RU2289133C1 - Method for determining hemoglobin, erythrocytes, leukocytes, blood platelets quantity, hematokrit and erythrocyte sedimentation rate in whole blood - Google Patents
Method for determining hemoglobin, erythrocytes, leukocytes, blood platelets quantity, hematokrit and erythrocyte sedimentation rate in whole blood Download PDFInfo
- Publication number
- RU2289133C1 RU2289133C1 RU2005105884/15A RU2005105884A RU2289133C1 RU 2289133 C1 RU2289133 C1 RU 2289133C1 RU 2005105884/15 A RU2005105884/15 A RU 2005105884/15A RU 2005105884 A RU2005105884 A RU 2005105884A RU 2289133 C1 RU2289133 C1 RU 2289133C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sample
- ultrasound
- speed
- platelet
- suspension
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для проведения общего клинического анализа крови, включающего в себя определение концентрации гемоглобина, гематокрита, подсчет числа эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, расчет эритроцитарных индексов (MCV, МСН, МСНС), а также определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ).The invention relates to medicine, namely to laboratory diagnostics, and can be used to conduct a general clinical blood test, which includes determining the concentration of hemoglobin, hematocrit, counting the number of red blood cells, white blood cells and platelets, calculating red blood cell indices (MCV, MCH, MCHC), and also determining the erythrocyte sedimentation rate (ESR).
Известны фотометрические способы определения гемоглобина в крови: гемиглобинцианидный и гемихромный.Known photometric methods for determining hemoglobin in the blood: hemiglobin cyanide and hemichromic.
Гемиглобинцианидный метод (метод Драбкина) рекомендован Международным комитетом по стандартизации в гематологии в качестве референтного (1). Гемоглобин окисляют до метгемоглобина красной кровяной солью, а затем переводят в стабильный окрашенный цианметгемоглобин. Абсорбция определяется при 540 нм. Для этого в пробирку к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 20 мкл крови (разведение 1:251). Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин. Измерение проводят на спектрофотометре при длине волны 540 нм или при 520-560 нм на фотоэлектрокалориметре в кювете с длиной оптического пути 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор). Расчет содержания гемоглобина проводят по калибровочному графику, построенному по четырем точкам. На миллиметровой бумаге по оси абсцисс откладывают концентрации гемоглобина, указанные в паспорте к калибровочным ампулам, а по оси ординат откладывают соответствующие измеренные значения абсорбции или показания гемоглобинометра. Из калибровочного графика рассчитывают фактор пересчета для программируемого фотометра или расчетной таблицы.The hemiglobin cyanide method (Drabkin's method) is recommended by the International Committee for Standardization in Hematology as a reference (1). Hemoglobin is oxidized to methemoglobin with red blood salt, and then transferred to stable, stained cyanmethhemoglobin. Absorption is determined at 540 nm. For this, 20 μl of blood is added to a test tube of 5 ml of transforming solution (dilution 1: 251). The contents of the tube are thoroughly mixed and left for 10 minutes. The measurement is carried out on a spectrophotometer at a wavelength of 540 nm or at 520-560 nm on a photoelectrocalorimeter in a cuvette with an optical path length of 1 cm against a blank sample (transforming solution). Calculation of the hemoglobin content is carried out according to a calibration graph built on four points. On graph paper, the abscissa shows the concentration of hemoglobin indicated in the passport to the calibration ampoules, and the ordinate shows the corresponding measured absorption values or readings of the hemoglobinometer. The conversion factor for a programmable photometer or calculation table is calculated from the calibration graph.
Гемихромный метод (1) зарегистрирован в МЗ РФ и рекомендован для применения в клинико-диагностических лабораториях. Измеряется непосредственно метгемоглобин (гемихром). Максимум его поглощения при 533 нм. Измерение на этой длине волны возможно лишь в спектрофотометрах. Кроме того, метгемоглобин - лишь одна из форм гемоглобина, соотношение их в каждом конкретном случае неизвестно.The hemichromic method (1) is registered in the Ministry of Health of the Russian Federation and is recommended for use in clinical diagnostic laboratories. Methemoglobin (hemichrom) is measured directly. Its absorption maximum at 533 nm. Measurement at this wavelength is possible only in spectrophotometers. In addition, methemoglobin is only one form of hemoglobin, their ratio in each case is unknown.
К недостаткам всех фотометрических способов можно отнести необходимость применения калибровочных растворов, а также обязательность проведения пробоподготовки. Биопроба должна иметь окраску, но не быть мутной. Существует несколько причин, по которым затруднено фотометрическое определение гемоглобина непосредственно в цельной крови (2):The disadvantages of all photometric methods include the need to use calibration solutions, as well as the mandatory preparation of samples. The bioassay should be colored, but not cloudy. There are several reasons why photometric determination of hemoglobin directly in whole blood is difficult (2):
- нарушение математического закона Бугера-Ламберта-Бера за счет наличия большого количества клеток и белков в крови, что увеличивает рассеивание света;- violation of the mathematical law of Bouguer-Lambert-Beer due to the presence of a large number of cells and proteins in the blood, which increases the scattering of light;
- необходимая плотность фотометрирования (0,5 Белл) возможна лишь при разведении крови;- the necessary photometric density (0.5 Bell) is possible only with dilution of blood;
- производные гемоглобина имеют разные спектральные кривые поглощения, результат фотометрирования зависит от их соотношения, которое неизвестно у каждого конкретного пациента.- hemoglobin derivatives have different spectral absorption curves, the result of photometry depends on their ratio, which is unknown in each individual patient.
Для подсчета клеток крови используют ручные и автоматические методики.Manual and automatic methods are used to count blood cells.
Известен способ определения эритроцитов в цельной крови путем их подсчета в камере Горяева под микроскопом (3) в определенном количестве квадратов счетной сетки с последующим пересчетом на 1 мкл крови исходя из объема квадратов и разведения крови. Для этого в пробирку с 4 мл 0,9% раствора хлорида натрия добавляют 20 мкл крови и перемешивают. Подготовленную счетную камеру заполняют при помощи стеклянной палочки и оставляют в горизонтальном положении на 1 мин для осаждения эритроцитов. Подсчет проводится в 5 больших квадратах (80 малых). Расчет проводят по формуле:There is a method of determining red blood cells in whole blood by counting them in a Goryaev’s chamber under a microscope (3) in a certain number of squares of a counting grid, followed by conversion to 1 μl of blood based on the volume of squares and blood dilution. To do this, add 20 μl of blood to a test tube with 4 ml of a 0.9% sodium chloride solution and mix. The prepared counting chamber is filled with a glass rod and left in a horizontal position for 1 min to precipitate red blood cells. Counting is carried out in 5 large squares (80 small). The calculation is carried out according to the formula:
где Х - число эритроцитов в 1 мкл крови; а - число сосчитанных эритроцитов в 80 малых квадратах; 200 - разведение крови; 1/4000 мкл - объем одного малого квадрата.where X is the number of red blood cells in 1 μl of blood; a - the number of counted red blood cells in 80 small squares; 200 - blood dilution; 1/4000 μl - the volume of one small square.
