RU2322495C2 - Питательная среда для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов - Google Patents
Питательная среда для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2322495C2 RU2322495C2 RU2006112740/13A RU2006112740A RU2322495C2 RU 2322495 C2 RU2322495 C2 RU 2322495C2 RU 2006112740/13 A RU2006112740/13 A RU 2006112740/13A RU 2006112740 A RU2006112740 A RU 2006112740A RU 2322495 C2 RU2322495 C2 RU 2322495C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- nutrient medium
- growth
- option
- jensen
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит калий фосфорнокислый двузамещенный, сернокислый магний, L-аспарагин, глицерин, лимонную кислоту, лимоннокислое аммиачное железо, агар, гумивит и дистиллированную воду. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства питательной среды. 7 табл.
Description
Изобретение относится к микробиологическим исследованиям, касается питательной среды для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов и может быть использовано для изучения культурально-биохимических, хемотаксономических и генотипических свойств культур.
Для роста микобактерий из-за их неспособности синтезировать различные химические вещества самостоятельно необходимы полноценные, богатые белком, углеводом, минеральными веществами и стимуляторами роста питательные среды. В медицинской и ветеринарной практике используют преимущественно плотные среды Левенштейна-Йенсена и Финн-2, содержащие солевую основу (среда Левенштейна-Йенсена - однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, лимоннокислый магний, аспарагин, глицерин химически чистый; среда Финн-2 - магний сернокислый, натрий лимоннокислый, квасцы железоаммиачные, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий глютаминовокислый однозамещенный глицерин, яйца и малахитовую зелень (в качестве деконтаминанта) [1]. Для научных целей предпочтительными являются питательные среды, содержащие солевую основу и агар с добавлением в них в качестве стимуляторов роста сывороток крови человека или животных (кроличья или бычья - среда Kirchner, лошадиная сыворотка - модифицированная среда Sauton), крови (венозная кровь - среда Pryce, цитратная кровь - среда Школьниковой), олеиновой кислоты (среда Dubos и Middlebrook) или комплексов, включающих витамины, жирные кислоты и др. (среда Bacto-Middlbrook) [2]. Многообразие питательных сред (плотных, жидких, полужидких), разнообразных по сложности составов и способам изготовления, свидетельствует об отсутствии универсальной питательной среды, что обусловливает актуальность поиска новых питательных средств, обеспечивающих хороший рост культур, включая культуры первой генерации, и визуализацию начального роста колоний.
В качестве аналогов нами рассматриваются жидкая питательная среда Sauton, содержащая L-аспарагин, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, лимонную кислоту, лимоннокислое аммиачное железо, глицерин и дистиллированную воду [3], и модифицированная жидкая питательная среда Sauton, содержащая дополнительно питательный агар (до 0,35%) и лошадиную сыворотку (25%) [4]. Известную модификацию питательной среды Sauton применяют для ускоренного определения лекарственной устойчивости клинических штаммов микобактерий туберкулеза к изониациду, стрептомицину, рифампицину, однако наличие в ней компонентов крови и жидкая консистенция не позволяют применять ее для научных целей, в частности для изучения ферментативной активности.
Техническим результатом является повышение ростовых свойств питательной среды.
Технический результат достигается тем, что питательная среда, содержащая L-аспарагин, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, лимонную кислоту, лимоннокислое аммиачное железо, глицерин и дистиллированную воду, содержит 3,0% агара и дополнительно 9,0-9,5% гумивита.
Гумивит - щелочной гидролизат низинных сортов торфа (выпускается ООО Агропром), представляет собой высокодисперсный золь натриевых солей комплекса гумусных кислот - гуминовых, гуматомелановых и фульвокислот [5]. Раствор солей гуминовых кислот состоит из длинных фрагментарных цепочек с различными функциональными группами, важнейшими из которых являются карбоксильные (СООН) и фенольные (ОН), способные образовывать хелатные комплексы с микроэлементами, что обеспечивает их высокую обменную емкость и транспорт в клетку микроорганизмов [6, 7]. Гумивит - жидкость темно-коричневого до черного цвета со специфическим сладковатым запахом, благодаря чему готовая среда имеет интенсивно коричневый цвет, на фоне которого хорошо видны даже мелкие колонии в начальной фазе роста.
Сущность изобретения поясняется примерами.
