RU2354706C2 - Feeding medium for detecting h influenzae and method of its obtaining - Google Patents
Feeding medium for detecting h influenzae and method of its obtaining Download PDFInfo
- Publication number
- RU2354706C2 RU2354706C2 RU2006136958/13A RU2006136958A RU2354706C2 RU 2354706 C2 RU2354706 C2 RU 2354706C2 RU 2006136958/13 A RU2006136958/13 A RU 2006136958/13A RU 2006136958 A RU2006136958 A RU 2006136958A RU 2354706 C2 RU2354706 C2 RU 2354706C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- influenzae
- human blood
- yeast extract
- added
- agar
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выделения H.influenzae из патогенного материала.The invention relates to medical microbiology and can be used to isolate H.influenzae from pathogenic material.
H.influenzae является причиной таких инфекций как пневмония, эпиглотит, септический артрит, остеомиелит, средний отит у детей, гайморит, бактериальный конъюктивит, назофарингит. Эти бактерии обитают на слизистых оболочках верхних дыхательных путей, реже гениталий. Как правило на слизистых оболочках выявлются бескапсульные нетипируемые варианты H.influenzae, имеющие значение в развитии острого среднего отита, гайморита, хронических бронхолегочных инфекций, поэтому выделение и культивирование H.influenzae является важным фактором в диагностике заболеваний.H.influenzae is the cause of infections such as pneumonia, epiglotitis, septic arthritis, osteomyelitis, otitis media in children, sinusitis, bacterial conjunctivitis, nasopharyngitis. These bacteria live on the mucous membranes of the upper respiratory tract, less often the genitals. As a rule, non-capsular non-typable H.influenzae variants that are important in the development of acute otitis media, sinusitis, chronic bronchopulmonary infections are detected on the mucous membranes, therefore, the isolation and cultivation of H.influenzae is an important factor in the diagnosis of diseases.
Для выявления H.influenzae в бактериологических лабораториях чаще всего используют «шоколадный агар», содержащий питательный агар и 15% дефибринированной крови лошади или человека, для приготовления которого в расплавленный и охлажденный до 80°С питательный агар добавляют в несколько приемов кровь лошади или человека, сохраняя температуру прогрева 70-80°С 25-30 минут (Приказ МЗ СССР №535 от 22 апреля 1985 г. «Об унификации микробиологических (бактереологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» Москва, 1985 г., с.119-120). Как известно добавление крови к питательному агару увеличивает факторы роста (V и X) для бактерий H.influenzae.To detect H. influenzae in bacteriological laboratories, the most commonly used is “chocolate agar” containing nutritive agar and 15% defibrinated horse or human blood, for preparation of which horse or human blood is added in several doses to molten and cooled nutrient agar, keeping the heating temperature at 70-80 ° С for 25-30 minutes (Order of the Ministry of Health of the USSR No. 535 of April 22, 1985 “On the Unification of Microbiological (Bacteriological) Research Methods Used in Clinical Diagnostic Laboratories of the Medical Profile cultural institutions ”Moscow, 1985, p.119-120). The addition of blood to nutrient agar is known to increase growth factors (V and X) for H. influenzae bacteria.
Однако дефибринированная кровь во многих лабораториях не всегда доступна, кроме того, при приготовлении среды, вследствие термических обработок разрушается V фактор и частично Х фактор, что не обеспечивает условия для выделения H.influenzae из патогенного материала, особенно снижается чувствительность при малом количестве H.influenzae, которое можно выделить из 1 мл биоматериала (ликвор, кровь, мокрота). Среда, приготовленная из этих компонентов, имеет фактор Х в необходимом количестве, а фактор V остается в небольшом количестве, поэтому на такой среде не могут быть выделены малые количества H.influenzae из патогенного материала, особенно из обычно стерильных полостей, в отсутствии других микробов, являющиеся для них «кормушками», кроме того, в настоящее время для лабораторий недоступна дефибринированная кровь человека.However, defibrinated blood is not always available in many laboratories, in addition, during the preparation of the medium, the V factor and partially the X factor are destroyed due to thermal treatments, which does not provide conditions for the isolation of H. influenzae from pathogenic material, sensitivity is especially reduced with a small amount of H. influenzae , which can be isolated from 1 ml of biomaterial (cerebrospinal fluid, blood, sputum). The medium prepared from these components has factor X in the required amount, and factor V remains in a small amount; therefore, small amounts of H. influenzae cannot be isolated from pathogenic material, especially from usually sterile cavities, in the absence of other microbes. being “feeders” for them, in addition, defibrinated human blood is currently unavailable for laboratories.
