RU2308947C1

RU2308947C1 - Medicinal agent "simvaglisin" with hypolipidemic effect

Info

Publication number: RU2308947C1
Application number: RU2006105814/15A
Authority: RU
Inventors: Генрих Александрович Толстиков (RU); Генрих Александрович Толстиков; Юрий Петрович Никитин (RU); Юрий Петрович Никитин; хович В чеслав Валентинович Л (RU); Вячеслав Валентинович Ляхович; Нариман Фаридович Салахутдинов (RU); Нариман Фаридович Салахутдинов; Юли Игоревна Рагино (RU); Юлия Игоревна Рагино; Валентин Андреевич Вавилин (RU); Валентин Андреевич Вавилин
Original assignee: Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН (НИОХ СО РАН); Государственное учреждение Научно-исследовательский институт терапии СО РАМН (ГУ НИИТ СО РАМН)
Priority date: 2006-02-26
Filing date: 2006-02-26
Publication date: 2007-10-27

Abstract

FIELD: medicine, pharmacy.

SUBSTANCE: invention relates to medicinal agents, namely, to a novel medicinal agent possessing hypolipidemic effect and representing molecular complex of simvastatin with β-glycyrrhizic acid in the mole ratio simvastatin : β-glycyrrhizic acid= 1:(1-4). Proposed complex possess higher effectiveness in lower doses that results to reducing toxicity in treatment.

EFFECT: improved and valuable medicinal properties of agent.

3 dwg, 5 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к разработке новых лекарственных средств, обладающих гиполипидемическим эффектом.The invention relates to the field of medicine, namely to the development of new drugs with lipid-lowering effect.

Распространенность и смертность от сердечно-сосудистых заболеваний атеросклеротического генеза и, в частности, от ИБС продолжают оставаться чрезвычайно высокими в мире. Несмотря на проводимые интенсивные исследования и на высокий уровень современных научно-технических возможностей диагностики и лечения, проблема атеросклероза весьма далека от своего разрешения. Сегодня липидснижающая терапия при атеросклерозе и ИБС является самой актуальной и приоритетной. Связано это, прежде всего, с ведущей ролью холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛНП-ХС) в патогенезе атеросклероза [1, 2]. Основное внимание медицины в этой области направлено на нормализацию липидного профиля крови - общего ХС, ЛНП-ХС, триглицеридов (ТГ), ХС липопротеинов высокой плотности (ЛВП-ХС) у пациентов с атеросклерозом и с ИБС [3-5]. Необходимость применения и изучения механизмов действия современных липидснижающих средств - ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы - при атеросклерозе и ИБС в настоящее время не вызывает никаких сомнений.The prevalence and mortality from cardiovascular diseases of atherosclerotic origin and, in particular, from IHD continue to be extremely high in the world. Despite the ongoing intensive research and the high level of modern scientific and technical capabilities for diagnosis and treatment, the problem of atherosclerosis is far from being resolved. Today, lipid-lowering therapy for atherosclerosis and coronary heart disease is the most relevant and priority. This is primarily due to the leading role of low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) in the pathogenesis of atherosclerosis [1, 2]. The main focus of medicine in this area is aimed at normalizing the blood lipid profile - total cholesterol, LDL-cholesterol, triglycerides (TG), high density lipoprotein cholesterol (HDL-cholesterol) in patients with atherosclerosis and with coronary heart disease [3-5]. The need to use and study the mechanisms of action of modern lipid-lowering drugs - HMG-CoA reductase inhibitors - for atherosclerosis and coronary heart disease does not currently cause any doubts.

Известно, что цитохром Р-450 зависимый метаболизм статинов приводит к действию их активных метаболитов через ядерные PPARα-активаторы рецепторов, ингибированию ими фермента ГМГ-КоА-редуктазы в цепочке синтеза ХС, к снижению его внутриклеточного содержания и к увеличению количества апо-В,Е-рецепторов на мембране гепатоцитов. Как следствие, увеличивается захват атерогенных ЛНП из крови, приводящий к выраженному гипохолестеринемическому эффекту. Кроме того, повышается секреция антиатерогенных ЛВП, снижается образование атерогенных субфракций ЛНП из субфракций ЛОНП за счет подавления их синтеза в печени, повышенного катаболизма ремнантов ЛОНП через апо-В,Е-рецепторы [6, 7].It is known that cytochrome P-450 dependent metabolism of statins leads to the action of their active metabolites through nuclear PPARα-activators of receptors, their inhibition of the enzyme HMG-CoA reductase in the cholesterol synthesis chain, to a decrease in its intracellular content and to an increase in the amount of apo-B, E receptors on the membrane of hepatocytes. As a result, the capture of atherogenic LDL from the blood increases, leading to a pronounced hypocholesterolemic effect. In addition, the secretion of anti-atherogenic HDL is increased, the formation of atherogenic LDL subfractions from VLDL subfractions is reduced due to suppression of their synthesis in the liver, increased catabolism of VLDL remnants through apo-B, E-receptors [6, 7].

