RU2370270C1 - Composition for wound treatment - Google Patents
Composition for wound treatment Download PDFInfo
- Publication number
- RU2370270C1 RU2370270C1 RU2008115736/15A RU2008115736A RU2370270C1 RU 2370270 C1 RU2370270 C1 RU 2370270C1 RU 2008115736/15 A RU2008115736/15 A RU 2008115736/15A RU 2008115736 A RU2008115736 A RU 2008115736A RU 2370270 C1 RU2370270 C1 RU 2370270C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- wound
- composition
- chitosan
- collagen
- solution
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для местного лечения плоских ран в стадии экссудативного и пролиферативного воспаления, эпителизации, ожоговой поверхности II-III-A степени, санированного ожога III-Б степени в качестве временного раневого покрытия.The invention relates to medicine, namely to surgery, and can be used for local treatment of flat wounds in the stage of exudative and proliferative inflammation, epithelization, burn surface II-III-A degree, sanitized burn III-B degree as a temporary wound cover.
Известна композиция в виде пленки на основе хитозана, содержащая ферментный препарат трипсин, которая модифицирована сшивающим агентом - додецилсульфатом натрия [1], обладающая высокой адсорбирующей способностью. Однако указанная композиция имеет невысокую антимикробную активность, плохо повторяет рельеф раневой поверхности при аппликации, вызывает слабый и кратковременный обезболивающий эффект.A known composition in the form of a film based on chitosan containing the enzyme preparation trypsin, which is modified with a crosslinking agent, sodium dodecyl sulfate [1], has a high adsorption capacity. However, this composition has a low antimicrobial activity, poorly repeats the relief of the wound surface during application, causes a weak and short-term analgesic effect.
Известна композиция для лечения плоскостных ран или неглубоких ожоговых ран в виде полимерной пленки на основе хитозана, содержащая до 20% поливинилового спирта или полиэтиленгликоля, антибактериальные или антисептические препараты, биодеградирующая в тканях раны с высокой адсорбирующей раневой секрет способностью [2].A known composition for the treatment of planar wounds or shallow burn wounds in the form of a polymer film based on chitosan, containing up to 20% polyvinyl alcohol or polyethylene glycol, antibacterial or antiseptic drugs, biodegradable in wound tissues with high adsorbing wound secretion [2].
Однако пленка не может быть применена при глубоких ожоговых ранах III-A и III-Б степеней по причине быстрой биодеградации в раневой среде и требует частых повторных перевязок и дополнительной обработки гнойной раны растворами антисептиков. Кроме того, в составе пленки отсутствуют местноанестезирующие препараты, что сопровождается в процессе лечения болезненными перевязками, особенно ожоговых ран.However, the film cannot be used for deep burn wounds of III-A and III-B degrees due to rapid biodegradation in the wound environment and requires frequent repeated dressings and additional treatment of the purulent wound with antiseptic solutions. In addition, the film contains no local anesthetics, which is accompanied by painful dressings, especially burn wounds, during treatment.
Наиболее близкой к заявляемой композиции по совокупности признаков является биополимерная композиция для лечения ран «Коллахит», содержащая хитозан в количестве 5-50 мас.%, получаемый промышленным методом в соответствии с ТУ 9289-046-04689375-96, бычий коллаген, сшитый с помощью 0,1-10% глутарового альдегида или глиоксаля, до 100 мас.%. Композиция дополнительно может содержать антисептические препараты, например фурагин в количестве от 0,5 до 5% к массе композиции, анестетики, например анилокаин в количестве от 3 до 5% к массе композиции [3].Closest to the claimed composition according to the totality of signs, is the biopolymer composition for the treatment of wounds “Collachite”, containing chitosan in an amount of 5-50 wt.%, Obtained industrially in accordance with TU 9289-046-04689375-96, bovine collagen crosslinked with 0.1-10% glutaraldehyde or glyoxal, up to 100 wt.%. The composition may additionally contain antiseptic preparations, for example, furagin in an amount of from 0.5 to 5% by weight of the composition, anesthetics, for example anilokain in an amount of from 3 to 5% by weight of the composition [3].
Однако известная композиция «Коллахит» для лечения ран обладает высокой адгезией к раневой поверхности благодаря большому содержанию в ней химически сшитого бычьего коллагена. Соотношение модифицированного коллагена с хитозаном составляет 9:1. Это свойство композиции создает технические трудности при проведении перевязок раневой поверхности. Кроме того, стоимость композиции достаточно высока из-за высокой доли коллагена в ее составе. Применяемый в композиции хитозан из панциря крабов содержит до 0,2 мас.% нерастворимых веществ, имеет степень дезацетилирования 80-87%, содержит чужеродного белка менее 0,1 мас.%.However, the well-known composition "Collachite" for the treatment of wounds has high adhesion to the wound surface due to the high content of chemically cross-linked bovine collagen. The ratio of modified collagen to chitosan is 9: 1. This property of the composition creates technical difficulties when performing dressings of the wound surface. In addition, the cost of the composition is quite high due to the high proportion of collagen in its composition. The crab shell chitosan used in the composition contains up to 0.2 wt.% Insoluble substances, has a degree of deacetylation of 80-87%, and contains a foreign protein of less than 0.1 wt.%.
Однако указанное количество нерастворимых примесей и чужеродного белка, способного вызывать аллергические реакции, соответствует характеристикам пищевого хитозана и является причиной снижения ранозаживляющих свойств композиции. Кроме того, при получении комплекса хитозан-коллаген используется предварительно сшитый глутаровым альдегидом коллаген, а хитозан добавляется после реакции сшивания. Такая технология не создает устойчивости включаемых в состав композиции антисептических и анестезирующих средств. Включенные препараты быстро теряются из состава композиции на раневой поверхности, в результате чего патологическая микрофлора в 30% случаев в течение 3 суток продолжает высеваться вплоть до стадии активной эпителизации раны. Быстрое снижение концентрации в ране местноанестезирующих препаратов сокращало сроки эффективного обезболивания до 24 часов. Кроме того, высокая адгезия пленочной или губчатой композиции к раневой поверхности создает технические трудности при удалении повязок с раны. Это обстоятельство заставляет применять обильное увлажнение повязки для предупреждения дополнительной травмы раневой поверхности.However, the indicated amount of insoluble impurities and a foreign protein that can cause allergic reactions corresponds to the characteristics of food chitosan and is the reason for the decrease in the wound healing properties of the composition. In addition, in the preparation of the chitosan-collagen complex, collagen pre-crosslinked with glutaraldehyde is used, and chitosan is added after the crosslinking reaction. This technology does not create the stability of the antiseptic and anesthetic agents included in the composition. The included preparations are quickly lost from the composition on the wound surface, as a result of which pathological microflora in 30% of cases continues to be sown for 3 days up to the stage of active wound epithelization. A rapid decrease in the concentration of locally anesthetizing drugs in the wound reduced the time for effective analgesia to 24 hours. In addition, the high adhesion of the film or sponge composition to the wound surface creates technical difficulties in removing dressings from the wound. This circumstance forces the use of abundant moistening of the dressing to prevent additional injury to the wound surface.
Задача изобретения - получение композиции из коллагена и хитозана, обладающей сниженной адгезией к ране, способной легко удаляться с раневой поверхности при перевязках, повышенными ранозаживляющими свойствами, быстрым и пролонгированным антисептическим и анестезирующим эффектами.The objective of the invention is to obtain a composition of collagen and chitosan with reduced adhesion to the wound, able to easily be removed from the wound surface during dressings, increased wound healing properties, quick and prolonged antiseptic and anesthetic effects.
Задачу достигают за счет того, что композиция, содержащая в качестве коллагена 2% раствор ацетата коллагена, а в качестве хитозана 2% раствор ацетата хитозана медицинского назначения молекулярной массы 100-700 kDa и степени дезацетилирования свыше 95%, предварительно смешанные в соотношении 1:3 и сшитые раствором глутарового альдегида в конечной концентрации 0,2%, а также содержащая твин-80 в конечной концентрации 0,02%, дополнительно содержит официнальные синтетические или природные антисептические препараты, например диоксидин или шиконин в количестве от 1 до 3% от массы композиции, и/или официнальные местноанестезирующие препараты, например ксикаин, мепивакаин или артикаин в количестве 4-6% от массы композиции, причем перед получением комплекса коллагена и хитозана в гель хитозана дополнительно вводят водные растворы антисептических и/или местноанестезирующих препаратов.The objective is achieved due to the fact that the composition containing collagen as a 2% solution of collagen acetate, and as chitosan as a 2% solution of medical chitosan acetate with a molecular weight of 100-700 kDa and a degree of deacetylation of more than 95%, pre-mixed in a ratio of 1: 3 and crosslinked with a solution of glutaraldehyde in a final concentration of 0.2%, as well as containing tween-80 in a final concentration of 0.02%, additionally contains official synthetic or natural antiseptic preparations, for example dioxidine or shikonin in a quantity from 1 to 3% by weight of the composition, and / or official local anesthetics, for example xicain, mepivacaine or articaine in an amount of 4-6% by weight of the composition, moreover, aqueous solutions of antiseptic and / are added to the chitosan gel complex before or local anesthetics.
