RU2319963C1 - Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря - Google Patents
Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря Download PDFInfo
- Publication number
- RU2319963C1 RU2319963C1 RU2007102127/15A RU2007102127A RU2319963C1 RU 2319963 C1 RU2319963 C1 RU 2319963C1 RU 2007102127/15 A RU2007102127/15 A RU 2007102127/15A RU 2007102127 A RU2007102127 A RU 2007102127A RU 2319963 C1 RU2319963 C1 RU 2319963C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- irradiated
- sample
- organ
- blood
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, биохимии, а именно к онкологии. Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря включает взятие пробы крови, гамма-облучение части этой пробы in vitro, инкубации облученной и необлученной частей пробы крови и окрашивания ДНК компонентов обеих частей крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, далее определяют количество лейкоцитов Lo в облученной части пробы крови, количество лейкоцитов Lн в необлученной части пробы крови и отношение Lo/Lн, затем осуществляют окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови, определяют ИДо - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит облученной части пробы и ИДн - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит необлученной части пробы, вычисляют ИДн/ИДо и Lo/Lн, и при значениях обоих указанных отношений более 1,0 считают показанным проведение органосохраняющего лечения. Изобретение обеспечивает повышение надежности способа.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при определении наиболее рациональной тактики лечения больных с раком мочевого пузыря (РМП), представляющим собой солидное новообразование.
Известен способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения, а именно химиотерапии (XT), больным лимфогранулематозом и распространенным раком молочной железы, также являющимся солидным новообразованием; согласно способу определяют число нейтрофилов крови пациента и при уровне числа нейтрофилов от 1,8 до 10,0×109 кл/л исследуют лейкоциты периферической крови после гамма-облучения в дозе 2 Гр, инкубируют облученную и необлученную пробы в течение 3 ч при 37°С, определяют в них содержание ДНК лейкоцитов и рассчитывают показатель чувствительности (S) как отношение концентрации ДНК для лейкоцитов необлученной пробы к концентрации ДНК лейкоцитов облученной пробы и при величине нейтрофилов в пределах 1,8-10,0×109 кл/л и значении величины S-показателя ниже 1,0 считают, что больному, в случае первичного генерализованного лимфогранулематоза, показано проведение комбинированной терапии по схеме ВЕАСОРР - блеомецином, этопозидом, доксорубицином, циклофосфамидом, винкристином, прокарбозином и преднизолоном, при значении величины S-показателя ниже 0,8 считают, что больному, в случае первичного распространенного рака молочной железы, показано проведение стандартного курса комбинированной химиотерапии по схеме CMF - циклофосфаном, метотрексатом, 5-фторурацилом, а при значении S-показателя выше 0,8 считают, что больному, в случае первичного распространенного рака молочной железы, показано проведение курса комбинированной химиотерапии по схеме FAC - 5-фторурацилом, доксорубицином, циклофосфаном, RU 2212035 C2.
Данный способ малоэффективен при определении показаний к проведению органосохраняющего лечения больных РМП.
Радикальным методом лечения инвазивного рака мочевого пузыря (РМП) является цистэктомия. В то же время следует учитывать, что РМП - болезнь пожилого возраста, и не всем больным можно выполнить такую радикальную операцию из-за сопутствующей патологии. Кроме того, известно о снижении качества жизни после удаления мочевого пузыря. В результате многие пациенты, получив информацию о необходимости полного удаления этого органа, отказываются от предлагаемого лечения. Вместе с тем к настоящему времени установлено, что не всем больным с инвазивным и местно-распространенным РМП необходимо полное удаление органа и в определенной группе больных можно добиться регрессии опухоли, используя консервативные методы лечения. Однако при органосохраняющем лечении мочевого пузыря возрастает степень риска, связанная с возможным рецидивом заболевания, развитием регионарных или отдаленных метастазов. Прогнозировать эффективность такого лечения и дальнейшее развитие болезни пока еще очень трудно. Одним из подходов в решении этой проблемы представляется целенаправленный отбор больных для органосохраняющего лечения. Несмотря на наличие таких высокоинформативных методов исследования, как компьютерная и ядерно-магнитно-резонансная томография, разница при определении распространенности опухолевого поражения до и после лечения довольно существенна. Ошибка при установлении клинического диагноза встречается в 45-70% случаев, что в значительной степени осложняет прогноз течения болезни.