В настоящее время эта проблема решается использованием в качестве липидснижающих средств статинов как оригинальных препаратов - ловастатин (Мевакор), симвастатин (Зокор), правастатин (Липостат), аторвастатин (Липримар), флувастатин (Лескол), так и статинов-генериков. Характеризуя в целом имеющийся ряд статинов, необходимо отметить, что у большинства из них высокая суточная доза (20-80 мг), что обуславливает, во-первых, возникновение нежелательных побочных эффектов (повышение печеночных ферментов АЛТ и ACT, миалгия, миопатия с повышением КФК, рабдомиолиз и другие) и, во-вторых, высокую стоимость курса лечения этими препаратами.Currently, this problem is being solved by using statins as lipid-lowering drugs as original drugs - lovastatin (Mevacor), simvastatin (Zokor), pravastatin (Lipostat), atorvastatin (Liprimar), fluvastatin (Leskol), and generic statins. Describing the generally available number of statins, it should be noted that most of them have a high daily dose (20-80 mg), which causes, firstly, the appearance of undesirable side effects (increased liver enzymes ALT and ACT, myalgia, myopathy with an increase in CPK , rhabdomyolysis and others) and, secondly, the high cost of a course of treatment with these drugs.

В качестве прототипа нами выбран симвастатин (Зокор), обычная доза которого достаточно высока и составляет для человека массой 60 кг 10-20 мг/сутки или 160-320 мкг/кг массы тела. К недостаткам прототипа следует отнести нежелательные побочные эффекты: изменения функции печени с повышением уровня трансаминаз в сыворотке крови, диспепсия, головные боли, кожная сыпь, мышечные боли, изменения в мышцах, связанные с повышением содержания в крови и мышечной ткани креатининфосфокиназы, с появлением миопатии, общей слабости [8].As a prototype, we chose simvastatin (Zokor), the usual dose of which is quite high and for a person weighing 60 kg is 10-20 mg / day or 160-320 μg / kg of body weight. The disadvantages of the prototype include unwanted side effects: changes in liver function with increasing levels of transaminases in the blood serum, dyspepsia, headaches, skin rashes, muscle pains, changes in the muscles associated with increased levels of creatinine phosphokinase in the blood and muscle tissue, with the appearance of myopathy, general weakness [8].

Задача, на решение которой направлено предполагаемое изобретение, заключается в создании эффективного, низкотоксичного лекарственного препарата, обладающего гиполипидемическим эффектом, а также в расширении ассортимента липидснижающих средств.The problem to be solved by the alleged invention is aimed at creating an effective, low-toxic drug with a lipid-lowering effect, as well as expanding the range of lipid-lowering drugs.

Поставленная задача решается путем использования в качестве гиполипидемического препарата новых химических соединений, являющихся молекулярными комплексами симвастатина (СВ) с глицирризиновой кислотой (ГК) в соотношении 1÷(1-4) соответственно. Для этого комплекса предлагается название «симваглизин» (СВГ). Комплексы симваглизина получают смешением растворов симвастатина и β-глицирризиновой кислоты в легкоудаляемых и нетоксичных растворителях, таких как этиловый спирт, вода, ацетон. Структура комплекса представлена на фиг.1.The problem is solved by using as a hypolipidemic drug new chemical compounds that are molecular complexes of simvastatin (CB) with glycyrrhizic acid (HA) in a ratio of 1 ÷ (1-4), respectively. For this complex, the name "simvaglizin" (SVG) is proposed. Simvaglysin complexes are prepared by mixing solutions of simvastatin and β-glycyrrhizic acid in readily removable and non-toxic solvents such as ethyl alcohol, water, acetone. The structure of the complex is presented in figure 1.

Комплексообразование симвастатина (СВ) с глицирризиновой кислотой (ГК) изучено с использованием методов ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и электронной оптической UV-Vis спектроскопии. Обнаружено, что в присутствие ГК спектр поглощения СВ существенно изменяется, что указывает на образование комплекса включения (фиг.2).The complexation of simvastatin (CB) with glycyrrhizic acid (HA) was studied using nuclear magnetic resonance (NMR) and electronic optical UV-Vis spectroscopy. It was found that in the presence of HA, the absorption spectrum of SW changes significantly, which indicates the formation of an inclusion complex (Fig. 2).

Для получения информации о структуре комплекса была изучена зависимость интенсивности поглощения СВ на длине волны 247 нм от концентрации ГК. Измерения проводились в водно-этанольной смеси (20% этанола) при концентрации СВ 0.1 мМ. Результаты измерений приведены на фиг.2. На фиг.2 видно, что при малых концентрациях ГК (до 0.2 мМ) изменений в спектре поглощения не наблюдается. По-видимому, это указывает на то, что в данном диапазоне концентраций комплекс не образуется. При дальнейшем росте концентрации ГК наблюдается существенное изменение вида спектра.To obtain information on the structure of the complex, the dependence of the intensity of absorption of SW at a wavelength of 247 nm on the concentration of HA was studied. The measurements were carried out in a water-ethanol mixture (20% ethanol) at a CB concentration of 0.1 mM. The measurement results are shown in figure 2. Figure 2 shows that at low concentrations of HA (up to 0.2 mm), no changes in the absorption spectrum are observed. Apparently, this indicates that the complex does not form in this concentration range. With a further increase in the concentration of HA, a significant change in the shape of the spectrum is observed.

