RU2373926C1 - Композиции, содержащие частицы резвератрола, и способ их получения (варианты) - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения частиц, содержащих резвератрол. Способ получения частиц, содержащих резвератрол, путем диспергирования резвератрола в органическом растворе сополимера молочной и гликолевой кислот в метиленхлориде, диспергирования образовавшейся суспензии во внешней фазе, содержащей поверхностно-активное вещество, удаления органического растворителя, очищения суспензии центрифугированием или фильтрацией, затем полученные частицы резвератрола лиофилизируют. Способ получения частиц, содержащих резвератрол, путем добавления спиртового раствора резвератрола и лецитина при определенном соотношении к раствору хитозана, удаления органического растворителя, центрифугирования суспензии, затем супернатант, содержащий частицы, лиофилизируют. Композиция, содержащая частицы резвератрола, полученная любым из указанных способов и фармацевтически приемлемый разбавитель или наполнитель. Вышеописанные способы позволяют получить частицы с пролонгированным высвобождением резвератрола. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 4 ил.

Description

Область техники

Изобретение относится к фармакологии, медицине и представляет собой способ получения композиций, содержащих частицы резвератрола, с целью его контролируемого высвобождения.

Уровень техники

Резвератрол (3,5,4-trihydroxystilbene) - вещество растительной природы, фитоалексин, содержащийся во многих растительных источниках. Наибольшее его содержание - в кожуре красного винограда и корне растения Polygonum Cuspidatum. На животных моделях показано, что резвератрол обладает антиоксидантными, противовоспалительными, хемопротективными свойствами и может использоваться в профилактике инфаркта миокарда, сахарного диабета, опухолевых заболеваний. Получение резвератрола описано, в частности, в патенте ЕР 1884508. Известно, что резвератрол, во-первых, не полностью всасывается из желудочно-кишечного тракта (на 70%), во-вторых, интенсивно метаболизируется. Решением указанных проблем может стать разработка новой транспортной формы резвератрола.

Частицы являются одним из способов повысить всасывание из желудочно-кишечного тракта веществ с низкой биодоступностью. Так, например, микро- и наносомальные лекарственные формы обеспечивают контролируемое и/или рН-зависимое высвобождение активной субстанции. В качестве вспомогательных веществ для получения таких частиц используют различные вещества, в том числе биодеградируемые и бионедеградируемые полимеры, фосфолипиды, растительные масла.

В патенте US 6967028 описан способ получения нано- и микрочастиц на основе биодеградируемых полимеров размером 0,1-150 нм. В качестве активного компонента заявлено вещество исключительно пептидной природы. Скорость высвобождения активного компонента не указана.

В патенте US 2004247870 описан способ получения микро- и частиц на основе различных носителей, в том числе сополимеров молочной и гликолевой кислот. Лекарственное вещество и полимер-носитель растворяются в смешивающемся с водой растворителе, то есть спектр полимеров ограничивается теми, которые растворимы в этих растворителях, в частности, по описанной технологии затруднительно получение композиций на основе полимеров с высокой молекулярной массой. В качестве активной субстанции резвератрол не заявлен.

В работе Hong Kee Kim с соавторами (2006) продемонстрирована зависимость высвобождения активной субстанции из микрочастиц на основе сополимера молочной и гликолевой кислот от размера пор частиц. Предложенный принцип можно использовать для контроля высвобождения любой субстанции, в том числе резвератрола. Вместе с тем, в указанной работе не описан процесс удаления как органического растворителя, так и водной фазы, т.е. технология получения такой композиции требует дальнейших исследований.

Sonvico, F. с соавторами (2006) предложили способ получения частиц на основе ионного связывания лецитина и хитозана. В качестве единственного модельного лекарственного вещества использовали нерастворимый в воде, но растворимый в спирте прогестерон. Недостатком данного способа является низкая эффективность включения прогестерона, которая не превышала 50%.

