RU2332231C2 - Method of obtaining acellular vaccine for pertussis immunoprophylaxis - Google Patents
Method of obtaining acellular vaccine for pertussis immunoprophylaxis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2332231C2 RU2332231C2 RU2006127548/13A RU2006127548A RU2332231C2 RU 2332231 C2 RU2332231 C2 RU 2332231C2 RU 2006127548/13 A RU2006127548/13 A RU 2006127548/13A RU 2006127548 A RU2006127548 A RU 2006127548A RU 2332231 C2 RU2332231 C2 RU 2332231C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pertussis
- suspension
- target product
- sodium
- temperature
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а точнее к вакцинопрофилактике инфекционных заболеваний человека, и может быть использовано при производстве высокоиммуногенных безвредных препаратов для профилактики коклюша.The invention relates to medicine, and more specifically to the vaccine prophylaxis of human infectious diseases, and can be used in the production of highly immunogenic harmless drugs for the prevention of whooping cough.
Известен способ получения бесклеточных коклюшных вакцин, предусматривающий выделение очищенных антигенов Bordetella pertussis с последующим их соединением в готовом препарате (K.М. Edwards, В.D. Meade, М.D. Decker et al. Comparison of 13 Acellular Pertussis Vaccines: Overview and Serologic Response. Pediatrics, 1995; 96: 548-557). Недостатками данного способа являются отсутствие адекватных лабораторных тестов, позволяющих проводить количественную оценку протективной активности получаемых вакцин, недостаточный объем данных эпидемиологических наблюдений за их эффективностью, а также невозможность к настоящему времени установить, какие именно антигены должны присутствовать в составе вакцин (Vaccines edited by Stanley A. Plotkin; Walter A. Orenstein - 3rd edition. 1999. USA).A known method for producing acellular pertussis vaccines, providing for the release of purified Bordetella pertussis antigens with their subsequent combination in the finished product (K.M. Edwards, B.D. Meade, M.D. Decker et al. Comparison of 13 Acellular Pertussis Vaccines: Overview and Serologic Response. Pediatrics, 1995; 96: 548-557). The disadvantages of this method are the lack of adequate laboratory tests to quantify the protective activity of the obtained vaccines, the insufficient amount of epidemiological observations of their effectiveness, and the inability to date to establish which antigens should be present in the vaccines (Vaccines edited by Stanley A. Plotkin; Walter A. Orenstein - 3rd edition. 1999. USA).
Наиболее близким к предлагаемому изобретению аналогом является способ получения корпускулярной коклюшной вакцины, компонента АКДС-вакцины, включающий выращивание культуры Bordetella pertussis на питательной среде КУА (казеиново-угольный агар), смыв микробных клеток с поверхности питательной среды, инактивацию микробной взвеси формальдегидом (ФС 42-0504-6501-05. Вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная жидкая).Closest to the proposed invention, an analogue is a method for producing a corpuscular pertussis vaccine, a component of the DTP vaccine, comprising growing a Bordetella pertussis culture on KUA (casein-carbon agar) culture, washing microbial cells from the surface of the culture medium, inactivating the microbial suspension with formaldehyde (FS 42- 0504-6501-05 (vaccine pertussis-diphtheria-tetanus adsorbed liquid).
При этом АКДС-вакцина является наиболее реактогенным препаратом национального календаря профилактических прививок. Во многом осложнения при использовании данного препарата связаны с коклюшным компонентом.At the same time, DTP vaccine is the most reactogenic drug in the national vaccination calendar. In many ways, the complications of using this drug are associated with the pertussis component.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является получение бесклеточной коклюшной вакцины со сниженной реактогенностью.The technical result of the invention is to obtain a cell-free pertussis vaccine with reduced reactogenicity.