Известен также способ определения лейкоцитов путем их подсчета в камере Горяева под микроскопом, который проводят после лизирования эритроцитов в 100 больших квадратах счетной сетки и пересчитывают на 1 л крови (4). Подсчет лейкоцитов должен быть проведен в течение 2-4 часов после взятия крови. В пробирку с 0,4 мл 3-5% раствора уксусной кислоты, подкрашенного раствором метиленового синего, добавляют 20 мкл крови (разведение 1:20). Тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 минуту для осаждения лейкоцитов. Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах при малом увеличении. Расчет числа лейкоцитов проводят по формуле:There is also a method of determining leukocytes by counting them in a Goryaev’s chamber under a microscope, which is carried out after lysing red blood cells in 100 large squares of the counting grid and counted on 1 liter of blood (4). White blood cell counts should be done within 2-4 hours after taking the blood. In a test tube with 0.4 ml of a 3-5% solution of acetic acid, tinted with a solution of methylene blue, add 20 μl of blood (dilution 1:20). Thoroughly mix and fill the chamber Goryaeva. The filled chamber is left in a horizontal position for 1 minute to precipitate leukocytes. White blood cells are counted in 100 large squares at low magnification. The calculation of the number of leukocytes is carried out according to the formula:
где Х - число лейкоцитов в 1 мкл крови, а - число лейкоцитов в 100 больших квадратах, 20 - разведение крови, 100 - число посчитанных квадратов, 250 - объем одного большого квадрата 1/250.where X is the number of leukocytes in 1 μl of blood, and is the number of leukocytes in 100 large squares, 20 is the dilution of blood, 100 is the number of counted squares, 250 is the volume of one large square 1/250.
Существуют методы подсчета тромбоцитов в счетной камере и в мазках крови (5). Подсчет тромбоцитов в камере достаточно точен, не требует для расчета количества эритроцитов. С другой стороны, этот метод более трудоемкий, поскольку тромбоциты в нативном состоянии представлены мелкими и плохо контрастированными элементами.There are methods for counting platelets in the counting chamber and in blood smears (5). The platelet count in the chamber is quite accurate, does not require the calculation of the number of red blood cells. On the other hand, this method is more time-consuming, since platelets in the native state are represented by small and poorly contrasted elements.
Исследуемую кровь разводят в 200 раз (в сухую пробирку набирают 4 мл 1% раствора оксалата аммония и 20 мкл крови). Перемешивают и оставляют на 25-30 минут для гемолиза эритроцитов. Заполненную счетную камеру помещают во влажную камеру на 5 минут для оседания тромбоцитов. При помощи фазово-контрастного устройства считают тромбоциты в 25 больших квадратах. Расчет проводят по формуле:The test blood is diluted 200 times (4 ml of a 1% solution of ammonium oxalate and 20 μl of blood are collected in a dry tube). Stirred and left for 25-30 minutes for hemolysis of red blood cells. The filled counting chamber is placed in a wet chamber for 5 minutes to settle the platelets. Using a phase contrast device, platelets in 25 large squares are counted. The calculation is carried out according to the formula:
где Х - число тромбоцитов в 1 мкл крови, а - число тромбоцитов в 25 больших квадратах, 200 - разведение крови, 25 - число сосчитанных квадратов, 250 - объем одного квадрата 1/250 мкл.where X is the number of platelets in 1 μl of blood, and is the number of platelets in 25 large squares, 200 is the dilution of blood, 25 is the number of counted squares, 250 is the volume of one square 1/250 μl.
Определение количества тромбоцитов в мазках крови по Фонио значительно уступает по своей точности камерному методу, т.к. зависит от качества мазка и точности подсчета количества эритроцитов. Проводят подсчет числа тромбоцитов в окрашенных мазках на 1000 эритроцитов с расчетом на 1 мкл крови исходя из содержания в этом объеме количества эритроцитов (5). Для этого кровь перемешивают с 2,6% раствором ЭДТА (этилендиаминтетраацетат натрия) в пропорции 4:1. Готовят тонкие мазки и окрашивают их по Романовскому-Гимзе в течение 35-40 минут. Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитов в тонких местах препарата. Подсчет проводят следующим образом: в каждом поле зрения микроскопа считают число тромбоцитов и эритроцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов. Расчет проводят по формуле:The determination of platelet count in blood smears by Fonio is significantly inferior in accuracy to the chamber method, because depends on the quality of the smear and the accuracy of counting the number of red blood cells. The platelet count in stained smears per 1000 red blood cells is calculated per 1 μl of blood based on the content of the number of red blood cells in this volume (5). To do this, the blood is mixed with a 2.6% solution of EDTA (sodium ethylenediaminetetraacetate) in a ratio of 4: 1. Thin strokes are prepared and stained according to Romanovsky-Giemsa for 35-40 minutes. Dry smears are microscopic with an immersion lens, counting the platelet count in thin spots of the preparation. The calculation is carried out as follows: in each field of view of the microscope, the number of platelets and red blood cells is counted, moving the smear until 1000 red blood cells are counted. The calculation is carried out according to the formula:
где Х - количество тромбоцитов *109/л, а - число тромбоцитов на 1000 эритроцитов, b - число эритроцитов в 1 л крови, 1000 - количество посчитанных эритроцитов.where X is the number of platelets * 10 9 / l, and a is the number of platelets per 1000 red blood cells, b is the number of red blood cells in 1 liter of blood, 1000 is the number of red blood cells counted.
Ручные методы подсчета клеток чрезвычайно трудоемки и имеют огромное количество источников ошибок: неточное взятие крови в пипетку, образование сгустка крови, недостаточное перемешивание, неправильное заполнение камеры, ошибка в счете, недостаточно чистая посуда и т.д.Manual methods for counting cells are extremely time-consuming and have a huge number of error sources: inaccurate blood collection in a pipette, blood clot formation, insufficient mixing, improper filling of the chamber, error in the count, insufficiently clean dishes, etc.
Анализ клеток крови на гематологических анализаторах имеет ряд неоспоримых преимуществ. Работа большинства гематологических анализаторов основана на кондуктометрическом методе, разработанном J.& W.Coulter в 1947 году, который позволяет подсчитать не только количество клеток, но и охарактеризовать объем каждой клетки, проходящей через апертуру. Принцип метода основан на подсчете числа клеток, проходящих через апертуру, по обе стороны которой расположены электроды, через которые проходит постоянный электрический ток. При прохождении клетки через микроотверстие сопротивление в электрической цепи возрастает и на приборе регистрируются импульсы, количество которых соответствует количеству клеток. Анализ амплитуды импульсов позволяет оценить объем клеток. Кондуктометрический тип счетчиков приспособлен для точного подсчета эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. В современных анализаторах этот метод сочетается с применением дифференцирующих лизатов, лазерного светорассеяния, радиочастотного анализа, цитохимического метода и т.д., что позволяет проводить дифференцирование лейкоцитов. Автоматический анализ крови позволяет полноценно охарактеризовать красную кровь по следующим параметрам: RBC, HGB, HCT, MCV, МСН, МСНС.The analysis of blood cells on hematological analyzers has a number of undeniable advantages. The work of most hematological analyzers is based on the conductometric method developed by J. & W. Coulter in 1947, which allows us to calculate not only the number of cells, but also to characterize the volume of each cell passing through the aperture. The principle of the method is based on counting the number of cells passing through the aperture, on both sides of which there are electrodes through which direct current flows. When a cell passes through a micro-hole, the resistance in the electric circuit increases and pulses are recorded on the device, the number of which corresponds to the number of cells. Analysis of the amplitude of the pulses allows us to estimate the volume of cells. The conductometric type of counters is adapted for accurate counting of red blood cells, white blood cells and platelets. In modern analyzers, this method is combined with the use of differentiating lysates, laser light scattering, radio frequency analysis, the cytochemical method, etc., which allows differentiation of leukocytes. An automatic blood test allows you to fully characterize red blood according to the following parameters: RBC, HGB, HCT, MCV, MCH, MCHC.
