RU2292045C2 - Способ оценки степени чувствительности мембран эритроцитов и лимфоцитов к инсулину - Google Patents
Способ оценки степени чувствительности мембран эритроцитов и лимфоцитов к инсулину Download PDFInfo
- Publication number
- RU2292045C2 RU2292045C2 RU2005107066/15A RU2005107066A RU2292045C2 RU 2292045 C2 RU2292045 C2 RU 2292045C2 RU 2005107066/15 A RU2005107066/15 A RU 2005107066/15A RU 2005107066 A RU2005107066 A RU 2005107066A RU 2292045 C2 RU2292045 C2 RU 2292045C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sensitivity
- insulin
- units
- suspension
- samples
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биофизическим методам исследования крови. Сущность способа: степень чувствительности мембран клеток крови к инсулину определяют путем приготовления, по крайней мере, трех проб суспензии клеток по 50 мкл с равномерно возрастающей дозой инсулина, имеющего концентрацию 1×10-5 М, при этом суспензия лимфоцитов должна содержать 1×106 кл/мл, а суспензия эритроцитов - иметь оптическую плотность 0,7 ед. в 0,5 см кювете при длине волны поглощения 650 нм. В 1-ую пробу добавляют 1 мкл свежеприготовленного раствора инсулина, во 2-ую - 5 мкл, в 3-ю - 10 мкл, и после определения величины флуоресценции каждой пробы рассчитывают среднюю арифметическую величину флуоресценции Fcp. Чувствительность мембран оценивают по флуориметрической шкале, при этом Fcp менее 30 ед. фл. свидетельствует о пониженной степени чувствительности, Fcp от 30 до 60 ед. фл. свидетельствует о средней степени чувствительности, Fcp более 60 ед. фл. - о повышенной степени чувствительности. Использование способа позволяет повысить точность и информативность оценки степени чувствительности мембран эритроцитов и лимфоцитов к инсулину. 1 табл.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к биофизическим методам исследования крови. Может быть использовано для характеристики инсулинзависимой реакции биомембран при гормональных нарушениях.
Известен способ количественной оценки чувствительности эритроцитарных мембран к инсулину [1]. Способ представляет собой оценку чувствительности эритроцитарных мембран к инсулину по разности констант связывания флуоресцирующего индикатора с эритроцитарными мембранами при спектрофлуориметрическом исследовании опытной и контрольной проб эритроцитов в присутствии инсулина.
Известный способ является недостаточно точным, т.к. позволяет оценить чувствительность эритроцитарных мембран на одну дозу инсулина, которая может оказаться недостаточной для проявления реакции. Кроме того, оценивается чувствительность одного типа мембран - эритроцитарных. Между тем, при ряде состояний, например при патологии иммунной системы, страдают иммунокомпетентные клетки - лимфоциты. Возможность оценки чувствительности только мембран эритроцитов способствует снижению возможностей известного способа.
Задача изобретения - создание информативного способа оценки степени чувствительности мембран эритроцитов и лимфоцитов к инсулину.
Задача решается тем, что проводят спектрофлуориметрическое исследование инкубированных мембран эритроцитов и лимфоцитов в присутствии инсулина и флуоресцирующего зонда. Для этого готовят, по крайней мере, три пробы суспензии клеток по 50 мкл с равномерно возрастающей дозой инсулина, имеющего концентрацию 1×10-5 М. При этом суспензия лимфоцитов должна содержать 1×106 кл/мл, а суспензия эритроцитов - иметь оптическую плотность 0,7 ед. в 0,5 см кювете при длине волны поглощения 650 нм, причем в 1-ую пробу добавляют 1 мкл свежеприготовленного раствора инсулина, во 2-ую - 5 мкл, в 3-ю - 10 мкл. После определения величины флуоресценции каждой пробы рассчитывают среднюю арифметическую величину флуоресценции Fcp. Результаты выражают в единицах флуоресценции (ед. фл.). Степень чувствительности мембран оценивают по флуориметрической шкале: Fcp менее 30 ед. фл. свидетельствует о пониженной степени чувствительности; Fcp от 30 до 60 ед. фл. - о средней степени чувствительности; Fcp более 60 ед. фл. - о повышенной степени чувствительности.
Изменение флуоресценции в мембранах эритроцитов или лимфоцитов крови в результате реакции связывания различных доз инсулина свидетельствует о нарушении действия периферического эффекторного звена инсулина на уровне биомембран клеток крови и является количественным выражением степени чувствительности мембран этих клеток к инсулину.