Сущность изобретения заключается в следующем. Микробную взвесь Bordetella pertussis обрабатывают раствором дезоксихолата натрия, целевой продукт отделяют от биомассы центрифугированием, подвергают диафильтрации, ультрафильтрации, обезвреживанию формальдегидом и теплом, очистке соляной кислотой в присутствии гексаметафосфата натрия и стерилизующей фильтрации.The invention consists in the following. The microbial suspension of Bordetella pertussis is treated with a solution of sodium deoxycholate, the target product is separated from the biomass by centrifugation, subjected to diafiltration, ultrafiltration, neutralization with formaldehyde and heat, purification with hydrochloric acid in the presence of sodium hexametaphosphate and sterilizing filtration.
Обработка клеток Bordetella pertussis раствором дезоксихолата натрия позволяет выделить антигенный комплекс, обладающий протективной активностью. На этапе диафильтрации достигается очистка целевого продукта от низкомолекулярных балластных примесей. Добавление формальдегида позволяет обезвредить потенциально токсичные компоненты препарата. Дополнительная очистка целевого продукта достигается путем обработки соляной кислотой в присутствии гексаметафосфата натрия. При этом снижается реактогенность выделенного, очищенного и обезвреженного антигенного комплекса в сравнении с цельноклеточным препаратом.Treatment of Bordetella pertussis cells with a solution of sodium deoxycholate allows you to select antigenic complex with protective activity. At the stage of diafiltration, the purification of the target product from low molecular weight ballast impurities is achieved. The addition of formaldehyde helps neutralize the potentially toxic components of the drug. Additional purification of the target product is achieved by treatment with hydrochloric acid in the presence of sodium hexametaphosphate. At the same time, the reactogenicity of the isolated, purified and neutralized antigenic complex is reduced in comparison with the whole-cell preparation.
Способ получения препарата осуществляется следующим образом. Для изготовления вакцины используют 3-5 штаммов возбудителя коклюша. Bordetella pertussis 1 фазы. Микробы выращивают на КУА в матрацах при (36±1)°С в течение 48 ч. По истечении указанного времени выросшую культуру в каждом матраце контролируют на бактериологическую чистоту и типичность морфологии микробных клеток путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму. С каждого матраца с культурой В.pertussis, удовлетворяющего требованиям по морфологии и чистоте, производят смыв культуры стерильным 0,9% раствором натрия хлорида (рН 7,2). Бактериальную суспензию сливают в стерильную бутыль. Производят стандартизацию суспензии по оптическому стандарту мутности, устанавливая концентрацию 60-80 МОЕ микробных клеток в 1 мл суспензии. В стандартизованной суспензии устанавливают рН 8,4±0,1 с помощью 5% раствора натрия гидроксида. К охлажденной до (3±1)°С микробной суспензии, содержащей 60-80 МОЕ, добавляют 10% раствор дезоксихолата натрия до конечной концентрации его в суспензии, равной 0,5%, и выдерживают при температуре (3±1)°С в течение двух часов при периодическом перемешивании. После этого целевой продукт отделяют от биомассы посредством центрифугирования. Полученный раствор целевого продукта подвергают осветляющей фильтрации через мембраны с диаметром пор 1-3 мкм. Затем проводят очистку целевого продукта на ультрафильтрационной установке, состоящей из перистальтического насоса и мембранных аппаратов с пределом задержания веществ по молекулярной массе 15 кД. Вначале проводят диафильтрацию против десяти объемов 0,9% раствора натрия хлорида. По окончании диафильтрации раствор концентрируют до исходного объема, добавляют 0,03% от объема 40% раствора формальдегида, коррегируют рН до 7,6±0,2, подвергают микрофильтрации через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм и выдерживают при температуре (36±3)°С в течение 3 суток. Далее проводят дополнительную очистку целевого продукта осаждением соляной кислотой при рН 3,5±0,3 в присутствии 0,30±0,05% гексаметафосфата натрия при температуре (4±2)°С. Образовавшийся осадок растворяют в 0,9% растворе натрия хлорида при рН 7,1±0,3 до содержания белка не менее 0,4 мг/мл (по методу Лоури), после чего проводят стерилизующую фильтрацию препарата.The method of obtaining the drug is as follows. For the manufacture of the vaccine, 3-5 strains of the pertussis pathogen are used. Bordetella pertussis 1 phase. Microbes are grown