Способ получения композиции для лечения ран осуществляют следующим образом.A method of obtaining a composition for the treatment of wounds is as follows.
Перед образованием комплекса, состоящего из гелевых растворов коллагена и хитозана, предварительно сухой хитозан марки «М», полученный из клешней камчатского краба молекулярной массы 100-700 kDa и степени дезацетилирования свыше 95% (ТУ 9289-001-92741007-2000), растворяют в 1% растворе уксусной кислоты и в полученный раствор ацетата хитозана последовательно вводят официнальные антисептические препараты, например диоксидин или шиконин в количестве от 1 до 3% от массы композиции, и/или официнальные местноанестезирующие препараты, например ксикаин, мепивакаин или артикаин в количестве от 4 до 6% от массы композиции, с получением 2% раствора хитозана в конечной концентрации. Далее 2% раствор ацетата бычьего коллагена и модифицированного таким образом 2% раствора хитозана сливают в соотношении 1:3, добавляют дистиллированную воду, поверхностноактивное вещество - твин-80 в конечной концентрации 0,02%, сшивающий агент - глутаровый альдегид в конечной концентрации 0,2%, смесь замораживают, лиофилизируют в вакууме с получением губки, упаковывают в герметичный пакет, проводят гамма-стерилизацию, продукт используют как композицию для лечения ран различного происхождения.Before the formation of a complex consisting of gel solutions of collagen and chitosan, the “M” grade dry chitosan obtained from king crab claws of molecular weight 100-700 kDa and a degree of deacetylation of more than 95% (TU 9289-001-92741007-2000) is dissolved in 1% solution of acetic acid and official antiseptic preparations, for example dioxidine or shikonin in an amount of 1 to 3% by weight of the composition, and / or official local anesthetics, for example xicain, mepivac, are successively introduced into the resulting solution of chitosan acetate anin or articaine in an amount of from 4 to 6% by weight of the composition, to obtain a 2% solution of chitosan in a final concentration. Next, a 2% solution of bovine collagen acetate and a 2% solution of chitosan thus modified is poured in a ratio of 1: 3, distilled water is added, the surface-active substance is tween-80 at a final concentration of 0.02%, the crosslinking agent is glutaraldehyde at a final concentration of 0, 2%, the mixture is frozen, lyophilized in vacuo to obtain a sponge, packaged in an airtight bag, gamma sterilized, the product is used as a composition for treating wounds of various origins.
Поэтапность процессаProcess step by step
Приготовление раствора уксусной кислоты. В реактор-смеситель, снабженный мешалкой и рубашкой, заливают 800 мл дистиллированной воды, добавляют при перемешивании и температуре 20±5°С ледяную уксусную кислоту в объеме 20 мл, перемешивают 5 мин, полученный раствор используют для приготовления раствора хитозана.Preparation of acetic acid solution. 800 ml of distilled water are poured into a mixer reactor equipped with a stirrer and a jacket, glacial acetic acid is added in a volume of 20 ml with stirring at a temperature of 20 ± 5 ° С, stirring for 5 minutes, the resulting solution is used to prepare a chitosan solution.
Приготовление 2% раствора ацетата хитозана. В приготовленный раствор уксусной кислоты при перемешивании и температуре 20±5°С добавляют 23,7 г хитозана марки «М», полученный из клешней камчатского краба с молекулярной массой 100-700 kDa, и степени дезацетилирования свыше 95% (содержание нерастворимых веществ до 0,05 мас.%, чужеродного белка менее 0,01 мас.%). Массу перемешивают в течение 4-5 часов до полного растворения хитозана. В гель хитозана добавляют последовательно и тщательно перемешивают от 0,4 до 1,2 г антисептика, например диоксидина или шиконина, и от 1,6 до 2,4 г анестетика, например ксикаина, мепивакаина или артикаина Объем геля доводят дистиллированной водой до 1185 мл.Preparation of a 2% solution of chitosan acetate. 23.7 g of brand “M” chitosan obtained from Kamchatka crab claws with a molecular weight of 100-700 kDa and a degree of deacetylation of over 95% (insoluble matter up to 0) are added to the prepared solution of acetic acid with stirring and a temperature of 20 ± 5 ° C. , 05 wt.%, Foreign protein less than 0.01 wt.%). The mass is stirred for 4-5 hours until complete dissolution of chitosan. From 0.4 to 1.2 g of an antiseptic, such as dioxidine or shikonin, and from 1.6 to 2.4 g of an anesthetic, such as xicain, mepivacaine or articaine, are successively added to the chitosan gel and mixed thoroughly. The volume of the gel is adjusted with distilled water to 1185 ml .
Приготовление водного раствора глутарового альдегида и твина-80. В реактор-смеситель, снабженный мешалкой и рубашкой, заливают 730 мл дистиллированной воды, при перемешивании и температуре 20±5°С добавляют 5,8 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида и 0,224 г (8 капель) твина-80. Массу перемешивают в течение 5-10 минут. Полученный раствор идет на приготовление композиционной смеси заданного состава.Preparation of an aqueous solution of glutaraldehyde and tween-80. 730 ml of distilled water are poured into the mixer reactor equipped with a stirrer and a jacket, 5.8 ml of a 25% solution of glutaraldehyde and 0.224 g (8 drops) of tween-80 are added with stirring and a temperature of 20 ± 5 ° С. The mass is stirred for 5-10 minutes. The resulting solution is used to prepare a composite mixture of a given composition.
Приготовление композиционной смеси. В реактор-смеситель, снабженный мешалкой, рубашкой и мерником, заливают 730 мл 2% раствора бычьего коллагена (ФСП 42-0282-1221-01). Далее при перемешивании и температуре 20±5°С добавляют 1185 мл 2% раствора ацетата хитозана с введенными в его состав антисептическим и анестетическим препаратами, постепенно приливают раствор глутарового альдегида и твина-80, тщательно перемешивают в течение 10-15 мин. Розлив композиционной смеси на противни. Противни предварительно протирают спиртом из расчета 40-50 мл/противень. Затем композиционную смесь разливают мерным стаканом на протвини так, чтобы толщина слоя смеси составляла 4±1 мм. Разлитую на противни композиционную смесь можно хранить до замораживания не более 1 часа. В противни с композиционной смесью при необходимости устанавливают делительные решетки.Preparation of the composite mixture. 730 ml of a 2% bovine collagen solution (FSP 42-0282-1221-01) is poured into a mixer reactor equipped with a stirrer, a jacket and a measuring device. Then, with stirring and a temperature of 20 ± 5 ° C, 1185 ml of a 2% solution of chitosan acetate with antiseptic and anesthetic drugs introduced into it are added, a solution of glutaraldehyde and tween-80 is gradually poured, mix thoroughly for 10-15 minutes. Pouring the mixture onto baking sheets. Baking sheets are pre-wiped with alcohol at the rate of 40-50 ml / baking sheet. Then the composite mixture is poured with a measuring cup on a pan so that the layer thickness of the mixture is 4 ± 1 mm. The composite mixture spilled on baking sheets can be stored for no more than 1 hour until frozen. In baking sheets with the composite mixture, if necessary, dividing grids are installed.
Замораживание композиционной смеси.Freezing the composite mixture.
Противни с композиционной смесью устанавливают в холодильную камеру для заморозки (КТК-800, НС-700 или в сублимационную установку TG-15) при температуре плит 20±5°С. Смесь замораживают до температуры минус 40±3°С. Время замораживания 2-3 часа.Baking trays with a composite mixture are installed in a refrigerating chamber for freezing (KTK-800, NS-700 or in a TG-15 sublimation unit) at a plate temperature of 20 ± 5 ° С. The mixture is frozen to a temperature of minus 40 ± 3 ° C. Freezing time 2-3 hours.
Сублимационная сушка.Freeze-drying.
По окончании процесса замораживания продукт перегружают в сублимационную установку для установок LZ, затем камеру вакуумируют до остаточного давления 133 Па (1 мм рт.ст), после чего начинают процесс сушки продукта за счет подвода тепла от теплоносителя к замороженному продукту через поверхность греющих плит.At the end of the freezing process, the product is transferred to a sublimation unit for LZ units, then the chamber is evacuated to a residual pressure of 133 Pa (1 mmHg), after which the drying process of the product begins by supplying heat from the coolant to the frozen product through the surface of the heating plates.
Процесс сублимации осуществляют при остаточном давлении от 44,3 до 133 Па (от 0,33 до 1 мм рт.ст.) и температуре теплоносителя 45±5°С. Температура продукта не должна превышать плюс 50°С. Полный цикл сушки продукта составляет 8±2 часа. По окончании процесса сублимационной сушки проводят девакуумирование установки.The sublimation process is carried out at a residual pressure of 44.3 to 133 Pa (0.33 to 1 mm Hg) and a coolant temperature of 45 ± 5 ° C. The temperature of the product should not exceed plus 50 ° C. The complete drying cycle of the product is 8 ± 2 hours. At the end of the freeze-drying process, the unit is evacuated.
Экспериментальное применение.Experimental application.
Чистые плоскостные раны. На белых крысах популяции Wistar массой 200 г наносили в межлопаточной области полнослойные плоскостные дефекты кожи с подкожным соединительнотканным комплексом площадью 400 мм2 с соблюдением правил асептики. После остановки кровотечения из раны последнюю закрывали предлагаемой композицией для лечения ран в виде губки. Губка содержала бычий коллаген и хитозан медицинского назначения в соотношении 1:3, сшитые глутаровым альдегидом в конечной концентрации 0,2%, и содержала твин-80 в конечной концентрации 0,02%. В качестве контрольного раневого покрытия использовали композицию «Коллахит». Сверху на раневые покрытия фиксировали сухую асептическую повязку. Контроль репарации кожи осуществляли до полной эпителизации дефекта с помощью анализа парафиновых срезов раневой поверхности, окрашенных гематоксилином Эрлиха и эозином, пикрофуксином по Ван Гизон в модификации Н.М.Dodds (коллагеновые волокна и фибробласты), резорцином и фуксином по Вейгерту с тонированием световым зеленым по А.П.Сорокину (эластические волокна), импрегнацией азотно-кислым серебром по Карупу (ретикулярные волокна).Clean, flat wounds. On white rats, Wistar populations weighing 200 g inflicted full-layer planar skin defects in the interscapular region with a subcutaneous connective tissue complex of 400 mm 2 in compliance with aseptic rules. After stopping bleeding from the wound, the latter was closed with the proposed composition for the treatment of wounds in the form of a sponge. The sponge contained bovine collagen and medical chitosan in a 1: 3 ratio, crosslinked with glutaraldehyde at a final concentration of 0.2%, and contained tween-80 at a final concentration of 0.02%. As a control wound cover used the composition "Collachite". A dry aseptic dressing was fixed on top of the wound dressings. Skin repair was monitored until the defect was completely epithelized by analyzing paraffin sections of the wound surface stained with Ehrlich hematoxylin and eosin, van Gieson picrofuchsin modified by N.M. Dodds (collagen fibers and fibroblasts), Weigert resorcinol and fuchsin with light green tinting A.P. Sorokin (elastic fibers), impregnation with nitric acid silver according to Karup (reticular fibers).
Результаты исследования в опытной группе животных показали, что в зоне раневого дефекта состояние раневого покрытия через сутки представляет собой гелеобразную массу, полностью заполняющую раневой дефект кожи. Посев на наличие микробной флоры под гелеобразной массой через 1,2 и 5 суток послеоперационного периода роста не обнаружил. В случае необходимости удаления гелеобразной массы с поверхности раны полное удаление легко достигалось под струей стерильного физиологического раствора. В зоне рубцевания при использовании губчатой композиции для лечения ран полностью к 24 суткам после операции восстанавливается объем кровеносных сосудов. Хорошая васкуляризация раневой ткани влияет на раннее закрытие раневого дефекта с образованием зрелой соединительной ткани, полноценного многослойного плоского эпителия. Сосочковый слой в зоне рубца характеризуется наличием зрелых ретикулярных и коллагеновых волокон. Сетчатый слой раневой зоны имеет достаточный объем ретикулярных и коллагеновых волокон с плотной укладкой волокнистых элементов, ход волокон строго ориентирован поперечно оси тела. Воспалительная клеточная реакция в опытной группе крыс отсутствует. В контрольной группе животных раневое покрытие «Коллахит-Г» через 1 сутки представляет собой плотную коркообразную пленку, плотно фиксированную к раневой поверхности. Попытки удаления раневого покрытия приводили к дополнительной травме раны и повторному кровотечению. Раневое покрытие удалялось с помощью хирургических инструментов только после его обильного смачивания стельным физиологическим раствором. Посев на наличие микробной флоры под контрольным раневым покрытием через 1,2 и 5 суток послеоперационного периода роста не обнаружил.The results of the study in the experimental group of animals showed that in the zone of the wound defect the state of the wound cover in a day is a gel-like mass that completely fills the wound defect of the skin. Sowing for the presence of microbial flora under the gel mass after 1.2 and 5 days of the postoperative growth period was not found. If it is necessary to remove the gel-like mass from the surface of the wound, complete removal was easily achieved under the stream of sterile saline. In the scarring zone, when using a spongy composition for treating wounds, the volume of blood vessels is completely restored by 24 days after the operation. Good vascularization of wound tissue affects the early closure of a wound defect with the formation of mature connective tissue, a full multilayer squamous epithelium. The papillary layer in the scar area is characterized by the presence of mature reticular and collagen fibers. The mesh layer of the wound zone has a sufficient volume of reticular and collagen fibers with a dense laying of fibrous elements, the course of the fibers is strictly oriented transversely to the axis of the body. Inflammatory cell response in the experimental group of rats is absent. In the control group of animals, the wound dressing “Collachite-G” after 1 day is a dense crust-like film, tightly fixed to the wound surface. Attempts to remove the wound cover led to additional injury to the wound and repeated bleeding. The wound cover was removed using surgical instruments only after it was abundantly wetted with physiological saline. Sowing for the presence of microbial flora under the control wound cover after 1.2 and 5 days of the postoperative growth period was not found.
Пример 1. На 10 белых крысах популяции Wistar массой 200 г наносили в межлопаточной области полнослойные плоскостные дефекты кожи с подкожным соединительнотканным комплексом площадью 400 мм2 с соблюдением правил асептики. После остановки кровотечения рану закрывали композицией для лечения ран в виде губки. Контрольная группа животных (10 крыс) получала на раневую поверхность изделие медицинского назначения в виде губки «Коллахит-Г». Контроль рубцового участка кожи осуществляли на 24-е сутки с помощью анализа парафиновых срезов.Example 1. On 10 white rats of a Wistar population weighing 200 g, full-layer planar skin defects were applied in the interscapular region with a subcutaneous connective tissue complex of 400 mm 2 in compliance with aseptic rules. After stopping the bleeding, the wound was closed with a composition for the treatment of wounds in the form of a sponge. The control group of animals (10 rats) received a medical product in the form of a “Collahit-G” sponge on the wound surface. The control of the cicatricial region of the skin was carried out on the 24th day using the analysis of paraffin sections.
Посевы образцов тканей с раневой поверхности, взятые из-под раневых покрытий на 2 и 5 сутки послеоперационного периода, показали отрицательные результаты - роста микрофлоры не обнаружено. Идентичные результаты получены при использовании контрольного раневого покрытия «Коллахит-Г».Crops of tissue samples from the wound surface, taken from under the wound coverings on the 2nd and 5th day of the postoperative period, showed negative results - microflora growth was not detected. Identical results were obtained using the control wound cover "Collachite-G".
Результаты анализа показали, что доля сосудов дермы в зоне рубца опытной группы животных составила 18,2±1,4%, а в контроле только 12,3±1,6%. В сосочковом слое кожи размеры коллагеновых волокон в опыте составили 2,2±0,1 мкм, интервалы между волокнами 1,0-4,7 мкм, объем волокон в образце ткани составил 32,6±0,8%. В тканях контрольных животных соответствующие параметры составили 1,6±0,1 мкм; 1,0-7,0 мкм; 27,5±1,5%.The results of the analysis showed that the proportion of dermal vessels in the rumen area of the experimental group of animals was 18.2 ± 1.4%, and in the control only 12.3 ± 1.6%. In the papillary layer of the skin, the sizes of collagen fibers in the experiment were 2.2 ± 0.1 μm, the intervals between the fibers were 1.0–4.7 μm, the volume of fibers in the tissue sample was 32.6 ± 0.8%. In the tissues of control animals, the corresponding parameters were 1.6 ± 0.1 μm; 1.0-7.0 microns; 27.5 ± 1.5%.
Анализ числовых характеристик ретикулярных волокон в раневой зоне опытных животных показал, что размеры волокон, интервалы между ними и объем, занимаемый ими, составляют соответственно 2,2±0,1 мкм; 0,7-5 мкм; 32,0±1,3%. В контроле числовые характеристики ретикулярных волокон составили соответственно 0,4±0,15 мкм; 0,7-5 мкм и 24,6±1,4%.An analysis of the numerical characteristics of the reticular fibers in the wound zone of experimental animals showed that the fiber sizes, the intervals between them and the volume occupied by them are 2.2 ± 0.1 μm, respectively; 0.7-5 microns; 32.0 ± 1.3%. In the control, the numerical characteristics of the reticular fibers were 0.4 ± 0.15 μm, respectively; 0.7-5 μm and 24.6 ± 1.4%.
Количество лимфоплазматических клеток с элементами активной вакуолизации, указывающих на признаки иммунной реакции в ответ на внедрение чужеродного материала в рану, в опытной группе тканей составило 0,5±0,2%, в контроле 5,6±0,8%. Толщина сетчатого слоя у животных в опытной группе составила 345,7±16,58 мкм, а в контрольной группе - 117,5±25,7 мкм.The number of lymphoplasmic cells with elements of active vacuolization, indicating signs of an immune response in response to the introduction of foreign material into the wound, in the experimental group of tissues was 0.5 ± 0.2%, in the control 5.6 ± 0.8%. The thickness of the mesh layer in animals in the experimental group was 345.7 ± 16.58 μm, and in the control group - 117.5 ± 25.7 μm.
Подсчет коллагеновых волокон в сетчатом слое кожи показал, что их размеры составляют 2,42±0,07 мкм, расстояние между волокнами 0,75-5 мкм, объем, занимаемый волокнами, 33,4±2,1%. В контроле соответствующие показатели составили 2,38±0,07 мкм; 0,7-8,5 мкм; 21,8±1,9%.Counting collagen fibers in the reticular layer of the skin showed that their sizes are 2.42 ± 0.07 μm, the distance between the fibers is 0.75-5 μm, the volume occupied by the fibers is 33.4 ± 2.1%. In the control, the corresponding indices were 2.38 ± 0.07 μm; 0.7-8.5 microns; 21.8 ± 1.9%.
Размеры ретикулярных волокон в сетчатом слое дермы у опытной группы животных составили, в среднем, 1,3±0,4 мкм, расстояние между этими волокнами - 1,3-8,0 мкм, а объем, занимаемый этими волокнами, составил 35,1±1,7%. В коже контрольных крыс соответствующие параметры составили 1,5±0,4 мкм; 0,8-7 мкм; 24,3±2,6%The dimensions of the reticular fibers in the reticular layer of the dermis in the experimental group of animals averaged 1.3 ± 0.4 μm, the distance between these fibers was 1.3-8.0 μm, and the volume occupied by these fibers was 35.1 ± 1.7%. In the skin of control rats, the corresponding parameters were 1.5 ± 0.4 μm; 0.8-7 microns; 24.3 ± 2.6%
Объем лимфоплазматических клеток в состоянии раздражения в сетчатом слое опытных животных составляет 0,45±0,08%, в контроле - 6,7±1,0%The volume of lymphoplasmic cells in a state of irritation in the reticular layer of experimental animals is 0.45 ± 0.08%, in the control - 6.7 ± 1.0%
Таким образом, нанесение на раневую поверхность предлагаемой композиции формирует гелевый слой, надежно защищающий рану от инфекции. На 24-е сутки заживления раневого дефекта формирование соединительной ткани происходит за счет ориентированной архитектоники волокнистых структур и межуточного матрикса. Применение опытной композиции для лечения ран приводит к образованию практически сформированного сосочкового слоя кожи на 24-е сутки заживления. Раннее созревание молодой грануляционной ткани, быстрое формирование ее объема с четкой ориентацией коллагеновых волокон указывает на повышенные ранозаживляющие свойства предлагаемой композиции. В отличие от опытного раневого покрытия, использование изделия медицинского назначения «Коллахит-Г» на 24 сутки после операции характеризуется лишь частичным восстановлением сосудов, массивной плазмоклеточной воспалительной инфильтрацией, отсутствием сосочкового слоя кожи, что оценивается как признак замедленного формирования кожи с элементами иммунологического конфликта.Thus, applying to the wound surface of the proposed composition forms a gel layer that reliably protects the wound from infection. On the 24th day of the healing of the wound defect, the formation of connective tissue occurs due to the oriented architectonics of the fibrous structures and the interstitial matrix. The use of an experimental composition for the treatment of wounds leads to the formation of a practically formed papillary layer of the skin on the 24th day of healing. The early maturation of young granulation tissue, the rapid formation of its volume with a clear orientation of collagen fibers indicates increased wound healing properties of the proposed composition. In contrast to the experimental wound dressing, the use of the Collahit-G medical device on the 24th day after the operation is characterized only by partial restoration of blood vessels, massive plasma cell inflammatory infiltration, and the absence of the papillary layer of the skin, which is assessed as a sign of delayed skin formation with elements of an immunological conflict.
Раны в стадии экссудативного воспаления. На белых крысах популяции Wistar массой 200 г наносили в межлопаточной области полнослойные плоскостные дефекты кожи с подкожным соединительнотканным комплексом площадью 400 мм с соблюдением правил асептики. После остановки кровотечения из раны на ее поверхность наносили 10% раствор односуточного фильтрата каловых масс подопытного животного в объеме 1 мл с содержанием микробной флоры 1 млрд в 1 мл. К ране фиксировали асептическую повязку. Через 24 часа после инфицирования раны на ее поверхность наносили губчатую композицию, содержащую бычий коллаген и хитозан медицинского назначения в соотношении 1:3, сшитые глутаровым альдегидом в конечной концентрации 0,2%, содержащую твин-80 в конечной концентрации 0,02%, причем хитозан изначально дополнительно содержал антисептический препарат диоксидин в количестве 1-3% к массе композиции и анестетик ксикаин в количестве 4-6% к массе композиции. В качестве контрольного раневого покрытия использовали композицию «Коллахит-ФА, содержащую фурагин калия в количестве 1-5% к массе композиции и анестетик анилокаин в количестве 3-5% к массе композиции. Сверху на раневые покрытия фиксировали сухую асептическую повязку.Wounds in the stage of exudative inflammation. On white rats, Wistar populations weighing 200 g inflicted full-layer planar skin defects in the interscapular region with a subcutaneous connective tissue complex of 400 mm in compliance with aseptic rules. After stopping the bleeding from the wound, a 10% solution of one-day fecal filtrate of the experimental animal in a volume of 1 ml with a microbial flora content of 1 billion in 1 ml was applied to its surface. An aseptic dressing was fixed to the wound. 24 hours after infection of the wound, a sponge composition containing bovine collagen and medical chitosan in a ratio of 1: 3 crosslinked with glutaraldehyde at a final concentration of 0.2%, containing tween-80 at a final concentration of 0.02%, was applied to its surface chitosan initially additionally contained an antiseptic preparation dioxidine in an amount of 1-3% by weight of the composition and anesthetic xicain in an amount of 4-6% by weight of the composition. As a control wound cover, the composition “Collachite-FA, containing potassium furagin in the amount of 1-5% by weight of the composition and anesthetic anilokain in the amount of 3-5% by weight of the composition was used. A dry aseptic dressing was fixed on top of the wound dressings.
Результаты исследований показали, что у всех животных с опытной композицией для лечения ран через 24 часа после нанесения на раневую поверхность каловой взвеси количество колониеобразующих единиц (КОЕ) на грамм высеваемого биоптата (ткани) составляет 104, а у животных с контрольным раневым покрытием этот показатель в тот же срок составил 109. Через 36 часов после бактериального загрязнения раны показатель КОЕ у всех опытных животных составил 102, а у контрольных животных - 107. Через 48 часов после бактериального загрязнения раны посев биоптатов выявил содержание микрофлоры в количестве 101 на грамм ткани, а в контроле у 50% животных биоптаты содержали 105 КОЕ. Через 72 часа после бактериального загрязнения раневого дефекта у 100% опытных животных посев ткани роста КОЕ не обнаружил. У группы контрольных животных забор биоптатов из-под пропитанного раневым отделяемым и плотного раневого покрытия «Коллахит-ФА» в срок 72 часа обнаруживает в 40% случаев рост КОЕ в количестве 103-104. Для снижения числа и степени инфицирования контрольных ран до 102 КОЕ требуется повторное нанесение свежего раневого покрытия «Коллахит-ФА».The results of the studies showed that in all animals with an experimental composition for treating wounds, 24 hours after applying fecal suspension to the wound surface, the number of colony forming units (CFU) per gram of biopsy sample (tissue) is 10 4 , and in animals with a control wound coverage this indicator in the same period amounted to 10 9 . 36 hours after bacterial contamination of the wound, the CFU in all experimental animals was 10 2 , and in control animals - 10 7 . 48 hours after bacterial contamination of the wound, inoculation of the biopsy specimens revealed a microflora content of 10 1 per gram of tissue, and in the control, 50% of the animals contained 10 5 CFU. 72 hours after bacterial contamination of the wound defect in 100% of the experimental animals, no CFU growth culture was found. In the group of control animals, the collection of biopsy samples from under the soaked wound discharge and dense wound dressing “Collachite-FA” in the period of 72 hours reveals in 40% of cases the growth of CFU in the amount of 10 3 -10 4 . To reduce the number and degree of infection of control wounds to 10 2 CFU, repeated application of fresh wound dressing Collahit-FA is required.
Смена предлагаемой раневой композиции через 36 и 48 часов у опытных животных путем смывания гелевой консистенции струей стерильного физиологического раствора не вызывает болевой реакции, что указывает на пролонгированный обезболивающий эффект композиции. Смена контрольного раневого покрытия через 36-48 часов от момента нанесения на раневую поверхность сопровождается дополнительной травмой раны и вызывает выраженную болевую реакцию животных, не позволяющую выполнить указанную манипуляцию. Для снятия раневого покрытия в этом случае требуется достаточно длительное смачивание физиологическим раствором плотной поверхности изделия.Changing the proposed wound composition after 36 and 48 hours in experimental animals by washing off the gel consistency with a stream of sterile physiological saline does not cause a pain reaction, which indicates a prolonged analgesic effect of the composition. Changing the control wound cover after 36-48 hours from the moment of application to the wound surface is accompanied by an additional wound injury and causes a pronounced painful reaction of the animals, which does not allow performing the specified manipulation. To remove the wound cover in this case, a sufficiently long wetting with a physiological solution of a dense surface of the product is required.
Сроки полного заживления опытных ран составили в среднем 19±1,2 суток, в контрольной серии крыс - 26±1,8 суток.The terms of complete healing of experimental wounds averaged 19 ± 1.2 days, in the control series of rats - 26 ± 1.8 days.
Пример 2. На 12 белых крысах популяции Wistar массой 200 г наносили в межлопаточной области полнослойные плоскостные дефекты кожи с подкожным соединительнотканным комплексом площадью 400 мм2 с соблюдением правил асептики. После остановки кровотечения из раны на ее поверхность наносили 10% раствор односуточного фильтрата каловых масс подопытного животного в объеме 1 мл с содержанием микробной флоры 1 млрд в 1 мл. К ране фиксировали асептическую повязку. Через 24 часа после бактериального загрязнения раны на ее поверхность наносили губчатую композицию, содержащую бычий коллаген и хитозан медицинского назначения в соотношении 1:3, сшитые глутаровым альдегидом в конечной концентрации 0,2%, содержащую твин-80 в конечной концентрации 0,02%, причем хитозан изначально дополнительно содержал антисептический препарат диоксидин в количестве 2% к массе композиции и анестетик ксикаин в количестве 4% к массе композиции. На 10 крысах такой же массы в качестве контрольного раневого покрытия использовали композицию «Коллахит-ФА», содержащую фурагин калия в количестве 2% к массе композиции и анестетик анилокаин в количестве 4% к массе композиции. Сверху раневые покрытия в обеих группах животных закрывали сухой асептической повязкой.Example 2. On 12 white rats of a Wistar population weighing 200 g, full-layer planar skin defects were applied in the interscapular region with a subcutaneous connective tissue complex of 400 mm 2 in compliance with aseptic rules. After stopping the bleeding from the wound, a 10% solution of one-day fecal filtrate of the experimental animal in a volume of 1 ml with a microbial flora content of 1 billion in 1 ml was applied to its surface. An aseptic dressing was fixed to the wound. 24 hours after bacterial contamination of the wound, a sponge composition containing bovine collagen and medical chitosan in a ratio of 1: 3 crosslinked with glutaraldehyde in a final concentration of 0.2%, containing tween-80 in a final concentration of 0.02%, was applied to its surface. moreover, chitosan initially additionally contained an antiseptic preparation dioxidin in an amount of 2% by weight of the composition and anesthetic xicain in an amount of 4% by weight of the composition. On 10 rats of the same weight, the composition “Collachite-FA” containing potassium furagin in an amount of 2% by weight of the composition and anilestic anilokain in an amount of 4% by weight of the composition was used as a control wound cover. From above, wound dressings in both groups of animals were covered with a dry aseptic dressing.
Результаты исследований показали, что у 80% животных с опытной композицией для лечения ран через 24 часа после бактериального загрязнения раневой поверхности каловой взвесью количество колониеобразующих единиц (КОЕ) на грамм высеваемого биоптата составляло 104, а у 20% животных - 105. У крыс с контрольным раневым покрытием этот показатель в тот же срок составил 109. Через 36 часов после бактериального загрязнения раны показатель КОЕ у всех опытных животных составил 102, а у контрольных животных - 107. Через 48 часов после бактериального загрязнения раны в 80% случаев посев биоптатов выявил содержание микрофлоры в количестве 101 на грамм ткани, а в 20% случаев - 102 КОЕ. В контроле у 50% животных биоптаты содержали 105 КОЕ, а в 50% случаев - 104 КОЕ. Через 72 часа после бактериального загрязнения раневого дефекта у 100% опытных животных посев ткани роста КОЕ не обнаружил. У группы контрольных животных забор биоптатов из-под раневого покрытия «Коллахит-ФА» в срок 72 часа обнаружил в 30% рост КОЕ в количестве 104, а в 70% случаев - 103 КОЕ.The research results showed that in 80% of animals with an experimental composition for treating wounds 24 hours after bacterial contamination of the wound surface with fecal suspension, the number of colony forming units (CFU) per gram of inoculated biopsy was 10 4 , and in 20% of animals - 10 5 . In rats with control wound coverage, this indicator at the same time amounted to 10 9 . 36 hours after bacterial contamination of the wound, the CFU in all experimental animals was 10 2 , and in control animals - 10 7 . 48 hours after bacterial contamination of the wound, in 80% of cases, inoculation of biopsy samples revealed microflora in the amount of 10 1 per gram of tissue, and in 20% of cases - 10 2 CFU. In the control, in 50% of the animals, the biopsy specimens contained 10 5 CFU, and in 50% of cases - 10 4 CFU. 72 hours after bacterial contamination of the wound defect in 100% of the experimental animals, no CFU growth culture was found. In the group of control animals, the collection of biopsy samples from under the wound dressing Collahit-FA in 72 hours showed a 30% increase in CFU in the amount of 10 4 , and in 70% of cases - 10 3 CFU.
Смена предлагаемой раневой композиции через 48 часов у опытных животных производилась достаточно легко путем смывания гелевой консистенции струей стерильного физиологического раствора. Смена раневой композиции не вызывала болевой реакции. Смена контрольного раневого покрытия через 48 часов от момента аппликации на раневую поверхность сопровождалась травмой раны и вызывала выраженную болевую реакцию животных. Длительное смачивание физиологическим раствором плотной поверхности раневого покрытия позволяло его удалять. Сроки полного заживления ран опытной группы животных составили в среднем 18±1,6 суток, в контрольной серии крыс - 25±1,2 суток.Changing the proposed wound composition after 48 hours in experimental animals was carried out quite easily by washing off the gel consistency with a jet of sterile saline. The change in the wound composition did not cause a pain reaction. A change in the control wound cover after 48 hours from the moment of application to the wound surface was accompanied by a wound injury and caused a pronounced painful reaction of the animals. Prolonged wetting with a physiological solution of the dense surface of the wound cover allowed it to be removed. The terms of complete wound healing in the experimental group of animals averaged 18 ± 1.6 days, in the control series of rats - 25 ± 1.2 days.
Таким образом, применение композиции, содержащей коллаген и хитозан в соотношении 1:3, сшитых глутаровым альдегидом в конечной концентрации 0,2%, твин-80 в конечной концентрации 0,02%, дополнительно предварительно смешанные с хитозаном антисептик диоксидин в количестве 2% к массе композиции и анестетик ксикаин в количестве 4% к массе композиции, позволяет повысить ранозаживляющие свойства, упростить удаление изделия с раневой поверхности для его смены при перевязках, быстро и на длительный срок обеспечить обезболивающий эффект, существенно снизить степень инфицирования раны в ранние сроки заживления.Thus, the use of a composition containing collagen and chitosan in a 1: 3 ratio, crosslinked with glutaraldehyde in a final concentration of 0.2%, tween-80 in a final concentration of 0.02%, additionally pre-mixed with chitosan antiseptic dioxidine in an amount of 2% weight of the composition and anesthetic xicaine in the amount of 4% by weight of the composition, allows to increase wound healing properties, simplify removal of the product from the wound surface to change it during dressings, quickly and for a long time to provide anesthetic effect, significantly relieve zit extent of wound infection in the early stages of healing.
Раны в стадии пролиферативного воспаления. На белых крысах популяции Wistar массой 200 г наносили в межлопаточной области полнослойные плоскостные дефекты кожи с подкожным соединительнотканным комплексом площадью 400 мм с соблюдением правил асептики. После остановки кровотечения из раны на ее поверхность наносили 10% раствор односуточного фильтрата каловых масс подопытного животного в объеме 1 мл с содержанием микробной флоры 1 млрд в 1 мл. К ране фиксировали асептическую повязку. Через 24 часа после бактериального загрязнения раны ее поверхность 1 раз в сутки промывали стерильным физиологическим раствором, накладывали сухую асептическую повязку. Через 12 суток поверхность ран покрывалась легко кровоточащей грануляционной тканью ярко-розового цвета без раневого отделяемого. Посев биоптатов на количественное содержание микробной флоры показал, что число КОЕ на грамм ткани составляло 103-104.Wounds in the stage of proliferative inflammation. On white rats, Wistar populations weighing 200 g inflicted full-layer planar skin defects in the interscapular region with a subcutaneous connective tissue complex of 400 mm in compliance with aseptic rules. After stopping the bleeding from the wound, a 10% solution of one-day fecal filtrate of the experimental animal in a volume of 1 ml with a microbial flora content of 1 billion in 1 ml was applied to its surface. An aseptic dressing was fixed to the wound. 24 hours after bacterial contamination of the wound, its surface was washed once a day with sterile physiological saline, and a dry aseptic dressing was applied. After 12 days, the surface of the wounds was covered with easily bleeding granulation tissue of a bright pink color without wound discharge. Sowing biopsy samples for the quantitative content of microbial flora showed that the number of CFU per gram of tissue was 10 3 -10 4 .
Все экспериментальные животные были разделены на две группы: опытную и контрольную. На поверхность гранулирующих ран опытной группы животных наносили губчатую композицию, содержащую бычий коллаген и хитозан медицинского назначения в соотношении 1:3, сшитые глутаровым альдегидом в конечной концентрации 0,2%, и содержащую твин-80 в конечной концентрации 0,02%, причем хитозан изначально дополнительно содержал антисептический препарат природного происхождения шиконин в количестве 1-3% от массы композиции. В качестве контрольного раневого покрытия использовали композицию «Коллахит-Ш», содержащую шиконин в количестве 1-5% к массе композиции. Сверху раневые покрытия в обеих группах животных закрывали сухой асептической повязкой.All experimental animals were divided into two groups: experimental and control. A sponge composition containing bovine collagen and medical chitosan in a ratio of 1: 3 crosslinked with glutaraldehyde at a final concentration of 0.2% and containing tween-80 at a final concentration of 0.02% was applied to the surface of the granulating wounds of the experimental group of animals, with chitosan initially additionally contained an antiseptic preparation of natural origin shikonin in an amount of 1-3% by weight of the composition. As a control wound cover used the composition "Collachite-Sh" containing shikonin in an amount of 1-5% by weight of the composition. From above, wound dressings in both groups of animals were covered with a dry aseptic dressing.
Результаты исследований показали, что у всех животных с опытной композицией для лечения ран через 24 часа после ее нанесения количество колониеобразующих единиц (КОЕ) на грамм высеваемого биоптата составляло 101. У крыс с контрольным раневым покрытием этот показатель в тот же срок составил 103. Через 36 часов после бактериального загрязнения раны у опытной группы крыс посев биоптатов роста КОЕ не дал, а у контрольных животных - 102. Через 48 часов после бактериального загрязнения раны в контроле в 30% случаев посев биоптатов выявил содержание микрофлоры в количестве 102 на грамм ткани, а в 70% случаев - роста не обнаружено.The results of the studies showed that in all animals with an experimental composition for treating wounds 24 hours after its application, the number of colony forming units (CFU) per gram of biopsy sample was 10 1 . In rats with control wound coverage, this indicator at the same time amounted to 10 3 . 36 hours after bacterial contamination of the wound in the experimental group of rats, sowing of biopsy specimens of CFU did not produce, and in control animals - 10 2 . 48 hours after bacterial contamination of the wound in the control, in 30% of cases, biopsy culture showed the microflora content in the amount of 10 2 per gram of tissue, and in 70% of cases, no growth was detected.
Смену предлагаемой раневой композиции через 48 часов у опытных животных производили достаточно легко путем смывания гелевой консистенции струей стерильного физиологического раствора. Смена раневой композиции не вызывала болевой реакции. Смена контрольного раневого покрытия через 48 часов от момента аппликации на раневую поверхность в результате плотного прилипания губки и ее уплотнения по истечении времени сопровождалась травмой гранулирующей поверхности и вызывала выраженную болевую реакцию животных. Сроки полного заживления ран опытной группы животных составили в среднем 17±1,2 суток, в контрольной серии крыс - 23±1,4 суток.Changing the proposed wound composition after 48 hours in experimental animals was carried out quite easily by washing off the gel consistency with a jet of sterile saline. The change in the wound composition did not cause a pain reaction. A change in the control wound cover after 48 hours from the moment of application to the wound surface as a result of tight adhesion of the sponge and its compaction after time was accompanied by trauma to the granulating surface and caused a pronounced painful reaction of animals. The terms of complete wound healing of the experimental group of animals averaged 17 ± 1.2 days, in the control series of rats - 23 ± 1.4 days.
Пример 3. На 18 белых крысах популяции Wistar массой 200 г наносили в межлопаточной области полнослойные плоскостные дефекты кожи с подкожным соединительнотканным комплексом площадью 400 мм2 с соблюдением правил асептики. После остановки кровотечения из раны на ее поверхность наносили 10% раствор односуточного фильтрата каловых масс подопытного животного в объеме 1 мл с содержанием микробной флоры 1 млрд микробных тел в 1 мл. К ране фиксировали асептическую повязку. Через 24 часа после бактериального загрязнения раны ее поверхность 1 раз в сутки промывали стерильным физиологическим раствором, накладывали сухую асептическую повязку. Через 12 суток на раневой поверхности формировалась легко кровоточащая грануляционная ткань ярко-розового цвета без раневого отделяемого. Посев биоптатов на количественное содержание микробной флоры показал, что число КОЕ на грамм ткани составляло 104.Example 3. On 18 white rats Wistar populations weighing 200 g were applied in the interscapular region full-layer planar skin defects with a subcutaneous connective tissue complex with an area of 400 mm 2 in compliance with aseptic rules. After stopping bleeding from the wound, a 10% solution of one-day fecal filtrate of the experimental animal in a volume of 1 ml with a microbial flora content of 1 billion microbial bodies in 1 ml was applied to its surface. An aseptic dressing was fixed to the wound. 24 hours after bacterial contamination of the wound, its surface was washed once a day with sterile physiological saline, and a dry aseptic dressing was applied. After 12 days, easily bleeding granulation tissue of bright pink color without wound discharge was formed on the wound surface. Sowing biopsy samples for the quantitative content of microbial flora showed that the number of CFU per gram of tissue was 10 4 .
Все экспериментальные животные были разделены на две группы: опытную и контрольную по 9 животных в каждой группе. На поверхность гранулирующих ран опытной группы животных наносили губчатую композицию, содержащую бычий коллаген и хитозан медицинского назначения в соотношении 1:3, сшитые глутаровым альдегидом в конечной концентрации 0,2%, и твин-80 в конечной концентрации 0,02%, причем хитозан изначально дополнительно содержал антисептический препарат природного происхождения шиконин в количестве 2% к массе композиции. В качестве контрольного раневого покрытия использовали композицию «Коллахит-Ш», содержащую шиконин в количестве также 2% к массе композиции. Сверху раневые покрытия в обеих группах животных закрывали сухой асептической повязкой.All experimental animals were divided into two groups: experimental and control 9 animals in each group. A sponge composition containing bovine collagen and medical chitosan in a ratio of 1: 3 crosslinked with glutaraldehyde at a final concentration of 0.2% and tween-80 at a final concentration of 0.02% was applied to the surface of the granulating wounds of the experimental group of animals, with chitosan initially additionally contained an antiseptic preparation of natural origin shikonin in an amount of 2% by weight of the composition. As a control wound cover used the composition "Collachite-Sh" containing shikonin in an amount of also 2% by weight of the composition. From above, wound dressings in both groups of animals were covered with a dry aseptic dressing.
Результаты исследований показали, что у всех животных с опытной композицией для лечения ран через 24 часа после ее нанесения количество колониеобразующих единиц (КОЕ) на грамм высеваемого биоптата составляло 101. У крыс с контрольным раневым покрытием этот показатель в тот же срок составил 103. Через 36 часов после бактериального загрязнения раны у опытной группы крыс посев биоптатов роста КОЕ не дал, а у контрольных животных - 102. Через 48 часов после бактериального загрязнения раны в контроле в 33% случаев посев биоптатов выявил содержание микрофлоры в количестве 102 на грамм ткани, а в 67% случаев - роста не обнаружено.The results of the studies showed that in all animals with an experimental composition for treating wounds 24 hours after its application, the number of colony forming units (CFU) per gram of biopsy sample was 10 1 . In rats with control wound coverage, this indicator at the same time amounted to 10 3 . 36 hours after bacterial contamination of the wound in the experimental group of rats, sowing of biopsy specimens of CFU did not produce, and in control animals - 10 2 . 48 hours after bacterial contamination of the wound in the control in 33% of cases, the inoculation of biopsy samples revealed microflora in the amount of 10 2 per gram of tissue, and in 67% of cases, no growth was detected.
Смена предлагаемой раневой композиции через 48 часов у опытных животных производилась достаточно легко путем смывания гелевой консистенции струей стерильного физиологического раствора. Смена раневой композиции не вызывала болевой реакции животных. Контрольная раневая поверхность была закрыта уплотненным раневым покрытием, попытки его отделения от раны сопровождались кровотечением на гранулирующей поверхности и выраженной болевой реакцией животных. Сроки полного заживления ран опытной группы животных составили в среднем 17±1,5 суток, в контрольной серии крыс - 22±1,1 суток.Changing the proposed wound composition after 48 hours in experimental animals was carried out quite easily by washing off the gel consistency with a jet of sterile saline. The change in the wound composition did not cause a painful reaction of animals. The control wound surface was covered with a compacted wound cover, attempts to separate it from the wound were accompanied by bleeding on the granulating surface and a pronounced pain response of the animals. The terms of complete wound healing of the experimental group of animals averaged 17 ± 1.5 days, in the control series of rats - 22 ± 1.1 days.
Таким образом, применение композиции, содержащей коллаген и хитозан в соотношении 1:3, сшитых глутаровым альдегидом в конечной концентрации 0,2%, твин-80 в конечной концентрации 0,02%, дополнительно предварительно смешанный с хитозаном антисептик шиконин в количестве 2% от массы композиции, позволяет повысить ранозаживляющие свойства, упростить удаление с раневой поверхности изделия для его смены при перевязках, быстро ликвидировать инфицирование раны в короткие сроки после аппликации, сократить сроки полного заживления ран.Thus, the use of a composition containing collagen and chitosan in a 1: 3 ratio, crosslinked with glutaraldehyde in a final concentration of 0.2%, tween-80 in a final concentration of 0.02%, additionally mixed with chitosan antiseptic shikonin in an amount of 2% of the mass of the composition, it allows to increase wound healing properties, to simplify removal from the wound surface of the product for its replacement during dressings, to quickly eliminate infection of the wound in the short time after application, to reduce the time for complete healing of wounds.
Ожоговые раны III-A и III-Б степеней. Термический ожог кожи моделировали на крысах-самцах популяции Wistar массой 180-220 г. Животным после удаления волосяного покрова в паравертебральной области спины на уровне ее середины под эфирным наркозом создавали контактный термический ожог медной пластинкой с силой давления в 1,255 н, нагретой до 220°С. Время экспозиции пластины составило 10 с с глубиной ожога III-A степени или 14 с с глубиной ожога III-Б степени. Площадь ожоговой раны составляла 26 см2 (9-10% от общей поверхности кожи крысы). Предварительно глубина ожоговой травмы была определена на гистологическом срезе ткани кожи. При частичном сохранении сосочкового слоя кожи устанавливали III-A степень ожога, при полном отсутствии структуры сосочкового слоя - III-Б степень ожога. На 2-й день ожоговые раны перевязывали. Во время перевязок производили туалет ран, удаление некротических тканей (некрэктомию), обрабатывая их 3% раствором перекиси водорода.Burn wounds of III-A and III-B degrees. A thermal skin burn was modeled on male rats of a Wistar population weighing 180-220 g. After removing the hair in the paravertebral region of the back at the mid-level under ether anesthesia, the contact thermal burn was created with a copper plate with a pressure force of 1.255 n, heated to 220 ° C. . The exposure time of the plate was 10 s with a burn depth of III-A degree or 14 s with a burn depth of III-B degree. The area of the burn wound was 26 cm 2 (9-10% of the total surface of the rat skin). Previously, the depth of the burn injury was determined on a histological section of skin tissue. With partial preservation of the papillary layer of the skin, the III-A degree of burn was established, in the complete absence of the structure of the papillary layer, III-B degree of burn. On day 2, burn wounds were bandaged. During dressings, a wound toilet was performed, removal of necrotic tissues (necrectomy), treating them with a 3% hydrogen peroxide solution.
В контроле на ожоговую поверхность глубиной III-A степени после удаления некротических тканей накладывали раневое покрытие «Коллахит-Ш», содержащее антисептик шиконин в количестве 3-5% от массы композиции. На ожоговую поверхность III-A степени у опытной группы крыс накладывали предлагаемую губчатую композицию, содержащую шиконин в количестве 1-3% от массы композиции.In the control, on a burn surface with a depth of III-A degree after removal of necrotic tissue, a Collachite-Sh wound dressing containing shikonin antiseptic in an amount of 3-5% by weight of the composition was applied. On the burn surface of the III-A degree in the experimental group of rats, the proposed sponge composition was applied containing shikonin in an amount of 1-3% by weight of the composition.
В контроле на ожоговую поверхность глубиной III-Б степени после удаления некротических тканей накладывали раневое покрытие «Коллахит-ФА», содержащее антисептик фурагин калия и анестетик анилокаин в количестве 3-5% от массы композиции. На ожоговую поверхность III-Б степени у опытной группы крыс накладывали предлагаемую губчатую композицию, содержащую антисептик диоксидин в количестве 1-3% от массы композиции и анестетик артикаин в количестве 4-6% от массы композиции. Раневые композиции (губки) моделировали по контуру, соответствующему размеру и форме раны. Покрытие наносили на рану, прижимали ее ко дну и фиксировали с помощью асептических ватно-марлевых салфеток и пластыря. При наложении на рану покрытие выступало за края раны на 0,5-1 см. Клиническую оценку результатов производили на основе динамического визуального, планиметрического и иммуногистохимического контроля состояния ожоговой поверхности. Сроки анализа репарации ожоговой поверхности составляли 5, 10, 15, 20 и 30 сутки с момента травмы. Согласно сроку животных выводили из опыта, для гистологического анализа забирали сектор ожоговой раны (с захватом центрального и периферического отделов), материал помещали в контейнер с забуференным нейтральным 10% раствором формалина и в течение 24 часов подвергали автоматизированной гистологической проводке на системе Leica (Германия) с заливкой в парафин. Секцию тканей в парафиновых блоках и их окраску осуществляли в стандартных автоматизированных условиях. Для иммуногистохимического анализа ожоговой поверхности гистологические срезы обрабатывали моноклональными антителами: для оценки фиброгенных факторов - к трансформирующему фактору роста бета-1 (TGF-β-1), для характеристики клеток воспалительного инфильтрата - к кластеру дифференцировки макрофагов (CD68+), для пролиферативной активности клеток - к фактору пролиферативной активности клеток Ki-67, для оценки ремоделирования внеклеточного матрикса - к металлопротеазам (ММР-2, ММР-9) и к коллагену IV, VII типов.In the control, on a burn surface with a depth of III-B degree after removal of necrotic tissue, a Collachite-FA wound dressing containing potassium furagin antiseptic and anilestic anilestic in an amount of 3-5% by weight of the composition was applied. The proposed spongy composition containing antiseptic dioxidine in the amount of 1-3% by weight of the composition and anesthetic articaine in the amount of 4-6% by weight of the composition was imposed on the burn surface of the III-B degree in the experimental group of rats. Wound compositions (sponges) were modeled along the contour corresponding to the size and shape of the wound. The coating was applied to the wound, pressed to the bottom and fixed with aseptic cotton-gauze napkins and a patch. When applied to the wound, the coating protruded 0.5-1 cm beyond the edges of the wound. Clinical evaluation of the results was carried out on the basis of dynamic visual, planimetric and immunohistochemical control of the state of the burn surface. The terms of the analysis of the repair of the burn surface were 5, 10, 15, 20, and 30 days after the injury. According to the term, the animals were taken from the experiment, the burn wound sector (with capture of the central and peripheral sections) was taken for histological analysis, the material was placed in a container with buffered neutral 10% formalin solution and subjected to automated histological posting on the Leica system (Germany) with 24 hours pouring in paraffin. The tissue section in paraffin blocks and their dyeing was carried out under standard automated conditions. For immunohistochemical analysis of the burn surface, histological sections were treated with monoclonal antibodies: to assess fibrogenic factors, to the transforming growth factor beta-1 (TGF-β-1), to characterize cells of inflammatory infiltrate, to the macrophage differentiation cluster (CD68 + ), for proliferative activity of cells - to the factor of proliferative activity of Ki-67 cells, to assess remodeling of the extracellular matrix - to metalloproteases (MMP-2, MMP-9) and to type IV, VII collagen.
Результаты гистологического анализа выявляют изменения, манифестирующие выраженную биологическую активность раневого покрытия в отношении эпителиального и стромально-сосудистого компонента кожи. Это подтверждалось стимуляцией пролиферации и кератинизации эпидермоцитов, активацией ангиогенеза в центральных и периферических зонах ожога, ранней активацией моноцитарно-макрофагальных CD68 элементов в течение первого этапа заживления. При этом регистрировали интенсивную по сравнению с контролем экспрессию трансформирующего фактора роста бета-1 и маркера пролиферативной активности Ki-67. В область термического повреждения более активно мигрировали фибробласты. Их пролиферация сопровождалась выработкой ими компонентов внеклеточного матрикса и деградацией некротизированных тканей. Снижение экспрессии матриксных металлопротеаз в присутствии опытного раневого покрытия указывает на супрессию деструктивных процессов внеклеточного матрикса. При этом отмечен усиленный синтез компонентов внеклеточного матрикса с образованием неостромы, служащей адгезивной матрицей для вновь образующегося эпителия. Выявленные особенности сочетались с более активной продукцией волокнистых структур (коллагенов IV и VII типов), что указывало на полноценное и быстрое формирование базальных мембран сосудов и эпидермиса кожи. Планиметрический контроль (площадь ожоговой раны) показывает, что скорость сокращения ран на 5, 10, 15, 20 и 30 сутки у опытных крыс достоверно выше, чем у контрольных животных. Сроки полной эпителизации ожоговых ран III-A степени в опыте составили 22-24 суток, в контроле - 26-30 суток. Сроки заживления ожогов III-Б степени у опытной группы животных составили 28-32 суток, в контрольной группе - 36-40 суток. Микробиологический посев биоптатов ожоговых поверхностей глубиной III-A и III-Б степеней у опытной группы животных на 3 сутки применения композиции роста колониеобразующих единиц не выявил, что указывает на стерилизацию ожоговой поверхности. Микробиологический анализ биоптатов контрольной группы животных в эти же сроки в 30% случаев выявляет наличие микробной флоры в количестве 102 КОЕ. Смена повязки с ожоговой поверхности опытного животного на 2-3 сутки после травмы происходила без технических трудностей путем смывания композиции в форме геля струей стерильного физиологического раствора. При этом болевая реакция животного в ответ на смену повязки отсутствовала. Удаление уплотненного контрольного покрытия с ожоговой раны через 2-3 суток сопровождалось болевой реакцией животных, дополнительной травмой раневой поверхности, требующей длительной влажной обработки повязки.The results of histological analysis reveal changes that manifest pronounced biological activity of the wound cover in relation to the epithelial and stromal-vascular component of the skin. This was confirmed by stimulation of the proliferation and keratinization of epidermocytes, activation of angiogenesis in the central and peripheral zones of the burn, early activation of monocyte-macrophage CD68 elements during the first stage of healing. In this case, intense expression of the transforming growth factor beta-1 and the proliferative activity marker Ki-67 was recorded compared to the control. Fibroblasts migrated more actively to the area of thermal damage. Their proliferation was accompanied by the development of extracellular matrix components by them and the degradation of necrotic tissues. A decrease in the expression of matrix metalloproteases in the presence of an experimental wound cover indicates suppression of the destructive processes of the extracellular matrix. At the same time, an enhanced synthesis of the components of the extracellular matrix with the formation of a neostroma, which serves as an adhesive matrix for the newly formed epithelium, was noted. The revealed features were combined with a more active production of fibrous structures (type IV and VII collagens), which indicated the complete and rapid formation of the basement membranes of blood vessels and the epidermis of the skin. The planimetric control (area of the burn wound) shows that the rate of wound contraction on days 5, 10, 15, 20, and 30 is significantly higher in experimental rats than in control animals. The terms of complete epithelization of burn wounds of III-A degree in the experiment were 22-24 days, in the control - 26-30 days. The healing time of burns of the III-B degree in the experimental group of animals was 28-32 days, in the control group - 36-40 days. Microbiological seeding of biopsy samples of burn surfaces with depths of III-A and III-B degrees in the experimental group of animals on the 3rd day of application of the colony forming unit growth composition did not reveal that indicates a sterilization of the burn surface. Microbiological analysis of biopsy samples of the control group of animals at the same time in 30% of cases reveals the presence of microbial flora in the amount of 10 2 CFU. The dressing was changed from the burned surface of the experimental animal 2-3 days after the injury without technical difficulties by rinsing the gel-shaped composition with a stream of sterile saline. In this case, the pain response of the animal in response to a change in dressing was absent. Removal of the compacted control coating from the burn wound after 2-3 days was accompanied by a painful reaction of the animals, an additional injury to the wound surface, requiring a long wet treatment of the dressing.
Таким образом, применение композиции для лечения ран, содержащей коллаген и хитозан медицинского назначения с молекулярной массой 100-700 kDa и степенью дезацетилирования свыше 95% в соотношении 1:3, дополнительно содержащей антисептическое средство, например диоксидин в количестве 1-3% от массы композиции, и/или местноанестезирующее средство, например артикаин в количестве 4-6% от массы композиции, позволяет ускорять эпителизацию ожоговой поверхности глубиной III-A и III-Б степеней, быстро санировать глубокий ожог и использовать в качестве временного раневого покрытия.Thus, the use of a composition for the treatment of wounds containing collagen and chitosan for medical purposes with a molecular weight of 100-700 kDa and a degree of deacetylation of more than 95% in a ratio of 1: 3, additionally containing an antiseptic agent, for example dioxidine in an amount of 1-3% by weight of the composition and / or a local anesthetic, for example, articaine in an amount of 4-6% by weight of the composition, allows you to accelerate the epithelization of the burn surface with a depth of III-A and III-B degrees, quickly sanitize a deep burn and use as of wound dressings.
ЛитератураLiterature
1. Современные подходы к разработке эффективных шовных материалов. Материалы III Межд. конф., М., 1998. - 130 с.1. Modern approaches to the development of effective suture materials. Materials III Int. Conf., M., 1998 .-- 130 s.
2. PCT/GB00/04777, WO 01/41820 A1, А61L 15/28, публ. 14.06.2001.2. PCT / GB00 / 04777, WO 01/41820 A1, A61L 15/28, publ. 06/14/2001.
3. Патент №2108114 А61L 15/28. Публ. от 10.04.98, бюл. №10.3. Patent No. 2108114 A61L 15/28. Publ. from 10.04.98, bull. No. 10.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008115736/15A RU2370270C1 (en) | 2008-04-21 | 2008-04-21 | Composition for wound treatment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008115736/15A RU2370270C1 (en) | 2008-04-21 | 2008-04-21 | Composition for wound treatment |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2370270C1 true RU2370270C1 (en) | 2009-10-20 |
Family
ID=41262856
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008115736/15A RU2370270C1 (en) | 2008-04-21 | 2008-04-21 | Composition for wound treatment |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2370270C1 (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2467767C1 (en) * | 2011-05-10 | 2012-11-27 | Эдуард Валентинович Фрончек | Composition for wound treatment and products on its basis |
| RU2545798C1 (en) * | 2014-03-24 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "ФИРН М" (ЗАО "ФИРН М") | Pharmaceutical composition for immediate treatment of burns of various origins, area and depth in form of spray, gel and aerosol |
| RU2599126C2 (en) * | 2014-09-25 | 2016-10-10 | Вероника Андреевна Гусева | Method of treatment skin wounds in mammals with the help of thrombocytic auto plasma |
| RU2640504C2 (en) * | 2015-07-28 | 2018-01-09 | Зо Скин Хелз, Инк. | Systems and compositions for postprocedure skin care and methods of application thereof |
| RU2782198C2 (en) * | 2017-12-19 | 2022-10-24 | Альтергон Са | Use of plant extract as active agent in processes of reepithelization and cicatrization of tissue |
-
2008
- 2008-04-21 RU RU2008115736/15A patent/RU2370270C1/en active IP Right Revival
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2467767C1 (en) * | 2011-05-10 | 2012-11-27 | Эдуард Валентинович Фрончек | Composition for wound treatment and products on its basis |
| RU2545798C1 (en) * | 2014-03-24 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "ФИРН М" (ЗАО "ФИРН М") | Pharmaceutical composition for immediate treatment of burns of various origins, area and depth in form of spray, gel and aerosol |
| RU2599126C2 (en) * | 2014-09-25 | 2016-10-10 | Вероника Андреевна Гусева | Method of treatment skin wounds in mammals with the help of thrombocytic auto plasma |
| RU2640504C2 (en) * | 2015-07-28 | 2018-01-09 | Зо Скин Хелз, Инк. | Systems and compositions for postprocedure skin care and methods of application thereof |
| RU2782198C2 (en) * | 2017-12-19 | 2022-10-24 | Альтергон Са | Use of plant extract as active agent in processes of reepithelization and cicatrization of tissue |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gaspar-Pintiliescu et al. | Natural composite dressings based on collagen, gelatin and plant bioactive compounds for wound healing: A review | |
| Mir et al. | Synthetic polymeric biomaterials for wound healing: a review | |
| Helary et al. | Evaluation of dense collagen matrices as medicated wound dressing for the treatment of cutaneous chronic wounds | |
| Shyna et al. | A nonadherent chitosan-polyvinyl alcohol absorbent wound dressing prepared via controlled freeze-dry technology | |
| CN103520764B (en) | Functional dressing, and preparation method and application thereof | |
| US10238768B2 (en) | Wound-healing and hemostatic sponge of squid ink polysaccharide/chitosan, preparation method and use thereof | |
| EA005697B1 (en) | A method for preparing a collagen sponge | |
| CN112107723B (en) | Medical water-based adhesive and using method thereof | |
| JP5460580B2 (en) | Novel active ingredients and their use in fusion | |
| US20040161453A1 (en) | Microbial cellulose wound dressing for treating chronic wounds | |
| KR20070010572A (en) | Method for the preparation of hydrogels for wound dressing using radiation irradiation | |
| Arasteh et al. | Efficient wound healing using a synthetic nanofibrous bilayer skin substitute in murine model | |
| WO2024178882A1 (en) | Method for preparing dry amniotic membrane and use thereof | |
| Rajput et al. | Honey loaded silk fibroin 3D porous scaffold facilitates homeostatic full-thickness wound healing | |
| CA3137987A1 (en) | Novel polysaccharide-based hydrogel scaffolds for wound care | |
| RU2370270C1 (en) | Composition for wound treatment | |
| Bülbül et al. | Traditional and advanced wound dressings: physical characterization and desirable properties for wound healing | |
| WO2011050622A1 (en) | Granular biomaterial for tissue repairing and preparation method thereof | |
| KR101365065B1 (en) | Bacterial synthesized citrus cellolose for wound healing and dressing materials containing the same | |
| RU2372922C1 (en) | Therapy of deep burn of skin | |
| Kimura et al. | Accelerating effects of silk fibroin on wound healing in hairless descendants of Mexican hairless dogs | |
| CN114796160A (en) | Antibacterial material and application thereof | |
| RU2804197C1 (en) | Biologically active material for covering wound surfaces | |
| KR100372560B1 (en) | Charcoal filled hydrogels dressings and process for preparing thereof by irradiation | |
| TWI731667B (en) | Preparing method and use of pgc film in dermatitis healing |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130422 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20140420 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20150528 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180422 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20191106 |