Способ осуществляют следующим образом. Лимфоциты или эритроцигы выделяют из цельной гепаринизированной венозной крови на градиенте фиколл-верографин. Суспензию лимфоцитов разводят до концентрации 1×106 кл/мл, а суспензию эритроцитов - до оптической плотности 0,7 ед. в 0,5 см кювете при длине волны поглощения 650 нм. Готовят раствор инсулина с концентрацией 1×10-5 М. Готовят, например, 3 пробы суспензии эритроцитов или лимфоцитов, помещая по 50 мкл в каждую пробирку. Добавляют 1 мкл свежеприготовленного раствора инсулина в первую пробу, 5 мкл - во 2-ую, 10 мкл - в 3-ю. Инкубируют все 3 пробы при комнатной температуре в течение достаточного для взаимодействия инсулина и клеток времени, например в течение часа. К каждой пробе добавляют флуоресцентный краситель, например 5 мкл анилино-нафталин-8-сульфоната натрия (АНС) при концентрации раствора 40 мкМ в этаноле. Через одну минуту, т.е. время, достаточное для связывания АНС с биомембраной, в каждой пробе регистрируют флуоресценцию на спектрофлуориметре при длине волны 480 нм. Определяют среднюю арифметическую величину флуоресценции Fcp.. Степень чувствительности мембран оценивают по флуориметрической шкале.
| Fcp, (ед. фл.) | Степень чувствительности мембран |
| менее 30 | пониженная |
| 30-60 | средняя |
| более 60 | повышенная |
По результатам выявленной степени чувствительности мембран можно планировать дальнейшие диагностические и лечебные мероприятия.
Способ можно продемонстрировать на следующих примерах.
Пример 1. Больной А.
Проведена оценка степени чувствительности мембран эритроцитов к инсулину.
Результаты измерения флуоресценции: 1 проба - 43,3 ед. фл., 2 проба - 56,4 ед. фл., 3 проба - 60,6 ед. фл.
Fcp равна 53,43 ед. фл. Это соответствует средней степени чувствительности мембран к воздействию инсулина.
Пример 2. Больной Б.
Проведена оценка степени чувствительности мембран эритроцитов к инсулину. Результаты измерения флуоресценции: 1 проба - 13,3 ед. фл., 2 проба - 24,6 ед. фл., 3 проба - 48,6 ед. фл.
Fcp равна 28,83 ед. Это соответствует пониженной степени чувствительности мембран к воздействию инсулина.
Пример 3. Больной В.
Проведена оценка степени чувствительности мембран лимфоцитов к инсулину.
Результаты измерения флуоресценции: 1 проба - 13,2 ед. фл.; 2 проба - 16,2 ед. фл.; 3 проба - 19,0 ед. фл.
Fcp равна 16,1 ед. Это соответствует низкому уровню чувствительности клеточных мембран к воздействию инсулина.
Пример 4. Больной Г.
Проведена оценка степени чувствительности мембран лимфоцитов к инсулину.
Результаты измерения флуоресценции: 1 проба - 10,8 ед. фл., 2 проба - 25,6 ед. фл., 3 проба - 53,7 ед. фл.
Fcp равна 30,03 ед. фл. Это соответствует среднему уровню чувствительности клеточных мембран к воздействию инсулина.
Пример 5. Больной Д.
Проведена оценка степени чувствительности мембран лимфоцитов к инсулину.
Результаты измерения флуоресценции: 1 проба - 50,2 ед. фл., 2 проба - 65,1 ед. фл., 3 проба - 76,0 ед. фл.
Fcp равна 63,7 ед. фл. Это соответствует повышенному уровню чувствительности клеточных мембран к воздействию инсулина.
Применение способа способствует повышению информативности и точности оценки чувствительности клеточных мембран к инсулину.
Источники информации
1. Терещенко В.П., Манчук В.Т. Способ количественной оценки чувствительности эритроцитарных мембран к инсулину. RU 94024809 А1, заявлено 29.06.1994; опубл. 27.09.1996.