on AMC in mattresses at (36 ± 1) ° C for 48 hours. After this time, the grown culture in each mattress is monitored for bacteriological purity and typical morphology of microbial cells by microscopy of Gram stained smears. From each mattress with a B.pertussis culture that meets the requirements for morphology and purity, the culture is washed off with a sterile 0.9% sodium chloride solution (pH 7.2). The bacterial suspension is poured into a sterile bottle. Standardize the suspension according to the optical turbidity standard, setting the concentration of 60-80 MOI of microbial cells in 1 ml of suspension. In a standardized suspension, a pH of 8.4 ± 0.1 is adjusted with a 5% sodium hydroxide solution. To a microbial suspension cooled to (3 ± 1) ° C, containing 60-80 MOE, add 10% sodium deoxycholate solution to a final concentration of 0.5% in the suspension, and maintain at a temperature of (3 ± 1) ° С for two hours with periodic stirring. After that, the target product is separated from the biomass by centrifugation. The resulting solution of the target product is subjected to clarifying filtration through membranes with a pore diameter of 1-3 μm. Then, the target product is purified on an ultrafiltration unit consisting of a peristaltic pump and membrane devices with a retention limit of substances by molecular weight of 15 kD. First, diafiltration is carried out against ten volumes of 0.9% sodium chloride solution. At the end of diafiltration, the solution is concentrated to the initial volume, 0.03% of the volume of 40% formaldehyde solution is added, the pH is adjusted to 7.6 ± 0.2, microfiltered through membranes with a pore diameter of 0.22 μm and kept at a temperature (36 ± 3) ° C for 3 days. Next, an additional purification of the target product is carried out by precipitation with hydrochloric acid at pH 3.5 ± 0.3 in the presence of 0.30 ± 0.05% sodium hexametaphosphate at a temperature of (4 ± 2) ° С. The precipitate formed is dissolved in a 0.9% sodium chloride solution at pH 7.1 ± 0.3 to a protein content of at least 0.4 mg / ml (according to the Lowry method), after which sterilizing filtration of the preparation is carried out.
Пример.Example.
На матрацы с питательной средой КУА засеяли штаммы Bordetella pertussis №№39, 267, 305 (10 матрацев на каждый штамм). Матрацы инкубировали 48 часов при 36°С. По истечении указанного времени выросшую культуру в каждом матраце контролировали на бактериологическую чистоту и типичность морфологии визуально и микроскопически. В каждый матрац с культурой В.pertussis, удовлетворяющей требованиям по морфологии и чистоте, внесли по 50 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Матрацы оставили в горизонтальном положении посевной поверхностью кверху на 5 минут, после чего смыли культуру путем покачивания.Bordetella pertussis strains No. 39, 267, 305 (10 mattresses for each strain) were seeded on mattresses with AMC nutrient medium. Mattresses were incubated 48 hours at 36 ° C. After this time, the grown culture in each mattress was monitored visually and microscopically for bacteriological purity and typical morphology. 50 ml of a 0.9% sodium chloride solution were added to each mattress with a B. pertussis culture meeting the requirements for morphology and purity. The mattresses were left in a horizontal position with the seed surface up for 5 minutes, after which the culture was washed off by swaying.
Содержимое матрацев с культурой каждого штамма объединили в соответствующие бутыли. Объем микробной взвеси каждого штамма составил 450 мл, содержание микробных клеток - 120 МОЕ. После этого в каждую бутыль добавили 300 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Содержание микробных клеток по результатам контроля составило 75 МОЕ. Суспензии всех трех штаммов были объединены в общую бутыль емкостью 5 л. Объем суспензии составлял 2,25 л, рН - 7,0. Провели коррекцию рН 10% раствором гидроксида натрия до 8,5.The contents of the mattresses with the culture of each strain were combined in the appropriate bottles. The volume of microbial suspension of each strain was 450 ml, the content of microbial cells was 120 MOU. After that, 300 ml of 0.9% sodium chloride solution was added to each bottle. The content of microbial cells according to the control results was 75 MOU. Suspensions of all three strains were combined into a 5 liter common bottle. The volume of the suspension was 2.25 L, pH 7.0. The pH was adjusted with a 10% sodium hydroxide solution to 8.5.
