RU2372951C2 - Polyaniline as sorbents for removing viruses, non-viral proteins and as immunosorbent base, method of removing or attaching viruses using said sorbents, immunoadsorption method using said sorbents, sorption method using said sorbents - Google Patents
Polyaniline as sorbents for removing viruses, non-viral proteins and as immunosorbent base, method of removing or attaching viruses using said sorbents, immunoadsorption method using said sorbents, sorption method using said sorbents Download PDFInfo
- Publication number
- RU2372951C2 RU2372951C2 RU2007129444/04A RU2007129444A RU2372951C2 RU 2372951 C2 RU2372951 C2 RU 2372951C2 RU 2007129444/04 A RU2007129444/04 A RU 2007129444/04A RU 2007129444 A RU2007129444 A RU 2007129444A RU 2372951 C2 RU2372951 C2 RU 2372951C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- viruses
- sorbents
- virus
- influenza
- sorption
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине и касается применения соединений полианилина в качестве сорбента для удаления вирусов, белков невирусной природы и в качестве матрицы для получения иммуносорбента и может быть использовано в диагностических целях, для дезактивации и удаления вирусов из окружающей среды.The invention relates to medicine and relates to the use of polyaniline compounds as a sorbent for the removal of viruses, non-viral proteins and as a matrix for the production of immunosorbent and can be used for diagnostic purposes, for deactivation and removal of viruses from the environment.
Широкое распространение вредных, токсических для людей веществ, патогенных микроорганизмов, в том числе и вирусов, ставит вопрос о дезактивации и удалении их из окружающей среды. Известно, что для удаления вирусов из растворов существует два методических подхода -ультрацентрифугирование или связывание их с помощью сорбентов.The wide spread of harmful substances, toxic to humans, pathogenic microorganisms, including viruses, raises the question of decontamination and their removal from the environment. It is known that for the removal of viruses from solutions, there are two methodological approaches — ultracentrifugation or their binding using sorbents.
Иммуносорбция - извлечение антител или антигенов из сложных смесей с помощью иммуносорбентов, основанное на реакции антиген-антитело («Энциклопедический словарь медицинских терминов». М., «Советская энциклопедия», 1982, т.1, с.409). При такой технологии органические полимеры или неорганические материалы применяют в качестве матрицы для приготовления иммуносорбентов, представляющих собой комплексы сорбентов с антигеном или антителами, которые используются для извлечения соответственно антител или антигенов из сложных смесей. Известны матрицы для приготовления иммуносорбентов на основе целлюлозы (Гурвич А.Е. Использование целлюлозных матриц в иммунохимии. В кн: «Иммуносорбенты и их использование в биотехнологии», М., 1987, стр.5-22). Предложены иммуносорбенты на основе вермикулита (природных соединений кремния) или смеси вермикулита с магнитным порошком (RU 2192013, G01N 33/531).Immunosorption - the extraction of antibodies or antigens from complex mixtures using immunosorbents, based on the antigen-antibody reaction ("Encyclopedic Dictionary of Medical Terms". M., "Soviet Encyclopedia", 1982, v.1, s. 409). With this technology, organic polymers or inorganic materials are used as a matrix for the preparation of immunosorbents, which are complexes of sorbents with antigen or antibodies, which are used to extract antibodies or antigens from complex mixtures, respectively. Matrices for the preparation of cellulose-based immunosorbents are known (Gurvich AE Use of cellulose matrices in immunochemistry. In the book: “Immunosorbents and their use in biotechnology”, M., 1987, pp. 5-22). Immunosorbents based on vermiculite (natural silicon compounds) or a mixture of vermiculite with magnetic powder (RU 2192013, G01N 33/531) are proposed.
С помощью иммуносорбции можно выделять и выявлять специфические антитела, например, к вирусам. В частности, для выявления антител к вирусу гепатита С в качестве матрицы (носителя) предложен полистирол с фиксированным (иммобилизованным) на нем вирусспецифическим рекомбинантным белком или синтетическим пептидом (RU 2095815, G01N 33/543, RU 2138286, G01N 33/53). Эти иммуносорбенты ограничены в использовании, т.к. решают узкоспециализированную задачу, предназначены лишь для совершенствования диагностики вирусного гепатита С и осуществляются на хорошо известных материалах, применяемых для диагностических целей.Using immunosorption, specific antibodies can be isolated and detected, for example, against viruses. In particular, to identify antibodies to hepatitis C virus, a polystyrene with a fixed (immobilized) virus-specific recombinant protein or synthetic peptide (RU 2095815, G01N 33/543, RU 2138286, G01N 33/53) was proposed as a matrix (carrier). These immunosorbents are limited in use since solve a highly specialized problem, are intended only to improve the diagnosis of viral hepatitis C and are carried out on well-known materials used for diagnostic purposes.
Классическим методом получения (выделения) антител к вирусу гриппа с помощью иммуносорбции является применение куриных эритроцитов с адсорбированными на них вирусом (Ровнова З.И. Получение специфических противогриппозных сывороток «Вопр. вирусологии», 1959, №4, стр.465-470) Известен иммуносорбент на основе BaSO4 для выделения противогриппозных антител. С этой целью сухой поршок BaSO4 при 4°С в течение 1 ч инкубируют с вируссодержащей жидкостью, из расчета 1 г BaSO4 на начальную концентрацию вируса гриппа - миллион гемагглютинирующих единиц (ГЕ) или 1000 ГЕ на 1 мг (Закстельская Л.Я, Шендерович С.Ф. Использование иммуносорбента для удаления противогриппозных антител из диагностических сывороток. «Лабораторное дело», 1979, №12, стр.748-749).The classical method of obtaining (isolation) of antibodies to influenza virus using immunosorption is the use of chicken red blood cells with the virus adsorbed on them (Rovnova Z. I. Obtaining specific anti-influenza sera “Issues of Virology”, 1959, No. 4, pp. 465-470) Known BaSO 4 based immunosorbent for isolation of influenza antibodies. For this purpose, a dry BaSO 4 pistol at 4 ° C is incubated for 1 h with a virus-containing liquid, based on 1 g of BaSO 4 per initial concentration of influenza virus - a million hemagglutinating units (GE) or 1000 GE per 1 mg (Zakstelskaya L.Ya. Shenderovich SF Use of an immunosorbent to remove anti-influenza antibodies from diagnostic sera. "Laboratory case", 1979, No. 12, pp. 748-749).