RBC (red blood cells) - количество эритроцитов крови (*1012/л).RBC (red blood cells) - the number of red blood cells (* 10 12 / l).
HGB (hemoglobin) - концентрация гемоглобина (г/л). Определяется в анализаторах спектрофотометрически гемиглобинцианидным методом. Происходит завышение этого параметра при липидемии и высоких лейкоцитозах.HGB (hemoglobin) - hemoglobin concentration (g / l). It is determined in analyzers spectrophotometrically by the hemiglobin cyanide method. This parameter is overestimated with lipidemia and high leukocytosis.
НСТ (hematocrit) - гематокрит. Показатель, отражающий долю объема крови, занимаемую эритроцитами. В анализаторах данный показатель представлен суммой прямо измеренных объемов эритроцитов в единице объема крови.HCT (hematocrit) - hematocrit. An indicator that reflects the proportion of blood volume occupied by red blood cells. In analyzers, this indicator is represented by the sum of directly measured volumes of red blood cells per unit volume of blood.
MCV (mean corpuscular volume) - средний объем эритроцита в кубических микрометрах (мкм3) или фемтолитрах (фл). Измерение проводится одновременно с подсчетом эритроцитов по амплитуде импульсов.MCV (mean corpuscular volume) - the average volume of an erythrocyte in cubic micrometers (μm 3 ) or femtoliters (fl). The measurement is carried out simultaneously with the calculation of red blood cells by the amplitude of the pulses.
МСН (mean corpuscular hemoglobin) - среднее содержание гемоглобина в эритроцитах (пг). Отражает содержание гемоглобина в одной клетке. Это расчетный показатель:MCH (mean corpuscular hemoglobin) is the average hemoglobin content in red blood cells (pg). Reflects the hemoglobin content in one cell. This is a calculated indicator:
МСНС (mean corpuscular hemoglobin concentration) - средняя концентрация гемоглобина в эритроците (г/дл):ICS (mean corpuscular hemoglobin concentration) - the average concentration of hemoglobin in the red blood cell (g / dl):
Разделение тромбоцитов и эритроцитов в современных анализаторах решается дискриминаторами по измерению амплитуды электрического сигнала: тромбоциты генерируют сигналы гораздо меньшей амплитуды. Для подсчета лейкоцитов к крови добавляется лизирующий раствор или гемолитик, разрушающий эритроциты. Гематологические анализаторы удобны в применении и точны, но дороги, требуют реагентов, кроме того, они не способны определять СОЭ.The separation of platelets and red blood cells in modern analyzers is decided by discriminators to measure the amplitude of the electrical signal: platelets generate signals of much lower amplitude. To count white blood cells, a lyse solution or hemolytic that destroys red blood cells is added to the blood. Hematological analyzers are convenient to use and accurate, but expensive, require reagents, in addition, they are not able to determine ESR.
СОЭ - скорость оседания эритроцитов. Показатель, входящий в общий анализ крови. В нашей стране в практике лабораторий широко применяется метод Панченкова (6).ESR - erythrocyte sedimentation rate. An indicator that is included in the general blood test. In our country, in the practice of laboratories, the Panchenkov method is widely used (6).
Перед использованием химически чистый капилляр промывают цитратом натрия, набирают его до метки "50" и выдувают в пробирку. Далее в эту пробирку выдувают 2 капилляра крови по 100 мм. Кровь перемешивают с цитратом (разведение получилось 4:1). В лаборатории полученной смесью заполняют капилляр до метки "0". Закрыв пальцем верхний конец капилляра, осторожно устанавливают его в штатив строго вертикально, упирая нижний конец капилляра в резиновую прокладку. Через час отмечают оседание эритроцитов по высоте отстоявшегося слоя плазмы в миллиметрах. Метод не дорог и прост, но требует не менее 1 часа для выполнения, проводится вручную, неудобен при большом количестве исследований, имеет много источников ошибок.Before use, the chemically clean capillary is washed with sodium citrate, recovered to the mark “50” and blown into a test tube. Next, 2 blood capillaries of 100 mm in each tube are blown out. Blood is mixed with citrate (dilution was 4: 1). In the laboratory, the resulting mixture is filled into the capillary to the mark "0". Covering the upper end of the capillary with a finger, carefully place it in a tripod strictly vertically, resting the lower end of the capillary in a rubber gasket. After an hour, erythrocyte sedimentation is noted along the height of the settled plasma layer in millimeters. The method is not expensive and simple, but requires at least 1 hour to complete, is carried out manually, is inconvenient with a large number of studies, has many sources of errors.
Каждый из известных методов предназначен для определения только одного или нескольких показателей. Отсутствует единый универсальный способ одновременного определения всех указанных показателей.Each of the known methods is designed to determine only one or more indicators. There is no single universal way to simultaneously determine all of these indicators.
Задачей изобретения является создание быстрого, безреагентного способа одновременного определения гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гематокрита и скорости оседания эритроцитов в цельной крови.The objective of the invention is to provide a quick, reagentless method for the simultaneous determination of hemoglobin, the number of red blood cells, white blood cells, platelets, hematocrit and erythrocyte sedimentation rate in whole blood.