К суспензии добавили 112,5 мл стерильного 10% раствора дезоксихолата натрия и выдержали 2 часа при температуре (4±2)°С при периодическом встряхивании.112.5 ml of a sterile 10% sodium deoxycholate solution was added to the suspension and kept for 2 hours at a temperature of (4 ± 2) ° С with periodic shaking.
Далее суспензию центрифугировали при 3000 об/мин в течение 1 часа. Полученный осадок отбросили, а надосадочную жидкость объемом 2,3 л освободили от мелкодисперсных примесей микрофильтрацией на мембранах с диаметром пор 3 мкм. После этого целевой продукт подвергли диафильтрации на полых волокнах марки ВПУ-15 против 25 л 0,9% раствора натрия хлорида. По окончании диафильтрации целевой продукт сконцентрировали ультрафильтрацией до 1,5 л, добавили 0,45 мл 40% раствора формальдегида, скорректировали рН 5% раствором натрия гидроксида до 7,8, профильтровали через пластины с диаметром пор 0,22 мкм в стерильную бутыль объемом 3 л. Полученный раствор выдержали при температуре (36±1)°С в течение 72 часов.Next, the suspension was centrifuged at 3000 rpm for 1 hour. The resulting precipitate was discarded, and the supernatant with a volume of 2.3 L was freed from fine impurities by microfiltration on membranes with a pore diameter of 3 μm. After that, the target product was diafiltered on hollow fibers of VPU-15 grade against 25 l of 0.9% sodium chloride solution. After diafiltration, the target product was concentrated by ultrafiltration to 1.5 L, 0.45 ml of a 40% formaldehyde solution was added, the pH was adjusted with a 5% sodium hydroxide solution to 7.8, and filtered through plates with a pore diameter of 0.22 μm into a sterile bottle of 3 l The resulting solution was kept at a temperature of (36 ± 1) ° C for 72 hours.
Затем к препарату добавили 15 мл 33% раствора гексаметафосфата натрия и довели рН 5% раствором соляной кислоты до рН 3,4. Образовавшийся осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 минут и растворили в 1,0 л 0,9% раствора натрия хлорида при подщелачивании 5% раствором натрия гидроксида до рН 7,0. Полученный раствор подвергли стерилизующей фильтрации через пластины с диаметром пор 0,22 мкм. Содержание белка в препарате составило 0,4 мг/мл.Then, 15 ml of a 33% sodium hexametaphosphate solution was added to the preparation and the pH was adjusted with a 5% hydrochloric acid solution to a pH of 3.4. The precipitate formed was separated by centrifugation at 3000 rpm for 30 minutes and dissolved in 1.0 l of a 0.9% sodium chloride solution with alkalization with a 5% sodium hydroxide solution to pH 7.0. The resulting solution was subjected to sterilizing filtration through plates with a pore diameter of 0.22 μm. The protein content in the preparation was 0.4 mg / ml.
Препараты, полученные с использованием предлагаемого способа, были отконтролированы согласно Фармакопейной статье 42-0504650105 «Вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная жидкая (АКДС-вакцина)». При исследовании безвредности препаратов на белых беспородных мышах было показано, что препарат безопасен в дозах до 2,0 мг (Таблица 1).The drugs obtained using the proposed method were monitored according to Pharmacopoeia article 42-0504650105 “Vaccine pertussis-diphtheria-tetanus adsorbed liquid (DTP vaccine)”. In a study of the safety of drugs on outbred mice, it was shown that the drug is safe in doses of up to 2.0 mg (Table 1).