Для сорбции специфических противогриппозных антител из иммунных сывороток предложены углеродсодержащие иммуносорбенты. С этой целью ультрадисперсный Z-расщепленный графит с частицами 20-100 нм инкубировали с жидкостями, содержащими вирусы гриппа А и В человека (Курочкина Я.Е. и др. «Метод очистки воды и растворов, контаминированных вирусами гриппа, с использованием углеродсодержащих сорбентов» // Материалы IX съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, М., 2007, т.1, стр.247-248).Carbon-containing immunosorbents have been proposed for sorption of specific anti-influenza antibodies from immune sera. To this end, ultrafine Z-split graphite with particles of 20-100 nm was incubated with fluids containing human influenza A and B viruses (Y. E. Kurochkina et al. “Method for purifying water and solutions contaminated with influenza viruses using carbon-containing sorbents” // Materials of the IX Congress of the All-Russian Scientific and Practical Society of Epidemiologists, Microbiologists and Parasitologists, M., 2007, vol. 1, pp. 247-248).
Иммуносорбцию можно применять и для выделения вирусов с определенной антигенной структурой. Такие подходы требуют предварительной иммобилизации специфических антител на сорбент. Известен способ иммуносорбции для выделения вирусов гриппа с определенной антигенной структурой поверхностных белков. В качестве матрицы для приготовления иммуносорбента предложен сорбент, приготовленный в виде гранул из криогеля поливинилового спирта, с иммобилизированными (фиксированными) на нем вирусоспецифическими антителами (Плиева Ф.М., Исаева Е.И., Лозинский В.И. Применение криогелей поливинилового спирта в биотехнологии. VI. Биоафинные собренты на основе сверхмакропористого носителя для работы с вирусными частицами, «Биотехнология»,1998, №5, стр.32-37).Immunosorption can also be used to isolate viruses with a specific antigenic structure. Such approaches require the preliminary immobilization of specific antibodies to the sorbent. A known method of immunosorption for the isolation of influenza viruses with a specific antigenic structure of surface proteins. As a matrix for the preparation of an immunosorbent, a sorbent prepared in the form of granules from a polyvinyl alcohol cryogel with immobilized (fixed) virus-specific antibodies immobilized on it (Plieva F.M., Isaeva E.I., Lozinsky V.I. Application of polyvinyl alcohol cryogels in biotechnologies VI. Bioaffinity sobrents based on an ultra-macroporous carrier for working with viral particles, Biotechnology, 1998, No. 5, pp. 32-37).
Известна разработка, в которой для элюции и концентрирования вируса гриппа птиц используют магноиммуносорбенты, матрицей которых является твердая магнитная основа с иммобилизованными (фиксированными) гомологичными антителами. Созданная для этих целей установка позволяет проводить мониторинг открытых водных объектов на наличие патогена (И.В.Левченко, В.И.Ефременко, Д.К.Львов и др. Разработка магноиммуносорбентных тест-систем и установка для селективного концентрирования для выявления вирусов гриппа птиц // Материалы IX съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, М., 2007, т.1, стр.248-249).There is a known development in which for the elution and concentration of the avian influenza virus, magnetic immunosorbents are used, the matrix of which is a solid magnetic base with immobilized (fixed) homologous antibodies. The setup created for these purposes allows monitoring open water bodies for the presence of a pathogen (I.V. Levchenko, V.I. Efremenko, D.K. Lvov, etc. Development of magneto-immunosorbent test systems and a selective concentration unit for detection of avian influenza viruses // Materials of the IX Congress of the All-Russian Scientific and Practical Society of Epidemiologists, Microbiologists and Parasitologists, M., 2007, vol. 1, pp. 248-249).
Как известно, элюцию вирусов из растворов можно проводить не только с помощью иммуносорбции. Одним из первых органических сорбентов для связывания (агглютинации) вирусов гриппа были формализированные куриные эритроциты. Этот классический метод требует поддерживания специфического температурного режима, т.к. в противном случае происходит диссоциация комплексов эритроцитов с вирусами, и вирионы выходят в раствор. Последнее свойство активно использовалось при выделении вируса гриппа из раствора с последующим получением очищенных элюатов.As you know, the elution of viruses from solutions can be carried out not only by immunosorption. One of the first organic sorbents for the binding (agglutination) of influenza viruses was formalized chicken red blood cells. This classical method requires the maintenance of a specific temperature regime, since otherwise, the erythrocyte complexes with viruses dissociate, and the virions enter the solution. The latter property was actively used in the isolation of influenza virus from solution with the subsequent receipt of purified eluates.
Использование в качестве сорбента полипиррола в виде мембран позволяет удалять из водных растворов ряд вирусов животных, включающих полиовирусы, коксаки, эхо и другие энтеровирусы, вирусы рео, рота и гепатита А (патент США 6156202, заявка от 1999-03-30, Conducting polymer membrane and a process for the preparation of the same memdrane S.Chandra, R.Singh, H.Singh, A.K.Narula, S.Broor).The use of polypyrrole in the form of membranes as a sorbent makes it possible to remove a number of animal viruses from aqueous solutions, including polioviruses, Coxsackie, echo and other enteroviruses, reo, company and hepatitis A viruses (US patent 6156202, application from 1999-03-30, Conducting polymer membrane and a process for the preparation of the same memdrane S. Chandra, R. Singh, H. Singh, AKNarula, S. Broor).