Поставленная задача - создание среды с высокой чувствительностью к H.influenzae, а так же доступность и простота приготовления.The task is to create an environment with high sensitivity to H. influenzae, as well as the availability and ease of preparation.
Поставленная задача решается следующим образом.The problem is solved as follows.
В питательной среде для выделения H.influenzae, содержащей основу - питательный агар и стимуляторы роста, согласно изобретению в качестве стимуляторов роста используют эритроцитарную массу крови человека, сыворотку крупного рогатого скота и дрожжевой экстракт при следующем содержании компонентов, мл:In a nutrient medium for the isolation of H. influenzae containing the basis of nutrient agar and growth stimulators, according to the invention, human erythrocyte mass, cattle serum and yeast extract are used as growth stimulators in the following components, ml:
Способ получения питательной среды для выделения H.influenzae путем смешения питательного агара со стимуляторами роста и прогревания смеси отличается тем, что в качестве стимуляторов роста смесь содержит эритроцитарную массу крови человека, сыворотку крупного рогатого скота и дрожжевой экстракт, а смешение питательного агара со стимуляторами роста осуществляют в три этапа: на первом - к питательному агару добавляют половину эритроцитарной массы крови человека и прогревают смесь до 75-80°С в течение 5 минут; на втором - к охлажденной смеси до 55-60°С добавляют вторую часть эритроцитарной массы крови человека, снова прогревают смесь до 75-80°С в течение 5 минут, после чего охлаждают до 45-50°С; на третьем этапе - к охлажденной смеси добавляют сыворотку крупного рогатого скота и дрожжевой экстракт.A method of obtaining a nutrient medium for the isolation of H. influenzae by mixing nutrient agar with growth stimulants and heating the mixture is characterized in that the mixture contains red blood cells of human blood, cattle serum and yeast extract as growth stimulants, and nutrient agar with growth stimulators are mixed in three stages: at the first - half the erythrocyte mass of human blood is added to nutrient agar and the mixture is heated to 75-80 ° C for 5 minutes; on the second - to the cooled mixture to 55-60 ° C add the second part of the erythrocyte mass of human blood, again warm the mixture to 75-80 ° C for 5 minutes, and then cool to 45-50 ° C; at the third stage, cattle serum and yeast extract are added to the cooled mixture.
Использование в качестве стимуляторов роста эритроцитарной массы крови человека, сыворотки крупного рогатого скота и дрожжевого экстракта (в определенных количествах к 100 мл питательного агара) позволяет конструировать полноценную питательную среду для выделения и дальнейшего культивирования H.influenzae. Компоненты среды способствуют образованию капсулы у штамма, что имеет принципиальное значение для типирования H.influenzae и определения серологического (капсульного) варианта. При этом эритроцитарная масса крови человека поставляет в питательную среду фактор X, а сыворотка крупного рогатого скота и дрожжевой экстракт - фактор V и другие компоненты, необходимые для роста, что обеспечивает условия для выделения H.influenzae из патогенного материала, даже при его малых количествах. Приготовление среды в три этапа с минимальным временем прогрева практически не меняет количественный состав фактора Х и фактора V (который добавляется в уже охлажденную смесь). Величина вносимых в основу компонентов обусловлена необходимостью получения плотной питательной среды (1-2% агар-агара), необходимой для работы в лаборатории для микробиологических исследований.The use of human blood erythrocyte mass, cattle serum, and yeast extract (in certain quantities to 100 ml of nutrient agar) as growth stimulants allows the construction of a complete nutrient medium for the isolation and further cultivation of H. influenzae. The components of the medium contribute to the formation of capsules in the strain, which is of fundamental importance for typing of H. influenzae and determination of the serological (capsule) variant. Moreover, human erythrocyte mass supplies factor X to the nutrient medium, and cattle serum and yeast extract supplies factor V and other components necessary for growth, which provides conditions for the isolation of H. influenzae from pathogenic material, even with small amounts. The preparation of the medium in three stages with a minimum heating time does not practically change the quantitative composition of factor X and factor V (which is added to the already cooled mixture). The value of the components introduced into the base is due to the need to obtain a dense nutrient medium (1-2% agar-agar), necessary for working in the laboratory for microbiological studies.