Как следует из таблицы 1, прибавка в весе мышей была максимальной в случае введения препарата, полученного по предлагаемому способу. При этом минимальная прибавка массы тела должна составлять не менее 60% от таковой в случае введения 0,9% раствора хлорида натрия.As follows from table 1, the weight gain of the mice was maximum in the case of the introduction of the drug obtained by the proposed method. In this case, the minimum weight gain should be at least 60% of that in the case of the introduction of a 0.9% solution of sodium chloride.
Препарат обладал более низкой гистаминсенсибилизирующей активностью в сравнении с корпускулярным аналогом. Результаты отражены в Таблице 2.The drug had a lower histamine-sensitizing activity in comparison with the corpuscular analogue. The results are shown in Table 2.
Лимфоцитозстимулирующая активность корпускулярного и бесклеточного препаратов в тех же дозах была умеренной - 300-450 лимфоцитов в 100 квадратах камеры Горяева; против 250 лимфоцитов при введении 0,9% раствора натрия хлорида.Lymphocytosis-stimulating activity of corpuscular and acellular preparations in the same doses was moderate - 300-450 lymphocytes in 100 squares of the Goryaev chamber; against 250 lymphocytes with the introduction of 0.9% sodium chloride solution.
Для оценки протективных свойств противококлюшных препаратов использовали регламентированный тест Кендрик. При постановке теста были использованы мыши гибриды первого поколения (CBAхC57BL/6J). Сравнительная оценка разных серий бесклеточного препарата и корпускулярной вакцины показывает их сопоставимую иммуногенность (Таблица 3).The regulated Kendrick test was used to evaluate the protective properties of pertussis drugs. When setting up the test, first-generation mouse hybrids (CBAxC57BL / 6J) were used. A comparative assessment of different series of cell-free drug and corpuscular vaccine shows their comparable immunogenicity (table 3).
Таким образом, при использовании бесклеточного препарата процент выживаемости иммунных мышей составлял от 72,2 до 100%, тогда как при использовании корпускулярного препарата - от 73,7 до 83,3%. Регламентированный показатель протективной активности составляет 70%.Thus, when using a cell-free drug, the percentage of survival of immune mice ranged from 72.2 to 100%, while when using a corpuscular preparation, from 73.7 to 83.3%. The regulated indicator of protective activity is 70%.
При оценке гуморального иммунитета в опытах на аутбредных морских свинках было показано, что содержание антител в сыворотках животных двукратно иммунизированных бесклеточным и корпускулярным препаратами различалось недостоверно (Таблица 4).When evaluating humoral immunity in experiments on outbred guinea pigs, it was shown that the antibody content in the sera of animals twice immunized with acellular and corpuscular preparations did not differ significantly (Table 4).
Изучение локальных иммуноморфологических реакций на введение патентуемого препарата и корпускулярной вакцины (прототип) проводили на мышах-тетрагибридах (CBA/C57BL/6J). В результате проведенных исследований было установлено, что иммунное воспаление при использовании бесклеточного препарата протекает по типу гиперчувствительности замедленного типа, тогда как при использовании корпускулярного препарата преобладает иммунокомплексный механизм, что может привести к развитию таких серьезных побочных реакций и осложнений, как васкулиты, артриты, нейропатии.The study of local immunomorphological reactions to the administration of the patented drug and the corpuscular vaccine (prototype) was carried out on tetrahybrid mice (CBA / C57BL / 6J). As a result of the studies, it was found that the immune inflammation when using a cell-free drug proceeds as a delayed-type hypersensitivity, while when using a corpuscular preparation, the immunocomplex mechanism prevails, which can lead to the development of such serious adverse reactions and complications as vasculitis, arthritis, neuropathies.