Пример 1. Для приготовления среды в химически чистую стерильную колбу емкостью 2,0 л наливали 300,0 мл дистиллированной воды, прогревали на водяной бане до 75-85°С. В воде растворяли последовательно 2,0 г лимонной кислоты, 4,0 г L-аспарагина, 0,5 г сернокислого магния, 0,5 г двузамещенного фосфорнокислого калия, 0,05 г лимоннокислого аммиачного железа, 40,0 г глицерина, 90,0 мл гумивита и 30,0 г агара. Каждый компонент добавляли после полного растворения предыдущего. После внесения всех компонентов общий объем доводили до 1000,0 мл стерильной дистиллированной водой. Устанавливали рН 7,1-7,2 добавлением 1н. NaOH или 1н. HCl. Раствор автоклавировали в течение 30 минут при 1 атм. Горячую среду разливали по пробиркам по 3 мл и скашивали.
Пример 2. В таблице 1 приведены варианты питательной среды в соответствии с изобретением.
| Таблица 1 | ||||
| Состав разных вариантов питательных сред | ||||
| Состав | Вариант новой среды | |||
| 1-й | 2-й | 3-й | 4-й | |
| L-аспарагин, г | 4,0 | 4,0 | 4,0 | 4,0 |
| Двузамещенный фосфорнокислый калий, г | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Сернокислый магний, г | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Лимонная кислота, г | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Лимоннокислое аммиачное железо, г | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 |
| Глицерин, г | 40,0 | 40,0 | 40,0 | 40,0 |
| Агар, г | 30,0 | 30,0 | 30,0 | 30,0 |
| Гумивит, мл | 85,0 | 90,0 | 95,0 | 100,0 |
| Дистиллированная вода, мл | до 1000,0 | до 1000,0 | до 1000,0 | до 1000,0 |
Пример 3. Для определения эффективности среды для культивирования микобактерий использовали референс-штаммы микобактерий M.bovis (шт.Valle и BCG), M.tuberculosis (шт.Academia), Н37Ra, М.avium (шт.ГИСК, 44, 659), M.smegmatis (шт.53), М.phlei. Все штаммы хранились на среде Левенштейна-Йенсена в холодильнике при температуре +4°С. Посевы культур производили нанесением 10 мкл суспензии микобактерий, содержавшей 30-60 КОЕ при посеве на среду Левенштейна-Иенсена, на все сравниваемые варианты среды в соответствии с изобретением. Посев каждого штамма проводили на 3-5 пробирок. При оценке роста культур учитывали сроки появления первичных колоний, интенсивность роста (±слабый, +средний, ++обильный) и изучали культурально-морфологические свойства. Контроль - традиционно применяемая среда Левенштейна-Йенсена. Полученные результаты (таблица 2 и 3) показали, что оптимальными являются варианты 2 и 3 питательной среды в соответствии с изобретением, обеспечивавшие более ранние сроки появления и более высокую интенсивность роста относительно варианта 1 питательной среды в соответствии с изобретением и сравнимые с таковыми на среде Левенштейна-Йенсена. Повышение количества гумивита (вариант 4 питательной среды в соответствии с изобретением) не сокращало срок появления роста и не влияло на интенсивность роста. Культурально-морфологические свойства и цвет выросших колоний штаммов не отличались от таковых на исходной среде.
| Таблица 2 | |||||
| Сроки появления первичного роста микобактерий на средах разных вариантов | |||||
| Штаммы | Сроки появления роста, дней | ||||
| Среда в соответствии с изобретением | Среда Левенштейна-Йенсена | ||||
| Вариант 1 | Вариант 2 | Вариант 3 | Вариант 4 | ||
| M.bovis (шт.Vallee) | 15 | 13 | 12 | 12 | 14 |
| М.bovis (BCG) | 15 | 15 | 15 | 15 | 15 |
| М.tuberculosis (шт.Academia) | 13 | 11 | 10 | 10 | 10 |
| М.tuberculosis (шт.H37Ra) | 13 | 11 | 10 | 10 | 10 |
| М.avium (шт.ГИСК) | 9 | 7 | 7 | 7 | 7 |
| М.avium шт.44 | 12 | 10 | 9 | 9 | 7 |
| М.avium шт.659 | 11 | 10 | 10 | 10 | 8 |
| М.phlei | 4 | 3 | 2 | 2 | 2 |
| М.smegmatis, 53 | 4 | 3 | 2 | 2 | 2 |
| Таблица 3 | |||||||||
| Массивность роста микобактерий на средах разных вариантов: | |||||||||
| Среда | Штаммы микобактерий | ||||||||
| М.bovis Vallee | М.bovis BCG | M.tub. Academia | M.tub. Н37Ra | М.avium ГИСК | М.avium 44 | М.avium 659 | М.phlei | М.smegmatis 53 | |
| Массивность роста | |||||||||
| 3 недели роста | 1 неделя роста | ||||||||
| Вариант 1 | ± | ± | ± | + | ± | ± | ± | 4- | + |
| Вариант 2 | ± | + | + | ++ | + | + | + | ++ | ++-- |
| Вариант 3 | ± | + | + | ++ | ++ | + | ++ | ++ | ++ |
| Вариант 4 | ± | + | + | ++ | ++ | + | ++ | ++ | ++ |
| Среда Левен-штейна-Йенсена | ± | + | + | ++ | ++ | + | ++ | ++ | ++ |
Пример 4. Для определения эффективности среды для культивирования нокардиоформных актиномицетов использовали референс-штамм Nocardia asteroids и четыре штамма родококков, выделенные от свиней и идентифицированные в лабораторных условиях. Все штаммы хранились на среде Левенштейна-Йенсена в холодильнике при температуре +4°С. Посевы культур и учет результатов проводили как в примере 3. Контроль - традиционно применяемая среда Левенштейна-Йенсена. Результаты представлены в таблицах 4 и 5.