Известно применение для адсорбции вирусов различных модификаций углеродсодержащих материалов, например активированного угля. В работе Clark K.J, Sarr A.B et al. Vet. Microbiol. 1998, v.63(2-4), p.137-146 глина или древесный уголь использовались как сорбенты для рота- и коронавирусов коров, вызывающих гастроэнтериты у млекопитающих и птиц. С помощью угольного сорбента можно удалить из растворов энтеровирусы (полиовирус типа 2) (Zadorozhnaia V. I. «Mikrobiol. J»., 1996, v.58(3), p.83-87). В патенте RU 2237022, C02F 1/28, C02F 1/50, опубл. 27.09.2004, приоритет США от 20.05.1999 предложен угольный сорбент, представляющий собой частицы активированного угля, способный удалять из воды вирусы бактерий, например бактериофаги MS-2, имеющие размер от 25 нм. Следует отметить, что в зависимости от состава и способа получения активированных углей наблюдается широкий диапазон их сорбционных свойств, в частности распределения пор по размерам и величины удельной поверхности. Известен способ удаления вирусов гриппа А и В человека с помощью ультрадисперсного Z-расщепленного графита, полученного из модифицированного графита путем гидротермической обработки. Авторы разработки предлагают использовать этот метод для очистки водоемов (Курочкина Я.Е. и др. «Метод очистки воды и растворов, контаминированных вирусами гриппа, с использованием углеродсодержащих сорбентов» // Материалы IX съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, М., 2007, т.1, стр.247-248).It is known to use for adsorption of viruses various modifications of carbon-containing materials, for example, activated carbon. Clark K.J., Sarr A.B et al. Vet. Microbiol. 1998, v.63 (2-4), p.137-146 clay or charcoal were used as sorbents for rotavirus and coronaviruses of cows that cause gastroenteritis in mammals and birds. Using a carbon sorbent, enteroviruses (
В патенте США 7018538, опубликованном 28.03.2006, приводятся данные по получению препаратов ДНК из лизата бактерий Escherichia coli. Лизат наносили на хроматографическую колонку, наполненную носителями (стеклянными шариками или дисками, покрытыми полианилином или его производными). Образцы, содержащие ДНК, выходили из колонки в первых фракциях после элюции ТЕ-буфером. Степень очистки ДНК проверялась электрофоретически в агарозном геле. О сорбции и элюции белков из лизата Е.coli не сообщалась.US Pat. No. 7,018,538, published March 28, 2006, provides data on the preparation of DNA preparations from Escherichia coli bacterial lysate. The lysate was applied to a chromatographic column filled with carriers (glass beads or discs coated with polyaniline or its derivatives). Samples containing DNA exited the column in the first fractions after elution with TE buffer. The degree of DNA purification was checked electrophoretically in an agarose gel. No sorption and elution of proteins from the E. coli lysate were reported.
Предлагаемое изобретение решает задачу увеличения сорбционной способности сорбента к веществам белковой природы, к вирусам, обладающим наружной белковой оболочкой, с различными антигенными свойствами, получения иммуносорбента на его основе для выделения специфических противовирусных антител, упрощения и расширения условий сорбции вирусов, а также получения возможности иметь сорбент, фактуру которого можно изменять в зависимости от предполагаемого применения (порошок или пленка).The present invention solves the problem of increasing the sorption ability of the sorbent to substances of a protein nature, to viruses having an outer protein shell with various antigenic properties, to obtain an immunosorbent based on it to isolate specific antiviral antibodies, simplify and expand the conditions for sorption of viruses, and also to be able to have a sorbent , the texture of which can be changed depending on the intended application (powder or film).
Это достигается за счет использования в качестве сорбента полианилина: или основания эмеральдина (т.е. основной полуокисленной формы полианилина) формулыThis is achieved through the use of polyaniline as a sorbent: or emeraldine base (i.e., the main semi-oxidized form of polyaniline) of the formula
или солевой формы полуокисленного полианилина и поли-(2-акриламидо-2-метил-1-пропан-сульфоновой кислоты формулыor salt form of the semi-oxidized polyaniline and poly- (2-acrylamido-2-methyl-1-propane-sulfonic acid of the formula
n=50-50000n = 50-50000
Выбор полианилина был обусловлен тем, что он является синтетическим полимером с известной структурой, химическим составом и изученными физико-химическими свойствами. Химическая структура полианилина включает химические функциональные группы различной природы, обеспечивающие их взаимодействие с гидрофобными и гидрофильными участками антигенов. Наличие этих групп в составе полианилина обеспечивает их сорбционную способность к белкам.The choice of polyaniline was due to the fact that it is a synthetic polymer with a known structure, chemical composition and studied physicochemical properties. The chemical structure of polyaniline includes chemical functional groups of various nature, ensuring their interaction with hydrophobic and hydrophilic sites of antigens. The presence of these groups in the composition of polyaniline ensures their sorption ability to proteins.
Сущность изобретения заключается в использовании основания эмеральдина (т.е. основной полуокисленной формы полианилина) (ПАН-О) или солевой формы полуокисленного полианилина и поли-(2-акриламидо-2-метил-1-пропан-сульфоновой кислоты формулы (ПАН-С) в качестве сорбента для удаления вирусов, белков невирусной природы и в качестве матрицы для получения иммуносорбента для выделения специфических противовирусных антител.The essence of the invention lies in the use of an emeraldine base (i.e., the basic semi-oxidized form of polyaniline) (PAN-O) or the salt form of the semi-oxidized polyaniline and poly- (2-acrylamido-2-methyl-1-propane-sulfonic acid of the formula (PAN-C ) as an sorbent for the removal of viruses, proteins of non-viral nature and as a matrix for the production of immunosorbent for the isolation of specific antiviral antibodies.
ПАН-О получают по методике, описанной в работе Cao Y., Andreatta A., Heeger A.J., Smith P. Influence of chemical polymerization conditios on the properties ofpolyaniline, «Polymer», 1989, V.30, N.12, p.2305-2311. ПАН-С - по методике, описанной в работе Иванов В.Ф., Грибкова О.Л., Чеберяко К.В., Некрасов А.А., Тверской В.А., Ванников А.В. Матричный синтез полианилина в присутствии поли-(2-акриламидо-2-метил-1-пропан)-сульфоновой кислоты, «Электрохимия», 2004, т.40, №3, стр.339-345.PAN-O is prepared according to the procedure described in Cao Y., Andreatta A., Heeger AJ, Smith P. Influence of chemical polymerization conditios on the properties ofpolyaniline, "Polymer", 1989, V.30, N.12, p. 2305-2311. PAN-S - according to the method described in the work of Ivanov V.F., Gribkova O.L., Cheberyako K.V., Nekrasov A.A., Tverskoy V.A., Vannikov A.V. Matrix synthesis of polyaniline in the presence of poly- (2-acrylamido-2-methyl-1-propane) sulfonic acid, Electrochemistry, 2004, v.40, No. 3, pp. 339-345.
ПАН-О представляет собой порошок, нерастворимый в воде.PAN-O is a water insoluble powder.
Солевая форма ПАН-С растворима в воде и в водно-органических смесях при определенных условиях. Растворы представляют собой гомогенные высокодисперсные системы, вплоть до молекулярно-дисперсных, стабильные в течение длительного времени. Данные атомной силовой микроскопии свидетельствуют о формировании интерполимерных комплексов поли-(2-акриламидо-2-метил-1-пропан-сульфоновой кислоты (ПАМПСК) длиной до 50-300 нм и диаметром 20-40 нм. Кроме того, обнаружены линейные ассоциаты этих комплексов длиной до 1500 нм (O.L.Gribkova, G.B.Meshkov, V.F.Ivanov, A.A.Isakova, A.A.Nekrasov, A.V.Vannikov, I.V.Yaminsky, Nanoobjects of interpolymer complexes of polyaniline and PAMPSA in aqueous solutions, J. Phys.: Conf. Ser. 61 (2007) 359-363). ПАН-О и ПАН-С могут быть использованы в виде порошка или в виде пленок, что расширяет возможности использования этих сорбентов. Они отличаются методом и временем синтеза, степенью упорядоченности полимерных звеньев. Оба соединения были использованы в дальнейшем для связывания вирусных частиц и других белков из различных жидкостей.The salt form of PAN-S is soluble in water and in aqueous-organic mixtures under certain conditions. Solutions are homogeneous highly dispersed systems, up to molecularly dispersed ones, stable for a long time. Atomic force microscopy data indicate the formation of interpolymer complexes of poly- (2-acrylamido-2-methyl-1-propane-sulfonic acid (PAMPSK) with a length of up to 50-300 nm and a diameter of 20-40 nm. In addition, linear associates of these complexes were found up to 1500 nm long (OLGribkova, GBMeshkov, VFIvanov, AAIsakova, AANekrasov, AVVannikov, IV Yaminsky, Nanoobjects of interpolymer complexes of polyaniline and PAMPSA in aqueous solutions, J. Phys .: Conf. Ser. 61 (2007 ) 359-363). PAN-O and PAN-S can be used in the form of powder or in the form of films, which expands the possibilities of using these sorbents. They differ in method and time In addition to synthesis, the degree of ordering of polymer units, both compounds were used later for binding viral particles and other proteins from various liquids.
В данной работе представлены данные по изучению условий сорбции и десорбции вирусов гриппа А и В с предлагаемыми сорбентами, сорбции белков невирусной природы, а также противогриппозных антител из иммунных сывороток с помощью иммуносорбента, матрицей которых служат предлагаемые сорбенты.This paper presents data on the study of the conditions of sorption and desorption of influenza A and B viruses with the proposed sorbents, sorption of non-viral proteins, as well as anti-influenza antibodies from immune sera using an immunosorbent, the matrix of which are the proposed sorbents.
ВирусыViruses
Известно, что вирусы животных и птиц имеют множество отличий между собой. Это касается как размеров вирионов, их геномов, состава и свойств вирионных белков, в том числе и поверхностных (Гайдамович С.Я. Классификация вирусов. В кн.: «Общая и частная вирусология». М., Медицина, 1982, стр.26-60). Вирусы семейства ортомиксовирусов (вирусы гриппа), парамиксовирусов, тоговирусов (например, флавивирусы) имеют внешнюю оболочку. Наличие в составе внешней оболочки гликопротеидов обусловливает способность их сорбироваться на эритроцитах животных.It is known that animal and bird viruses have many differences among themselves. This applies both to the size of virions, their genomes, the composition and properties of virion proteins, including surface ones (Gaidamovich S.Ya. Classification of viruses. In the book: “General and private virology.” M., Medicine, 1982, p. 26 -60). The viruses of the family of orthomyxoviruses (influenza viruses), paramyxoviruses, togoviruses (for example, flaviviruses) have an outer shell. The presence of glycoproteins in the outer shell determines their ability to be sorbed on animal erythrocytes.
В качестве представителей вирусов, имеющих внешнюю оболочку, для выявления сорбционных свойств предлагаемых полианилинов и для приготовления иммуносорбентов были взяты эталонные и эпидемические штаммы вируса гриппа A (H1N1, H3N2) и В, изолированные в период 1977-2007 гг., обладающие различной структурой поверхностных белков и соответственно свойствами. Вирусы культивировали в различных системах (куриные эмбрионы, клетки культуры ткани MDCK). В работе использовались также очищенные в градиенте концентрации сахарозы 10-50% и концентрированные аллантоисные вирусы.To identify the sorption properties of the proposed polyanilines and for the preparation of immunosorbents, reference and epidemic strains of the influenza A virus (H1N1, H3N2) and B, isolated in the period 1977-2007, with different surface protein structures, were taken as representatives of viruses with an outer shell. and accordingly properties. Viruses were cultured in various systems (chicken embryos, MDCK tissue culture cells). We also used 10-50% sucrose concentrations purified in a gradient and concentrated allantoic viruses.
МетодыMethods
Определения: 1) вирусов в растворе проводили с помощью реакции гемагглютинирующей активности (РГА); 2) антител в сыворотках - реакции торможения гемагглютинирующей активности (РТГА) с использованием 0,75% взвеси эритроцитов человека 0 (1) группой крови; 3) наличие белка в препаратах определялось при электрофорезе образцов в полиакриламидном геле по методу Laemmli U.K. (Cleavage of structural proteins of the head ofbacteriophage T4, «Nature» 1970, v.227, p.680-685).Definitions: 1) viruses in solution were carried out using the reaction of hemagglutinating activity (RGA); 2) antibodies in serum - the inhibition of hemagglutinating activity (RTGA) using 0.75% suspension of human red blood cells 0 (1) blood group; 3) the presence of protein in the preparations was determined by electrophoresis of samples in a polyacrylamide gel according to the method of Laemmli U.K. (Cleavage of structural proteins of the head ofbacteriophage T4, "Nature" 1970, v.227, p.680-685).
В исследованиях с сорбентом на разных стадиях использовали шейкер (Shaker PSU 2T plus) и настольную низкоскоростную центрифугу (Comb spin).In studies with a sorbent at different stages, a shaker (Shaker PSU 2T plus) and a desktop low-speed centrifuge (Comb spin) were used.
Пример 1. Получение сорбента ПАН-О.Example 1. Obtaining a sorbent PAN-O.
Химический синтез полианилина проводили при комнатной температуре, добавляя 0,11 М раствора персульфата аммония в 0,22 М раствор солянокислого анилина в 2 М соляной кислоте при перемешивании. Молярное соотношение анилина и окислителя составляло 2:1 (Сао Y., Andreatta A., Heeger A.J., Smith P. Influence of chemical polymerization conditios on the properties ofpolyaniline, «Polymer», 1989, V.30, N.12, p.2305-2311). Осадок отфильтровывали, промывали дистиллированной водой, ацетонитрилом и этанолом, а затем сушили под вакуумом. Полученную соль эмеральдина переводили в основание путем обработки в 15%-ном водном растворе аммиака в течение часа. Осадок отфильтровывали и сушили под вакуумом.The chemical synthesis of polyaniline was carried out at room temperature by adding a 0.11 M solution of ammonium persulfate in a 0.22 M solution of aniline hydrochloride in 2 M hydrochloric acid with stirring. The molar ratio of aniline and oxidizing agent was 2: 1 (Cao Y., Andreatta A., Heeger AJ, Smith P. Influence of chemical polymerization conditios on the properties ofpolyaniline, "Polymer", 1989, V.30, N.12, p. 2305-2311). The precipitate was filtered off, washed with distilled water, acetonitrile and ethanol, and then dried under vacuum. The resulting emeraldine salt was transferred to the base by treatment in a 15% aqueous ammonia solution for one hour. The precipitate was filtered off and dried in vacuo.
