added. After 1 min, the measurement mode is turned on and after another 1 min, 0.025 ml of standard undiluted plasma is added. Measurements are also performed in plasma diluted 2.5 and 10 times. Registration is carried out within 15 minutes Subsequent calculation of vWF activity in the studied plasma is carried out automatically using the AGGRWB program. With a vWF value of less than or equal to 102%, chronic viral hepatitis is diagnosed, with a vWF concentration of more than 102%, liver cirrhosis.

Примеры конкретного выполнения.Examples of specific performance.

Пример 1. Больной Г. 50 лет, диагноз хронический гепатит С, фаза реактивации, анти - ВГС - с 1997 г. Эпиданамнез - донор с 1986 г. Жалобы на слабость. Объективно - печень у края реберной дуги, безболезненная, гладкая. Биохимическое исследование: АЛТ - 54 Ед/л, ACT - 44 Ед/л, общий билирубин - 13,7 мкмоль. По данным УЗИ - диффузные изменения в печени. Обнаружен HCV РНК, генотип 1b. Функциональная активность vWF в плазме крови 90%. Диагноз хронического вирусного гепатита С подтвержден.Example 1. Patient G., 50 years old, diagnosed with chronic hepatitis C, reactivation phase, anti-HCV - since 1997. Epidanamnesis - donor since 1986. Complaints of weakness. Objectively - the liver at the edge of the costal arch, painless, smooth. Biochemical study: ALT - 54 U / L, ACT - 44 U / L, total bilirubin - 13.7 μmol. According to ultrasound, diffuse changes in the liver. Detected HCV RNA, genotype 1b. The functional activity of vWF in blood plasma is 90%. The diagnosis of chronic viral hepatitis C is confirmed.

Пример 2. Больная Щ. 25 лет, диагноз хронический гепатит С в фазе реактивации, анти ВГС положительные. Эпиданамнез - половой контакт. Объективно - печень по краю реберной дуги, безболезненная, гладкая. Биохимическое исследование: АЛТ - 51,1 Ед/л, ACT - 32,3 Ед/л, общий билирубин - 13,7 мкмоль/л. По данным УЗИ - незначительные диффузные изменения в печени. Обнаружен HCV РНК, генотип 3а. Функциональная активность vWF в плазме крови 95%. Диагноз хронического вирусного гепатита С подтвержден.Example 2. Patient S. 25 years old, the diagnosis of chronic hepatitis C in the reactivation phase, anti-HCV positive. Epidanamnesis - sexual contact. Objectively - the liver along the edge of the costal arch, painless, smooth. Biochemical research: ALT - 51.1 U / L, ACT - 32.3 U / L, total bilirubin - 13.7 μmol / L. According to ultrasound - minor diffuse changes in the liver. HCV RNA genotype 3a was detected. The functional activity of vWF in blood plasma is 95%. The diagnosis of chronic viral hepatitis C is confirmed.

Пример 3. Больной Я. 61 год, диагноз цирроз печени в исходе хронического гепатита В, стадия выраженных клинических проявлений, портальная гипертензия, асцит. HBsAg положительный. Жалобы на слабость, кровоточивость десен, периодическое повышение температуры тела. Объективно - гепатомегалия +3 см, плотная, бугристая; спленомегалия +1 см, отеки на нижних конечностях, телеангиэктазии, асцит. Биохимическое исследование: АЛТ - 53,4 Ед/л, ACT - 82 Ед/л, общий билирубин - 37,4 мкмоль/л, щелочная фосфатаза - 133 Ед, тимоловая проба - 12,7 Ед. По данным инструментальных исследований - гепатоспленомегалия, асцит, признаки портальной гипертензии. Функциональная активность vWF в плазме крови 118%. Диагноз цирроза печени подтвержден.Example 3. Patient I. 61 years old, diagnosed with cirrhosis of the liver in the outcome of chronic hepatitis B, stage of severe clinical manifestations, portal hypertension, ascites. HBsAg positive. Complaints of weakness, bleeding gums, a periodic increase in body temperature. Objectively - hepatomegaly +3 cm, dense, tuberous; splenomegaly +1 cm, edema in the lower extremities, telangiectasia, ascites. Biochemical study: ALT - 53.4 U / L, ACT - 82 U / L, total bilirubin - 37.4 mmol / L, alkaline phosphatase - 133 U, thymol sample - 12.7 U. According to instrumental studies - hepatosplenomegaly, ascites, signs of portal hypertension. The functional activity of vWF in plasma is 118%. The diagnosis of cirrhosis is confirmed.