Сущность изобретения состоит в том, что способ определения гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гематокрита и скорости оседания эритроцитов в цельной крови характеризуется тем, что к крови пациента добавляют раствор цитрата натрия в соотношении 1:4, получают образец А, из которого готовят лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, затем в акустические ячейки двух аналогичных подключенных к компьютеру устройств для контроля биологических жидкостей с поддерживаемой в них температурой от 15 до 40°С, которая в первом устройстве ниже, чем во втором, помещают соответственно физиологический раствор и образец А, пропускают через них ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц, измеряют одновременно скорость его прохождения в физиологическом растворе и коэффициент поглощения в образце А, затем измеряют скорость прохождения ультразвука в образце А в течение промежутка времени, на протяжении которого в первое устройство вместо физиологического раствора последовательно помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, измеряя в них скорость прохождения ультразвука, на основании полученных данных определяют концентрацию гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в 1 мл цельной крови, гематокрит и скорость оседания эритроцитов в цельной крови, при этом количество лейкоцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:The essence of the invention lies in the fact that the method of determining hemoglobin, the number of red blood cells, white blood cells, platelets, hematocrit and the erythrocyte sedimentation rate in whole blood is characterized in that a solution of sodium citrate is added to the patient’s blood in a ratio of 1: 4, and sample A is obtained from which to prepare leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium, then into the acoustic cells of two similar devices connected to a computer for controlling biological fluids with a temperature maintained in them Atura from 15 to 40 ° C, which in the first device is lower than in the second, physiological saline and sample A are placed respectively, ultrasound is passed through them with a frequency varying in the range from 2 to 40 MHz, and its speed in physiological saline is measured simultaneously and the absorption coefficient in sample A, then the ultrasound transmission speed in sample A is measured for a period of time during which a leukocyte suspension is sequentially placed in the first device instead of physiological saline, platelet suspension and platelet-free medium, measuring the speed of ultrasound in them, on the basis of the obtained data determine the concentration of hemoglobin, the number of red blood cells, white blood cells and platelets in 1 ml of whole blood, hematocrit and erythrocyte sedimentation rate in whole blood, while the number of leukocytes in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
WBC=K1(V2-V1), WBC = K1 (V 2 -V 1 ),
где WBC - количество лейкоцитов в 1 мл цельной крови,where WBC is the number of leukocytes in 1 ml of whole blood,
V1 - скорость прохождения ультразвука в физиологическом растворе,V 1 - the speed of ultrasound in physiological saline,
V2 - скорость прохождения ультразвука в лейкоцитарной суспензии,V 2 - the speed of ultrasound in a leukocyte suspension,
К1 - коэффициент пропорциональности;K1 is the coefficient of proportionality;
количество тромбоцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:platelet count in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
PLT=K2(V3-V1),PLT = K 2 (V 3 -V 1 ),
где PLT - количество тромбоцитов в 1 мл цельной крови,where PLT is the number of platelets in 1 ml of whole blood,
V3 - скорость прохождения ультразвука в тромбоцитарной суспензии,V 3 - the speed of ultrasound in a platelet suspension,
V1 - скорость прохождения ультразвука в физиологическом растворе,V 1 - the speed of ultrasound in physiological saline,
К2 - коэффициент пропорциональности;K 2 - coefficient of proportionality;
концентрацию гемоглобина определяют по формуле:hemoglobin concentration is determined by the formula:
Hb=К3V4,Hb = K 3 V 4 ,
где Hb - концентрация гемоглобина в цельной крови в г/л,where Hb is the concentration of hemoglobin in whole blood in g / l,
V4 - скорость прохождения ультразвука в образце А, измеренная одновременно со скоростью его прохождения в физиологическом растворе,V 4 - the speed of ultrasound in sample A, measured simultaneously with the speed of its passage in physiological saline,
К3 - коэффициент пропорциональности;K 3 - coefficient of proportionality;
количество эритроцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:the number of red blood cells in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
RBC=K4α,RBC = K 4 α,
где RBC - количество эритроцитов в 1 мл цельной крови;where RBC is the number of red blood cells in 1 ml of whole blood;
α - коэффициент поглощения ультразвука в образце А, измеренный одновременно со скоростью его прохождения в физиологическом растворе,α is the absorption coefficient of ultrasound in sample A, measured simultaneously with the speed of its passage in physiological saline,
K4 - коэффициент пропорциональности;K 4 is the coefficient of proportionality;
гематокрит определяют по формуле:hematocrit is determined by the formula:
Ht=K5(V4-V5),Ht = K 5 (V 4 -V 5 ),
где Ht - показатель гематокрита в %,where Ht is the hematocrit in%,
V4 - скорость прохождения ультразвука в образце А, измеренная одновременно со скоростью его прохождения в физиологическом растворе,V 4 - the speed of ultrasound in sample A, measured simultaneously with the speed of its passage in physiological saline,
V5 - скорость прохождения ультразвука в безтромбоцитарной среде,V 5 - the speed of ultrasound in a platelet-free medium,
К5 - коэффициент пропорциональности;To 5 - the coefficient of proportionality;
скорость оседания эритроцитов определяют по формуле:erythrocyte sedimentation rate is determined by the formula:
СОЭ=К6(Vmax-Vmin),ESR = K 6 (Vmax-Vmin),
где СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/час,where ESR is the erythrocyte sedimentation rate, mm / h,
Vmax - максимальное значение скорости прохождения ультразвука в образце А, измеренная в течение промежутка времени, на протяжении которого в первое устройство последовательно помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, измеряя в них скорость прохождения ультразвука,Vmax is the maximum value of the ultrasound transmission speed in sample A, measured during the period of time during which the leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are successively placed in the first device, measuring the speed of ultrasound transmission in them,
Vmin - минимальное значение скорости прохождения ультразвука в образце А, измеренная в течение промежутка времени, на протяжении которого в первое устройство последовательно помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, измеряя в них скорость прохождения ультразвука,Vmin is the minimum value of the ultrasound transmission speed in sample A, measured during the period of time during which the leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are successively placed in the first device, measuring the ultrasound transmission speed in them,
К6 - коэффициент пропорциональности.To 6 - the coefficient of proportionality.
При получении лейкоцитарной суспензии к 0,4 мл образца А добавляют 0,7 мл лизирующего раствора, тщательно перемешивают, центрифугируют 3 минуты при 2000 об/мин, полностью отбирают надосадочную среду, а к лейкоцитарному осадку добавляют 0,1 мл физиологического раствора.When a leukocyte suspension is obtained, 0.4 ml of the lyse solution is added to 0.4 ml of sample A, mixed thoroughly, centrifuged for 3 minutes at 2000 rpm, the supernatant is completely taken away, and 0.1 ml of physiological saline is added to the leukocyte suspension.
При получении тромбоцитарной суспензии 1 мл образца А центрифугируют 3 минуты при 2000 об/мин, затем 0,4 мл надосадочной среды, насыщенной тромбоцитами, отбирают, центрифугируют 3 мин при 5000 об/мин, после чего полностью отбирают надосадочную среду, а к тромбоцитарному осадку добавляют 0,1 мл физиологического раствора.Upon receipt of the platelet suspension, 1 ml of sample A is centrifuged for 3 minutes at 2000 rpm, then 0.4 ml of the platelet-saturated supernatant is removed, centrifuged for 3 minutes at 5000 rpm, after which the supernatant is completely collected, and the platelet precipitate add 0.1 ml of saline.
При получении безтромбоцитарной среды надосадочную среду, полученную аналогичным образом, разводят физиологическим раствором в соотношении 1:3.Upon receipt of platelet-free medium, the supernatant obtained in a similar manner is diluted with physiological saline in a ratio of 1: 3.
Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат.Using the invention allows to obtain the following technical result.
Способ обладает высокой точностью и информативностью, поскольку позволяет определять все показатели общего клинического анализа крови достаточно быстро и, следовательно, может применяться для скрининговых исследований.The method has high accuracy and informativeness, because it allows you to determine all the indicators of the general clinical blood test quickly enough and, therefore, can be used for screening studies.
Способ позволяет следить за динамикой патологического процесса при установленном диагнозе, так как возможна оценка "красной крови" за 7-10 минут (определение гемоглобина, СОЭ, количества эритроцитов, гематокрита, эритроцитарных показателей). Для определения СОЭ традиционным способом необходимо не менее часа.The method allows you to monitor the dynamics of the pathological process with an established diagnosis, since it is possible to evaluate "red blood" in 7-10 minutes (determination of hemoglobin, ESR, the number of red blood cells, hematocrit, red blood cells). To determine ESR in the traditional way, at least an hour is needed.
Акустический способ проведения общего клинического анализа крови универсален, так как позволяет одновременно определить все показатели общего клинического анализа крови, в том числе СОЭ. В настоящее время не существует способов одновременного определения СОЭ и других показателей крови.The acoustic method for conducting a general clinical blood test is universal, since it allows you to simultaneously determine all the indicators of a general clinical blood test, including ESR. Currently, there are no ways to simultaneously determine ESR and other blood parameters.