К настоящему времени известно, что своеобразным критерием отбора больных для органосохраняющего лечения может быть ответ на индукционную химиотерапию (XT), который коррелирует с чувствительностью РМП к комбинированному лечению. Выживаемость больных, имевших полный ответ на XT, была выше, чем у резистентных. Однако определение наиболее раннего ответа на такую индукционную XT требует, по крайней мере, 6-14-дневного периода и, кроме того, возникают сложности при необходимости изменения последующей тактики лечения у пациентов, не имевших достаточной величины (полноты) ответа или имевших частичный ответ на подведенную XT (у которых должна быть проведена радикальная цистэктомия после такого лечения).
Известен способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных РМП путем взятия пробы крови, выделения лимфоцитов, гамма-облучения лимфоцитов части этой пробы in vitro, инкубации лимфоцитов облученной и необлученной частей пробы крови и окрашивания лимфоцитов ДНК-специфичным флуоресцентным красителем; затем определяют содержание ДНК в облученных и необлученных лимфоцитах и при установлении снижения содержания ДНК в облученных лимфоцитах в сравнении с необлученными считают, что больному показано органосохраняющее лечение, в частности химиолучевая терапия, см. М.Ozsahin и др. «Radiation-Induced Late Toxicity Can Be Predicted by CD4 and CD8 T-Lymphocyte Apoptosis: Results of a Prospective Study in 399 Individual Consenting Patients», I.J.Radiation Oncology. Biology. Physics. Volume 57, Number 2, Supplement, 2003, USA, p.p.203-204 (копия ссылки прилагается).
Данный способ принят в качестве прототипа настоящего изобретения.
Недостатком этого способа является то, что учитываются реакции только в лимфоцитах, которые составляют при солидных опухолях не более 30% от общего числа лейкоцитов. Это не всегда позволяет сделать достоверное заключение о наличии показаний к проведению органосохраняющего лечения. В частности, в указанном выше источнике (М.Ozsahin и др., р.203) отмечается, что при РМП реакция CD4 лимфоцитов на тест облучения недостоверна (p=NS for CD4).
Таким образом, способ-прототип не обладает достаточной надежностью при определении показаний к проведению органосохраняющего лечения больных РМП.
Задачей настоящего изобретения является повышение надежности способа определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных РМП.
Согласно изобретению в способе определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря путем взятия пробы крови, гамма-облучения части этой пробы in vitro, инкубации облученной и необлученной частей пробы крови и окрашивания ДНК компонентов обеих частей крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, определяют количество лейкоцитов Lo в облученной части пробы крови, количество лейкоцитов Lн в необлученной части пробы крови и отношение Lo/Lн, затем осуществляют окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови, определяют ИДо - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит облученной части пробы и ИДн - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит необлученной части пробы, вычисляют ИДн/ИДо и Lo/Lн, и при значениях обоих указанных отношений более 1,0 считают показанным проведение органосохраняющего лечения.
Заявителем не выявлены источники, содержащие информацию о технических решениях, идентичных настоящему изобретению, что позволяет сделать вывод о его соответствии критерию «новизна».
Определение суммарной концентрации ДНК в пробе крови позволяет более полно оценить реакции на облучение, так как учитывает все ДНК-содержащие компоненты, а не только реакции в лимфоцитах. Значительное количество ДНК содержится в гранулоцитах крови, которые могут составлять до 70% всех периферических лейкоцитов, кроме того, в кровотоке онкологических больных имеются ДНК-содержащие опухолевые клетки, наконец, также известно о наличии циркулирующей ДНК в плазме/сыворотке крови. Каждый из перечисленных компонентов дает свой вклад в повышение надежности способа.