Наклон кривой на фиг.3 позволяет сделать предположение об образовании комплекса со стехиометрией 1:4. Точный математический анализ комплексов со стехиометрией больше чем 1:1 достаточно сложен, однако можно воспользоваться упрощенной моделью, рассматривая лишь процесс входа-выхода СВ из комплекса:The slope of the curve in figure 3 allows us to make an assumption about the formation of a complex with a stoichiometry of 1: 4. The exact mathematical analysis of complexes with stoichiometry greater than 1: 1 is quite complicated, however, you can use the simplified model, considering only the process of input-output of SV from the complex:

СВ+nГК=Complex.CB + nHC = Complex.

Определив константу стабильности какDefining the stability constant as

К=[Comp]/[СВ][ГК]ⁿ,K = [Comp] / [CB] [GK] ⁿ ,

путем математических преобразований можно получить приближенное выражение для данных экспериментальных условий:by mathematical transformations it is possible to obtain an approximate expression for these experimental conditions:

A₀/A-1=К*[ГК]ⁿ,A ₀ / A-1 = K * [HA] ⁿ ,

где А - интенсивность поглощения СВ на длине волны 247 нм. Действительно, построив график (А₀/А-1) от [ГК]ⁿ на участке роста от 0.2 до 0.6 мМ ГК, мы получили линейную зависимость для n=4. Наклон прямой дает величину К=3*10¹⁴ М^-4.where A is the intensity of absorption of SW at a wavelength of 247 nm. Indeed, having plotted (A ₀ / A-1) versus [HA] ⁿ in the growth region from 0.2 to 0.6 mM HA, we obtained a linear relationship for n = 4. The slope of the line gives the value K = 3 * 10 ¹⁴ M ^-4 .

На основании этих результатов можно предположить, что в диапазоне концентраций от 0.2 до 0.8 мМ ГК образует циклические ассоциаты, состоящие из 4-х молекул ГК. Данный результат хорошо согласуется с результатами по измерению динамической вязкости водно-спиртовых растворов ГК. Вязкость растворов ГК скачком увеличивается при [ГК]=0.1 мМ и 0.8 мМ с дальнейшим плавным увеличением, что можно связать с ростом ассоциатов. По аналогии с мицеллами точку 0.1 мМ можно назвать критической концентрацией мицеллообразования, причем положение этой точки зависит от содержания спирта в растворе.Based on these results, it can be assumed that in the concentration range from 0.2 to 0.8 mM, HA forms cyclic associates consisting of 4 HA molecules. This result is in good agreement with the results on measuring the dynamic viscosity of aqueous-alcoholic solutions of HA. The viscosity of HA solutions abruptly increases at [HA] = 0.1 mM and 0.8 mM with a further gradual increase, which can be associated with an increase in associates. By analogy with micelles, the 0.1 mM point can be called the critical micelle concentration, and the position of this point depends on the alcohol content in the solution.

В спектрах ЯМР СВ и ГК также наблюдаются изменения при смешении растворов СВ и ГК, что указывает на наличие связывания. Заметные изменения в положении линий ЯМР наблюдаются для протонов СВ при двойной связи (3'-Н, 4'-Н и 5'-Н), что позволяет предположить, что СВ входит в комплекс именно этим фрагментом. В спектре ГК наблюдаются сдвиги линий протонов 1-Н и 2-Н, расположенных в центральной части молекулы. Это позволяет предположить участие карбонильной группы глицирризиновой кислоты в механизме связывания с симвастатином.In the NMR spectra of CB and HA, changes are also observed upon mixing solutions of CB and HA, which indicates the presence of binding. Noticeable changes in the position of the NMR lines are observed for CB protons at the double bond (3'-Н, 4'-Н and 5'-Н), which suggests that the SW is included in the complex by this particular fragment. In the HA spectrum, shifts of the lines of 1-H and 2-H protons located in the central part of the molecule are observed. This suggests the participation of the carbonyl group of glycyrrhizic acid in the mechanism of binding to simvastatin.

Предварительное тестирование комплексов показало их высокую гиполипидемическую активность, причем наилучшие результаты показал комплекс состава СВ:ГК=1:4 (молярные доли). Одна весовая часть симваглизина содержит в этом случае 0,111 части симвастатина.Preliminary testing of the complexes showed their high lipid-lowering activity, with the best results being shown by the CB composition complex: HA = 1: 4 (molar fractions). One weight part of simvaglizin contains in this case 0.111 parts of simvastatin.

Проведены доклинические экспериментальные исследования по изучению ингибирующего ГМГ-КоА-редуктазу эффекта СВГ in vitro и гипохолестеринемического его эффекта in vivo. Исследования проведены с использованием традиционной классической схемы, применяемой в настоящее время при проведении подобных испытаний [9-11].Preclinical experimental studies have been conducted to study the in vitro inhibitory effect of HMG-CoA reductase in vitro and its hypocholesterolemic effect in vivo. The studies were carried out using the traditional classical scheme, which is currently used for such tests [9-11].