Технический результат достигается за счет того, что для одновременного определения концентрации гемоглобина, гематокрита, количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и скорости оседания эритроцитов авторы применили полученные по разработанной ими методике из цельной крови пациента: образец А и приготовленные из него лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, а также за счет их последовательного помещения в акустические ячейки двух аналогичных подключенных к компьютеру устройств для ультразвукового контроля биологических жидкостей с постоянно поддерживаемой в них температурой от 15 до 40°С, которая в первом устройстве ниже, чем во втором, через которые пропускают ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц.The technical result is achieved due to the fact that for the simultaneous determination of the concentration of hemoglobin, hematocrit, the number of red blood cells, white blood cells, platelets and the erythrocyte sedimentation rate, the authors used the method developed by them from the patient’s whole blood: sample A and leukocyte suspension prepared from it, platelet suspension and platelet-free medium, as well as due to their sequential placement in acoustic cells of two similar ultrasound devices connected to a computer new control of biological fluids with constantly maintained temperature from 15 to 40 ° C, which in the first device is lower than in the second, through which ultrasound is passed with a frequency that varies in the range from 2 to 40 MHz.
При этом в ячейки устройств сначала помещают образец А и соответственно физиологический раствор, пропускают через него ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц, измеряют одновременно коэффициент поглощения ультразвука в образце А и скорость его прохождения в физиологическом растворе. Затем вместо физиологического раствора в первое устройство помещают последовательно лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду и измеряют скорость прохождения ультразвука в них и одновременно в течение этого заданного промежутка времени - в образце. По полученным таким образом данным определяют гемоглобин, количество эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гематокрит и СОЭ с использованием специальных формул. Вошедшие в них коэффициенты подобраны общепринятым образом в результате сравнения получаемых результатов с референтными методами.In this case, sample A is first placed in the device’s cells and, accordingly, physiological saline, ultrasound is passed through it with a frequency varying from 2 to 40 MHz, the ultrasound absorption coefficient in sample A and its propagation rate in physiological saline are measured simultaneously. Then, instead of physiological saline, the leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are sequentially placed in the first device, and the speed of ultrasound transmission in them is measured and simultaneously during this predetermined period of time in the sample. According to the data thus obtained, hemoglobin, the number of red blood cells, white blood cells, platelets, hematocrit and ESR are determined using special formulas. The coefficients included in them are selected in a generally accepted way as a result of comparing the obtained results with reference methods.
Способ осуществляется следующим образом. У пациента из локтевой вены забирают 4-5 мл крови в специальную пробирку с К2ЭДТА (для предотвращения свертываемости цельной крови) и доставляют в лабораторию. К данному образцу добавляют раствор цитрата натрия в соотношении 1:4, получают образец А, из которого готовят лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду.The method is as follows. 4-5 ml of blood are taken from a cubital vein from a patient in a special tube with K2EDTA (to prevent coagulation of whole blood) and delivered to the laboratory. A solution of sodium citrate is added to this sample in a ratio of 1: 4, and sample A is obtained from which a leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are prepared.
Для приготовления лейкоцитарной суспензии к 0,4 мл образца А добавляют 0,7 мл лизирующего раствора, тщательно перемешивают, центрифугируют 3 минуты при 2000 об/мин, полностью отбирают надосадочную среду, добавляют к лейкоцитарному осадку 0,1 мл физиологического раствора.To prepare the leukocyte suspension, 0.4 ml of the lysing solution is added to 0.4 ml of sample A, thoroughly mixed, centrifuged for 3 minutes at 2000 rpm, the supernatant is completely taken away, and 0.1 ml of physiological saline is added to the leukocyte precipitate.
Для получения тромбоцитарной суспензии 1 мл образца А центрифугируют 3 минуты при 2000 об/мин, 0,4 мл надосадочной среды, насыщенной тромбоцитами, отбирают, центрифугируют 3 мин при 5000 об/мин, полностью отбирают надосадочную среду, добавляют к тромбоцитарному осадку 0,1 мл физиологического раствора.To obtain a platelet suspension, 1 ml of sample A is centrifuged for 3 minutes at 2000 rpm, 0.4 ml of platelet-saturated supernatant is removed, centrifuged for 3 minutes at 5000 rpm, the supernatant is completely selected, 0.1 is added to the platelet ml of physiological saline.
Для получения безтромбоцитарной среды надосадочную среду после центрифугирования образца А в течение 3-х минут при 2000 об/мин разводят физиологическим раствором в соотношении 1:3.To obtain a platelet-free medium, the supernatant after centrifugation of sample A for 3 minutes at 2000 rpm was diluted with saline in a ratio of 1: 3.
Затем в акустические ячейки двух аналогичных подключенных к компьютеру устройств для контроля биологических жидкостей (RU 2082318, кл. МПК: А 61 В 8/08, 1997 г.) с поддерживаемой в них температурой от 15 до 40°С, которая в первом устройстве ниже, чем во втором, помещают физиологический раствор (0,9% раствор хлорида натрия) в первое устройство и образец А во второе устройство, пропускают через них ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц с высокочастотного генератора (например, ГЧ-164), управляемого персональным компьютером, и одномоментно измеряют коэффициент поглощения ультразвука в образце А и скорость его прохождения в физиологическом растворе. При этом в устройствах электрический сигнал преобразуется на пьезоизлучателях в ультразвуковой сигнал той же частоты, который распространяется в средах, находящихся в акустических ячейках устройств. Пьезоприемники преобразуют ультразвуковой сигнал в высокочастотный электрический сигнал, который поступает на высокочастотный переключатель, управляемый компьютером, который через этот переключатель подсоединяет к высокочастотному микровольтметру (например, В3-48) то первое, то второе устройство. Продетектированный высокочастотный сигнал с выхода высокочастотного микровольтметра поступает на вольтметр постоянного тока (например, В7-53), также управляемый компьютером. В результате обработки данных, получаемых с пьезоприемников устройств, в памяти компьютера фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в выбранном диапазоне частот (например, от 5,0 до 15,0 МГц) и частотная ширина одного из выбранных резонансных пиков на уровне половинной мощности в акустической ячейке второго устройства с образцом А.Then, into the acoustic cells of two similar devices connected to the computer for controlling biological fluids (RU 2082318, class IPC: A 61 V 8/08, 1997) with a temperature maintained in them from 15 to 40 ° C, which is lower in the first device than in the second, physiological saline (0.9% sodium chloride solution) is placed in the first device and sample A in the second device, ultrasound is passed through them with a frequency that varies from 2 to 40 MHz from a high-frequency generator (for example, 164), controlled by a personal computer, and simultaneously measure the absorption coefficient of ultrasound in sample A and its speed in physiological saline. Moreover, in devices, the electrical signal is converted on piezoelectric emitters into an ultrasonic signal of the same frequency, which propagates in the media located in the acoustic cells of the devices. Piezoelectric receivers convert an ultrasonic signal into a high-frequency electrical signal, which is fed to a high-frequency switch controlled by a computer, which through this switch connects to the high-frequency microvoltmeter (for example, B3-48) either the first or the second device. The detected high-frequency signal from the output of the high-frequency microvoltmeter is fed to a DC voltmeter (for example, B7-53), also controlled by a computer. As a result of processing the data obtained from the piezoelectric receivers of the devices, the central frequencies of all resonant peaks in the selected frequency range (for example, from 5.0 to 15.0 MHz) and the frequency width of one of the selected resonant peaks at half power in acoustic cell of the second device with sample A.