Указанные обстоятельства позволяют сделать вывод о соответствии заявленного изобретения критерию «изобретательский уровень».
Заявленный способ реализуют следующим образом.
У больного РМП берут 2,0 мл венозной крови, добавляют гепарин до 25 ед/мл, а также 2,0 мл раствора Хенкса. Смесь делят на две примерно равные части. Одну часть подвергают гамма-облучению в дозе 2 Гр, другая часть смеси остается необлученной. Обе части инкубируют при 37°С в течение 3 часов. После этого в каждой части пробы определяют общее количество лейкоцитов с помощью камеры Горяева и вычисляют отношение количества лейкоцитов в облученной части пробы (Ло) к количеству лейкоцитов в необлученной части пробы (Лн). Перед окрашиванием 0,05 мл каждой части пробы обрабатывают 10-кратным объемом лизирующей смеси, содержащей 0,5% тритон Х-100, 2М NaCl, 0,1 М Na2EDTA и 0,01 М трис при рН 8,0 в течение 3-5 минут до просветления. Далее осуществляют окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, в частности, 4:6-диамидино-2-фенилиндолом (ДАФИ). Для этого измеряют интенсивность флуоресценции при λВОЗБ=350 нм и λЭМ=450 нм у лизированной пробы (I0), затем к пробе добавляют 0,05 мл раствора ДАФИ в концентрации 4 мкг/мл и измеряют интенсивность флуоресценции - I1, после чего к пробе добавляют 0,02 мл раствора стандартной ДНК в известной концентрации и определяют интенсивность флуоресценции - I2. Концентрацию ДНК, нормированную на один лейкоцит (Л) в анализируемых пробах, рассчитывают по формуле:
где К - коэффициент, зависящий от разбавления проб и стандарта, а также от концентрации стандарта (К - при одинаковых условиях измерения является величиной постоянной).
Определив индексы ИДн в необлученной и ИДо в облученной частях пробы, вычисляют отношение ИДн/ИДо.
При значениях Lo/Lн и ИДн/ИДо более 1,0 считают целесообразным проведение органосохраняющего лечения.
Пример 1.
Анамнез - больной К-в B.C. 54 года. Поступил в Клинику ЦНИРРИ с диагнозом: «переходноклеточный РМП», Т2-стадия.
К 2,0 мл гепаринизированной (25 ед/мл) цельной венозной пробы крови пациента добавили 2,0 мл раствора Хенкса. Получившуюся смесь разделили на 2 части. Одну из них облучили в дозе 2 Гр на гамма-установке «Луч-1» (мощность дозы 0,4 Гр/мин), другая служила контролем. Обе части пробы инкубировали при 37°С в течение 3 ч в термостате. После этого в обеих пробах определяли концентрации лейкоцитов с помощью камеры Горяева и отношение Lo/Lн=1,10.
Затем в обеих частях пробы определяли концентрацию ДНК с помощью флуоресцентного красителя. Для этого к 0,05 мл пробы проинкубированной крови добавляли 0.5 мл лизирующей смеси, содержащей 0,5% тритон Х-100, 2М NaCl, 0,1 М Na2EDTA и 0,01 М трис при рН 8,0, в течение 3-5 мин до просветления и 0,05 мл лизированной пробы добавляли к 1,0 мл трис-буфера. Интенсивность флуоресценции образца измеряли на спектрофлуориметре фирмы «Хитачи» (Япония) Model-850 λВОЗБ=350 нм и λЭМ=450 нм. В данном случае у необлученной лизированной пробы I0=8,5, затем к пробе добавляли 0,05 мл раствора ДАФИ в концентрации 4 мкг/мл и измеряли интенсивность флуоресценции - I1=28,3, после чего к пробе добавили 0,02 мл раствора соницированной ДНК тимуса теленка фирмы «Серва» (Германия) в концентрации 25 мкг/мл и определили интенсивность флуоресценции - I2=45,4.
Определив количество ДНК в расчете на 1 лейкоцит, в необлученной и облученной пробах рассчитали величину ИДн/ИДо=1,44. Так как значения ИДн/ИДо и Lo/Lн больше 1,0, было сделано заключение о возможном проведении комбинированной органосохраняющей терапии больному К-ву. Последующее определение длительности безрецидивного периода показало, что рецидивов заболевания у больного не было в течение 23 мес.
Для сравнения приводим результаты лечения другого больного, которому в соответствии с нашими показаниями комбинированное органосохраняющее лечение не было рекомендовано, но оно все-таки было проведено.
Анамнез - больной Ж-в Н.Ф. 79 лет. Поступил в клинику ЦНИРРИ с диагнозом: «переходноклеточный РМП», Т2-стадия.
Величина Lo/Lн=0,83, а величина ИДн/ИДо=0,86, что не являлось показанием проведения органосохраняющего комбинированного лечения. Несмотря на это, такое лечение было осуществлено, и в результате обнаружилось, что рецидив заболевания произошел уже через 2 месяца после окончания органосохраняющей терапии, что привело к осложнению всего лечения.
Результаты определения показаний к проведению органосохраняющего лечения 20 больных и данные клинических наблюдений, полученные в результате лечения, продемонстрировали, что у больных с Lo/Lн>1,0 и ИДн/ИДо>1,0 длительность безрецидивного периода после органосохраняющей терапии составляла 14,5±3,0 месяцев. В то же время 16 больным с Lo/Lн<1,0 и/или ИДн/ИДо<1 была проведена, несмотря на рекомендации, следующие из заявленного способа, органосохраняющая терапия. В этом случае длительность безрецидивного периода составила 6,5±0,7 месяцев.
Claims (1)
- Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря путем взятия пробы крови, гамма-облучения части этой пробы in vitro, инкубации облученной и необлученной частей пробы крови и окрашивания ДНК компонентов обеих частей крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, отличающийся тем, что определяют количество лейкоцитов Lo в облученной части пробы крови, количество лейкоцитов Lн в необлученной части пробы крови и отношение Lo/Lн затем осуществляют окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови, определяют ИДо - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит облученной части пробы и ИДн - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит необлученной части пробы, вычисляют ИДн/ИДо и Lo/Lн и при значениях обоих указанных отношений более 1,0 считают показанным проведение органосохраняющего лечения.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007102127/15A RU2319963C1 (ru) | 2007-01-11 | 2007-01-11 | Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007102127/15A RU2319963C1 (ru) | 2007-01-11 | 2007-01-11 | Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2319963C1 true RU2319963C1 (ru) | 2008-03-20 |
Family
ID=39279858
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007102127/15A RU2319963C1 (ru) | 2007-01-11 | 2007-01-11 | Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2319963C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2506591C1 (ru) * | 2012-12-12 | 2014-02-10 | Сергей Дмитриевич Иванов | Способ определения показаний к проведению лучевой терапии у опухоленосителей путем предикции ее эффективности |
-
2007
- 2007-01-11 RU RU2007102127/15A patent/RU2319963C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Kopjar N et al. "Assessment of chemotherapy-induced DNA damage in peripheral blood leukocytes of cancer patients using the alkaline comet assay", Teratog Carcinog Mutagen., 2002, 22(1):13-30 PMID 11754384 (реферат) найдено в PubMed 05.04.2007. Hartley JM et al "Measurement of DNA cross-linking in patients on ifosfamide therapy using the single cell gel electrophoresis (comet) assay", Clin Cancer Res. 1999 Mar, 5(3):507-12. PMID: 10100700. * |
| Ozsahin M et al. I.J.Radiation Oncology, Biology, Physics. V.57, №2, Supplement, 2003, USA, p/203-204. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2506591C1 (ru) * | 2012-12-12 | 2014-02-10 | Сергей Дмитриевич Иванов | Способ определения показаний к проведению лучевой терапии у опухоленосителей путем предикции ее эффективности |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nguyen et al. | Radiation acts on the microenvironment to affect breast carcinogenesis by distinct mechanisms that decrease cancer latency and affect tumor type | |
| Yang et al. | Suppression of long non‐coding RNA TNRC6C‐AS1 protects against thyroid carcinoma through DNA demethylation of STK4 via the Hippo signalling pathway | |
| Greipp et al. | Patients with chronic lymphocytic leukaemia and clonal deletion of both 17p13. 1 and 11q22. 3 have a very poor prognosis | |
| Li et al. | Clinical significance of detecting CSF-derived tumor cells in breast cancer patients with leptomeningeal metastasis | |
| CN104302180B (zh) | 对nedd8活化酶(nae)抑制剂的反应的生物标记 | |
| Tóth et al. | Circadian rhythm of methylated septin 9, cell-free DNA amount and tumor markers in colorectal cancer patients | |
| CN105473735A (zh) | 用于肿瘤分子亚型分型的方法和试剂盒 | |
| Cheng et al. | LncRNA MAGI2-AS3 overexpression sensitizes esophageal cancer cells to irradiation through down-regulation of HOXB7 via EZH2 | |
| BR112013012943A2 (pt) | método de diagnóstico de uma disfunção neurodegenerativa em um sujeito, método de monitoramento de doença, método de avaliação de predisposição e kit | |
| US20130131139A1 (en) | Ror1 as a gene target in acute lymphoblastic leukemia | |
| Topkan et al. | Low systemic inflammation response index predicts good prognosis in locally advanced pancreatic carcinoma patients treated with concurrent chemoradiotherapy | |
| Sakane-Ishikawa et al. | Prognostic significance of BACH2 expression in diffuse large B-cell lymphoma: a study of the Osaka Lymphoma Study Group | |
| Kim et al. | Breast cancer stem cells in HER2-negative breast cancer cells contribute to HER2-mediated radioresistance and molecular subtype conversion: clinical implications for serum HER2 in recurrent HER2-negative breast cancer | |
| CN101484586A (zh) | 检测移植物抗宿主疾病易感性或移植相关死亡率的方法和试剂 | |
| Liu et al. | TUG1 long non‐coding RNA enlists the USF1 transcription factor to overexpress ROMO1 leading to hepatocellular carcinoma growth and metastasis | |
| Advani et al. | A Phase 1 study of imatinib mesylate in combination with cytarabine and daunorubicin for c-kit positive relapsed acute myeloid leukemia | |
| RU2319963C1 (ru) | Способ определения показаний к проведению органосохраняющего лечения больных раком мочевого пузыря | |
| Wei et al. | Epithelial-mesenchymal transition classification of circulating tumor cells predicts clinical outcomes in progressive nasopharyngeal carcinoma | |
| Dang et al. | MicroRNA profiling in BEAS-2B cells exposed to alpha radiation reveals potential biomarkers for malignant cellular transformation | |
| Zhang et al. | ADGRG1 is a predictor of chemoresistance and poor survival in cervical squamous carcinoma | |
| KR20140094768A (ko) | Ｃｄｃ27을 측정하는 제제를 포함하는 방사선 저항성 또는 민감성 진단용 조성물 및 이의 용도 | |
| Bai et al. | Circulating tumor cells and CXCR4 in the prognosis of hepatocellular carcinoma | |
| Pan et al. | Significance of WT1 and multiparameter flow cytometry assessment in patients with chronic myelomonocytic leukemia receiving allogeneic hematopoietic stem cell transplantation | |
| Zhou et al. | hsa_circ_0072309 expression profiling in non-small-cell lung carcinoma and its implications for diagnosis and prognosis | |
| KR101467289B1 (ko) | Ｗｄｆｙ3를 측정하는 제제를 포함하는 방사선 저항성 또는 민감성 진단용 조성물 및 이의 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170112 |