В работе Maestrelli, F. с соавторами (2004) описан способ получения частиц на основе хитозана, лецитина, растительного масла (Миглиол 840) для вещества, нерастворимого в воде, но растворимого в спирте - триклозана. Триклозан и Миглиол 840 - единственные описанные активная субстанция и растительное масло для получения микроэмульсий соответственно. Недостатком данного способа является тот факт, что стадия высушивания наноэмульсии не проводилась, что может оказать существенное влияние на стабильность готовой формы.

В патенте WO 2007/112366 описан способ повышения биодоступности резвератрола с использованием различных вспомогательных компонентов, в том числе сополимеров молочной и гликолевой кислот, хитозанов, полиметакрилатов, а также микро- и частиц. Не уточняется состав композиции; не указана возможность использования полиэтиленгликолей, растительных масел, фосфатидилхолина. Не обсуждается профиль высвобождения резвератрола.

Прототипом, наиболее близким к предлагаемому изобретению, является патент US 7316818, в котором описано получение липосомальной формы резвератрола для перорального введения. Недостатком данного способа получения является выбор вспомогательных компонентов, не обеспечивающих стабильность формы в желудочно-кишечном тракте, в связи с чем форму, полученную заявленным способом, рекомендовано использовать в виде таблеток и капсул с защитной оболочкой.

Раскрытие изобретения

Техническим результатом является получения частиц с резвератролом с высоким выходом резвератрола и с контролируемым его высвобождением.

При использовании так называемого метода «эмульгирования - диффузии» полимер или смесь полимеров растворяют в органическом растворителе, резвератрол диспергируют в образовавшемся растворе с помощью ультразвука, после чего дисперсию гомогенизируют в водной фазе, содержащей поверхностно-активное вещество.

В качестве полимеров можно использовать все биосовместимые полимеры: сополимеры молочной и гликолевой кислот с соотношением звеньев от 100:0 к 0:100 и с молекулярной массой от 2000 кДа до 2000000 кДа, предпочтительно с соотношением звеньев 50:50 и с характеристической вязкостью в гексафторизопропаноле 0,37; поликапролактоны; сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля (Плюроники); сополимеры метакриловой кислоты и ее производных (Eudragit RL, RS, L, S), а также их комбинации.

В качестве органической фазы можно использовать летучие, не смешивающиеся с водой органические растворители: дихлорметан, хлороформ, этилацетат, а также смесь смешивающихся и не смешивающихся с водой растворителей, таких как ацетон, этанол, изопропанол. Предпочтительно использование дихлорметана.

В качестве поверхностно-активного вещества водной фазы используют сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля (Плюроники), хитозаны, поливиниловые спирты. Предпочтительно использование Плюроников, особенно предпочтительно использование Плюроника F127.

При использовании метода соосаждения резвератрол и вспомогательные вещества растворяют в органическом растворителе, смешивающемся с водой, и образовавшийся раствор смешивают с водной фазой, содержащей поверхностно-активное вещество.

В качестве растворителя, смешивающегося с водой, используют любые нетоксичные летучие и нелетучие растворители, такие как диметилсульфоксид, ацетон, этанол, изопропанол, бензиловый спирт. Предпочтительно использовать этанол.

В качестве вспомогательных веществ органической фазы используют любые биосовместимые вспомогательные вещества, в частности лецитины с массовым содержанием фосфатидилхолина от 40 до 100%, триацилглицеролы с длиной боковой цепи от 4 до 22 атомов углерода, с длиной боковой цепи 8-10 атомов углерода, их комбинации.

В качестве водной фазы можно используют воду, раствор сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля (Плюроники), а также раствор хитозана с молекулярной массой от 2 до 200 кДа, предпочтительно с молекулярной массой от 5 до 100 кДа, еще более предпочтительно с молекулярной массой 20-50 кДа.