Затем в ячейку первого устройства вместо физиологического раствора в течение заданного промежутка времени последовательно помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, каждую из которых предварительно тщательно перемешивают. Пропускают через них ультразвук и измеряют скорость его прохождения. Аналогично в памяти компьютера фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в том же диапазоне (например, от 5,0 до 15,0 МГц) для указанных сред.Then, in the cell of the first device, instead of physiological saline, for a predetermined period of time, a leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are successively placed, each of which is thoroughly mixed beforehand. Ultrasound is passed through them and the speed of its passage is measured. Similarly, the central frequencies of all resonant peaks in the same range (for example, from 5.0 to 15.0 MHz) for these media are recorded in the computer's memory.
Затем компьютер вычисляет среднюю разность частотного расстояния между резонансными пиками и номер выбранного резонансного пика по следующей формуле:Then the computer calculates the average difference in the frequency distance between the resonant peaks and the number of the selected resonant peak according to the following formula:
где N - число частотных расстояний между резонансными пиками в выбранном частотном диапазоне;where N is the number of frequency distances between the resonant peaks in the selected frequency range;
j - номер выбранного резонансного пика;j is the number of the selected resonant peak;
fj - резонансная частота j-ого резонансного пика;f j is the resonant frequency of the j-th resonance peak;
fj+1 - резонансная частота j+1-ого резонансного пика.f j + 1 is the resonance frequency of the j + 1st resonance peak.
Затем выбирают значения центральных частот резонансных пиков одного и того же номера для физиологического раствора, образца А, лейкоцитарной суспензии, тромбоцитарной суспензии и безтромбоцитарной среды и вычисляют соответствующие скорости ультразвука по формулам:Then, the central frequencies of the resonance peaks of the same number are selected for physiological saline, sample A, leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium, and the corresponding ultrasound velocities are calculated by the formulas:
где 
Кроме того, в момент измерения скорости ультразвука в физиологическом растворе измеряют коэффициент поглощения α ультразвука в образце А по формуле:In addition, at the time of measuring the speed of ultrasound in physiological saline, the absorption coefficient α of ultrasound in sample A is measured by the formula:
α=π(ΔFj/V4j),α = π (ΔF j / V 4j ),
где α - коэффициент поглощения ультразвука в образце А,where α is the absorption coefficient of ultrasound in sample A,
ΔFj - частотная ширина выбранного резонансного пика номера j на уровне половинной мощности для образца А, измеренная одновременно с измерением скорости ультразвука в физиологическом растворе,ΔF j is the frequency width of the selected resonant peak of number j at half power for sample A, measured simultaneously with the measurement of the speed of ultrasound in physiological saline,
V4j - скорость прохождения ультразвука в образце А, измеренная одновременно со скоростью его прохождения в физиологическом растворе.V 4j is the speed of ultrasound in sample A, measured simultaneously with its speed in physiological saline.
Скорость прохождения ультразвука в образце А измеряют в течение промежутка времени, на протяжении которого в первое устройство последовательно помещают сначала лейкоцитарную суспензию и измеряют в ней скорость прохождения ультразвука, затем тромбоцитарную суспензию и измеряют скорость прохождения ультразвука в ней и, наконец, - безтромбоцитарную среду и измеряют скорость прохождения ультразвука в ней.The speed of ultrasound in sample A is measured over a period of time during which the leukocyte suspension is sequentially placed in the first device and the speed of ultrasound is measured in it, then the platelet suspension and the speed of ultrasound in it is measured, and finally, the platelet-free medium is measured and measured the speed of ultrasound in it.
На основании полученных данных определяют концентрацию гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в 1 мл цельной крови, гематокрит и скорость оседания эритроцитов в цельной крови.Based on the data obtained, the hemoglobin concentration, the number of red blood cells, white blood cells and platelets in 1 ml of whole blood, the hematocrit and the erythrocyte sedimentation rate in whole blood are determined.
Количество лейкоцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:The number of leukocytes in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
WBC=K1(V2-V1),WBC = K1 (V 2 -V 1 ),
где WBC - количество лейкоцитов в 1 мл цельной крови,where WBC is the number of leukocytes in 1 ml of whole blood,
V1 - скорость прохождения ультразвука в физиологическом растворе,V 1 - the speed of ultrasound in physiological saline,
V2 - скорость прохождения ультразвука в лейкоцитарной суспензии,V 2 - the speed of ultrasound in a leukocyte suspension,
К1 - коэффициент пропорциональности.K1 is the coefficient of proportionality.
Коэффициент К1 получают общепринятым образом для конкретного первого устройства после выбора температуры T1 путем сравнительных исследований лейкоцитарной суспензии, полученной из данного образца крови и помещенной в первое устройство, и данного образца, в котором лейкоциты получены при подсчете их в камере Горяева (4). Количество тромбоцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:The coefficient K1 is obtained in the generally accepted manner for a particular first device after selecting a temperature T 1 by comparative studies of the leukocyte suspension obtained from a given blood sample and placed in the first device and this sample in which leukocytes were obtained by counting them in a Goryaev chamber (4). The platelet count in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
PLT=K2(V3-V1),PLT = K 2 (V 3 -V 1 ),
где PLT - количество тромбоцитов в 1 мл цельной крови,where PLT is the number of platelets in 1 ml of whole blood,
V3 - скорость прохождения ультразвука в тромбоцитарной суспензии,V 3 - the speed of ultrasound in a platelet suspension,
V1 - скорость прохождения ультразвука в физиологическом растворе,V 1 - the speed of ultrasound in physiological saline,
K2 - коэффициент пропорциональности.K 2 - coefficient of proportionality.
Последний получают общепринятым образом для конкретного первого устройства после выбора температуры T1 путем сравнительных исследований тромбоцитарной суспензии, полученной из данного образца крови и помещенной в первое устройство, и данного образца, в котором тромбоциты получены путем подсчета их по методу (5).The latter is obtained in the generally accepted way for a particular first device after choosing a temperature T 1 by comparative studies of a platelet suspension obtained from a given blood sample and placed in the first device and this sample in which platelets are obtained by counting them according to the method (5).
Концентрацию гемоглобина определяют по формуле:The concentration of hemoglobin is determined by the formula:
HGB=К3V4,HGB = K 3 V 4 ,
где HGB - концентрация гемоглобина в цельной крови в г/л,where HGB is the concentration of hemoglobin in whole blood in g / l,
V4 - скорость прохождения ультразвука в образце А, измеренная одновременно с измерением скорости ультразвука в физиологическом растворе,V 4 - the speed of ultrasound in sample A, measured simultaneously with the measurement of the speed of ultrasound in physiological saline,
К3 - коэффициент пропорциональности.K 3 is the coefficient of proportionality.
Последний получают общепринятым образом для конкретного второго устройства после выбора температуры Т2 путем сравнительных исследований образца А, полученного из данного образца крови и помещенного во второе устройство, и данного образца, в котором гемоглобин получен по методу (1).The latter is obtained in the generally accepted manner for a specific second device after selecting a temperature of T 2 by comparative studies of sample A obtained from a given blood sample and placed in a second device and this sample in which hemoglobin was obtained by the method (1).