Автор провел сравнительные исследования заявляемой среды и питательной среды, приготовленной по принципу «шоколадного» агара: с применением дефибринированной крови человека согласно методических рекомендаций. Для выделения H.influenzae использовали клинический материал объемом 1 мл (мокрота, заднеглоточные и назофарингеальные мазки и кровь, ликвор от больных детей). Результаты исследований показали, что предлагаемый состав питательной среды имеет более высокую чувствительность - выделение минимального количества H.influenzae (от 10 до 50 клеток в мл на заявляемой среде, в прототипе - 200 - 100 клеток в мл), а предлагаемый способ приготовления полноценной среды в условиях практической лаборатории является простым и доступным для лабораторий любого уровня.The author conducted a comparative study of the claimed medium and the nutrient medium prepared according to the principle of “chocolate” agar: using defibrated human blood according to the guidelines. To isolate H. influenzae, 1 ml clinical material was used (sputum, posterior pharyngeal and nasopharyngeal smears and blood, cerebrospinal fluid from sick children). The research results showed that the proposed composition of the nutrient medium has a higher sensitivity - the allocation of the minimum amount of H. influenzae (from 10 to 50 cells per ml on the inventive medium, in the prototype 200 - 100 cells per ml), and the proposed method of preparing a complete medium in practical laboratory conditions is simple and affordable for laboratories of any level.
Кроме того, при исследовании мокрот 105 больных пневмонией детей, с выделением H.influenzae, на заявляемой питательной среде, выявлено, что причиной пневмонии в 11,5% случаев стал возбудитель H.influenzae, что можно использовать для диагностических целей.In addition, when examining the sputum of 105 patients with pneumonia of children, with the release of H.influenzae, on the claimed nutrient medium, it was found that the causative agent of pneumonia was H.influenzae in 11.5% of cases, which can be used for diagnostic purposes.
Питательную среду с компонентным составом: 2% питательный агар - 100 мл; эритроцитарная масса крови человека - 10 мл; сыворотка крупного рогатого скота - 5 мл; дрожжевой экстракт - 5 мл готовят следующим образом.Nutrient medium with component composition: 2% nutrient agar - 100 ml; erythrocyte mass of human blood - 10 ml; cattle serum - 5 ml; yeast extract - 5 ml is prepared as follows.
К 100 мл расплавленного и остуженного до 65-70°С питательного агара, например питательный агар Махачкалинского НИИ питательных сред из гидролизата кильки (промышленно-выпускаемый), добавляют 5 мл эритроцитарной массы из крови человека (получаемой со станций переливания крови согласно ГОСТа). Флакон взбалтывают и нагревают на водяной бане до 75-80°С в течение 5 минут. При постоянном встряхивании флакона на водяной бане получается светло-коричневая масса с мелкими хлопьями. Смесь остужают до 55-60°С в течение 10 минут и добавляют еще 5 мл эритроцитарной массы. Флакон снова нагревают на водяной бане до 75-80°С в течение 5 минут при постоянном перемешивании, после чего смесь охлаждают до 55-60°С и добавляют 5 мл сыворотки крупного рогатого скота (имеет промышленное производство) и 10 мл дрожжевого экстракта, который готовят заранее по известной методике (Энтэробактерии. Под ред. Покровского В.И., М.: Медицина, 1985 г.). Приготовленную среду сразу разливают по чашкам Петри. Среда имеет вид полупрозрачного агара с коричневатым оттенком и хранится при температуре +4°С в течение 2-3 дней.To 100 ml of melted and cooled to 65-70 ° C nutrient agar, for example nutrient agar of the Makhachkala Research Institute of Nutrient Medium from sprat hydrolyzate (commercially available), add 5 ml of red blood cells from human blood (obtained from blood transfusion stations according to GOST). The bottle is shaken and heated in a water bath to 75-80 ° C for 5 minutes. With constant shaking of the bottle in a water bath, a light brown mass with small flakes is obtained. The mixture is cooled to 55-60 ° C for 10 minutes and add another 5 ml of red blood cell mass. The bottle is again heated in a water bath to 75-80 ° C for 5 minutes with constant stirring, after which the mixture is cooled to 55-60 ° C and 5 ml of cattle serum (commercially available) and 10 ml of yeast extract, which prepared in advance by a well-known technique (Enterobacteria. Ed. Pokrovsky V.I., M .: Medicine, 1985). The prepared medium is immediately poured into Petri dishes. The medium has the appearance of a translucent agar with a brownish tint and is stored at a temperature of + 4 ° C for 2-3 days.
