RU2366294C1 - Dietary supplement "mobelis" and its production method - Google Patents
Dietary supplement "mobelis" and its production method Download PDFInfo
- Publication number
- RU2366294C1 RU2366294C1 RU2008109043/13A RU2008109043A RU2366294C1 RU 2366294 C1 RU2366294 C1 RU 2366294C1 RU 2008109043/13 A RU2008109043/13 A RU 2008109043/13A RU 2008109043 A RU2008109043 A RU 2008109043A RU 2366294 C1 RU2366294 C1 RU 2366294C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lysozyme
- milk
- lactoferrin
- dietary supplement
- lactoperoxidase
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к молочной, биотехнологической, медицинской, фармацевтической, косметической промышленности, а именно к способам получения биологически активных веществ, которые могут использоваться в качестве биологически активных добавок (БАД).The invention relates to the dairy, biotechnological, medical, pharmaceutical, cosmetic industries, and in particular to methods for producing biologically active substances that can be used as biologically active additives (BAA).
Известна антибактериальная композиция, содержащая в качестве активных компонентов аполактоферрин и лизоцим [Патент JP 62249931 (Япония). / Антибактериальная композиция. / Оконоги Шигео (JP); Кийозава Исао (JP); Кудо Цутомо (JP); Кавасе Козо (JP); Такасе Митсунори (JP); Озава Казухиро (JP); Ямаучи Коджи (JP)]. Композиция применяется для лечения инфекционных болезней и подавления пролиферации вредных бактерий в кишечнике, а также оказывает профилактическое действие на организм человека. Композиция содержит в качестве активных компонентов аполактоферрин и лизоцим в соотношении 5:95-95:5.Known antibacterial composition containing as active components apolactoferrin and lysozyme [Patent JP 62249931 (Japan). / Antibacterial composition. / Okoneogi Shigeo (JP); Kiyozawa Isao (JP); Kudo Tsutomo (JP); Kawase Kozo (JP); Takase Mitsunori (JP); Ozawa Kazuhiro (JP); Yamauchi Koji (JP)]. The composition is used to treat infectious diseases and inhibit the proliferation of harmful bacteria in the intestine, and also has a prophylactic effect on the human body. The composition contains as active components apolactoferrin and lysozyme in a ratio of 5: 95-95: 5.
Известен способ получения биологически активного продукта из молозива [Патент CN 1112394 (Китай). / Способ приготовления биологически активного продукта из молозива коров. / Жаокуоун Денг (CN); Юниян Лю (CN); Лю Шенгву (CN)]. Способ включает следующие последовательные операции: удаление жира и казеина центрифугированием, добавление пепсина или соляной кислоты, удаление сгустка центрифугированием, осаждение иммуноглобулина насыщенным сульфатом аммония или гиперфильтрацией, сбор и отделение иммуноглобулина и лизоцима. Полученный продукт обладает значительным действием для профилактики и лечения диареи, а также хронических бронхитов у новорожденных. Недостатком данного способа является то, что при добавлении пепсина или соляной кислоты часть биологически значимых компонентов молозива теряет свою активность.A known method of obtaining a biologically active product from colostrum [Patent CN 1112394 (China). / A method of preparing a biologically active product from colostrum of cows. / Zhaokoung Deng (CN); Yiyun Liu (CN); Liu Shengwu (CN)]. The method includes the following sequential operations: removing fat and casein by centrifugation, adding pepsin or hydrochloric acid, removing the clot by centrifugation, precipitating immunoglobulin with saturated ammonium sulfate or hyperfiltration, collecting and separating immunoglobulin and lysozyme. The resulting product has a significant effect for the prevention and treatment of diarrhea, as well as chronic bronchitis in newborns. The disadvantage of this method is that when pepsin or hydrochloric acid is added, some of the biologically significant components of colostrum lose their activity.
В Японии запатентовано антибактериальное средство [Патент JP 6199698 (Япония) / Антибактериальное средство и способ обработки антибактериальным средством. / Томита Мамору (JP); Ямаучи Кочи (JP)]. Целью работы являлось получение антибактериального средства, обладающего антибактериальным действием в отношении широкого спектра микроорганизмов и пригодного для использования в технологиях консервирования пищевых продуктов без ухудшения вкуса и запаха путем использования в качестве активных компонентов лактоферрина или его антибактериального пептида, а также лизоцима. Средство получали путем использования водного раствора лактоферрина, выделенного из коровьего молока, последующего добавления 1 н соляной кислоты до pH 2, нагревания до 120°С в течение 15 минут и охлаждения, смешения с лизоцимом, используемым в качестве активного компонента, добавления наполнителя, формования в форме парафармацевтиков. К недостаткам данного способа можно отнести то, что используемые условия обработки лактоферрина с применением низких значений pH в сочетании с высокотемпературной обработкой приводят к частичной потере его активности.An antibacterial agent is patented in Japan [JP Patent 6199698 (Japan) / Antibacterial agent and method for treating an antibacterial agent. / Tomita Mamoru (JP); Yamauchi Kochi (JP)]. The aim of the work was to obtain an antibacterial agent that has antibacterial activity against a wide range of microorganisms and is suitable for use in food preservation technologies without deterioration of taste and smell by using lactoferrin or its antibacterial peptide as well as lysozyme as active components. The tool was obtained by using an aqueous solution of lactoferrin isolated from cow's milk, then adding 1N hydrochloric acid to pH 2, heating to 120 ° C for 15 minutes and cooling, mixing with lysozyme used as an active ingredient, adding filler, molding into form of parapharmaceuticals. The disadvantages of this method include the fact that the used processing conditions of lactoferrin using low pH values in combination with high-temperature processing lead to a partial loss of its activity.