Пример 2. Получение сорбента ПАН-С.Example 2. Obtaining a sorbent PAN-S.
Химический синтез ПАН-С проводили при комнатной температуре при последовательном смешивании водных растворов ПАМПСК, анилина и персульфата аммония. Соотношение ПАМПСК и анилина составляло 1:1 моль-звено/моль, а анилина и окислителя - 2:1 моль/моль. Концентрации анилина и ПАМПСК в реакционной смеси - 0,04 М (Иванов В.Ф., Грибкова О.Л., Чеберяко К.В., Некрасов А.А., Тверской В.А., Ванников А.В. "Матричный синтез полианилина в присутствии поли-(2-акриламидо-2-метил-1-пропан-сульфоновой кислоты)", Электрохимия, 2004, т.40, №3 стр.339-345). Полученный ПАН-С осаждали диоксаном и сушили под вакуумом.The chemical synthesis of PAN-S was carried out at room temperature with successive mixing of aqueous solutions of PAMPSK, aniline and ammonium persulfate. The ratio of PAMPSK and aniline was 1: 1 mol-unit / mol, and the ratio of aniline and oxidizing agent was 2: 1 mol / mol. The concentrations of aniline and PAMPSC in the reaction mixture are 0.04 M (Ivanov V.F., Gribkova O.L., Cheberyako K.V., Nekrasov A.A., Tverskoy V.A., Vannikov A.V. "Matrix synthesis of polyaniline in the presence of poly- (2-acrylamido-2-methyl-1-propane-sulfonic acid) ", Electrochemistry, 2004, v.40, No. 3 p.339-345). The resulting PAN-C was precipitated with dioxane and dried under vacuum.
3. Сорбции вирусов гриппа на сорбенты.3. Sorption of influenza viruses on sorbents.
Сорбенты в опытах использованы в виде порошка или в виде пленок. Для определения оптимального соотношения массы сорбентов в виде порошка к постоянному объему раствора вируса V=200 мкл проведены исследования, в которых масса сорбента варьировалась от 5 до 50 мг. Как показали исследования, сорбция вирусов происходила интенсивно при навесках сорбента при выбранных массах сорбентов, поэтому в дальнейшем все исследования были проведены на навеске 5 мг.Sorbents in the experiments used in the form of powder or in the form of films. To determine the optimal ratio of the mass of sorbents in the form of a powder to a constant volume of the virus solution V = 200 μl, studies were conducted in which the mass of the sorbent ranged from 5 to 50 mg. As studies have shown, sorption of viruses occurred intensively with weighed portions of the sorbent at selected sorbent masses, therefore, in the future, all studies were carried out on a 5 mg sample.
Процедура сорбции вирусов была следующая. Приготовленный сорбент добавляли к вируссодержащему раствору. Для активного контакта вируса с сорбентом реакционную смесь помещали на шейкер. После контакта вируса с сорбентом смесь центрифугировали при 2000 тыс. об/мин в течение 4 мин, надосадочную жидкость исследовали на наличие вируса в РГА. Осадок, содержащий сорбент с иммобилизованным вирусом, исследовали в экспериментах по десорбции вируса, а также по сорбции антител на иммуносорбент. Сорбция вирусов изучалась в зависимости от сорбентов, антигенной вирусов гриппа А и В, а также от разных условий эксперимента.The virus sorption procedure was as follows. The prepared sorbent was added to the virus-containing solution. For active contact of the virus with the sorbent, the reaction mixture was placed on a shaker. After the virus contacted the sorbent, the mixture was centrifuged at 2000 thousand rpm for 4 min, the supernatant was examined for the presence of the virus in the RGA. The precipitate containing the sorbent with the immobilized virus was investigated in experiments on desorption of the virus, as well as on the sorption of antibodies to the immunosorbent. Sorption of viruses was studied depending on the sorbents, antigenic viruses of influenza A and B, as well as on different experimental conditions.
Исследование сорбции разных штаммов вирусов гриппа А и В на любой из сорбентов (ПАН-О или ПАН-С) представлено в табл.1. Показано, что все вирусы успешно взаимодействовали с сорбентом при разных условиях независимо от антигенных свойств поверхностных белков. Вирусы гриппа А и В сорбировались на сорбент из любой вируссодержащей жидкости: из буферных растворов (Трис-HCl-буфера с pH 7.2-STE, физиологическом раствора - ФР), аллантоисной жидкости куриных эмбрионов как неразведенной, так и разведенной в ФР, культуральной жидкости (клетки культуры ткани MDCK). В опытах навески сорбента варьировались от 5 до 50 мг при постоянном объеме вируссодержащей жидкости V=200 мкл. Начальные титры вирусов, исследуемых в данном эксперименте, в пересчете на 1 мг сорбента находились в диапазоне от 10 до 400 гемагглютинирующих единиц (ГЕ). Конечные титры в пересчете на 1 мг сорбента варьировались от меньше 2 до 10 ГЕ. Падение гемагглютинирующего титра вирусов гриппа, содержащихся в растворе после сорбции, происходило в 8 - 256 раз, в зависимости от начальной концентрации вирусов. Аналогичные результаты были получены и при использовании предложенных сорбентов в виде пленок.A study of the sorption of different strains of influenza A and B viruses on any of the sorbents (PAN-O or PAN-S) is presented in Table 1. It was shown that all viruses successfully interacted with the sorbent under different conditions, regardless of the antigenic properties of surface proteins. Influenza viruses A and B were adsorbed onto the sorbent from any virus-containing liquid: from buffer solutions (Tris-HCl buffer with pH 7.2-STE, saline solution - FR), allantoic fluid of chicken embryos, both undiluted and diluted in FR, the culture fluid ( tissue culture cells MDCK). In the experiments, the weights of the sorbent ranged from 5 to 50 mg with a constant volume of virus-containing liquid V = 200 μl. The initial titers of the viruses studied in this experiment, in terms of 1 mg of sorbent, were in the range from 10 to 400 hemagglutinating units (GE). The final titers in terms of 1 mg of sorbent ranged from less than 2 to 10 GE. The drop in the hemagglutinating titer of influenza viruses contained in the solution after sorption occurred 8 - 256 times, depending on the initial concentration of viruses. Similar results were obtained using the proposed sorbents in the form of films.