Пример. Для сравнения использовали материал (10 образцов мокроты от больных с пневмонией и 10 образцов ликвора от больных с гнойным менингитом). При микроскопии в мокроте и ликворе обнаружены грамотрицательные бактерии, похожие на H.influenzae, при посеве на «шоколадный» агар из человеческой крови - H.influenzae не обнаружены, на чашке Петри со средой не обнаружено ни одной колонии Н.influenzae, на предлагаемой среде были выявлены от 10 и более колоний Н.influenzae.Example. For comparison, we used material (10 sputum samples from patients with pneumonia and 10 cerebrospinal fluid samples from patients with purulent meningitis). Microscopy in sputum and cerebrospinal fluid revealed gram-negative bacteria similar to H. influenzae; when plating on chocolate agar from human blood, H. influenzae were not found; not a single H. influenzae colony was found on a Petri dish with medium on the proposed medium were identified from 10 or more colonies of H. influenzae.
Пример изобретения: получение питательной среды предусматривает смешение 2%-ного расплавленного питательного агара со стимуляторами роста, в качестве которых используют эритроцитарную массу из крови человека, сыворотку крупного рогатого скота и дрожжевой экстракт, в три этапа: на первом этапе - к расплавленному 2%-ному питательному агару добавляют половину эритроцитарной массы из крови человека и нагревают до 75-80°С в течение 5 минут; на втором этапе - к охлажденной смеси до 55-60°С добавляют остальную часть эритроцитарной массы из крови человека, вновь нагревают смесь до 75-80°С в течение 5 минут, после чего охлаждают до 45-50°; на третьем этапе - к охлажденной смеси добавляют сыворотку крупного рогатого скота и дрожжевой экстракт.An example of the invention: obtaining a nutrient medium involves mixing a 2% molten nutrient agar with growth stimulants, which are used as an erythrocyte mass from human blood, cattle serum and yeast extract, in three stages: in the first stage, to molten 2% - half the erythrocyte mass from human blood is added to nutrient agar and heated to 75-80 ° C for 5 minutes; at the second stage, the rest of the erythrocyte mass from human blood is added to the cooled mixture to 55-60 ° C, the mixture is again heated to 75-80 ° C for 5 minutes, and then cooled to 45-50 °; at the third stage, cattle serum and yeast extract are added to the cooled mixture.
Таким образом, полученные данные показали, что предлагаемая среда и способ ее приготовления позволяет выделить бактериологическим методом Н.influenzae даже при малым количествах этого возбудителя в патологическом материале. Чувствительность полученной среды в 10-100 раз больше, чем в используемых в настоящее время средах, кроме этого доступность компонентов и простота приготовления заявляемой среды позволяете использовать ее для выделения Н.influenzae из клинического материала в лабораторных условиях при диагностике инфекционных заболеваний.Thus, the obtained data showed that the proposed environment and the method of its preparation allows to isolate H. influenzae bacteriologically even with small amounts of this pathogen in the pathological material. The sensitivity of the resulting medium is 10-100 times greater than in the currently used environments, in addition to the availability of components and the simplicity of the preparation of the claimed medium, you can use it to isolate H. influenzae from clinical material in the laboratory for the diagnosis of infectious diseases.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006136958/13A RU2354706C2 (en) | 2006-10-18 | 2006-10-18 | Feeding medium for detecting h influenzae and method of its obtaining |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006136958/13A RU2354706C2 (en) | 2006-10-18 | 2006-10-18 | Feeding medium for detecting h influenzae and method of its obtaining |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006136958A RU2006136958A (en) | 2008-04-27 |
| RU2354706C2 true RU2354706C2 (en) | 2009-05-10 |
Family
ID=39452681
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006136958/13A RU2354706C2 (en) | 2006-10-18 | 2006-10-18 | Feeding medium for detecting h influenzae and method of its obtaining |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2354706C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2481394C2 (en) * | 2011-07-08 | 2013-05-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Уральская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" (ГОУ ВПО УГМА Минздравсоцразвития России) | Nutrient medium for extraction, cultivation and determination of haemolytic properties of bacteria from clinical material |