Проводилась оценка дозозависимого ингибирующего ГМГ-КоА-редуктазу эффекта СВГ in vitro с использованием радиоизотопного метода на модели микросомальной фракции гомогената печени крыс и хроматографического метода количественной оценки [С-14]-меченного мевалоната в суспензии микросом печени крыс. Фракция микросом печени крыс выделялась методом дифференциального ультрацентрифугирования. Метаболизм ГМГ-КоА-редуктазной реакции во фракции микросом печени крыс проводился при 37°С в присутствии меченного субстрата (3-гидрокси-3-метил-[3-14С]-глутарил-коэнзим А), НАДФН-генерирующей системы в избытке (включая НАДФ, глюкозо-6-фосфат и глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназу), в присутствии разных концентраций ингибиторов, кроме контрольных проб (контрольный метаболизм мевалоната). Перед основным этапом анализа количества образовавшегося продукта реакции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) были откалиброваны немеченый и меченный стандарты субстрата реакции - 3-метил-ГМГ-КоА и 3-гидрокси-3-метил-[3-14С]-глутарил-коэнзим А. Разделение продукта и субстрата 3-ГМГ-КоА-редуктазной реакции проводили методом ион-парной обращенно-фазной ВЭЖХ. Детекция образовавшегося продукта реакции - лактона мевалоновой кислоты - проводилась в диоксановом сцинтилляторе на β-счетчике. Полученные результаты подтвердили, что СВГ является ингибитором/проингибитором ГМГ-КоА-редуктазной реакции в синтезе ХС по бесконкурентному типу. Ингибирующий эффект симваглизина in vitro не уступает собственно СВ (соединения были уравнены с учетом молярной доли СВ в СВГ) в силе ингибирования. В диапазоне константы ингибирования 100-300 нМ симваглизин ингибировал образование мевалоната на 37,7-42,0% (пример 4).The dose-dependent inhibitory HMG-CoA reductase inhibitory effect of in vitro SVH was evaluated using the radioisotope method in the model of the microsomal fraction of rat liver homogenate and the chromatographic method of quantifying [C-14] -labeled mevalonate in a suspension of rat liver microsomes. The rat liver microsome fraction was isolated by differential ultracentrifugation. The metabolism of the HMG-CoA reductase reaction in the rat liver microsome fraction was carried out at 37 ° C in the presence of a labeled substrate (3-hydroxy-3-methyl- [3-14C] -glutaryl-coenzyme A), in excess of the NADPH-generating system (including NADP, glucose-6-phosphate and glucose-6-phosphate dehydrogenase), in the presence of different concentrations of inhibitors, except for control samples (control metabolism of mevalonate). Before the main stage of the analysis of the amount of the resulting reaction product by high performance liquid chromatography (HPLC), unlabeled and labeled standards of the reaction substrate — 3-methyl-HMG-CoA and 3-hydroxy-3-methyl- [3-14C] -glutaryl-coenzyme A, were calibrated The separation of the product and the substrate of the 3-HMG-CoA reductase reaction was carried out by ion-pair reversed-phase HPLC. Detection of the resulting reaction product, mevalonic acid lactone, was carried out in a dioxane scintillator on a β counter. The obtained results confirmed that SVG is an inhibitor / inhibitor of the HMG-CoA reductase reaction in the synthesis of cholesterol in a non-competitive manner. The inhibition effect of simvaglysin in vitro is not inferior to the CB itself (the compounds were equalized taking into account the molar fraction of CB in the CBH) in the inhibition force. In the range of the inhibition constant 100-300 nM, simvaglyzin inhibited the formation of mevalonate by 37.7-42.0% (Example 4).

Оценка эффективности по гипохолестеринемическому действию и безопасности симваглизина in vivo проводилась в экспериментальной модели гиперхолестеринемии (ГХС) у крыс. Модель ГХС создавалась в течение 4 недель кормлением крыс per os XC 3-5% от объема пищи, животным жиром 5% от объема пищи, 0,1% 6-N-пропил-2-тиоурацил, 0,3% таурохолаты, далее был 2-х недельный период активного вмешательства (прием гипохолестеринемических соединений). В эксперимент общей продолжительностью 6 недель вошли 25 самцов крыс Вистар массой 180-200 г, по 5 крыс в каждой из 5 групп (контрольная группа, группа приема СВ 40 мкг/на крысу/сутки, приема СВГ 80, 133 и 200 мкг/на крысу/сутки). Заборы крови у крыс через sinus jugulars по 1 мл проводились в точках «0, 4 и 6 недель». Биохимическими энзиматическими методами с использованием стандартных реактивов «Biocon» (Германия) проводилось измерение в динамике эксперимента липидного профиля крови у крыс (общий ХС, ЛВП-ХС и ТГ) и активности печеночных ферментов (АЛТ, ЛДГ, КФК). Все биохимические измерения проводились в 2-х параллелях.Evaluation of the effectiveness of the hypocholesterolemic effect and the safety of simvaglysin in vivo was carried out in an experimental model of hypercholesterolemia (GHS) in rats. The GCS model was created within 4 weeks by feeding rats per os XC 3-5% of the food volume, animal fat 5% of the food volume, 0.1% 6-N-propyl-2-thiouracil, 0.3% taurocholates, then 2-week period of active intervention (taking hypocholesterolemic compounds). The experiment with a total duration of 6 weeks included 25 male Wistar rats weighing 180-200 g, 5 rats in each of the 5 groups (control group, SV intake group 40 μg / per rat / day, SVG intake 80, 133 and 200 μg / per rat / day). Blood sampling in rats through sinus jugulars of 1 ml was carried out at points "0, 4 and 6 weeks." Biochemical enzymatic methods using standard Biocon reagents (Germany) measured the dynamics of the experiment in the dynamics of the blood lipid profile in rats (total cholesterol, HDL-cholesterol and TG) and liver enzyme activity (ALT, LDH, CPK). All biochemical measurements were carried out in 2 parallels.

Расчет суточной дозы ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы - симвастатина и симваглизина у крыс:Calculation of the daily dose of HMG-CoA reductase inhibitors - simvastatin and simvaglysin in rats:

Симвастатин: Обычная доза человека массой 60 кг - 10-20 мг/сутки или 160-320 мкг/кг массы тела. У крысы массой 200 г - доза 32-64 мкг/крысе в сутки. Установлена доза 40 мкг/крысе в сутки - эта доза сопоставима с суточной дозой у человека 200 мкг/кг массы тела или 12 мг/сутки.Simvastatin: The usual dose of a person weighing 60 kg is 10-20 mg / day or 160-320 mcg / kg of body weight. In a rat weighing 200 g, the dose is 32-64 mcg / rat per day. A dose of 40 μg / rat per day has been established - this dose is comparable to a daily dose in humans of 200 μg / kg body weight or 12 mg / day.

Симваглизин: доля СВ в СВГ (по Мол. весу) - 1/10-1/11 часть. Дозы в эксперименте:Simvaglysin: the proportion of CB in SVG (by mol. Weight) - 1 / 10-1 / 11 part. Doses in the experiment:

- концентрация по СВ меньше в 5 раз: СВГ 80 мкг/сутки (8 мкг/сутки СВ);- SV concentration is 5 times less: SVG 80 μg / day (8 μg / day SV);

- концентрация по СВ меньше в 3 раза: СВГ 133 мкг/сутки (13,3 мкг/сутки СВ);- SV concentration is 3 times less: SVG 133 μg / day (13.3 μg / day SV);

- концентрация по СВ меньше в 2 раза: СВГ 200 мкг/сутки (20 мкг/сутки СВ).- SV concentration is 2 times less: SVG 200 μg / day (20 μg / day SV).

Результаты измерения общего ХС крови у крыс в динамике эксперимента показали, что период создания модели ГХС охарактеризовался повышением общего ХС на 45% по сравнению с исходными данными (р<0,001). За период 2 недельного активного вмешательства в контрольной группе на фоне обычной диеты уровень общего ХС крови снизился на 24% в сравнении с показателями 4 недели (р<0,001). У крыс в группе СВ (40 мкг/на крысу/сутки) через 2 недели вмешательства уровень общего ХС снизился на 32% в сравнении с показателями 4 недели (р<0,001). У крыс в группах СВГ (80, 133 и 200 мкг/на крысу/сутки) через 2 недели периода вмешательства (при приеме доз, в 5, 3 и 2 раза меньших по молярной массе СВ в СВГ в сравнении с собственно СВ) уровень общего ХС снизился на 27%, 33% и 31% соответственно в сравнении с показателями 4 недели (р<0,001). Проведенное сравнение между опытными группами и контрольной (пример 5) показало, что средняя терапевтическая доза СВ 40 мкг/на крысу/сутки привела к снижению уровня общего ХС крови на 8% (р<0,01). Дозы СВГ 133 и 200 мкг/на крысу/сутки, т.е. в 2 и 3 раза меньшие по содержанию собственно СВ в СВГ, привели к снижению уровня общего ХС крови на 9% и 7% (р<0,01). Полученные по уровню общего ХС результаты (пример 5) свидетельствуют, что симваглизин после 2 недель приема в дозах, меньших в 2 и 3 раза по содержанию в нем СВ, вызывает снижение уровня общего ХС крови, сопоставимое с подобным снижением от приема собственно симвастатина (на 31-33%). Это указывает на хорошую гипохолестеринемическую эффективность СВГ и возможность снижения эффективной лекарственной дозы, имея в виду долю собственно симвастатина в симваглизине.The results of measuring total blood cholesterol in rats in the dynamics of the experiment showed that the period of creating the GCS model was characterized by an increase in total cholesterol by 45% compared with the initial data (p <0.001). Over a period of 2 weeks of active intervention in the control group, against the background of a normal diet, the level of total blood cholesterol decreased by 24% compared with 4 weeks (p <0.001). In rats in the SV group (40 μg / per rat / day), after 2 weeks of intervention, the level of total cholesterol decreased by 32% compared with 4 weeks (p <0.001). In rats in SVG groups (80, 133 and 200 μg / per rat / day) after 2 weeks of the intervention period (when taking doses that are 5, 3 and 2 times lower in molar mass of SV in SVG compared to the actual SV), the level of total Cholesterol decreased by 27%, 33% and 31%, respectively, compared with 4 weeks (p <0.001). The comparison between the experimental groups and the control (example 5) showed that the average therapeutic dose of SV of 40 μg / rat / day led to a decrease in the level of total blood cholesterol by 8% (p <0.01). Doses of SVG are 133 and 200 μg / per rat / day, i.e. 2 and 3 times lower in terms of the actual content of SV in the SVG, led to a decrease in the level of total blood cholesterol by 9% and 7% (p <0.01). The results obtained by the level of total cholesterol (example 5) indicate that simvaglysin after 2 weeks of administration in doses less than 2 and 3 times the content of CB causes a decrease in the level of total cholesterol, comparable to a similar decrease from taking simvastatin itself (by 31-33%). This indicates a good hypocholesterolemic efficacy of SVG and the possibility of reducing the effective drug dose, bearing in mind the proportion of simvastatin itself in simvaglysin.

Результаты измерения уровня ЛВП-ХС, ТГ, ACT и АЛТ в крови у крыс в динамике эксперимента не выявили значимых различий между группами и в сравнении с контрольной группой крыс.The results of measuring the level of HDL-C, TG, ACT, and ALT in the blood of rats in the dynamics of the experiment did not reveal significant differences between the groups and in comparison with the control group of rats.

Результаты измерения уровня активности фермента КФК крови у крыс в динамике эксперимента показали, что в период 2-х недельного активного вмешательства уровень КФК крови не изменился только в контрольной группе, а в основных экспериментальных группах крыс повысился (р<0,001). Однако у крыс, принимающих среднюю терапевтическую дозу СВ, уровень КФК повысился на 79%, в то время как в группах СВГ 80, 133 и 200 мкг/на крысу/сутки - только на 30-36% в сравнении с показателями на 4 неделе. Проведенное сравнение между группами вмешательства и контрольной показало, что средняя терапевтическая доза СВ 40 мкг/на крысу/сутки привела к повышению уровня активности КФК крови на 76% (р<0,001). Дозы СВГ 80, 133 и 200 мкг/на крысу/сутки, фактически в 2, 3 и 5 раз меньшие по содержанию собственно СВ в СВГ, привели к 2-3 раза менее выраженному повышению уровня КФК крови - всего на 27-33% (р<0,001), чем в группе собственно СВ, что указывает на большую безопасность симваглизина в сравнении с собственно симвастатином.The results of measuring the activity of the KFK enzyme blood in rats in the dynamics of the experiment showed that during the 2-week active intervention, the level of KFK blood did not change only in the control group, but increased in the main experimental groups of rats (p <0.001). However, in rats taking the average therapeutic dose of SV, the CPK level increased by 79%, while in the SVG groups of 80, 133, and 200 μg / per rat / day, it was only 30-36% compared with the values at 4 weeks. The comparison between the intervention and control groups showed that the average therapeutic dose of SV 40 μg / rat / day led to an increase in the level of blood CPK activity by 76% (p <0.001). Doses of SVG of 80, 133 and 200 μg / per rat / day, which are actually 2, 3 and 5 times lower in terms of the content of SV in the SVG, led to a 2-3 times less pronounced increase in the level of blood CPK - only 27-33% ( p <0.001) than in the SV group itself, which indicates greater safety of simvaglysin compared to simvastatin itself.

Таким образом, симваглизин в суточной дозе, в 2-3 раза меньшей (рассчитанной относительно доли симвастатина в симваглизине), чем у симвастатина, продемонстрировал свою эффективность по гипохолестеринемическому действию, сопоставимую с эффективностью симвастатина, и одновременно большую безопасность в связи с уменьшением побочных эффектов.Thus, simvaglizin in a daily dose, 2-3 times less (calculated relative to the share of simvastatin in simvaglizin) than simvastatin, showed its effectiveness on hypocholesterolemic action, comparable with the effectiveness of simvastatin, and at the same time greater safety due to the reduction of side effects.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1.Example 1

Получение комплекса симвастатина с 3-0-(2'-О-βН-20-β-олеан-12-ен-30-овой кислотой) (β-глицирризиновой кислотой) при соотношении 1:4.Obtaining a complex of simvastatin with 3-0- (2'-O-βH-20-β-olean-12-ene-30-oic acid) (β-glycyrrhizic acid) in a ratio of 1: 4.

3,48 г (4·10^-3 моля) 95%-ной β-глицирризиновой кислоты растворили в 30 мл 70% водного раствора этанола и добавили к раствору 0,41 г (1·10^-3 моля) симвастатина в 1 мл ацетона. Смесь кипятили в течение 2 ч, растворители упарили на ротационном испарителе, отвакуумировали осадок (3 часа, комнатная температура, остаточное давление 1 мм рт.ст.), получили 3,89 г (100% комплекса).3.48 g (4 · 10 ^-3 mol) of 95% β-glycyrrhizic acid was dissolved in 30 ml of a 70% aqueous ethanol solution and 0.41 g (1 · 10 ^-3 mol) of simvastatin in 1 ml of acetone was added to the solution . The mixture was boiled for 2 hours, the solvents were evaporated on a rotary evaporator, the precipitate was evacuated (3 hours, room temperature, residual pressure 1 mmHg), 3.89 g (100% of the complex) were obtained.