| Таблица 4 | |||||
| Сроки появления первичного роста нокардиоформных актиномицетов на средах разных вариантов | |||||
| Штаммы | Сроки появления роста, дней | ||||
| Среда в соответствии с изобретением | Среда Левенштейна-Йенсена | ||||
| Вариант 1 | Вариант 2 | Вариант 3 | Вариант 4 | ||
| Rhodococcus equi, шт.12 | 3 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| Rhodococcus equi, шт.13 | 4 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| Rhodococcus equi, шт.5 | 3 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| Rhodococcus equi, шт.6 | 3 | 3 | 2 | 2 | 2 |
| Nocardia asteroids | 3 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| Таблица 5 | |||||
| Массивность роста нокардиоформных актиномицетов на средах разных вариантов | |||||
| Среда | Штаммы нокардиоформных актиномицетов | ||||
| Rhodococcus equi 12 | Rhodococcus equi 13 | Rhodococcus equi 14 | Rhodococcus equi 15 | Nocardia asteroids | |
| Массивность роста | |||||
| Вариант 1 | ± | + | + | + | ± |
| Вариант 2 | + | ++ | ++ | ++ | + |
| Вариант 3 | ++ | ++ | ++ | ++ | + |
| Вариант 4 | ++ | ++ | ++ | ++ | + |
| Контроль | ++ | ++ | ++ | ++ | + |
Пример 5. Для сравнительного изучения информативности среды в соответствии с изобретением (вариант 3) и сред Левенштейна-Йенсена, Финн-2, Гельберга, ФАСТ-ЗЛ и Петраньяни использовали референс-штаммы микобактерий M.bovis (шт.Vallee, Ravenal БЦЖ), M.tuberculosis (шт.Academia), М.avium (шт.ГИСК и 659), M.smegmatis (шт.4), М.fortuitum и биологический материал от положительно реагировавшего на туберкулин крупного рогатого скота неблагополучных по туберкулезу хозяйств с характерными поражениями в органах и лимфатических узлах. Все штаммы хранились на среде Левенштейна-Йенсена в холодильнике при температуре +4°С. Биологический материал предварительно обрабатывали по методу Аликаевой. Посевы культур производили нанесением одной капли суспензии микобактерий, содержавшей 30-60 КОЕ при посеве на известные среды и на среду в соответствии с изобретением. Посев каждого штамма проводили на 3-5 пробирок. При оценке роста культур учитывали сроки появления первичных колоний и изучали культурально-морфологические свойства. Интенсивность роста изучали при посеве культуры М.bovis (шт.Vallee) на все анализируемые среды. Результаты представлены в таблицах 6 и 7.
Пример 6. Изучали жирнокислотный состав клеток колоний штаммов микобактерий туберкулеза BCG и Academia, снятых со сред Левенштейна-Йенсена, Павловского (оптимальной для получения бактериальной массы микобактерий и нокардиоформных актиномицетов для газохроматографического анализа) и питательной среды в соответствии с изобретением на газовом хроматографе Цвет-500. На хроматограммах эфиров жирных кислот клеток, снятых со среды Левенштейна-Йенсена, установлены следы жирных кислот яичной среды. Хроматограммы эфиров жирных кислот клеток, снятых со среды в соответствии с изобретением, отличались от хроматограмм эфиров жирных кислот клеток, снятых со среды Павловского, более четкими пиками.