Японскими учеными запатентован в России способ получения продукта, содержащего «активные молочно-белковые компоненты», и продукт, полученный этим способом (варианты) [Патент №21-6785 (Россия). Способ получения продукта, содержащего активные молочно-белковые компоненты, и продукт, полученный этим способом (варианты). / Йосиказу Юки (JP), Кумико Теразава (JP), Томойо Накагава (JP), Казуо Кате (JP)]. Целью разработанного способа является получение для недоношенных детей продуктов, получаемых из грудного или коровьего молока и содержащих активные молочные белковые компоненты, а именно иммуноглобулины, лактоферрин и лизоцим. Эти продукты также могут быть использованы в качестве добавки к грудному молоку и как фармацевтические продукты, например, при терапии неподдающегося поноса. Авторы патента термин «активные белковые компоненты» используют для обозначения любого белка, который в минимальных количествах проявляет физиологические и фармакологические свойства. Продукты получают по способу, состоящему из стадий добавления к молочной плазме или сыворотке сахарного спирта, или дисахарида, или стабилизатора, состоящего из дисахарида и аминокислоты (глицин), и проведения термообработки полученной смеси при pH 6-8, при примерно 60°С в течение около 10 ч; продукты, содержащие активные компоненты молочного белка, представляют собой осадок, образовавшийся при добавлении сульфата аммония в концентрации 30-60% (мас./объем) к термообработанной смеси. Термообработанную смесь охлаждают, а осажденную фракцию собирают центрифугированием и растворяют в изотоническом солевом растворе, подвергают адекватному диализу и стерилизации с помощью мембранной фильтрации. Недостатком данного способа является использование длительной (10 ч) термообработки, в результате которой уничтожаются не только вирусы, но и нативные вещества молока.Japanese scientists have patented in Russia a method for producing a product containing “active milk protein components” and a product obtained in this way (options) [Patent No. 21-6785 (Russia). A method of obtaining a product containing active milk protein components, and a product obtained by this method (options). / Yoshikazu Yuki (JP), Kumiko Terazawa (JP), Tomoyo Nakagawa (JP), Kazuo Kate (JP)]. The aim of the developed method is to obtain products for preterm infants obtained from breast or cow milk and containing active milk protein components, namely immunoglobulins, lactoferrin and lysozyme. These products can also be used as an additive to breast milk and as pharmaceutical products, for example, in the treatment of resistant diarrhea. The authors of the patent use the term “active protein components” to mean any protein that exhibits physiological and pharmacological properties in minimal amounts. The products are obtained by the method consisting of the steps of adding sugar alcohol or disaccharide or a stabilizer consisting of a disaccharide and amino acid (glycine) to milk plasma or serum, and performing heat treatment of the resulting mixture at a pH of 6-8, at about 60 ° C for about 10 hours; products containing the active components of milk protein are a precipitate formed by adding ammonium sulfate at a concentration of 30-60% (wt./vol.) to the heat-treated mixture. The heat-treated mixture is cooled, and the precipitated fraction is collected by centrifugation and dissolved in isotonic saline, subjected to adequate dialysis and sterilization using membrane filtration. The disadvantage of this method is the use of prolonged (10 hours) heat treatment, as a result of which not only viruses are destroyed, but also the native substances of milk.
Известен способ получения бактерицидной композиции, содержащей лизоцим куриного яйца [Патент СА 2000849 (Канада). / Бактериостатическая и бактерицидная композиция и метод ее использования. / Сапс Альфред Т (USA)]. Композиция включает лизоцим, минеральный компонент и кислотоиммуномодулятор с последующим доведением pH до значения не больше 5,0 для термолабильной композиции и не больше 8,0 для термостабильной композиции. Бактериостатическая, бактерицидная композиция, полученная данным способом, может быть использована для ингибирования развития большого числа микроорганизмов. В связи с этим она применяется в качестве консерванта для продления сроков хранения свежих продуктов, молока, молочных продуктов, включая творог.A known method of producing a bactericidal composition containing chicken lysozyme [Patent CA 2000849 (Canada). / Bacteriostatic and bactericidal composition and method of its use. / Saps Alfred T (USA)]. The composition includes lysozyme, a mineral component, and an acid immunomodulator, followed by adjusting the pH to not more than 5.0 for the thermolabile composition and not more than 8.0 for the thermostable composition. The bacteriostatic, bactericidal composition obtained by this method can be used to inhibit the development of a large number of microorganisms. In this regard, it is used as a preservative to extend the shelf life of fresh products, milk, dairy products, including cottage cheese.