Было проанализировано влияние температур на сорбцию вирусов. Полученные данные свидетельствовали, что адсорбция вирусов с любым из сорбентов происходила одинаково интенсивно в диапазоне температур от 4 до 37°С. Результаты опытов с ПАН-С представлены в табл.2.The effect of temperatures on the sorption of viruses was analyzed. The data obtained showed that the adsorption of viruses with any of the sorbents occurred equally intensively in the temperature range from 4 to 37 ° C. The results of experiments with PAN-S are presented in table 2.
Для определения оптимального времени контакта вирус-сорбент были проведены исследования влияния длительности взаимодействия вируса с сорбентом на сорбцию вирусов. Результаты исследования показали, что сорбция вирусов гриппа на любой из сорбентов происходила практически одинаково в диапазоне времени от 15 до 120 мин. В табл.2 представлены результаты опытов с ПАН-С при различном времени сорбции.To determine the optimal contact time of the virus-sorbent, studies were conducted on the effect of the duration of the interaction of the virus with the sorbent on the sorption of viruses. The results of the study showed that the sorption of influenza viruses on any of the sorbents occurred almost identically in the time range from 15 to 120 minutes. Table 2 presents the results of experiments with PAN-S at different sorption times.
Таким образом, сорбционные свойства предлагаемых сорбентов были одинаковы для различных штаммов вируса гриппа и имели общую закономерность в выбранных условиях опыта.Thus, the sorption properties of the proposed sorbents were the same for different strains of the influenza virus and had a common pattern in the chosen experimental conditions.
4. Десорбция вируса с иммуносорбента.4. Desorption of the virus from the immunosorbent.
Как известно, иммуносорбент - это вещество с сорбированными на нем антигенами или антителами, используемое для извлечения соответственно антител или антигенов из сложных смесей. Особый интерес представляло определить, насколько стабильно связан вирус с иммуносорбентом, приготовленным на основе ПАН-О или ПАН-С. Для этого мы исследовали десорбцию вируса с иммуносорбентов в два раствора буфер STE и ФР. Иммуносорбенты смешивали с растворами и инкубировали при 4, 22 и 37°С в течение 1, 24, 48 ч. Затем иммуносорбенты осаждали и центрифугировали в течение 5 мин. Надосадочную жидкость исследовали на наличие вируса в РГА. Десорбция вируса с иммуносорбентов была исследована на аллантоисных вирусах и после их очистки при ультрацентрифугировании (табл.3). Таким образом, было установлено, что десорбция вирусов с поверхности обоих сорбентов не происходит в выбранных температурных и времененных режимах.As you know, an immunosorbent is a substance with antigens or antibodies adsorbed on it, used to extract antibodies or antigens from complex mixtures, respectively. Of particular interest was to determine how stable the virus is associated with an immunosorbent prepared on the basis of PAN-O or PAN-S. For this, we investigated the desorption of the virus from immunosorbents in two solutions of STE buffer and FR. Immunosorbents were mixed with solutions and incubated at 4, 22 and 37 ° C for 1, 24, 48 hours. Then, immunosorbents were precipitated and centrifuged for 5 minutes. The supernatant was examined for the presence of virus in the RGA. Virus desorption from immunosorbents was studied on allantoic viruses and after their purification by ultracentrifugation (Table 3). Thus, it was found that desorption of viruses from the surface of both sorbents does not occur in the selected temperature and time regimes.
5. Взаимодействие иммуносорбента с антителами (иммуносорбция).5. The interaction of the immunosorbent with antibodies (immunosorption).
Для определения, сохраняется ли антигенная активность вирионных поверхностных белков, в частности наиболее важного - гемагглютинина, в иммобилизованном на сорбенте вируса, мы провели исследования взаимодействия сорбированных вирусов А/Сичуань/2/87 A(H3N2) и В/Малазия/2506/04 с антителами из иммунных сывороток, полученных к этим вирусам. Приготовленные иммуносорбенты смешивали с раствором иммунной сыворотки, содержащей гомологичные антитела к этому вирусу. Смесь ставили на контакт в различных температурных и временных условиях, затем центрифугировали. Надосадочную жидкость исследовали на наличие антител в растворе в РТГА. Анализ раствора сыворотки до и после взаимодействия с иммуносорбентом показал, что титры сыворотки существенно снижались при использовании любого из предложенных иммуносорбентов. Связывание антител происходило при использовании любого из иммуносорбентов при различных температурных и временных условиях. В табл.4 приведены результаты, полученные при температуре 4°С.To determine whether the antigenic activity of virionic surface proteins, in particular the most important one, hemagglutinin, is preserved in the virus immobilized on a sorbent, we studied the interaction of sorbed viruses A / Sichuan / 2/87 A (H3N2) and B / Malaysia / 2506/04 s antibodies from immune sera obtained against these viruses. The prepared immunosorbents were mixed with a solution of immune serum containing homologous antibodies to this virus. The mixture was contacted under various temperature and time conditions, then centrifuged. The supernatant was examined for the presence of antibodies in solution in rtga. Analysis of the serum solution before and after interaction with the immunosorbent showed that serum titers were significantly reduced when using any of the proposed immunosorbents. Antibody binding occurred using any of the immunosorbents under various temperature and time conditions. Table 4 shows the results obtained at a temperature of 4 ° C.
6. Сушка вирусов на сорбенте.6. Drying of viruses on a sorbent.
Особый интерес представляло установить возможность сохранения иммуносорбента в течение длительного времени. С этой целью был применен метод лиофилизации вирусных препаратов, широко используемый в вирусологии и позволяющий сохранять вирусы гриппа в течение многих лет.Of particular interest was to establish the ability to maintain immunosorbent for a long time. For this purpose, the method of lyophilization of viral preparations, widely used in virology and allowing the preservation of influenza viruses for many years, was applied.