Количество эритроцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:The number of red blood cells in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
RBC=K4α,RBC = K 4 α,
где RBC - количество эритроцитов в 1 мл цельной крови;where RBC is the number of red blood cells in 1 ml of whole blood;
α - коэффициент поглощения ультразвука в образце А, измеренный во втором устройстве одновременно со скоростью его прохождения в физиологическом растворе в первом устройстве,α is the absorption coefficient of ultrasound in sample A, measured in the second device simultaneously with the speed of its passage in physiological saline in the first device,
K4 - коэффициент пропорциональности.K 4 - coefficient of proportionality.
Последний получен общепринятым образом для конкретного второго устройства после выбора температуры Т2 путем сравнительных исследований образца А, полученного из данного образца крови и помещенного во второе устройство, и данного образца и подсчета эритроцитов данного образца крови в камере Горяева (3).The latter was obtained in the generally accepted manner for a specific second device after selecting a temperature of T 2 by comparative studies of sample A obtained from a given blood sample and placed in a second device and this sample and counting red blood cells of this blood sample in a Goryaev’s chamber (3).
Гематокрит определяют по формуле:Hematocrit is determined by the formula:
Ht=К5(V4-V5),Ht = K 5 (V 4 -V 5 ),
где Ht - показатель гематокрита в %;where Ht is the hematocrit in%;
V4 - скорость прохождения ультразвука в образце А, измеренная во втором устройстве одновременно со скоростью ультразвука в физиологическом растворе в первом устройстве,V 4 - the speed of ultrasound in sample A, measured in the second device simultaneously with the speed of ultrasound in saline in the first device,
V5 - скорость прохождения ультразвука в безтромбоцитарной среде, измеренная в первом устройстве,V 5 - the speed of ultrasound in a platelet-free medium, measured in the first device,
К5 - коэффициент пропорциональности.To 5 - the coefficient of proportionality.
Последний получают общепринятым образом для конкретных первого и второго устройств после выбора температур T1 и Т2 (Т2>T1) путем сравнительных исследований образца А из данного образца крови, помещенного во второе устройство, и безтромбоцитарной среды, измеренной в первом устройстве, и исследования образцов цельной крови на гематокритной центрифуге (3).The latter is obtained in the generally accepted manner for the specific first and second devices after selecting temperatures T 1 and T 2 (T 2 > T 1 ) by comparative studies of sample A from a given blood sample placed in the second device and platelet-free medium measured in the first device, and studies of whole blood samples in a hematocrit centrifuge (3).
Скорость оседания эритроцитов определяют по формуле:The erythrocyte sedimentation rate is determined by the formula:
СОЭ=К6(Vmax-Vmin),ESR = K 6 (Vmax-Vmin),
где СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/час,where ESR is the erythrocyte sedimentation rate, mm / h,
Vmax - максимальное значение скорости прохождения ультразвука в образце А, измеренной в течение промежутка времени, на протяжении которого в первое устройство последовательно помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, измеряя в них скорость прохождения ультразвука,Vmax is the maximum value of the ultrasound propagation speed in sample A, measured during the period of time during which the leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are sequentially placed in the first device, measuring the ultrasound propagation velocity in them,
Vmin - минимальное значение скорости ультразвука в образце А, измеренной в течение промежутка времени, на протяжении которого в первое устройство последовательно помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, измеряя в них скорость прохождения ультразвука,Vmin is the minimum value of the ultrasound speed in sample A, measured during the period of time during which the leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are sequentially placed in the first device, measuring the speed of ultrasound passage in them,
К6 - коэффициент пропорциональности.To 6 - the coefficient of proportionality.
Последний получают общепринятым образом для конкретного второго устройства после выбора температуры Т2 путем сравнительных исследований образца А из данного образца крови, помещенного во второе устройство, и данного образца на специальном устройстве для определения СОЭ по методу Панченкова (6).The latter is obtained in the generally accepted manner for a specific second device after selecting the temperature T 2 by comparative studies of sample A from a given blood sample placed in a second device and this sample on a special device for determining ESR according to the Panchenkov method (6).
Средний объем эритроцитов определяют по формуле:The average volume of red blood cells is determined by the formula:
где HGB - концентрация гемоглобина, НСТ - гематокрит.where HGB is the concentration of hemoglobin, HCT is hematocrit.
Среднее содержание гемоглобина в эритроците определяют по формуле:The average hemoglobin content in the red blood cell is determined by the formula:
где HGB - концентрация гемоглобина, RBC- количество эритроцитов.where HGB is the concentration of hemoglobin, RBC is the number of red blood cells.
Среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците определяют по формуле:The average concentration of hemoglobin in the red blood cell is determined by the formula:
где HGB - концентрация гемоглобина, НСТ - гематокрит.where HGB is the concentration of hemoglobin, HCT is hematocrit.
Пример 1. Больной В., 56 лет, диагноз: хроническая почечная недостаточность. Из локтевой вены натощак забирают 5 мл крови в пробирку с К2 ЭДТА, перемешивают и доставляют в лабораторию. К 4 мл крови добавляют 1 мл раствора цитрата натрия и тщательно перемешивают. Получают образец А. Для приготовления лейкоцитарной суспензии к 0,4 мл образца А добавляют 0,7 мл лизирующего раствора, тщательно перемешивают, центрифугируют 3 минуты при 2000 об/мин, полностью отбирают надосадочную среду, добавляют к лейкоцитарному осадку 0,1 мл физиологического раствора. Для получения тромбоцитарной суспензии 1 мл образца А центрифугируют 3 минуты при 2000 об/мин, 0,4 мл надосадочной среды, насыщенной тромбоцитами, отбирают, центрифугируют 3 мин при 5000 об/мин, полностью отбирают надосадочную среду, добавляют к тромбоцитарному осадку 0,1 мл физиологического раствора. Для получения безтромбоцитарной среды надосадочную среду после центрифугирования образца А 3 минуты при 2000 об/мин разводят физиологическим раствором в соотношении 1:3. Затем в акустические ячейки двух аналогичных подключенных к компьютеру устройств для контроля биологических жидкостей с поддерживаемой в них температурой от 15 до 40°С, которая в первом устройстве ниже, чем во втором, помещают физиологический раствор (0,9% раствор хлорида натрия) в первое устройство и образец А во второе устройство, пропускают через них ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц с высокочастотного генератора (например, ГЧ-164), управляемого персональным компьютером, измеряют одновременно скорость прохождения ультразвука в физиологическом растворе и коэффициент его поглощения в образце А. Затем в ячейку первого устройства вместо физиологического раствора последовательно в течение выбранного промежутка времени помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, пропускают ультразвуковой сигнал и измеряют скорость прохождения ультразвука. В течение этого промежутка времени измеряют скорость прохождения ультразвука в образце А.Example 1. Patient C., 56 years old, diagnosis: chronic renal failure. 5 ml of blood is taken from the ulnar vein on an empty stomach in a test tube with K2 EDTA, mixed and delivered to the laboratory. To 4 ml of blood add 1 ml of sodium citrate solution and mix thoroughly. Get sample A. To prepare a white blood cell suspension, 0.4 ml of sample A is added to 0.4 ml of sample A, mix thoroughly, centrifuged for 3 minutes at 2000 rpm, the supernatant is completely taken away, and 0.1 ml of physiological saline solution is added to the white blood cell . To obtain a platelet suspension, 1 ml of sample A is centrifuged for 3 minutes at 2000 rpm, 0.4 ml of platelet-saturated supernatant is removed, centrifuged for 3 minutes at 5000 rpm, the supernatant is completely selected, 0.1 is added to the platelet ml of physiological saline. To obtain platelet-free medium, the supernatant after centrifugation of sample A for 3 minutes at 2000 rpm was diluted with saline in a ratio of 1: 3. Then, in the acoustic cells of two similar devices connected to a computer for controlling biological fluids with a temperature maintained in them from 15 to 40 ° C, which in the first device is lower than in the second, physiological solution (0.9% sodium chloride solution) is placed in the first device and sample A into the second device, ultrasound is passed through them with a frequency varying from 2 to 40 MHz from a high-frequency generator (for example, GCH-164) controlled by a personal computer, the speed of passage is measured simultaneously ultrasound in saline and the absorption coefficient of the sample in the cell A. Subsequently, the first device sequentially during a selected period of time instead of saline was placed leukocyte suspension, and beztrombotsitarnuyu platelet suspension medium is passed ultrasonic signal and measuring the speed of ultrasound transmission. During this period of time, the speed of ultrasound in sample A.