В Японии запатентован способ выделения из молока препарата ангиогенина, обладающего физиологической активностью [Патент №2-296000 (Япония)]. Благодаря наиважнейшей функции ангиогенина - способности индуцировать рост кровеносных сосудов, предлагается использовать его для обработки поврежденных тканей, язв, при имплантации органов. К недостаткам двух вышеперечисленных аналогов можно отнести наличие одного антибактериального компонента и узкую направленность предлагаемой композиции.In Japan, a method has been patented for isolating angiogenin with physiological activity from milk [Patent No. 2-296000 (Japan)]. Due to the most important function of angiogenin - the ability to induce the growth of blood vessels, it is proposed to use it for the treatment of damaged tissues, ulcers, and implantation of organs. The disadvantages of the two above analogues can be attributed to the presence of one antibacterial component and the narrow focus of the proposed composition.
Запатентован способ выделения ангиогенина, который представляет собой трехэтапный метод хроматографической очистки ангиогенина от белков молока с помощью ионообменной хроматографии на СМ-целлюлозе и гидрофобной хроматографии на CM Toyopearl 650 S Butyl Toyopearl 650 S [Патент №2109784 (РФ). Способ выделения ангиогенина. / Рогов И.А., Шалыгина A.M., Комолова Г.С., Михайлов A.M., Тихомирова Н.А.]. Недостатком данного способа является многостадийность обработки молочного сырья при получении ангиогенина, что не исключает возможность его частичной потери.A method for isolating angiogenin is patented, which is a three-step method for chromatographic purification of angiogenin from milk proteins using ion exchange chromatography on CM-cellulose and hydrophobic chromatography on CM Toyopearl 650 S Butyl Toyopearl 650 S [Patent No. 2109784 (RF). The method of isolation of angiogenin. / Rogov I.A., Shalygina A.M., Komolova G.S., Mikhailov A.M., Tikhomirova N.A.]. The disadvantage of this method is the multi-stage processing of dairy raw materials upon receipt of angiogenin, which does not exclude the possibility of its partial loss.
Наряду с ним запатентован способ получения биологически активного концентрата, обогащенного панкреатической рибонуклеазой А, ангиогенином и лизоцимом, из молочного ультрафильтрата [Патент №2204262 (РФ). Способ получения биологически активного концентрата, обогащенного панкреатической рибонуклеазой А, ангиогенином и лизоцимом, из молочного ультрафильтрата. / Рогов И.А., Шалыгина A.M., Тихомирова Н.А., Комолова Г.С., Федорова Т.В., Машков А.Е., Цуман В.Г., Пыхтеев Д.А., Плаксина Г.В.]. Способ заключается в том, что молочное сырье, в качестве которого используют ультрафильтрат, сначала концентрируют в 10-12 раз посредством обратного осмоса через мембрану с размером пор 1000-5000 Да при давлении 0,4-0,7 МПа и температуре 4-10°С, затем производят очистку белкового раствора от лактозы и минеральных веществ добавлением калий-фосфатного буфера с pH 6,7-7,0, посредством диафильтрации, полученный белковый концентрат стерилизуют, подвергая его микрофильтрации через мембрану с размером пор 0,10-0,45 мкм при давлении 0,2-0,7 МПа и температуре 4-10°С.Along with it, a patented method for producing a biologically active concentrate enriched in pancreatic ribonuclease A, angiogenin and lysozyme from milk ultrafiltrate [Patent No. 2204262 (RF). A method of obtaining a biologically active concentrate enriched in pancreatic ribonuclease A, angiogenin and lysozyme from milk ultrafiltrate. / Rogov I.A., Shalygina AM, Tikhomirova N.A., Komolova G.S., Fedorova T.V., Mashkov A.E., Tsuman V.G., Pykhteev D.A., Plaksina G.V. .]. The method consists in the fact that milk raw materials, which use ultrafiltrate, are first concentrated 10-12 times by reverse osmosis through a membrane with a pore size of 1000-5000 Da at a pressure of 0.4-0.7 MPa and a temperature of 4-10 ° C, then the protein solution is purified from lactose and minerals by adding potassium phosphate buffer with a pH of 6.7-7.0, by diafiltration, the resulting protein concentrate is sterilized by microfiltration through a membrane with a pore size of 0.10-0.45 microns at a pressure of 0.2-0.7 MPa and a temperature of 4-10 ° C.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемым результатам является способ получения биологически активной добавки на основе лактоферрина, лактопероксидазы, ангиогенина, панкреатической РНКазы, лизоцима и полипептидов, полученной методом катионнообменной хроматографии на СМ-целлюлозе [Патент №2183935 (РФ). Способ получения биологически активной добавки «МИЛКАНГ» и полученная этим способом БАД «МИЛКАНГ». / Рогов И.А., Титов Е.И., Шалыгина A.M., Тихомирова Н.А., Комолова Г.С., Рогов С.И.]. Способ заключается в том, что сначала белки молочного происхождения отделяют от жировой фракции, затем проводят сорбцию и хроматографическое разделение, элюирование, определение фракций с оптической плотностью при длине волны 280 нм более 0,1 ед., диализ против физиологического раствора, стабилизируют ее путем проведения микрофильтрации через полупроницаемую мембрану с селективностью более 50 кДа, после чего полученную БАД, включающую ангиогенин, панкреатическую РНКазу, лизоцим и полипептиды, направляют на фасовку. Данный способ является прототипом. Недостатком данного способа является получение БАД в жидкой форме, что значительно снижает уровень сохранности компонентов, входящих в состав БАД в процессе хранения, а также использование этапа микрофильтрации через мембрану с размером пор 50 кДа, исключающего получение более полного спектра защитных катионных белков молока.The closest in technical essence and the achieved results is a method of producing a biologically active additive based on lactoferrin, lactoperoxidase, angiogenin, pancreatic RNase, lysozyme and polypeptides obtained by cation exchange chromatography on CM-cellulose [Patent No. 2183935 (RF). The method of obtaining biologically active additives "MILKANG" and dietary supplement "MILKANG" obtained by this method. / Rogov I.A., Titov E.I., Shalygina A.M., Tikhomirova N.A., Komolova G.S., Rogov S.I.]. The method consists in the fact that first the proteins of milk origin are separated from the fat fraction, then sorption and chromatographic separation, elution, determination of fractions with optical density at a wavelength of 280 nm more than 0.1 units, dialysis against physiological saline are carried out, they are stabilized by microfiltration through a semipermeable membrane with a selectivity of more than 50 kDa, after which the resulting dietary supplement, including angiogenin, pancreatic RNase, lysozyme and polypeptides, is sent to the packaging. This method is a prototype. The disadvantage of this method is to obtain dietary supplements in liquid form, which significantly reduces the level of preservation of the components that make up dietary supplements during storage, as well as the use of microfiltration through a membrane with a pore size of 50 kDa, eliminating the receipt of a more complete spectrum of protective cationic milk proteins.