Для определения влияния лиофилизации на свойства вирусов, соединенных с порошком полианилина, этот комплекс лиофилизировали в ампулах при стандартных условиях лиофилизации вирусов гриппа. После различных сроков хранения (несколько месяцев) полученный препарат исследовали на активность вирусов в РТГА. Для этого лиофилизированный иммуносорбент инкубировали с иммунной сывороткой при температуре 4°С в течение 18 ч и затем образовавшийся комплекс центрифугировали. Титр сыворотки в надосадочной жидкости снизился в 4 раза, что свидетельствует о взаимодействие вируса, входящего в иммуносорбент с антителами. Эти данные свидетельствуют также о сохранении антигенных свойств вирусов в комплексе с порошком полианилина обоих сорбентов ПАН-О и ПАН-С после лиофилизации.To determine the effect of lyophilization on the properties of viruses combined with polyaniline powder, this complex was lyophilized in ampoules under standard lyophilization conditions for influenza viruses. After various storage periods (several months), the resulting preparation was examined for the activity of viruses in rtga. For this, the lyophilized immunosorbent was incubated with immune serum at a temperature of 4 ° C for 18 h and then the resulting complex was centrifuged. The serum titer in the supernatant decreased 4 times, which indicates the interaction of the virus, which is part of the immunosorbent with antibodies. These data also indicate the preservation of the antigenic properties of viruses in combination with polyaniline powder of both PAN-O and PAN-S sorbents after lyophilization.
7. Взаимодействие сорбентов с белками невирусной природы.7. Interaction of sorbents with proteins of non-viral nature.
Представлялось важным исследовать сорбцию на сорбенты ПАН-О и ПАН-С белков невирусной природы: 1% бычьего сывороточного альбумина, который широко используется в вирусологии в иммунологических реакциях, белков иммунных сывороток, белков аллантоисной жидкости. Поэтому мы провели сорбцию этих белков на сорбенты при Т=22°С в течение 30 мин. После центрифугирования комплекса (сорбент + белки) количество несорбированного белка в надосадочной жидкости оценивались качественно по наличию белковых полос в ПАГ и сравнению их с белковыми полосами в препаратах до сорбции на ПАН-О и ПАН-С. Широко используемый для оценки концентрации белка в растворах метод Лоури не мог быть использован в случае применения сорбентов ПАН-О или ПАН-С (Lowry O.K., Roenbrough N.J. Faff N.J, Randal R.J. Protein measurement with folin reagent. «J.Biol.Chem.», 1951, том 193, стр.265-267).It was important to study the adsorption of non-viral proteins on the PAN-O and PAN-S sorbents: 1% bovine serum albumin, which is widely used in virology in immunological reactions, immune serum proteins, and allantoic fluid proteins. Therefore, we sorbed these proteins onto sorbents at T = 22 ° C for 30 min. After centrifugation of the complex (sorbent + proteins), the amount of unsorbed protein in the supernatant was evaluated qualitatively by the presence of protein bands in PAG and their comparison with protein bands in the preparations before sorption on PAN-O and PAN-S. The Lowry method, widely used to estimate the concentration of protein in solutions, could not be used in the case of the use of PAN-O or PAN-S sorbents (Lowry OK, Roenbrough NJ Faff NJ, Randal RJ Protein measurement with folin reagent. "J. Biol. Chem." , 1951, Volume 193, pp. 265-267).
Дело в том, что часть частиц сорбентов была столь мала, что они не осаждались при центрифугировании до 10000 об/мин и присутствовали в тестовых растворах, создавая неспецифическое окрашивание. Анализ биологических материалов при электрофорезе в полиакриамидном геле до и после сорбции на сорбенты ПАН-О или ПАН-С показал, что 1% бычий сывороточный альбумин садится примерно на 70%, аллантоисные белки иммобилизуются полностью, белки иммунной сыворотки сорбируются примерно 90%. На фиг.1 и 2 приведены данные по электрофорезу альбумина и сывороточных белков.The fact is that part of the sorbent particles was so small that they did not precipitate during centrifugation up to 10,000 rpm and were present in test solutions, creating non-specific staining. Analysis of biological materials during polyacryamide gel electrophoresis before and after sorption on PAN-O or PAN-S sorbents showed that 1% bovine serum albumin sits by about 70%, allantoic proteins are completely immobilized, and immune serum proteins are sorbed by about 90%. Figures 1 and 2 show the electrophoresis of albumin and serum proteins.
Таким образом, предлагаемые сорбенты - приготовленный двумя способами полианилин (основание и соль) - способны в широком диапазоне температур в короткое время сорбировать на себя оболочечные вирусы, в качестве которых использовали вирусы гриппа. Вирусы гриппа А и В, независимо от их антигенной структуры, степени их очистки и способа культивирования, с помощью предлагаемых сорбентов могут быть удалены из вируссодержащих жидкостей. При этом иммобилизованные вирусы сохраняли возможность соединяться со специфическими антителами, содержащимися в иммунных сыворотках, даже спустя несколько месяцев после лиофилизации. Эти сорбенты можно также использовать для других вирусов. Полученные данные указывают на широкий спектр белковых материалов, которые могут быть удалены из различных биологических жидкостей с помощью предложенных образцов полианилина, приготовленных разными методами. Это специфические противовирусные антитела и белки невирусной природы: белки аллантоисной жидкости, белки иммунной сыворотки, в том числе альбумин.Thus, the proposed sorbents — polyaniline (base and salt) prepared in two ways — are capable of absorbing enveloped viruses for a short time over a wide range of temperatures, using influenza viruses. Influenza viruses A and B, regardless of their antigenic structure, degree of purification and method of cultivation, using the proposed sorbents can be removed from virus-containing liquids. At the same time, immobilized viruses retained the ability to bind to specific antibodies contained in immune sera, even several months after lyophilization. These sorbents can also be used for other viruses. The data obtained indicate a wide range of protein materials that can be removed from various biological fluids using the proposed polyaniline samples prepared by different methods. These are specific antiviral antibodies and non-viral proteins: allantoic fluid proteins, immune serum proteins, including albumin.