| Таблица 6 | |||||||||
| Скорость роста микобактерий разных видов на плотных питательных средах | |||||||||
| Питательная среда | Скорость роста, сут. | ||||||||
| М.bovis шт Vallee | М.bovis шт.Ravenal | М.bovis шт.БЦЖ | М.tuberculosis шт.Academia | М.avium шт.ГИСК | M.avium шт.659 | М.smegmatis шт.4 | М.fortuitum | Биоматериал от крупного рогатого скота | |
| Левенштейна-Йенсена | 13-15 | 14-16 | 16-17 | 13-15 | 10-12 | 11-13 | 3-4 | 6-7 | 29-33 |
| Финн-2 | 13-15 | 14-16 | 16-17 | 13-15 | 10-11 | 11-12 | 3-4 | 5-8 | 29-33 |
| Гельберга | 17-19 | 17-19 | 20-21 | 17-19 | 11-12 | 13-13 | 2-3 | 7 | 33-37 |
| ФАСТ-ЗЛ | 16-18 | 16-18 | 18-19 | 15-17 | 10 | 11 | 3 | 6 | 30-34 |
| Петраньяни | 19-21 | 19-21 | 19-21 | 16-18 | 10-12 | 11-13 | 4-5 | 9-10 | 36-40 |
| Заявленная среда | 11-12 | 12-14 | 16-17 | 12-13 | 10-11 | 10-11 | 2 | 5 | 26-28 |
| Таблица 7 | ||||||||||
| Интенсивность роста М.bovis (шт.Vallee) на плотных питательных средах | ||||||||||
| Питательная среда | Сутки | |||||||||
| 7 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 24 | |
| Левенштейна-Йенсена | - | - | - | - | - | + | + | ++ | ++ | +++ |
| Финн-2 | - | - | - | - | - | + | + | ++ | ++ | +++ |
| Гельберга | - | - | - | - | - | - | ++ | ++ | ++ | +++ |
| ФАСТ-ЗЛ | - | - | - | - | - | - | + | ++ | +++ | +++ |
| Петраньяни | - | - | = | = | - | - | + | ++ | +++ | +++ |
| Заявленная среда | - | - | - | + | ++ | ++ | ++ | +++ | +++ | ++++ |
| Примечание: + - единичные колонии; ++ - 10-20 колоний: +++ - 21-50 колоний; ++++ - сплошной рост | ||||||||||
Проведенные исследования подтвердили эффективность питательной среды в соответствии с изобретением для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов (сроки появления первичного роста и массивность роста сравнимы с таковыми на традиционно применяемых средах). Заявленная питательная среда отличается дешевизной и технологичностью приготовления, а ее использование упрощает проведение бактериологических исследований благодаря визуализации начального роста колоний.
Источники информации
1. Туберкулез сельскохозяйственных животных / Под ред. Шишкова В.П., Урбана В.П. - М.: Агропромиздат, 1991. - С.120-121.
2. Васильев В.Н. Микобактериозы и микозы легких. - Софрия, 1971. - С.146-175.
3. Там же, С.156.
4. RU 2226398 C2, 2004.04.10.
5. Гришин Г.И., Слинина К.Н. Дар природы - гумивит // Практик. - 2004. - №3-4. - С.80-82.
6.Левинский Б.В. Все о гуматах. - Иркутск: ИП Макаров С.Е., 1999. - 198 с.
7. Сорокина Н.Ф. Физиология активности продуктов окисления торфа // Новые процессы и продукты переработки торфа. - Минск: Наука, 1982. - С.109-115.