Таким образом, в результате патентного и литературного поиска установлено, что получение биологически активных веществ из молока является актуальной задачей, а использование катионных сывороточных белков молока, таких как лизоцим, ангиогенин, лактоферрин, лактопероксидаза, панкреатическая рибонуклеаза, в том числе в сочетании с куриным лизоцимом в виде биологически активных препаратов находит широкое распространение не только в пищевой отрасли, а также медицине, фармакологии, но и в косметологии.Thus, as a result of a patent and literature search, it was found that obtaining biologically active substances from milk is an urgent task, and the use of cationic whey proteins of milk, such as lysozyme, angiogenin, lactoferrin, lactoperoxidase, pancreatic ribonuclease, including in combination with chicken lysozyme in the form of biologically active preparations is widely used not only in the food industry, but also in medicine, pharmacology, but also in cosmetology.
Задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, является разработка способа получения БАД на основе композиции физиологически значимых ферментов, выделенных из сырья животного происхождения, и получения этим способом БАД, содержащей в концентрированном виде защитный комплекс молока, включающий катионные белковые вещества (лактопероксидазу, лактоферрин, лизоцим, ангиогенин, панкреатическую рибонуклеазу), а также куриный лизоцим, обладающие синергетическими парафармацевтическими свойствами.The problem to which the present invention is directed, is to develop a method for producing dietary supplements based on a composition of physiologically significant enzymes isolated from raw materials of animal origin, and to produce dietary supplements in this way containing a concentrated milk protective complex including cationic protein substances (lactoperoxidase, lactoferrin, lysozyme, angiogenin, pancreatic ribonuclease), as well as chicken lysozyme with synergistic parapharmaceutical properties.
Это достигается тем, что для получения БАД проводят очистку молочного сырья центрифугированием, сорбцию белков на ионообменнике, хроматографическое их разделение, элюирование, определение фракций с оптической плотностью при длине волны 280 нм более 0,1 ед., диализ против физиологического раствора, фосфатного буфера или дистиллированной воды сырья для получения БАД на основе нативных катионных белковых веществ молочного происхождения: ангиогенина, панкреатической РНКазы, молочного лизоцима, лактопероксидазы, лактоферрина, стабилизацию и микробиологическую очистку микрофильтрацией через полупроницаемые мембраны с селективностью 0,22-0,45 мкм, составление композиции с куриным лизоцимом проводят при соотношении компонентов 1:2, соответственно сывороточные катионные белки молока: куриный лизоцим при температуре плюс 20±2°С с последующим замораживанием при температуре минус 35-40°С и сублимационным высушиванием с максимальной температурой досушки плюс 37±2°С. Биологически активная добавка «МОБЕЛИЗ» характеризуется тем, что она дополнительно содержит куриный лизоцим при следующем соотношении указанных белковых веществ, мг: лактопероксидаза 17,9±1,2; лактоферрин 10,3±1,4; ангиогенин 0,9±0,1; панкреатическая РНКаза 2,7±0,1; лизоцим молочный 0,09±0,01; куриный лизоцим 65,8±3,6.This is achieved by the fact that to obtain dietary supplements, milk raw materials are purified by centrifugation, sorption of proteins on an ion exchanger, their chromatographic separation, elution, determination of fractions with optical density at a wavelength of 280 nm more than 0.1 units, dialysis against physiological saline, phosphate buffer or distilled water raw materials for the production of dietary supplements based on native cationic protein substances of milk origin: angiogenin, pancreatic RNase, milk lysozyme, lactoperoxidase, lactoferrin, stabilization and microbiological purification by microfiltration through semipermeable membranes with a selectivity of 0.22-0.45 μm, composition with chicken lysozyme is carried out at a component ratio of 1: 2, respectively, serum cationic milk proteins: chicken lysozyme at a temperature of plus 20 ± 2 ° C, followed by freezing at a temperature of minus 35-40 ° С and freeze-drying with a maximum drying temperature plus 37 ± 2 ° С. MOBELIZ dietary supplement is characterized in that it additionally contains chicken lysozyme in the following ratio of the indicated protein substances, mg: lactoperoxidase 17.9 ± 1.2; lactoferrin 10.3 ± 1.4; angiogenin 0.9 ± 0.1; pancreatic RNase 2.7 ± 0.1; milk lysozyme 0.09 ± 0.01; chicken lysozyme 65.8 ± 3.6.
Технический результат, полученный согласно данному способу производства, заключается в том, что БАД содержит в нативном виде куриный лизоцим, лактопероксидазу, лактоферрин, лизоцим, ангиогенин, панкреатическую РНКазу, которые в композиции проявляют синергетические свойства, обладают ангиогенным, антимикробным, иммуномодуляторным, антиоксидантным, противострессорным, общеукрепляющим действием, а также способствуют взаимной стабилизации компонентов БАД в ходе получения, консервирования и хранения.The technical result obtained according to this production method is that the dietary supplement contains in its native form chicken lysozyme, lactoperoxidase, lactoferrin, lysozyme, angiogenin, pancreatic RNase, which in the composition exhibit synergistic properties, have angiogenic, antimicrobial, immunomodulatory, antioxidant , tonic effect, and also contribute to the mutual stabilization of the components of dietary supplements during receipt, preservation and storage.
Разработан достаточно простой современный способ получения БАД на основе куриного лизоцима и катионных сывороточных белков молока, обладающих биологической активностью. Впервые получена композиционная биологически активная добавка на основе фракции катионных белков молочного происхождения, обогащенная лактопероксидазой, лактоферрином, лизоцимом, ангиогенином, панкреатичекой РНКазой в сочетании с белком немолочного происхождения - куриным лизоцимом. Благодаря получению фракции белков в нативном состоянии данную композицию целесообразно использовать в качестве основы БАД к пищевым продуктам или в технологиях производства медицинских, фармацевтических и косметических препаратов. Для получения фракции катионных белковых веществ молока применена ионообменная хроматография на СМ-целлюлозе. В качестве функциональной протекторной среды для комплекса катионных сывороточных белков молока использован куриный лизоцим. Для обеспечения полифункциональной направленности БАД использовано соотношение компонентов как 1:2 катионные сывороточные белки молока: куриный лизоцим, которое является наиболее приближенным к содержанию катионных сывороточных белков и лизоцима в свежевыдоенном цельном молоке. Кроме того, при таком соотношении компонентов обеспечивается рекомендуемая дозировка концентрации лизоцима для обогащения продуктов детского питания. Для обеспечения наиболее быстрого смешения компонентов с минимальным воздействием на белковую структуру компонентов температуру составления БАД поддерживают на уровне плюс 20±2°С. Для стерилизации, микробиологической очистки БАД использована микрофильтрация через полупроницаемые мембраны. Для обеспечения длительных сроков хранения полученной БАД в нативном виде применяют быстрое замораживание до температур минус 35-40°С и сублимационную сушку с максимальной температурой досушки плюс 37±2°С. В качестве источника катионных белковых веществ молока, обладающих антимикробными, антиоксидантными, иммуномодуляторными свойствами, использовано цельное молоко, а также вторичное молочное сырье молочной промышленности (обезжиренное молоко). Молоко, в частности вторичные молочные ресурсы, является перспективным источником получения биологически активных веществ [Н.А.Тихомирова, Г.С.Комолова, И.И.Ионова. Биологически активные белки молока: Учеб. пособие. - М: МГУПБ, 2004. - 80 с.], которые могут быть использованы в качестве активной основы БАД для получения продуктов специального назначения и препаратов лечебно-профилактической направленности широкого спектра действия. В частности, представляют интерес практически не используемые в традиционных технологиях катионные белки, обладающие многофункциональными свойствами: лактопероксидаза (78 кДа, обладает антимикробной активностью), лактоферрин (78-80 кДа, полифункциональный белок: бактерицидная и бактериостатическая активность, стимулирует клеточный рост, белок острой фазы ингибирует иммунные и воспалительные реакции, участвует в процессах внутреннего пищеварения, иммуномодулятор), ангиогенин (14,5 кДа, полифункциональный белок: фактор роста кровеносных сосудов, активный фактор костеобразования, иммунорегулятор, бактерицидное действие, белок острой фазы, участвует в передаче пассивного иммунитета), панкреатическая РНКаза (12 кДа, противовирусное действие), лизоцим (около 14 кДа, обладает бактерицидным действием, является фактором неспецифической защиты, стимулирует восстановление поврежденных тканей, обладает противовоспалительным, иммунорегулирующим, антитоксическим и противоопухолевым действиями, является фактором местной защиты для пищеварительной системы организма человека).A fairly simple modern method for producing dietary supplements based on chicken lysozyme and cationic whey proteins of milk with biological activity has been developed. For the first time, a composite dietary supplement based on a fraction of cationic proteins of milk origin was obtained, enriched with lactoperoxidase, lactoferrin, lysozyme, angiogenin, pancreatic RNase in combination with non-dairy protein - chicken lysozyme. Due to the receipt of the fraction of proteins in the native state, this composition is advisable to use as the basis of dietary supplements for food products or in the production technologies of medical, pharmaceutical and cosmetic preparations. To obtain a fraction of cationic protein substances of milk, ion-exchange chromatography on CM-cellulose was used. Chicken lysozyme was used as a functional protective environment for the complex of cationic whey proteins of milk. To ensure the multifunctional orientation of dietary supplements, the ratio of components was used as 1: 2 cationic whey proteins of milk: chicken lysozyme, which is the closest to the content of cationic whey proteins and lysozyme in freshly milked whole milk. In addition, with this ratio of components, the recommended dosage of lysozyme concentration is provided for the enrichment of baby food. To