Таким образом, предложенный способ получения бесклеточной коклюшной вакцины позволяет получать препараты, обладающие высокой иммуногенной активностью и значительно сниженной реактогенностью по сравнению с корпускулярной вакциной.Thus, the proposed method for producing acellular pertussis vaccine allows to obtain drugs with high immunogenic activity and significantly reduced reactogenicity compared to the corpuscular vaccine.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006127548/13A RU2332231C2 (en) | 2006-07-31 | 2006-07-31 | Method of obtaining acellular vaccine for pertussis immunoprophylaxis |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006127548/13A RU2332231C2 (en) | 2006-07-31 | 2006-07-31 | Method of obtaining acellular vaccine for pertussis immunoprophylaxis |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2006127548A RU2006127548A (en) | 2008-02-10 |
RU2332231C2 true RU2332231C2 (en) | 2008-08-27 |
Family
ID=39265753
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006127548/13A RU2332231C2 (en) | 2006-07-31 | 2006-07-31 | Method of obtaining acellular vaccine for pertussis immunoprophylaxis |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2332231C2 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2504399C1 (en) * | 2012-12-06 | 2014-01-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским и иммунопрофилактическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) | Method for preparing cell-free vaccine for pertussis immunisation |
-
2006
- 2006-07-31 RU RU2006127548/13A patent/RU2332231C2/en active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЗАХАРОВА Н.С. и др. Бесклеточная коклюшная вакцина на основе природного комплекса антигенов, выделенных из супернатанта синтетической среды культивирования. - Микробиология, 1997, №3, с.67-70. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2504399C1 (en) * | 2012-12-06 | 2014-01-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским и иммунопрофилактическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) | Method for preparing cell-free vaccine for pertussis immunisation |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2006127548A (en) | 2008-02-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9707286B2 (en) | Process for detergent-free production of outer membrane vesicles of a gram-negative bacterium | |
HU185404B (en) | Process for preparing pertussis toxoide | |
CN111420044B (en) | Tetravalent influenza virus subunit vaccine and preparation method thereof | |
EP3316903A1 (en) | Polysaccharide vaccine formulations and processes for industrial production of bacterial polysaccharides | |
RU2332231C2 (en) | Method of obtaining acellular vaccine for pertussis immunoprophylaxis | |
US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
JPH07502174A (en) | Novel bacteria that cause poultry diseases and vaccines derived from them | |
RU2432174C1 (en) | Method for producing colibacillosis anatoxin | |
CN103083658B (en) | A kind of vaccine adjuvant composition being used for the treatment of or preventing pig infectious disease | |
CN104558225B (en) | Extraction method of capsular polysaccharide for intestinal bacteria | |
CN101428144A (en) | Polysaccharide combined vaccine for epidemic encephalitis and preparation method thereof | |
RU2504399C1 (en) | Method for preparing cell-free vaccine for pertussis immunisation | |
US3208909A (en) | Anaerobic process for production of a gel-adsorbed anthrax immunizing antigen | |
RU2538624C1 (en) | Method for preparing tuberculin for mass diagnosis and prevention of tuberculosis | |
RU2810740C1 (en) | Method of obtaining inactivated vaccine against covid-19 and vaccine obtained by method | |
RU2764467C1 (en) | Method for obtaining a specific immunomodulator | |
RU2809375C1 (en) | WHOLE VIRION INACTIVATED VACCINE AGAINST SARS-Cov-2 INFECTION AND ITS USE | |
RU2109519C1 (en) | Method of preparing vaccine for necrobacteriosis control in animals | |
RU2070819C1 (en) | Method of preparing the vaccine against escherichiosis in calves | |
RU2798283C1 (en) | Chlamydia vnitibp-21 chlamydia abortus strain for the production of immunobiological medicinal products | |
CN105199998A (en) | HIB (Haemophilus influenzae type B) synthetic medium, HIB conjugate vaccine and preparation method of HIB conjugate vaccine | |
RU2098127C1 (en) | Mixed vaccine for control over cattle necrobacteriosis | |
JP3752264B2 (en) | Mixed vaccine | |
RU2675598C1 (en) | Method of treatment of radiation damages of body | |
RU2643335C1 (en) | Inactivated bivalent hydro oxide aluminum vaccine against campilobacteriosis of dogs |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20180716 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner |