RU2302868C1 - Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения - Google Patents
Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2302868C1 RU2302868C1 RU2006122059/15A RU2006122059A RU2302868C1 RU 2302868 C1 RU2302868 C1 RU 2302868C1 RU 2006122059/15 A RU2006122059/15 A RU 2006122059/15A RU 2006122059 A RU2006122059 A RU 2006122059A RU 2302868 C1 RU2302868 C1 RU 2302868C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- temperature
- solution
- months
- concentration
- kgf
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к выделению биологически активного вещества из почек животных и получению лекарственной формы для парентерального введения, которая может использоваться в медицине как средство, нормализующее функции почек. Средство выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 70 до 456 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из почек телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка. Способ получения средства заключается в том, что почки телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3% раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20°±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7°÷16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2 раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7°÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см2, разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2. Изобретение обеспечивает оптимальную технологию выделения пептидного комплекса из почек телят не старше 12-месячного возраста или свиней с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 70 до 456 Да и получение водного раствора экстракта с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, позволяющую не только очистить получаемый продукт от примесей, но и увеличить его выход; а также то, что выделенное вещество отличается от известных веществ, полученных ранее из животного сырья, по молекулярной массе входящих в него пептидных компонентов, в его не токсичности и апирогенности за счет полной очистки от примесей 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.
Description
Группа изобретений относится к лекарственному средству и способу его получения из органов животных, в частности к выделению биологически активного вещества из почек и получению лекарственной формы для парентерального введения, которая может использоваться в медицине как средство, нормализующее функции почек.
Известны способы получения биологически активных веществ и лекарственных средств из животного сырья (а.с. SU №1218521, 1994; а.с. SU №1227198, 1986; патент РФ 1298879, 1993; патент РФ №1448443, 1994; патент РФ №2075944, 1997; патент РФ №2104702, 1998; патент РФ №2161501, 2001; патент РФ №2163129, 2000; патент US 4341765, патент FR 2583982, 1987).
Известны способы получения комплексных пептидных препаратов, обладающих тканеспецифическим действием (патент РФ №944191, 1994; патент РФ №1122606, 1993; патент РФ №1417244, 1993; патент РФ №2104702, 1998).
Известен способ получения указанных препаратов (Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы. - СПб.: Наука, 1996, 74 с.), включающий получение биологически активного вещества из органов и тканей животных путем экстракции 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка и обработкой надосадочной жидкости ацетоном, являющийся наиболее близким аналогом-прототипом для предлагаемого способа получения средства, нормализующего функции почек.
К недостаткам указанного способа следует отнести извлечение в процессе экстракции из ткани большого количества (более 70%) веществ непептидной природы - балластных компонентов, которые, являясь примесями, не определяют биологическую активность выделенного активного вещества, а также его низкий выход.
Настоящим изобретением поставлена и решена задача разработки способа получения средства, нормализующего функции почек, в виде лекарственной формы для парентерального введения, выделенного из почек телят не старше 12-месячного возраста или свиней, техническим результатом которого является оптимальная технология выделения пептидного комплекса с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 70 до 456 Да и получение водного раствора экстракта с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, позволяющая не только очистить получаемый продукт от примесей, но и увеличить его выход.
Экспериментальная проверка показала, что предлагаемый способ обеспечивает фармацевтическую стабильность, максимальную биологическую ценность и терапевтическую эффективность средства, нормализующего функции почек, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения, что подтверждено результатами экспериментов, приводимыми в примерах, иллюстрирующих изобретение.
Другим аспектом изобретения является средство, нормализующее функции почек, в виде лекарственной формы для парентерального введения, представляющее собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 70 до 456 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, технический результат которого заключается в том, что выделенное вещество отличается от известных веществ, полученных ранее из животного сырья, по молекулярной массе (от 500 до 1500 Да) входящих в него пептидных компонентов (патенты РФ №№1298879, 2104702, 2163129), а также по его нетоксичности и апирогенности за счет полной очистки от примесей.
В ходе исследований в экспериментах на животных выявлено, что полученный водный раствор средства с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл является терапевтически эффективной дозой, что позволяет считать показанным использование средства при различных видах патологии почек. Это подтверждается приводимыми ниже примерами.
В процессе проведения исследований была установлена важность следующих стадий способа получения средства, нормализующего функции почек, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения (далее - препарат):
- повторное осаждение образовавшегося гомогенизированного осадка двукратными объемами ацетона не менее двух раз и последующее промывание на нутч-фильтре двукратными объемами ацетона до получения осадка светло-серого цвета, что свидетельствует о полной очистке осадка от примесей, таких как липидные, белковые, фосфолипидные и другие;
- получение водного раствора экстракта в концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл; его центрифугирование, фильтрование, с последующей ультрафильтрационной очисткой на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да и добавление в ультрафильтрат гликокола до конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6;
- стерилизующая фильтрация, ампулирование и автоклавирование в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2, что обеспечивает стабильность препарата при сохранении терапевтической эффективности.
Режим и время автоклавирования были установлены экспериментально. Указанный технический результат достигается тем, что средство, нормализующее функции почек, выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 70 до 456 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из почек телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.
Указанный технический результат достигается также тем, что предлагаемый способ получения средства, нормализующего функции почек, характеризуется тем, что почки телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3% раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20°±5°C, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7°÷16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2 раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см2, разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2.
Сущность изобретения поясняется чертежом и таблицами.
На чертеже показано влияние препарата на развитие эксплантатов почки.
В Таблице 1 показано влияние препарата на морфологические и биохимические показатели периферической крови морских свинок при изучении токсичности.
В Таблице 2 показано влияние препарата на химический состав мочи больных подагрической нефропатией.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами: пример 1 - способ получения препарата; пример 2, подтверждающий биологическую активность препарата; пример 3 - изучение токсичности препарата; пример 4, подтверждающий терапевтическую эффективность препарата, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения.
Пример 1. Способ получения препарата
В качестве сырья используются почки телят (не старше 12-месячного возраста) или свиней, которые замораживают при температуре не менее минус 40°С и выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев.
В реактор для экстракции перекачивают 450 л 3% раствора уксусной кислоты и охлаждают до температуры (20±5)°С, затем в реактор при постоянном перемешивании загружают 90 кг измельченного до получения гомогенной массы сырья. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси добавляют в нее 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры плюс 7÷16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч.
Экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием при (5000±500) об/мин в течение 1 ч. К экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5. Выдерживают при температуре плюс 3÷5°С в течение 4 ч. Образовавшийся осадок гомогенизируют и повторно осаждают ацетоном не менее двух раз. Затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета. Промытый осадок протирают через металлическое сито, выкладывают тонким слоем в эмалированные кюветы, закрывают двойным слоем ткани хлопчатобумажной и высушивают при периодическом помешивании в вытяжном шкафу до полного удаления запаха ацетона.
Выход активного вещества (порошка биологически активного пептидного комплекса, выделенного из почек) составляет 50 г на 1 кг исходного сырья.
Полученный порошок растворяют в дистиллированной воде при постоянном перемешивании при комнатной температуре в течение 40 мин до концентрации пептидов 2,5÷2,9 мг/мл. Полученный раствор центрифугируют при (3000±200) об/мин в течение (20±5)мин. Центрифугат фильтруют через фильтр типа АР-15 или аналогичный.
Фильтрат подвергают ультрафильтрационной очистке на установке для ультрафильтрации при противодавлении не более 1,0 кгс/см2, через материалы с задерживающей способностью 15000 Да.
В ультрафильтрат добавляют расчетную навеску гликокола до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл, перемешивают до полного растворения гликокола при сохранении рН 5,6÷6,6.
Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, которую проводят под давлением, не превышающим 2,0, кгс/см2.
Полученный раствор разливают в ампулы по 2,0 мл и автоклавируют, причем ампулы с препаратом подвергают стерилизации в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении не более 1,1 кгс/см2.
Препарат представляет собой бесцветный прозрачный раствор и содержит пептидный комплекс с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл.
Тестирование на отсутствие высокомолекулярных белковых компонентов осуществляют путем добавления к содержимому 1 ампулы препарата 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Прозрачность раствора свидетельствует об отсутствии высокомолекулярных белковых компонентов.
Для определения в препарате пептидных связей к его раствору добавляют биуретовый реактив. Окрашивание раствора в фиолетовый цвет свидетельствует об имеющихся в препарате пептидных связях.
С целью определения в препарате полипептидов и их фракций используют методы ультрафиолетовой спектрофотометрии, гель-хроматографии, масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле.
Ультрафиолетовый спектр раствора препарата снимают в области длин волн от 250 до 350 нм: максимум поглощения отмечается при длине волны 270±5 нм.
Молекулярную массу полипептидов, входящих в препарат, определяют следующими методами:
методом гель-хроматографии на сефадексах G-25 и G-50 («Pharmacia», Швеция). Для калибровки колонки 1,6×60 см используют Peptide Molecuar Weight Kit MS III («Serva», Германия);
методом масс-спектрометрии. Спектры получают на времяпролетном масс-спектрометре Voyager DE Biospectrometry с лазерной десорбцией и ионизацией с помощью матрицы (MALDI-TOF) при относительной интенсивности азотного лазера 2300-2400, ускоряющем напряжении 25000 В, времени задержки 90 нс и давлении в вакуумной камере 2,6×106 Торр;
методом электрофореза в 15%-ном полиакриламидном геле в сравнении со стандартным набором маркерных белков.
Перечисленными выше методами установлено, что в состав препарата входят полипептиды с молекулярной массой 70 до 456 Да.
С помощью обращенно-фазовой высоко-эффективной жидкостной хроматографии в градиенте ацетонитрила (сорбент «Lichrosorb C18», колонка 2×62 мм), установлено, что в состав препарата входят преимущественно низкомолекулярные фракции - от 70 до 90%, а высокомолекулярные компоненты в препарате отсутствуют.
Пирогенность препарата определяют на кроликах общепринятым методом (ГФ XI, вып.2, с.183) при тест-дозе препарата 0,25 мг на 1 кг массы животного в 1,0 мл изотонического 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций. Показано, что препарат является апирогенным.
Таким образом, вышеизложенным способом получен препарат - лекарственная форма для парентерального введения, представляющая собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 70 до 456 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл.
Пример 2. Влияние препарата на развитие эксплантатов почек
Эксперименты проведены на 45 фрагментах почек крыс линии «Wistar» с массой тела 150÷200 г. Питательная среда для культивирования эксплантатов состояла из 35% раствора Игла, 25% фетальной сыворотки теленка, 35% раствора Хенкса, 5% куриного эмбрионального экстракта, в среду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед./мл), пенициллин (100 ед./мл), глютамин (2 мМ). Фрагменты почек помещали в эту среду и культивировали на коллагеновой подложке в чашках Петри в термостате при температуре 36,7°С в течение 2 суток. В экспериментальную среду добавляли препарат в концентрациях 2, 10, 20, 50, 100 нг/мл. Критерием биологической активности служил индекс площади (ИП) - соотношение площади всего эксплантата вместе с зоной роста к исходящей площади фрагмента почек. Значения ИП выражали в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%.
На чертеже показано влияние препарата на развитие эксплантатов почек.
Установлено, что через 1 сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов на коллагеновой подложке и начиналось выселение пролиферирующих и мигрирующих клеток по периферии эксплантата. На 3-и сутки культивирования при концентрации препарата 20 нг/мл наблюдалось достоверное повышение ИП эксплантатов на 31% по сравнению с контрольными значениями ИП. При исследовании эксплантатов почек на более длительных сроках культивирования (7 дней) были выявлено аналогичное стимулирующее действие препарата в той же концентрации.
Таким образом, в отношении ткани почек препарат оказывал тканеспецифическое действие, проявляющееся в стимуляции роста эксплантатов.
Пример 3. Изучение токсичности препарата
Общетоксическое действие препарата исследовали в соответствии с требованиями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000): острой токсичности при однократном введении препарата, а также подострой и хронической токсичности при длительном введении препарата.
Исследование по изучению острой токсичности проведено на 78 белых беспородных мышах-самцах с массой тела 18-21 г. Животные были рандомизированно разделены на 6 равных групп. Препарат вводили животным однократно внутримышечно в дозах 35 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг/кг, 150 мг/кг, 200 м г/кг в 0,25 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9% раствор NaCl.
Исследования по изучению подострой токсичности проведено на 65 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 150÷180 г. Ежедневно однократно животным подопытных групп вводили препарат внутримышечно в течение 90 дней в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы вводили в том же объеме стерильный 0,9% раствор NaCl. До введения препарата, на 30, 60 и 90 сутки после начала введения препарата у животных исследовали морфологический состав и свойства периферической крови. При завершении эксперимента исследовали биохимические и коагулологические показатели крови.
Исследования по изучению хронической токсичности проводили в течение 6 месяцев исходя из длительности рекомендуемого клинического назначения препарата на 84 морских свинках-самцах массой 250÷280 г. Животные подопытных групп получали ежедневно однократно внутримышечно препарат в течение 6 мес в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. В контрольной группе животным вводили по аналогичной схеме стерильный 0,9% раствор NaCl в том же объеме. У животных в периферической крови общепринятыми методами определяли: количество эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), резистентность эритроцитов. Наряду с этим определяли содержание в сыворотке крови общего белка по методу Лоури, калия и натрия методом плазменной спектрофотометрии. После завершения эксперимента проводили патоморфологическое исследование головного и спинного мозга, спинномозговых ганглиев, щитовидной железы, паращитовидных желез, надпочечников, семенников, гипофиза, сердца, легких, аорты, печени, почки, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга.
При изучении острой токсичности установлено, что однократное введение исследуемого препарата животным в дозе, превышающей терапевтическую, рекомендованную для клинического применения, более чем в 5000 раз не вызывает токсических реакций, что свидетельствует о большой терапевтической широте препарата.
Изучение подострой и хронической токсичности препарата свидетельствует об отсутствии побочных эффектов при длительном применении препарата в дозах, превышающих терапевтическую в 300÷3000 раз. При исследовании влияния препарата на морфологический состав и биохимические показатели периферической крови морских свинок через 3 и 6 месяцев после начала введения препарата достоверного изменения показателей не выявлено (Таблица 1).
При оценке общего состояния животных, морфологических и биохимических показателей периферической крови, морфологического состояния внутренних органов, состояния сердечно-сосудистой и дыхательной систем, функции печени и почек патологические изменения в организме не обнаружены.
Отсутствие общетоксического действия позволяет рекомендовать препарат, нормализующий функции почек, для проведения клинических испытаний.
Пример 4. Эффективность применения препарата у больных подагрической нефропатией
В исследовании принимали участие 25 больных подагрической нефропатией в возрасте 43÷57 лет. Больные предъявляли жалобы на периодически возникающие боли в области суставов, плохое самочувствие, слабость, тошноту, бессонницу. Все больные ранее получали симптоматическую и патогенетическую терапию по поводу данного заболевания.
Пациентов методом рандомизации разделили на 2 группы. 15 больных, вошедших в основную группу, получали препарат в дозе 5 мг в 2 мл физиологического раствора внутримышечно однократно ежедневно течение 10 дней.
Контрольная группа включала 10 пациентов, получавших общепринятое лечение.
В динамике оценивали жалобы больных, проводили общеклиническое исследование крови и мочи, биохимическое изучение крови, ультразвуковое исследование почек.
Пациенты основной группы, получавшие лечение с применением препарата, в 78% случаев отмечали значительное улучшение самочувствия, нормализацию сна, уменьшение частоты и интенсивности суставных болей. Сглаживание клинических симптомов сопровождалось улучшением лабораторных показателей. На фоне приема препарата наблюдалась активация метаболизма почечных тканей, сопровождающаяся усилением секреторной функции почек (Таблица 2).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о лечебной эффективности препарата и целесообразности его применения в комплексном лечении больных подагрической нефропатией в терапевтически эффективной дозировке 5 мг (2,5 мг/мл) внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней.
| Таблица 1 | ||||
| Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения | ||||
| Показатель | Введение препарата (10 мг/кг) | |||
| 3 месяца | 6 месяцев | |||
| Контроль (n=21) | Препарат (n=21) | Контроль (n=21) | Препарат (n=21) | |
| Эритроциты, ×1012/л | 5,1±0,2 | 5,2±0,1 | 5,1±0,5 | 5,3±0,2 |
| Гемоглобин, г/л | 14,3±1,7 | 14,1±1,6 | 14,2±1,6 | 14,4±1,8 |
| Ретикулоциты, % | 1,3±0,07 | 1,2±0,03 | 1,1±0,06 | 1,3±0,08 |
| Тромбоциты, ×109/л | 142,1±3,7 | 143,6±4,6 | 145,5±5,1 | 142,4±3,8 |
| Лейкоциты, ×109/л | 9,9±0,1 | 10,1±0,5 | 10,5±0,4 | 9,9±0,7 |
| Нейтрофилы палочкоядерные, % | 0,36±0,06 | 0,35±0,05 | 0,37±0,03 | 0,36±0,07 |
| Нейтрофилы сегментоядерные, % | 42,3±2,1 | 44,2±3,1 | 41,3±2,3 | 45,2±2,1 |
| Эозинофилы, % | 0,76±0,02 | 0,73±0,01 | 0,74±0,03 | 0,75±0,02 |
| Базофилы, % | 0,58±0,03 | 0,61±0,04 | 0,60±0,05 | 0,65±0,03 |
| Моноциты, % | 2,5±0,01 | 2,4±0,01 | 2,4±0,03 | 2,3±0,07 |
| Лимфоциты, % | 48,5±2,7 | 45,6±2,2 | 46,7±2,8 | 51,3±2,7 |
| СОЭ, мм/ч | 1,86±0,04 | 1,79±0,06 | 1,88±0,08 | 1,75±0,03 |
| Резистентность эритроцитов, % NaCl | ||||
| -максимальная | 0,45±0,03 | 0,45±0,07 | 0,48±0,04 | 0,44±0,02 |
| -минимальная | 0,33±0,06 | 0,30±0,04 | 0,28±0,04 | 0,31±0,03 |
| Общий белок в сыворотке крови, г/л | 74,2±1,2 | 71,9±1,8 | 75,6±1,6 | 74,6±1,7 |
| Натрий в сыворотке крови, ммоль/л | 157,2±7,9 | 155,2±7,3 | 156,1±6,5 | 154,8±7,5 |
| Калий в сыворотке крови, ммоль/л | 5,5±2,8 | 5,3±2,7 | 5,4±2,6 | 5,5±2,6 |
| Таблица 2 | |||
| Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения | |||
| Показатель | До применения | После лечения с применением общепринятых средств | После лечения с применением препарата |
| РН | Слабокислая | Нейтральная | Нейтральная |
| Мочевая кислота, ммоль | 1,35±0,02 | 2,88±0,05* | 4,34±0,01*# |
| Пуриновые основания: | |||
| - гипоксантин, мг/сут | 9,4±0,3 | 9,7±0,2 | 10,0±0,4 |
| - ксантин, мг/сут | 5,4±0,5 | 5,7±0,3 | 5,9±0,5 |
| * - Р<0,05 по сравнению с показателем до лечения; | |||
| # - Р<0,05 по сравнению с показателем после лечения с применением общепринятых средств. | |||
Claims (2)
1. Средство, нормализующее функции почек, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 70 до 456 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из почек телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.
2. Способ получения средства, нормализующего функции почек, характеризующийся тем, что почки телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее -40°С, выдерживают при температуре -20-22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3%-ный раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1%-ный раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7÷16°С, затем перемешивают по 1 ч через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее двух раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см2, разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006122059/15A RU2302868C1 (ru) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения |
| EA200700621A EA010723B1 (ru) | 2006-06-22 | 2007-04-11 | Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006122059/15A RU2302868C1 (ru) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2302868C1 true RU2302868C1 (ru) | 2007-07-20 |
Family
ID=38431013
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006122059/15A RU2302868C1 (ru) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA010723B1 (ru) |
| RU (1) | RU2302868C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2778505C1 (ru) * | 2021-07-07 | 2022-08-22 | Общество с ограниченной ответственностью "ТЕРРАНОВА КАПИТАЛ" | Пептид, обладающий нефропротекторным действием, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002308788A (ja) * | 2001-03-28 | 2002-10-23 | Kenzen Kyu | 腎臓炎および腎臓衰弱の治療剤 |
| RU2220732C2 (ru) * | 2001-11-01 | 2004-01-10 | Государственное унитарное предприятие "Иммунопрепарат" | Средство, нормализующее функцию почек, и способ его получения |
-
2006
- 2006-06-22 RU RU2006122059/15A patent/RU2302868C1/ru active
-
2007
- 2007-04-11 EA EA200700621A patent/EA010723B1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МОРОЗОВ В.Г. и др. Пептидные биорегуляторы. - СПб.: Наука, 1996, c.74. МОРОЗОВ В.Г. и др. Цитамины, биорегуляторы клеточного метаболизма. - СПб.: 1999, с.20. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2778505C1 (ru) * | 2021-07-07 | 2022-08-22 | Общество с ограниченной ответственностью "ТЕРРАНОВА КАПИТАЛ" | Пептид, обладающий нефропротекторным действием, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA010723B1 (ru) | 2008-10-30 |
| EA200700621A1 (ru) | 2007-12-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4342828A (en) | Method for producing substance capable of stimulating differentiation and proliferation of human granulopoietic stem cells | |
| JP2644767B2 (ja) | 後生的なグリコシル化最終産物を除去する為の方法及び薬剤 | |
| CN104327176B (zh) | 一种高纯度眼镜蛇神经毒素的提取方法及含有该毒素的药物组合物 | |
| EP2589389B1 (en) | Method for producing a biologically active complex. biologically active protein/polypeptide complex | |
| RU2302874C1 (ru) | Средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин, и способ его получения | |
| RU2301071C1 (ru) | Гепатопротекторное средство и способ его получения | |
| RU2302868C1 (ru) | Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения | |
| CN101081250B (zh) | 一种改善贫血的何首乌提取物药剂及其制备方法和应用 | |
| RU2303454C1 (ru) | Средство, нормализующее репродуктивную функцию у женщин, и способ его получения | |
| RU2302875C1 (ru) | Средство, нормализующее функции щитовидной железы, и способ его получения | |
| RU2302867C1 (ru) | Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения | |
| RU2301072C1 (ru) | Средство, нормализующее функции кровеносных сосудов, и способ его получения | |
| RU2302872C1 (ru) | Средство, нормализующее функции хрящевой ткани, и способ его получения | |
| SU624562A3 (ru) | Способ получени вещества, обладающего гормональным действием | |
| RU2152219C1 (ru) | Пептиды, обладающие иммуностимулирующей активностью, способ их получения, лекарственный препарат на их основе спленопид и его применение | |
| JP2023538109A (ja) | 骨髄由来間葉系幹細胞からの微小胞を使用する処置の組成物及び方法 | |
| CN1085803A (zh) | 促肝细胞生长素生产方法 | |
| EA010739B1 (ru) | Средство, нормализующее функции головного мозга, и способ его получения | |
| RU2405560C1 (ru) | Средство для защиты клеток мозга | |
| RU2799637C1 (ru) | Способ получения биологически активного пептидно-аминокислотного препарата на основе плазмы крови человека | |
| RU2302870C1 (ru) | Средство, обладающее геропротекторной активностью, и способ его получения | |
| RU2801151C1 (ru) | Способ получения биологически активного белково-полипептидного гидролизата из тканей мозга | |
| RU2033796C1 (ru) | Пептидсодержащая фракция из селезенки млекопитающих, обладающая иммуностимулирующей активностью и способ ее получения | |
| CN1042493C (zh) | 人胎胸腺素的制备方法 | |
| RU2582965C9 (ru) | Фармацевтическая композиция для лечения эндометриоза и способ ее получения |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20140403 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20190913 |