Claims (1)
- Способ оценки степени чувствительности мембран клеток крови к инсулину, включающий спектрофлуориметрическое исследование инкубированных мембран клеток в присутствии инсулина и флуоресцирующего зонда, отличающийся тем, что готовят, по крайней мере, три пробы суспензии клеток по 50 мкл с равномерно возрастающей дозой инсулина, имеющего концентрацию 1·10-5 М, при этом суспензия лимфоцитов должна содержать 1·106 кл/мл, а суспензия эритроцитов иметь оптическую плотность 0,7 ед. в 0,5 см кювете при длине волны поглощения 650 нм, причем в 1-ю пробу добавляют 1 мкл свежеприготовленного раствора инсулина, во 2-ю - 5 мкл, в 3-ю - 10 мкл, и после определения величины флуоресценции каждой пробы рассчитывают среднюю арифметическую величину флуоресценции Fcp, и чувствительность мембран оценивают по флуориметрической шкале, при этом Fcp менее 30 ед. фл. свидетельствует о пониженной степени чувствительности, Fcp от 30 до 60 ед. фл. свидетельствует о средней степени чувствительности, Fcp более 60 ед. фл. - о повышенной степени чувствительности.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005107066/15A RU2292045C2 (ru) | 2005-03-11 | 2005-03-11 | Способ оценки степени чувствительности мембран эритроцитов и лимфоцитов к инсулину |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005107066/15A RU2292045C2 (ru) | 2005-03-11 | 2005-03-11 | Способ оценки степени чувствительности мембран эритроцитов и лимфоцитов к инсулину |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005107066A RU2005107066A (ru) | 2006-08-20 |
| RU2292045C2 true RU2292045C2 (ru) | 2007-01-20 |
Family
ID=37060431
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005107066/15A RU2292045C2 (ru) | 2005-03-11 | 2005-03-11 | Способ оценки степени чувствительности мембран эритроцитов и лимфоцитов к инсулину |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2292045C2 (ru) |
-
2005
- 2005-03-11 RU RU2005107066/15A patent/RU2292045C2/ru not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005107066A (ru) | 2006-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108254550B (zh) | 检测ck-mb的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法 | |
| Mayo et al. | Clinical laboratory automated urinalysis: comparison among automated microscopy, flow cytometry, two test strips analyzers, and manual microscopic examination of the urine sediments | |
| CN104965085B (zh) | 用于诊断和监测糖尿病的唾液蛋白糖基化测试 | |
| WO2019223406A1 (zh) | 利用红细胞dna损伤信号预测血液病转归的方法及其应用 | |
| Carter | Ultramicroestimation of human serum albumin: binding of the cationic dye, 5, 5′-dibromo-o-cresolsulfonphthalein | |
| CN108072618A (zh) | 一种心梗后死亡风险的预测系统 | |
| CN108133754B (zh) | 一种溶栓后出血风险的预测系统 | |
| Zola et al. | Patients with HIV infection have a reduced proportion of lymphocytes expressing the IL2 receptor p55 chain (TAC, CD25) | |
| CN108048525A (zh) | 一种检测溶栓后出血风险的试剂盒 | |
| CN109470533B (zh) | 一种用于便携式血糖仪的人源全血基质质控品的制备方法 | |
| RU2292045C2 (ru) | Способ оценки степени чувствительности мембран эритроцитов и лимфоцитов к инсулину | |
| FI92877B (fi) | Menetelmä polarisoitujen fluoresenssiemissioiden mittaamiseksi | |
| Deluise et al. | Quantitation of tear lysozyme levels in dry-eye disorders | |
| Tworek et al. | The rate of manual microscopic examination of urine sediment: a College of American Pathologists Q-Probes study of 11 243 urinalysis tests from 88 institutions | |
| RU2328741C1 (ru) | Способ определения осмотической резистентности эритроцитов | |
| Lamon et al. | Screening tests in acute porphyria | |
| Huang et al. | Early risk factors for extrapulmonary organ injury in adult COVID-19 patients | |
| RU2734670C1 (ru) | Способ диагностики осложнений вирусной и бактериальной этиологии у больных хроническим лимфолейкозом | |
| Solarin et al. | The Micral-Test as a screening tool to detect microalbuminuria in children 5-15 years old with sickle cell anaemia, Lagos State University Teaching Hospital | |
| RU2442167C1 (ru) | Способ оценки эффективности действия антиагрегантных препаратов, влияющих на метаболизм арахидоновой кислоты путем ингибирования циклооксигеназы-1 как в отдельности, так и совместно с антагонистом рецептора адф p2y12 на тромбоцитарных мембранах, на состояния тромбоцитов крови пациента, принимающего антиагрегантные препараты указанной группы | |
| RU2146366C1 (ru) | Способ измерения адгезии тромбоцитов | |
| JP2009204465A (ja) | 銀染色を用いる電気泳動法により腎疾患等の病態を判定する方法 | |
| Varshini et al. | Changes in the results of the multi reagent s strips in a single lot: a comparative study | |
| RU2226082C1 (ru) | Способ выявления вспышек аденовирусных конъюнктивитов среди населения | |
| Şambel et al. | Serum Mindin, Nephrin and Podocalyxin Levels in Patients with Type 1 Diabetes: Are These New Markers to Detect the Development of Nephropathy? |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070312 |