Элементный состав: Определено С - 62.81%, Н - 7.69%, O - 30.01%; Вычислено С - 62.48%, Н - 7.77%, O - 29.75%. С₁₉₃C₂₈₆O₆₉.Elemental composition: Determined C - 62.81%, H - 7.69%, O - 30.01%; Calculated C - 62.48%, H - 7.77%, O - 29.75%. C ₁₉₃ C ₂₈₆ O ₆₉ .

Пример 2.Example 2

Получение комплекса симвастатина с 3-0-(2'-О-βН-20-β-олеан-12-ен-30-овой кислотой) (β-глицирризиновой кислотой) при соотношении 1:1.Obtaining a complex of simvastatin with 3-0- (2'-O-βH-20-β-olean-12-ene-30-oic acid) (β-glycyrrhizic acid) at a ratio of 1: 1.

0,87 г (1·10^-3 моля) 95%-ной β-глицирризиновой кислоты растворили в 10 мл 70% водного раствора этанола и добавили к раствору 0,41 г (1·10^-3 моля) симвастатина в 1 мл ацетона. Смесь кипятили в течение 2 ч, растворители упарили на ротационном испарителе, отвакуумировали осадок (3 часа, комнатная температура, остаточное давление 1 мм рт.ст.), получили 1,28 г (100% комплекса).0.87 g (1 · 10 ^-3 mol) of 95% β-glycyrrhizic acid was dissolved in 10 ml of a 70% aqueous ethanol solution and 0.41 g (1 · 10 ^-3 mol) of simvastatin in 1 ml of acetone was added to the solution . The mixture was boiled for 2 hours, the solvents were evaporated on a rotary evaporator, the precipitate was evacuated (3 hours, room temperature, residual pressure 1 mmHg), and 1.28 g (100% of the complex) were obtained.

Элементный состав: Определено С - 65.02%, Н - 8.05%, O - 26.73%; Вычислено С - 64.82%, Н - 8.12%, O - 27.06%. С₆₇Н₁₀₀O₂₁.Elemental composition: Determined C - 65.02%, H - 8.05%, O - 26.73%; Calculated C - 64.82%, H - 8.12%, O - 27.06%. C ₆₇ H ₁₀₀ O ₂₁ .

Пример 3Example 3

Анализ кривых ингибирования графическим методом Диксона (в координатах «обратная скорость реакции» - «концентрация ингибитора» (1/V-[I])*(см. фиг.4).The analysis of inhibition curves by the graphical Dickson method (in the coordinates “reverse reaction rate” - “inhibitor concentration” (1 / V- [I]) * (see Fig. 4).

Графический анализ ингибирования ГМГ-КоА-редуктазы симваглизином (А - без исключения максимальных концентраций СВГ при концентрации субстрата 28 мкМ; Б - с исключением концентраций 300 и 600 нМ) свидетельствует о бесконкурентном типе ингибирования, особенно при исключении высоких концентраций СВГ при низких концентрациях субстрата. СВГ снижает K_m и V_max синтеза мевалоната, что свидетельствует о его ингибирующем эффекте в отношении ГМГ-КоА-редуктазной реакции, приводящем к ингибированию синтеза холестерина в микросомах печени крыс in vitro.A graphical analysis of the inhibition of HMG-CoA reductase by simvaglysin (A — without excluding maximum concentrations of SVH at a substrate concentration of 28 μM; B — with the exception of concentrations of 300 and 600 nM) indicates a non-competitive type of inhibition, especially when high concentrations of SVG are excluded at low substrate concentrations. SVG reduces K _m and V _max synthesis of mevalonate, which indicates its inhibitory effect on the HMG-CoA reductase reaction, leading to inhibition of cholesterol synthesis in rat liver microsomes in vitro.

Пример 4.Example 4

Динамика изменения уровня общего ХС крови (мг/дл) у крыс в эксперименте in vivo при приеме СВГ (стандартизованные показатели, М±m)The dynamics of changes in the level of total blood cholesterol (mg / dl) in rats in an in vivo experiment when taking SVG (standardized indicators, M ± m)

Точки забора кровиBlood sampling points КонтрольThe control СВ (40 мкг/ сутки)SV (40 mcg / day) СВГ (80 мкг/сутки)SVG (80 mcg / day) СВГ (133 мкг/сутки)SVG (133 mcg / day) СВГ (200 мкг/сутки)SVG (200 mcg / day) 0 недель0 weeks 97,4±4,197.4 ± 4.1 4 недели4 weeks 141,6±5,9 (+45%)141.6 ± 5.9 (+ 45%) 6 недель6 weeks 107,5±4,9*107.5 ± 4.9 * 96,5±4,4*96.5 ± 4.4 * 103,1±4,5*103.1 ± 4.5 * 98,1±4,7*98.1 ± 4.7 * 95,3±4,0*95.3 ± 4.0 * Абсолютная разницаAbsolute difference -24%-24% -32%-32% -27%-27% -31%-31% -33%-33% Разница с контролемDifference with control -8%^-8% ^ -3%-3% -7%^-7% ^ -9%^-9% ^ Примечание: * - сравнение с данными 4 недель при р<0,001; ^ - сравнение с данными контрольной группы при р<0,05.Note: * - comparison with the data of 4 weeks at p <0.001; ^ - comparison with the data of the control group at p <0.05.

Пример 5.Example 5

Динамика изменения уровня КФК крови (ЕД/л) у крыс в эксперименте in vivo при приеме СВГ (стандартизованные показатели, М±m)The dynamics of changes in the level of blood CPK (U / L) in rats in an in vivo experiment when taking SVG (standardized indicators, M ± m)

Точки забора кровиBlood sampling points КонтрольThe control СВ (40 мкг/ сутки)SV (40 mcg / day) СВГ (80 мкг/сутки)SVG (80 mcg / day) СВГ (133 мкг/сутки)SVG (133 mcg / day) СВГ (200 мкг/сутки)SVG (200 mcg / day) 0 недель0 weeks 432,7±23,9432.7 ± 23.9 4 недель4 weeks 373,1±21,6 (-14%)373.1 ± 21.6 (-14%) 6 недель6 weeks 384,1±15,7384.1 ± 15.7 667,6±26,0*667.6 ± 26.0 * 501,0±19,7*501.0 ± 19.7 * 484,6±21,0*484.6 ± 21.0 * 506,4±21,8*506.4 ± 21.8 * Абсолютная разницаAbsolute difference +3%+ 3% +79%+ 79% +34%+ 34% +30%+ 30% +36%+ 36% разница с контролемdifference with control +76%^+ 76% ^ +31%^#+31% ^ # +27%^#+27% ^ # +33%^#+33% ^ # примечание: * - сравнение с данными 4 недель при р<0,001; ^ - сравнение с данными контрольной группы при р<0,001; # - сравнение с данными группы СВ при р<0,001.note: * - comparison with data of 4 weeks at p <0.001; ^ - comparison with the data of the control group at p <0.001; # - comparison with the data of the CB group at p <0.001.

Список использованных источников:List of sources used:

1. Steinberg D. Atherogenesis in perspective: hypercholesterolemia and inflammation as partners in crime. // Nature Medicine, 2002, 8: 1211-1218.1. Steinberg D. Atherogenesis in perspective: hypercholesterolemia and inflammation as partners in crime. // Nature Medicine, 2002, 8: 1211-1218.

2. Osterud В. and Bjorklid E. Role monocytes in atherogenesis. // Physiol. Rev., 2003, 83: 1069-1113.2. Osterud B. and Bjorklid E. Role monocytes in atherogenesis. // Physiol. Rev. 2003, 83: 1069-1113.

3. Перова Н.В. Новые европейские рекомендации по профилактике сердечнососудистых заболеваний, обусловленных атеросклерозом. // Кардиология, 2004, 1: 76-82.3. Perova N.V. New European guidelines for the prevention of cardiovascular diseases caused by atherosclerosis. // Cardiology, 2004, 1: 76-82.

4. Комитет экспертов ВНОК. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. // Российские рекомендации, 2005, Москва: 36 с.4. Committee of experts of GFCF. Diagnosis and correction of lipid metabolism disorders in order to prevent and treat atherosclerosis. // Russian recommendations, 2005, Moscow: 36 p.

5. Кухарчук В.В. Атеросклероз. Актуальные вопросы профилактики и терапии. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика, 2003, 6: 80-85.5. Kukharchuk VV Atherosclerosis. Actual issues of prevention and therapy. // Cardiovascular therapy and prevention, 2003, 6: 80-85.

6. Fruchart J.C. PPARS as targets for antiatherosclerotic therapies. // Atherosclerosis, 2003, 6: 29-38.6. Fruchart J.C. PPARS as targets for antiatherosclerotic therapies. // Atherosclerosis, 2003, 6: 29-38.

7. Fruchart J.C. PPARS alpha agonists and atherosclerosis. // Atherosclerosis, 2005, 6: 125-134.7. Fruchart J.C. PPARS alpha agonists and atherosclerosis. // Atherosclerosis, 2005, 6: 125-134.

8. Машковский М.Д. Лекарственные средства, Москва, 2001, т.1, 450.8. Mashkovsky M.D. Medicines, Moscow, 2001, v. 1, 450.

9. Kleinsek D.A., Ranganathan S., Porter J.W. Purification of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase from rat liver. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, 74: 1431-1435.9. Kleinsek D.A., Ranganathan S., Porter J.W. Purification of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase from rat liver. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1977 1977: 1431-1435.

10. Kleinsek D.A., Jabalquinto A.M., Porter J.W. In vitro and in vivo mechanisms regulating rat liver 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase activity. // J. Biological Chemistry, 1980, 255: 3918-3923.10. Kleinsek D.A., Jabalquinto A.M., Porter J.W. In vitro and in vivo mechanisms regulating rat liver 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase activity. // J. Biological Chemistry, 1980, 255: 3918-3923.

11. Swift L.L., Soule P.D., LeQuire V.S. Plasma lipoproteins in hypercholesterolemic rats. // J. Lipid Research, 1982, 23: 962-971.11. Swift L.L., Soule P.D., LeQuire V.S. Plasma lipoproteins in hypercholesterolemic rats. // J. Lipid Research, 1982, 23: 962-971.

Claims

A drug with a lipid-lowering effect, including the molecular complex of simvastatin with β-glycyrrhizic acid with a molar ratio of simvastatin: β-glycyrrhizic acid 1: (1-4).