Эти сорбенты могут быть применены для обеззараживания жидкостей. В последние годы участились случаи передачи вируса гриппа А от птиц к людям в районах близкого контакта птиц с человеком, предлагаемое изобретение можно использовать для удаления вирусов из резервуаров, зараженных вирусами гриппа птиц. Полученные иммуносорбенты на основе предложенных полианилинов можно применить для определения спектра антител в иммунных сыворотках при диагностических исследованиях. Совокупность выявленных адсорбционных свойств препаратов полианилина с уникальными физико-химическими свойствами (проводимостью, электрохромизмом, инертностью), экономичностью (дешевизной сырья), позволяет приступить к разработкам детекторов на вирусы или комплексов вирусов с антителами для экспресс-диагностики вирусных инфекций. Заявленное соединение в качестве сорбента пригодно не только для удаления оболочечных вирусов (например, вирусов гриппа А и В), но и других вирусов, например вируса полиомиелита, бактериофага.These sorbents can be used to disinfect liquids. In recent years, cases of transmission of influenza A virus from birds to people in areas of close contact between birds and humans have become more frequent, the present invention can be used to remove viruses from reservoirs infected with avian influenza viruses. The obtained immunosorbents based on the proposed polyanilines can be used to determine the spectrum of antibodies in immune sera during diagnostic studies. The combination of the revealed adsorption properties of polyaniline preparations with unique physicochemical properties (conductivity, electrochromism, inertness), economy (cheap raw materials), allows us to start developing virus detectors or virus complexes with antibodies for rapid diagnosis of viral infections. The claimed compound as a sorbent is suitable not only for the removal of enveloped viruses (for example, influenza A and B viruses), but also for other viruses, for example poliomyelitis virus, bacteriophage.
Иммунная сыворотка к вирусу гриппаSorbed substance
Flu virus immune serum
Claims (20)
n=20-10000
или интерполимерного комплекса полианилина с поли-(2-акриламидо-2-метил-1-пропан-сульфоновой кислотой), т.е. соли эмеральдина с поли-2-акриламидо-2-метил-1-пропансульфоновой кислотой формулы
n=50-50000
в качестве сорбента для удаления вирусов, белков невирусной природы и для получения иммуносорбента на его основе для выделения противовирусных антител.1. Polyaniline in the form of an emeraldine base of the formula
n = 20-10000
or an interpolymer complex of polyaniline with poly- (2-acrylamido-2-methyl-1-propanesulfonic acid), i.e. salts of emeraldine with poly-2-acrylamido-2-methyl-1-propanesulfonic acid of the formula
n = 50-50000
as a sorbent for the removal of viruses, proteins of non-viral nature and to obtain an immunosorbent based on it for the isolation of antiviral antibodies.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2007129444/04A RU2372951C2 (en) | 2007-08-01 | 2007-08-01 | Polyaniline as sorbents for removing viruses, non-viral proteins and as immunosorbent base, method of removing or attaching viruses using said sorbents, immunoadsorption method using said sorbents, sorption method using said sorbents |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2007129444/04A RU2372951C2 (en) | 2007-08-01 | 2007-08-01 | Polyaniline as sorbents for removing viruses, non-viral proteins and as immunosorbent base, method of removing or attaching viruses using said sorbents, immunoadsorption method using said sorbents, sorption method using said sorbents |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2007129444A RU2007129444A (en) | 2009-02-10 |
RU2372951C2 true RU2372951C2 (en) | 2009-11-20 |
Family
ID=40546351
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2007129444/04A RU2372951C2 (en) | 2007-08-01 | 2007-08-01 | Polyaniline as sorbents for removing viruses, non-viral proteins and as immunosorbent base, method of removing or attaching viruses using said sorbents, immunoadsorption method using said sorbents, sorption method using said sorbents |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2372951C2 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2491990C1 (en) * | 2012-04-16 | 2013-09-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Омский государственный университет им. Ф.М. Достоевского" | Method of producing modified sorbent of platinum metals |
-
2007
- 2007-08-01 RU RU2007129444/04A patent/RU2372951C2/en active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2491990C1 (en) * | 2012-04-16 | 2013-09-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Омский государственный университет им. Ф.М. Достоевского" | Method of producing modified sorbent of platinum metals |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2007129444A (en) | 2009-02-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA014533B1 (en) | Detection method for influenza viruses | |
Clark et al. | In vitro studies on the use of clay, clay minerals and charcoal to adsorb bovine rotavirus and bovine coronavirus | |
Farkas et al. | Adsorption of rotavirus, MS2 bacteriophage and surface-modified silica nanoparticles to hydrophobic matter | |
WO2017071601A1 (en) | Adsorbing material for multiple pathogenic factors of sepsis as well as preparation method and application thereof | |
Girot et al. | Composite affinity sorbents and their cleaning in place | |
RU2372951C2 (en) | Polyaniline as sorbents for removing viruses, non-viral proteins and as immunosorbent base, method of removing or attaching viruses using said sorbents, immunoadsorption method using said sorbents, sorption method using said sorbents | |
Ito et al. | Component (s) of Sendai virus that can induce interferon in mouse spleen cells | |
US20100297604A1 (en) | Methods and reagents for virus isolation and detection | |
Hartley et al. | STUDIES OF MOUSE POLYOMA VIRUS INFECTION: IV. EVIDENCE FOR MUCOPROTEIN ERYTHROCYTE RECEPTORS IN POLYOMA VIRUS HEMAGGLUTINATION | |
Adair et al. | Detection of influenza A type‐specific antibodies in chicken and turkey sera by enzyme linked immunosorbent assay | |
Adair et al. | Serological studies with reoviruses in chickens, turkeys and ducks | |
RU2329505C1 (en) | Method of immunosorbent production for virus-specific antibody binding | |
Tevethia et al. | Antigenic characterization of infectious bronchitis virus | |
CN105504320B (en) | A kind of affine biomembrane, preparation method and applications | |
Ivanova et al. | Adsorption of influenza A and B viruses on detonation nanodiamonds materials | |
Lang et al. | Wilmot virus a new influenza A virus infecting turkeys | |
NISHIKAWA et al. | A new paramyxovirus isolated from cynomolgus monkeys | |
Nakakita et al. | Preparation and detection of glycan-binding activity of influenza virus | |
RU2734538C1 (en) | Method for sorption removal of whole pathogenic bacterial cells from solution using autoclaved immobilized lysozyme | |
RU2815532C1 (en) | Diagnostic kit for detecting antibodies to avian influenza virus and identifying subtype of hemagglutinating viral agent in hemagglutination inhibition reaction | |
Yu et al. | Development of a specific latex agglutination test based on a recombinant hemagglutinin protein to detect antibodies to H5 avian influenza viruses | |
RU2569510C2 (en) | Sorbent representing nanodiamond material (versions), methods for obtaining and application thereof | |
Sentsui et al. | Hemagglutination by several strains of equine infectious anemia virus | |
RU2614960C1 (en) | Method for bifunctional affinity sorbent preparation for chromatographic purification of fluorescent immunoglobulins | |
Jawetz | HEMAGGLUTINATION BY VIRUSES—ITS BIOLOGICAL IMPLICATIONS |