Изобретение касается также частиц, получаемых заявленными способами. Частицы имеют размер в диапазоне 100 нм-3 мкм, содержание резвератрола в готовой форме составляет 2-10%. В среде, имитирующей кишечный сок, в течение 3 часов высвобождается до 45% резвератрола.

Краткое описание чертежей

Ф.1 - получение частиц с резвератролом на основе полимеров PLGA, Eudragit RL, Pluronic F127.

Фиг.2 - получение частиц с резвератролом на основе лецитина, хитозана, растительных масел.

Фиг.3 - высвобождение резвератрола в среде, имитирующей кишечный сок (фосфатный буфер, рН 7.2).

Фиг.4 - размер и распределение частиц по размеру.

Примеры осуществления изобретения.

Пример 1. Способ получения композиций резвератрола в виде частиц из сополимеров молочной и гликолевой кислот.

Во флакон вместимостью 10 мл взвешивали 10-20 мг резвератрола, 50-200 мг сополимера молочной и гликолевой кислот 50:50 с характеристической вязкостью в гексафторизопропаноле 0.37,0-100 мг Плюроника F127, 0-200 мг Eudragit RL, 1-2 г дихлорметана (фиг.1). Флакон герметично закрывали подходящей пробкой, перемешивали на шейкере до растворения полимеров. Суспензию подвергали первичной гомогенизации (Гомогенизатор ультразвуковой, Bandelin Sonopuls, UW 2070, максимальная выходная мощность 70 Вт) - 30 секунд, 10% от максимальной мощности. После этого суспензию автоматической пипеткой количественно переносили в 20 мл водного раствора Pluronic F127 1% и подвергали второй гомогенизации - 1 минута, 100% от максимальной мощности. Хлористый метилен удаляли при перемешивании на магнитной мешалке (400 оборотов в минуту) в течение 3-4 часов. Суспенизию а) центрифугировали 20000 оборотов в минуту, удаляли супернатант, суспендировали осадок в 1-2 мл дистиллированной воды, лиофилизовали; б) фильтровали через бумажный фильтр с размером пор 3 мкм, фильтрат лиофилизовали.

Содержание резвератрола в готовой форме составляет от 1 до 5%. Средний размер частиц составляет от 180 до 510 нм (фиг.4).

Пример 2. Способ получения частиц из лецитина и хитозана, содержащих резвератрол.

Готовили раствор, содержащий 9.36 мг резвератрола, 93,6 мг лецитина (Lipoid S80 или Lipoid S40), в качестве растворителя использовали этанол (фиг.2). При необходимости использовали легкое нагревание - до 40 градусов. Объем раствора составлял 2 мл. Затем при комнатной температуре спиртовую фазу автоматической пипеткой по каплям добавляли к 40 мл 0.1% раствора хитозана с ММ 29,7 kDа и степенью дезацетилирования 79%. Спирт удаляли при перемешивании на магнитной мешалке, после чего суспензию подвергали центрифугированию 3000 об/мин 5 минут для осаждения крупных частиц и не связанного с частицами резвератрола. Супернатант отделяли и лиофилизовали. Частицы, полученные заявленным способом, содержат 3- 6% резвератрола, что определено спектрофотометрически.

Содержание резвератрола в готовой форме составляет от 3 до 6%. Средний размер частиц составляет от 800 до 1000 нм.

Пример 3. Способ получения частиц, содержащих резвератрол, на основе лецитина, хитозан и жидкого растительного масла.

При легком нагревании (до 40 градусов) готовили спиртовую фазу: 8.9 мг резвератрола, 35.7 мг лецитина Lipoid S80, 130 мг глицерол-три-С8-С10 (Radia 7104), общий объем этанольного раствора - 2 мл (фиг.2). Затем при комнатной температуре спиртовую фазу автоматической пипеткой по каплям вводили в 20 мл 0.1% раствора хитозана. Спирт удаляли при перемешивании на магнитной мешалке, после чего суспензию подвергали центрифугированию 3000 об/мин 5 минут для осаждения крупных частиц и не связанного с частицами резвератрола. Супернатант отделяли и лиофилизовали.

Содержание резвератрола в готовой форме составляет около 2%. Размер частиц - 3000 нм.

Пример 4. Высвобождение резвератрола в среде, имитирующей кишечный сок.

Точную навеску образца (10-20 мг) суспендировали в фосфатном буфере (рН 7,2) до концентрации резвератрола 10-20 мг/л и инкубировали в термостате-шейкере (37°С, перемешивание 150 оборотов в минуту). Через 1 и 3 часа аликвоту образца отбирали; частицы и высвободившийся резвератрол отделяли ультрафильтрацией (микроцентрифужные фильтры Microcon 10 kDa, Millipore, 13200 оборотов в минуту). Фильтрат лиофильно высушивали, количество резвератрола определяли спектрофотометрически в диметилсульфоксиде при длине волны 328 нм (фиг.3).

Составы 1-7 обеспечивают контролируемое высвобождение резвератрола, в течение 1 часа и 3 часов высвобождается от 6% до 15% и от 20% до 45% соответственно.

Пример 5. Определение размера частиц.

Навеску лиофилизованных образцов составов 1-7 взбалтывали в дистиллированной воде, фильтровали через обеззоленный фильтр "белая лента"; размер частиц в фильтрате определяли методом фотонной корреляционной спектроскопии в дистиллированной воде (наносайзер Coulter N4MD, Coulter Electronics, U.K) при следующих рабочих параметрах прибора: угол рассеяния 90 градусов, температура 25 градусов, вязкость среды 0,01 пуаз, показатель преломления среды 1,333. Приведенные в примерах результаты отражают размер основного пика образца (фиг.4).

Claims (11)

1. Способ получения частиц, содержащих резвератрол, характеризующийся тем, что резвератрол диспергируют в органическом растворе сополимера молочной и гликолевой кислот 50:50 в метиленхлориде, образовавшуюся суспензию диспергируют во внешней фазе, содержащей Плюроник F127, удаляют органический растворитель, суспензию очищают центрифугированием или фильтрацией, полученные частицы резвератрола размером 100-3000 нм лиофилизируют.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что дополнительно используют полимеры, в частности Плюроник F127, сополимеры метакриловой кислоты и ее производных (Eudragit RL, RS, L, S) или их комбинации.

3. Способ получения частиц, содержащих резвератрол, характеризующийся тем, что спиртовый раствор резвератрола и лецитина при их соотношении 1 к 10 соответственно добавляют к 0,1%-ному раствору хитозана, удаляют органический растворитель, суспензию центрифугируют, супернатант, содержащий частицы, лиофилизируют.

4. Способ по п.3, характеризующийся тем, что при получении композиции с резвератролом в качестве лецитина используют лецитин с массовым содержанием фосфатидилхолина 40-80%.

5. Способ по п.3, характеризующийся тем, что при получении композиции с резвератролом в спиртовую фазу дополнительно вводят глицерил капромиристат (Radia 7104™).

6. Способ по п.3, характеризующийся тем, что после удаления органического растворителя суспензию дополнительно подвергают фильтрованию.

7. Способ по п.3, характеризующийся тем, что размер частиц составляет 100-3000 нм.

8. Композиция, содержащая частицы резвератрола, полученная способом по любому из пп.1-7, и фармацевтически приемлемый разбавитель или наполнитель.

9. Композиция по п.8, отличающиеся тем, что размер частиц находится в диапазоне 100-3000 нм.

10. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что содержание резвератрола находится в диапазоне от 1,5 до 10%.

11. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что в среде, имитирующей кишечный сок:
а. в течение 1 ч высвобождается не менее 6 и не более 15% резвератрола.
b. в течение 3 ч высвобождается не менее 20 и не более 45% резвератрола.

Images