Claims (1)
- Питательная среда для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов, содержащая калий фосфорнокислый двузамещенный, сернокислый магний, L-аспарагин, глицерин, лимонную кислоту, лимонно-кислое аммиачное железо и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит агар и гумивит при следующем соотношении компонентов:
L-аспарагин 4,0 г калий фосфорнокислый двузамещенный 0,5 г сернокислый магний 0,5 г лимонная кислота 2,0 г лимонно-кислое аммиачное железо 0,05 г глицерин 40,0 г агар 30,0 г гумивит 90,0-95,0 мл дистиллированная вода до 1000,0 мл
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006112740/13A RU2322495C2 (ru) | 2006-04-17 | 2006-04-17 | Питательная среда для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006112740/13A RU2322495C2 (ru) | 2006-04-17 | 2006-04-17 | Питательная среда для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006112740A RU2006112740A (ru) | 2007-10-27 |
| RU2322495C2 true RU2322495C2 (ru) | 2008-04-20 |
Family
ID=38955482
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006112740/13A RU2322495C2 (ru) | 2006-04-17 | 2006-04-17 | Питательная среда для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2322495C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD4030C2 (ru) * | 2009-12-12 | 2010-11-30 | Тимофей ПОПЕСКУ | Основа для приготовления питательных сред для культивирования микроорганизмов рода Mycobacterium и способ ее получения |
| RU2704278C1 (ru) * | 2019-01-28 | 2019-10-25 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для получения дрожжевых клеток диморфного гриба Histoplasma capsulatum |
-
2006
- 2006-04-17 RU RU2006112740/13A patent/RU2322495C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ВАСИЛЬЕВ В.Н., Микобактериозы и микозы легких. - София: МЕДИЦИНА И ФИЗКУЛЬТУРА, 1971, с.156. ШИШКОВ В.П., УРБАН В.П. Туберкулез сельскохозяйственных животных. - М.: АГРОПРОИЗДАТ, 1991, с.120. * |
| МЕДЖИДОВ М.М. Справочник по микробиологическим питательным средам. - Махачкала: Дагестанское книжное издательство, 1989, с.74-75. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD4030C2 (ru) * | 2009-12-12 | 2010-11-30 | Тимофей ПОПЕСКУ | Основа для приготовления питательных сред для культивирования микроорганизмов рода Mycobacterium и способ ее получения |
| RU2704278C1 (ru) * | 2019-01-28 | 2019-10-25 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для получения дрожжевых клеток диморфного гриба Histoplasma capsulatum |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2006112740A (ru) | 2007-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Currie et al. | Fungus-growing ants use antibiotic-producing bacteria to control garden parasites | |
| Di Menna | A search for pathogenic species of yeasts in New Zealand soils | |
| Menzel et al. | Isotopologue profiling enables insights into dietary routing and metabolism of trophic biomarker fatty acids | |
| Nudda et al. | Functional odd-and branched-chain fatty acid in sheep and goat milk and cheeses | |
| RU2322495C2 (ru) | Питательная среда для культивирования микобактерий и нокардиоформных актиномицетов | |
| RU2315812C1 (ru) | Питательная среда для выделения из биологического материала и культивирования микобактерий | |
| RU2428484C2 (ru) | Способ видовой дифференциации микобактерий туберкулеза | |
| RU2320716C2 (ru) | Плотная питательная среда для культивирования микобактерий | |
| CN102471757A (zh) | 用于分枝杆菌的增强的检测的方法和培养基 | |
| RU2375446C1 (ru) | Плотная питательная среда для культивирования патогенных микобактерий и нокардиоформных актиномицетов | |
| RU2300559C2 (ru) | Жидкая питательная среда для культивирования патогенных штаммов микобактерий туберкулеза | |
| RU2350648C1 (ru) | Способ оценки антагонистической активности пробиотиков на основе лиофилизированной биомассы анаэробных бактерий по отношению к патогенным микобактериям | |
| RU2672325C1 (ru) | Среда для выделения и культивирования микобактерий | |
| CN102471756A (zh) | 用于分枝杆菌的增强的检测的方法和培养基 | |
| RU2332452C2 (ru) | Композиция для приготовления питательной среды для выделения и культивирования микобактерий | |
| Brooks et al. | Characterization of strains of Corynebacterium bovis. | |
| RU2610412C2 (ru) | Способ первичной идентификации микобактерий комплекса m.tuberculosis от нетуберкулёзных микобактерий | |
| RU2295561C2 (ru) | Способ получения среды для выращивания микобактерий туберкулеза | |
| SU810812A1 (ru) | Способ отбора штаммов микроорганизмов,уСТОйчиВыХ K СОдЕРжАНиюМиКРОэлЕМЕНТОВ B пиТАТЕльНОйСРЕдЕ | |
| RU2757463C1 (ru) | Способ повышения эффективности культивирования каллусной культуры лимонника китайского (scisandra chinensis (turcz.) baill.) в условиях in vitro | |
| Suleimen et al. | The isolation of fungi from lichens of the Magadan region and biological activity of their extracts | |
| RU2740195C1 (ru) | Питательная среда культивирования микобактерий туберкулеза | |
| Merheb et al. | Evaluation of Oil Quantities in Oleaginous Filamentous Fungi in UAE Wetlands: Potential Precursors of Next-Generation Biofuel | |
| Bennardo et al. | The antimicrobial effects of secondary metabolites of anguillan fungi | |
| Kalyan | CULTURE MEDIA |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080418 |