ensure the fastest mixing of components with minimal impact on the protein structure of the components, the temperature of the preparation of dietary supplements is maintained at plus 20 ± 2 ° C. Microfiltration through semipermeable membranes was used for sterilization and microbiological purification of dietary supplements. To ensure long shelf life of the obtained dietary supplement in its native form, rapid freezing to temperatures of minus 35-40 ° C and freeze-drying with a maximum drying temperature plus 37 ± 2 ° C are used. As a source of cationic protein substances of milk with antimicrobial, antioxidant, immunomodulatory properties, whole milk was used, as well as secondary dairy raw materials of the dairy industry (skim milk). Milk, in particular secondary dairy resources, is a promising source of biologically active substances [N.A. Tikhomirova, G.S. Komolova, I.I. Ionova. Biologically active milk proteins: Textbook. allowance. - M: MGUPB, 2004. - 80 pp.], Which can be used as an active base for dietary supplements for special-purpose products and drugs with a therapeutic and prophylactic orientation of a wide spectrum of action. In particular, of interest are cationic proteins that are practically not used in traditional technologies and possess multifunctional properties: lactoperoxidase (78 kDa, has antimicrobial activity), lactoferrin (78-80 kDa, multifunctional protein: bactericidal and bacteriostatic activity, stimulates cell growth, acute phase protein inhibits immune and inflammatory reactions, participates in the processes of internal digestion, immunomodulator), angiogenin (14.5 kDa, multifunctional protein: circulatory growth factor c vessels, active bone formation factor, immunoregulator, bactericidal effect, acute phase protein, is involved in the transmission of passive immunity), pancreatic RNase (12 kDa, antiviral effect), lysozyme (about 14 kDa, has a bactericidal effect, is a non-specific defense factor, stimulates the restoration of damaged tissue, has anti-inflammatory, immunoregulatory, antitoxic and antitumor effects, is a factor of local protection for the digestive system of the human body).
В последние годы для повышения биологической ценности и в качестве природного консерванта в технологии производства молочных продуктов функционального назначения используют лизоцим. Лизоцим не только сам по себе является полифункциональным белком, но также способен проявлять синергизм в комплексе с другими биологически активными белками молока. Богатым источником лизоцима, относящегося к тому же типу, что и молочный, является куриный лизоцим. Присутствие куриного лизоцима в составе комплексных смесей на основе сывороточных катионных белков молока, как показали собственные исследования, обеспечивает высокую устойчивость компонентов к процедурам замораживания-оттаивания, сублимации, технологическим факторам, применяемым в технологиях получения молочных продуктов. Кроме того, куриный лизоцим оказывает стабилизирующее действие на молочные белки в условиях хранения его растворов при температурах как +4°С, так и +20°С.In recent years, lysozyme has been used to increase the biological value and as a natural preservative in the technology for the production of functional dairy products. Lysozyme is not only a multifunctional protein in itself, but also able to show synergism in combination with other biologically active milk proteins. A rich source of lysozyme of the same type as dairy is chicken lysozyme. The presence of chicken lysozyme in complex mixtures based on whey cationic milk proteins, as shown by our own studies, provides high resistance of the components to freeze-thaw, sublimation, and technological factors used in the technology of dairy products. In addition, chicken lysozyme has a stabilizing effect on milk proteins under conditions of storage of its solutions at temperatures of + 4 ° C and + 20 ° C.
Разработанный способ позволяет получать БАД, содержащую в концентрированном, но при этом нативном виде вышеперечисленные катионные белки молока, а также куриный лизоцим. Благодаря сохранности их нативных свойств БАД обладает антимикробным, антиоксидантным, иммуномодуляторным, ангиогенным, антитоксическим, противоопухолевым свойствами, что позволяет использовать ее как непосредственно, так и в виде добавки к молочным и другим продуктам питания, которые могут быть рекомендованы в качестве диетического, функционального, лечебно-профилактического питания. Наличие куриного лизоцима в составе БАД обеспечит стабилизирующее действие в отношении молочных белков в процессе хранения, технологической обработки при получении обогащенных ею продуктов питания. Применение куриного лизоцима в составе комплекса катионных белков молока также будет способствовать повышению скора серосодержащих аминокислот, обеспечит возрастание биологической ценности как самой добавки, так и обогащенных ею продуктов питания.The developed method allows to obtain a dietary supplement containing in concentrated, but in this native form, the above cationic milk proteins, as well as chicken lysozyme. Due to the preservation of their native properties, dietary supplements have antimicrobial, antioxidant, immunomodulatory, angiogenic, antitoxic, and antitumor properties, which allows it to be used either directly or as an additive to dairy and other food products, which can be recommended as dietary, functional, medical prophylactic nutrition. The presence of chicken lysozyme in the dietary supplement will provide a stabilizing effect against milk proteins during storage, technological processing upon receipt of food enriched with it. The use of chicken lysozyme as part of the complex of cationic milk proteins will also contribute to an increase in the rate of sulfur-containing amino acids, and will increase the biological value of both the supplement itself and the food enriched with it.
Белковый состав БАД проверяют электрофоретически в ПААГ, а нативность белков - по ферментативной активности (лактопероксидаза, лизоцим, пРНКаза), методом иммуноферментного анализа (лактоферрин) и по взаимодействию с плацентарным ингибитором (ангиогенин).The protein composition of dietary supplements is checked electrophoretically in PAAG, and the protein's nativeness is checked by enzymatic activity (lactoperoxidase, lysozyme, pRNAse), enzyme-linked immunosorbent assay (lactoferrin) and interaction with a placental inhibitor (angiogenin).
Способ осуществляют следующим образом. Для получения БАД «МОБЕЛИЗ» берут молочное сырье с нативными катионными белковыми веществами, обезжиривают центрифугированием, далее обезжиренную белковую фракцию наносят на колонку с сорбентом СМ-целлюлозой и проводят ионообменную хроматографию, элюируют, собирая фракции с A260>0,1. Фракции объединяют и проводят диализ против дистиллированной воды или фосфатного буфера. Диализат подвергают микрофильтрации через полупроницаемые мембраны с селективностью 0,22-0,45 мкм. Полученный белковый комплекс, содержащий лактопероксидазу, лактоферрин, панкреатическую РНКазу, ангиогенин, лизоцим, смешивают с куриным лизоцимом в соотношении 1:2 при температуре плюс 20±2°С. В результате получают БАД в жидкой форме, которую затем направляют на фасовку. С целью обеспечения более длительных сроков хранения полученную БАД после фасовки подвергают замораживанию до температур минус (35-40)°С и последующей сублимационной сушке (максимальная температура досушки плюс 37±2°С, получая тем самым сухую форму БАД. Белковый состав полученной БАД представлен в таблице 1.The method is as follows. To obtain the MOBELIZ dietary supplement, dairy raw materials with native cationic protein substances are taken, degreased by centrifugation, then a skimmed protein fraction is applied to a column with a sorbent CM-cellulose and ion-exchange chromatography is carried out, elute, collecting fractions with A 260 > 0.1. Fractions are combined and dialyzed against distilled water or phosphate buffer. The dialysate is subjected to microfiltration through semipermeable membranes with a selectivity of 0.22-0.45 μm. The resulting protein complex containing lactoperoxidase, lactoferrin, pancreatic RNase, angiogenin, lysozyme, is mixed with chicken lysozyme in a ratio of 1: 2 at a temperature of + 20 ± 2 ° C. The result is a dietary supplement in liquid form, which is then sent to the packaging. In order to ensure longer shelf life, the obtained dietary supplement after packing is subjected to freezing to temperatures minus (35-40) ° С and subsequent freeze-drying (maximum temperature plus 37 ± 2 ° С, thereby obtaining a dry form of dietary supplement. The protein composition of the obtained dietary supplement is presented in table 1.
ПримерExample
Цельное молоко в количестве 1 л обезжиривают центрифугированием, проводят сорбцию белков на ионообменнике СМ-целлюлозе, наносят на колонку и проводят ионообменную хроматографию, элюируют, собирая фракции с А280>0,1. Фракции объединяют и проводят диализ против дистиллированной воды или фосфатного буфера (pH 6,7). Полученный диализат подвергают микрофильтрации через полупроницаемые мембраны 0,22-0,45 мкм. В результате получают 10-25 мл белковой фракции. Затем полученную фракцию катионных сывороточных белков молока смешивают с куриным лизоцимом в соотношении компонентов 1:2. Готовую БАД в жидкой форме фасуют в стерильную тару. В сухой форме БАД «МОБЕЛИЗ» получают с применением сублимационной сушки с предварительным замораживанием готовой БАД. Состав полученной БАД в сухой форме представлен в таблице 2. Whole milk in an amount of 1 liter is degreased by centrifugation, sorption of proteins is carried out on an SM-cellulose ion exchanger, applied to a column and ion-exchange chromatography is carried out, eluting by collecting fractions with A 280 > 0.1. Fractions are combined and dialyzed against distilled water or phosphate buffer (pH 6.7). The resulting dialysate is subjected to microfiltration through semi-permeable membranes of 0.22-0.45 μm. The result is 10-25 ml of the protein fraction. Then, the obtained fraction of cationic whey proteins of milk is mixed with chicken lysozyme in the ratio of components 1: 2. The finished dietary supplement in liquid form is Packed in a sterile container. In a dry form, dietary supplement “MOBELIZ” is obtained using freeze-drying with preliminary freezing of the finished dietary supplement. The composition of the obtained dietary supplement in dry form is presented in table 2.
Таким образом, в сравнении с прототипом в состав БАД помимо белков молока входит дополнительно куриный лизоцим, который способствует проявлению синергетического эффекта, стабилизации компонентов в ходе получения БАД и ее хранения. Биологически активная добавка «МОБЕЛИЗ», включающая компоненты, обладающие общеукрепляющим, антимикробным, антиоксидантным, противовирусным, ангиогенным, иммуномодуляторным, противоопухолевым свойствами, может быть рекомендована для использования в технологиях производства медицинских, фармацевтических и косметических препаратов.Thus, in comparison with the prototype, in addition to milk proteins, dietary supplements also include chicken lysozyme, which contributes to the manifestation of a synergistic effect, stabilization of components during the production of dietary supplements and its storage. MOBELIZ dietary supplement, which includes components that have a restorative, antimicrobial, antioxidant, antiviral, angiogenic, immunomodulatory, antitumor properties, can be recommended for use in the production technologies of medical, pharmaceutical and cosmetic preparations.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008109043/13A RU2366294C1 (en) | 2008-03-12 | 2008-03-12 | Dietary supplement "mobelis" and its production method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008109043/13A RU2366294C1 (en) | 2008-03-12 | 2008-03-12 | Dietary supplement "mobelis" and its production method |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2366294C1 true RU2366294C1 (en) | 2009-09-10 |
Family
ID=41166333
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008109043/13A RU2366294C1 (en) | 2008-03-12 | 2008-03-12 | Dietary supplement "mobelis" and its production method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2366294C1 (en) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2536952C1 (en) * | 2013-06-13 | 2014-12-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет пищевых производств" | Functional product manufacture method |
| RU2607020C1 (en) * | 2016-03-25 | 2017-01-10 | Елена Сергеевна Каменская | Method for production of cultured milk product from milk whey |
| CN106793793A (en) * | 2014-10-06 | 2017-05-31 | 预层析股份有限公司 | The separation of the soluble protein of the mixture from the casein containing aggregation |
| US9861687B2 (en) | 2012-07-31 | 2018-01-09 | Megmilk Snow Brand Co., Ltd. | Protein material |
| RU2669349C1 (en) * | 2018-04-13 | 2018-10-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет инженерных технологий" (ФГБОУ ВО "ВГУИТ") | Method for producing lysozyme-containing biologically active additive |
| RU2717340C1 (en) * | 2018-12-20 | 2020-03-23 | Общество с ограниченной ответственностью "НПК "Альтернативные технологии" | Method of producing lactoferrin |
-
2008
- 2008-03-12 RU RU2008109043/13A patent/RU2366294C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9861687B2 (en) | 2012-07-31 | 2018-01-09 | Megmilk Snow Brand Co., Ltd. | Protein material |
| RU2536952C1 (en) * | 2013-06-13 | 2014-12-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет пищевых производств" | Functional product manufacture method |
| CN106793793A (en) * | 2014-10-06 | 2017-05-31 | 预层析股份有限公司 | The separation of the soluble protein of the mixture from the casein containing aggregation |
| RU2607020C1 (en) * | 2016-03-25 | 2017-01-10 | Елена Сергеевна Каменская | Method for production of cultured milk product from milk whey |
| RU2669349C1 (en) * | 2018-04-13 | 2018-10-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет инженерных технологий" (ФГБОУ ВО "ВГУИТ") | Method for producing lysozyme-containing biologically active additive |
| RU2717340C1 (en) * | 2018-12-20 | 2020-03-23 | Общество с ограниченной ответственностью "НПК "Альтернативные технологии" | Method of producing lactoferrin |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2366294C1 (en) | Dietary supplement "mobelis" and its production method | |
| CZ246194A3 (en) | Pharmaceutical composition for treating hiv-seropositive individuals by dietetic proteins of whey | |
| RU2727504C1 (en) | Method for two-step membrane production of a hypoallergenic product based on immunoglobulin enriched lactoferrin for preventive dietary nutrition | |
| RU2400106C1 (en) | Method for production of "l-pfi" dietary supplement from secondary milk stock and "l-pfi" dietary supplement produced by this method | |
| Bobreneva et al. | Lactoferrin: properties and application. A review | |
| KR101404035B1 (en) | Novel milk protein fractions and use thereof for preventing or treating chronic inflammatory diseases | |
| US20170173082A1 (en) | Novel fermented milk product and method for producing the same | |
| US10603362B2 (en) | Beverage, and method of producing the same | |
| Jean et al. | Antimicrobial activity of buttermilk and lactoferrin peptide extracts on poultry pathogens | |
| RU2416243C2 (en) | Method of extracting low molecular peptides | |
| RU2183935C2 (en) | Method of preparing biologically active supplement "milkang" and biologically active "milkang" prepared by said method | |
| EP2880981A1 (en) | Fermented milk product, and method for producing same | |
| CN114145344A (en) | Liquid dairy product and preparation method thereof | |
| RU2318406C1 (en) | Method for production of biologically active supplement (bas) from law molecular milk cation proteins and obtained bas | |
| Özer et al. | Comparison of different methods for beta lactoglobulin isolation | |
| RU2106785C1 (en) | Method of preparing product containing active milk-protein components and product prepared by this method | |
| JP6562956B2 (en) | Beverage and method for producing the same | |
| Birukou et al. | Industrial technology for producing recombinant lactofferin from the milk of transgenic goats. | |
| EP2880998B1 (en) | Beverage, and method for producing same | |
| PL218708B1 (en) | Method for isolation of the complex of peptides and whey proteins | |
| JP2017123859A (en) | Fermented milk and method for manufacturing the same | |
| JP2017123860A (en) | Fermented milk and method for manufacturing the same | |
| JP2016152809A (en) | Beverage and manufacturing method therefor | |
| JPH07267994A (en) | New protein and its production |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100313 |