-
2006
- 2006-10-18 RU RU2006136958/13A patent/RU2354706C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| СИДОРОВ М.А., СКОРОДУМОВ Д.И., ФЕДОТОВ В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. - М.: КОЛОС, 1995, с.237-239. КОЗЛОВ Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии. - М.: Медгиз, 1950, с.187-190. БИРГЕР М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - М.: МЕДИЦИНА, 1982, с.73-77. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2481394C2 (en) * | 2011-07-08 | 2013-05-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Уральская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" (ГОУ ВПО УГМА Минздравсоцразвития России) | Nutrient medium for extraction, cultivation and determination of haemolytic properties of bacteria from clinical material |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2006136958A (en) | 2008-04-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ding et al. | Inheritance and establishment of gut microbiota in chickens | |
| González et al. | Mycoplasmal mastitis in dairy herds | |
| Rudenko et al. | Search for promising strains of probiotic microbiota isolated from different biotopes of healthy cats for use in the control of surgical infections | |
| Michel et al. | Production of viable cultures of Flavobacterium psychrophilum: approach and control | |
| Tortorelli et al. | Evaluation of Mollicutes microorganisms in respiratory disease of cattle and their relationship to clinical signs | |
| Thurnheer et al. | Incorporation of staphylococci into titanium‐grown biofilms: an in vitro “submucosal” biofilm model for peri‐implantitis | |
| Morick et al. | Vertical nontransovarial transmission of B artonella in fleas | |
| Piekara-Stepinska et al. | Suitability of selected culture media for Blastocystis spp. | |
| RU2607006C1 (en) | Test strain leptospira of interrogans serogroup icterohaemorrhagiae serovar copenhageni for detection of antibodies to l icterohaemorrhagiae | |
| Hu et al. | Effect of nutritional and environmental conditions on biofilm formation of avian pathogenic Escherichia coli | |
| Ramanjeneya et al. | Virulence potential, biofilm formation, and antibiotic susceptibility of Listeria monocytogenes isolated from cattle housed in a particular gaushala (cattle shelter) and organized farm | |
| CN107743519A (en) | For separate include can not cultivating in conventional medium as mycoplasma species clinical sample culture medium | |
| RU2354706C2 (en) | Feeding medium for detecting h influenzae and method of its obtaining | |
| Gui et al. | Isolation and identification of symbiotic bacteria from the skin, mouth, and rectum of wild and captive tree shrews | |
| Castellani et al. | Fate of pathogenic bacteria in microcosms mimicking human body sites | |
| Bouhsira et al. | The efficacy of a selamectin (Stronghold®) spot on treatment in the prevention of Bartonella henselae transmission by Ctenocephalides felis in cats, using a new high-challenge model | |
| Pleshakova et al. | Phenotypic and genotypic features of strains of Actinobaculum suis-the causative agent of urinary tract infections in pigs | |
| Fonseca et al. | Transfer, viability and colonisation of Campylobacter jejuni in the chicken vitellus and in embryos | |
| Elgioushy et al. | The first molecular detection of Clostridium perfringens from pneumonic cases associated with foot and mouth disease in cattle and buffalo in Egypt | |
| Köllmann et al. | Investigations on transfer of pathogens between foster cows and calves during the suckling period | |
| Šula | A liquid ascitic medium for the isolation of Mycobacterium tuberculosis from pathological material | |
| RU2481394C2 (en) | Nutrient medium for extraction, cultivation and determination of haemolytic properties of bacteria from clinical material | |
| Rivera et al. | Carriage of bacteria and protozoa in the intestinal tract of common tern chicks | |
| Tabatabaei et al. | Identification of Bordetella bronchiseptica in the throat and nose of dogs and cats by PCR | |
| Tagesu | Microbiology examination |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20081020 |