Пример 4. Больной Г. 54 года, диагноз цирроз печени в исходе хронического гепатита С, стадия декомпенсации, портальная гипертензия, асцит. Анти - ВГС с 2001 г. Жалобы на слабость, снижение аппетита, увеличение живота, снижение диуреза. Объективно - гепатомегалия, асцит, отеки на нижних конечностях, телеангиэктазии. Биохимическое исследование: АЛТ - 34,5 Ед/л, ACT - 55,8 Ед/л, общий билирубин - 32,7 мкмоль/л, тимоловая проба - 3,9 Ед. По данным инструментальных исследований - гепатоспленомегалия, асцит, признаки портальной гипертензии. Функциональная активность vWF в плазме крови 124%. Диагноз цирроза печени подтвержден.Example 4. Patient G., 54 years old, diagnosed with cirrhosis of the liver in the outcome of chronic hepatitis C, decompensation stage, portal hypertension, ascites. Anti-HCV since 2001. Complaints of weakness, decreased appetite, increased abdomen, decreased diuresis. Objectively - hepatomegaly, ascites, edema in the lower extremities, telangiectasia. Biochemical research: ALT - 34.5 U / L, ACT - 55.8 U / L, total bilirubin - 32.7 μmol / L, thymol sample - 3.9 U. According to instrumental studies - hepatosplenomegaly, ascites, signs of portal hypertension. The functional activity of vWF in blood plasma is 124%. The diagnosis of cirrhosis is confirmed.

Данные статистики определения количественной активности vWF в плазме крови больных хроническим вирусным гепатитом С и циррозом печени в сравнении с группой практически здоровых лиц представлены в таблице.The statistics for determining the quantitative activity of vWF in the blood plasma of patients with chronic viral hepatitis C and cirrhosis in comparison with a group of healthy individuals are presented in the table.

Сравнительный анализ vWF в группах больных хроническим гепатитом С, циррозом печени и в группе практически здоровых лиц (М±δ)Comparative analysis of vWF in groups of patients with chronic hepatitis C, cirrhosis and in the group of healthy individuals (M ± δ) ПоказателиIndicators Контрольная группа n=20Control group n = 20 Больные ХГС n=40Patients with chronic hepatitis C n = 40 Больные ЦП n=25Patients with CP n = 25 Р1P1 Р2P2 Р3P3 vWF, %vWF,% 80,11±2,7780.11 ± 2.77 102,1±4,75102.1 ± 4.75 120±4,86120 ± 4.86 0,0030.003 0,00010.0001 0,010.01 Примечание: Р1 - достоверность отличий в группах здоровых и больных хроническим гепатитом С; Р2 - достоверность отличий в группах здоровых и больных циррозом печени; Р3-достоверность отличий в группе больных хроническим гепатитом С и группе пациентов с циррозом печени.Note: P1 - significance of differences in the groups of healthy and patients with chronic hepatitis C; P2 - significance of differences in the groups of healthy and patients with cirrhosis of the liver; P3 significance of differences in the group of patients with chronic hepatitis C and the group of patients with cirrhosis.

Операционные характеристики лабораторного теста количественного определения активности vWF в плазме крови больных хроническим вирусным гепатитом С и циррозом печени с целью их дифференциации по степени повреждения эндотелия: диагностическая чувствительность (ДЧ) составила 70%, диагностическая специфичность (ДС) - 73%, диагностическая эффективность - 75%. Точка разделения для больных хроническим вирусным гепатитом и циррозом печени по концентрации vWF при построении кумулятивных кривых зарегистрирована на уровне 102%. Соответственно, при концентрации vWF менее или равно 102% диагностируют хронический вирусный гепатит, при уровне vWF более 102% - цирроз печени.Operational characteristics of a laboratory test for the quantitative determination of vWF activity in the blood plasma of patients with chronic viral hepatitis C and liver cirrhosis in order to differentiate them by the degree of endothelial damage: diagnostic sensitivity (DC) was 70%, diagnostic specificity (DS) - 73%, diagnostic efficiency - 75 % The separation point for patients with chronic viral hepatitis and cirrhosis of the liver according to the concentration of vWF when constructing cumulative curves was recorded at 102%. Accordingly, with a vWF concentration of less than or equal to 102%, chronic viral hepatitis is diagnosed, with a vWF level of more than 102%, liver cirrhosis.

Положительный эффект от использования предлагаемого способа дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита и цирроза печени по количественной активности vWF с целью оценки степени повреждения эндотелия заключается в его простоте, доступности, нетравматичности, отсутствии осложнений, информативности, чувствительности и специфичности.The positive effect of using the proposed method for the differential diagnosis of chronic viral hepatitis and liver cirrhosis by the quantitative activity of vWF in order to assess the degree of endothelial damage lies in its simplicity, accessibility, non-trauma, the absence of complications, information content, sensitivity and specificity.

Claims

A method for differential diagnosis of chronic viral hepatitis and liver cirrhosis by means of a blood test, characterized in that in addition the activity of von Willebrand factor (vWF) is quantitatively determined in a patient’s blood plasma by measuring the agglutination of a standardized platelet preparation caused by the test plasma, and when the vWF value is less than or equal to 102% diagnose chronic viral hepatitis, with vWF activity of more than 102% - cirrhosis of the liver.