На основании полученных данных определяют концентрацию гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в 1 мл цельной крови, гематокрит и скорость оседания эритроцитов в цельной крови. Количество лейкоцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:Based on the data obtained, the hemoglobin concentration, the number of red blood cells, white blood cells and platelets in 1 ml of whole blood, the hematocrit and the erythrocyte sedimentation rate in whole blood are determined. The number of leukocytes in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
WBC=K1(V2-V1),WBC = K1 (V 2 -V 1 ),
где WBC - количество лейкоцитов в 1 мл цельной крови,where WBC is the number of leukocytes in 1 ml of whole blood,
V1 - скорость прохождения ультразвука в физиологическом растворе,V 1 - the speed of ultrasound in physiological saline,
V2 - скорость прохождения ультразвука в лейкоцитарной суспензии,V 2 - the speed of ultrasound in a leukocyte suspension,
К1 - коэффициент пропорциональности.K1 is the coefficient of proportionality.
Количество тромбоцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:The platelet count in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
PLT=K2(V3-V1),PLT = K 2 (V 3 -V 1 ),
где PLT - количество тромбоцитов в 1 мл цельной крови,where PLT is the number of platelets in 1 ml of whole blood,
V3 - скорость прохождения ультразвука в тромбоцитарной суспензии,V 3 - the speed of ultrasound in a platelet suspension,
V1 - скорость прохождения ультразвука в физиологическом растворе,V 1 - the speed of ultrasound in physiological saline,
К2 - коэффициент пропорциональности.To 2 is the coefficient of proportionality.
Концентрацию гемоглобина определяют по формуле:The concentration of hemoglobin is determined by the formula:
Hb=К3V4,Hb = K 3 V 4 ,
где Hb - концентрация гемоглобина в цельной крови в г/л,where Hb is the concentration of hemoglobin in whole blood in g / l,
V4 - скорость прохождения ультразвука в образце А, измеренная одновременно со скоростью его прохождения в физиологическом растворе,V 4 - the speed of ultrasound in sample A, measured simultaneously with the speed of its passage in physiological saline,
К3 - коэффициент пропорциональности.K 3 is the coefficient of proportionality.
Количество эритроцитов в 1 мл цельной крови определяют по формуле:The number of red blood cells in 1 ml of whole blood is determined by the formula:
RBC= К4α,RBC = K 4 α,
где RBC - количество эритроцитов в 1 мл цельной крови,where RBC is the number of red blood cells in 1 ml of whole blood,
α - коэффициент поглощения ультразвука в образце А, измеренный одновременно со скоростью его прохождения в физиологическом растворе,α is the absorption coefficient of ultrasound in sample A, measured simultaneously with the speed of its passage in physiological saline,
K4 - коэффициент пропорциональности.K 4 - coefficient of proportionality.
Гематокрит определяют по формуле:Hematocrit is determined by the formula:
Ht=K5(V4-V5),Ht = K 5 (V 4 -V 5 ),
где Ht - показатель гематокрита в %,where Ht is the hematocrit in%,
V4 - скорость прохождения ультразвука в образце А, измеренная одновременно со скоростью его прохождения в физиологическом растворе,V 4 - the speed of ultrasound in sample A, measured simultaneously with the speed of its passage in physiological saline,
V5 - скорость прохождения ультразвука в безтромбоцитарной среде,V 5 - the speed of ultrasound in a platelet-free medium,
К5 - коэффициент пропорциональности.To 5 - the coefficient of proportionality.
Скорость оседания эритроцитов определяют по формуле:The erythrocyte sedimentation rate is determined by the formula:
СОЭ=К6(Vmax-Vmin),ESR = K 6 (Vmax-Vmin),
где СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/час,where ESR is the erythrocyte sedimentation rate, mm / h,
Vmax - максимальное значение скорости прохождения ультразвука в образце А, измеренной в течение промежутка времени, на протяжении которого в первое устройство последовательно помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, измеряя в них скорость прохождения ультразвука,Vmax is the maximum value of the ultrasound propagation speed in sample A, measured during the period of time during which the leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are sequentially placed in the first device, measuring the ultrasound propagation velocity in them,
Vmin - минимальное значение скорости прохождения ультразвука в образце А, измеренной в течение промежутка времени, на протяжении которого в первое устройство последовательно помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, измеряя в них скорость прохождения ультразвука,Vmin is the minimum value of the ultrasound transmission speed in sample A, measured during the period of time during which the leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are successively placed in the first device, measuring the ultrasound transmission speed in them,
К6 - коэффициент пропорциональности.To 6 - the coefficient of proportionality.
Средний объем эритроцитов определяют по формуле:The average volume of red blood cells is determined by the formula:
где HGB - концентрация гемоглобина, НСТ - гематокрит.where HGB is the concentration of hemoglobin, HCT is hematocrit.
Среднее содержание гемоглобина в эритроците определяют по формуле:The average hemoglobin content in the red blood cell is determined by the formula:
где HGB - концентрация гемоглобина, RBC - количество эритроцитов.where HGB is the concentration of hemoglobin, RBC is the number of red blood cells.
Среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците определяют по формуле:The average concentration of hemoglobin in the red blood cell is determined by the formula:
где HGB - концентрация гемоглобина, НСТ - гематокрит.where HGB is the concentration of hemoglobin, HCT is hematocrit.
Результаты измерений выводятся на экран компьютера и могут быть распечатаны. Получают следующие результаты:The measurement results are displayed on a computer screen and can be printed. The following results are obtained:
гемоглобин - 81 г/л,hemoglobin - 81 g / l,
эритроциты - 2,64*1012/л,erythrocytes - 2.64 * 10 12 / l,
гематокрит - 23,5%,hematocrit - 23.5%,
СОЭ - 55 мм/час,ESR - 55 mm / hour,
тромбоциты - 169*109/л,platelets - 169 * 10 9 / l,
лейкоциты - 7,2*109/л,white blood cells - 7.2 * 10 9 / l,
средний объем эритроцита - 89,1 фл,the average volume of the red blood cell is 89.1 fl,
среднее содержание гемоглобина в эритроците - 30,67 пг,the average hemoglobin content in the red blood cell is 30.67 pg,
средняя концентрация гемоглобина в эритроците - 34,42 г/дл,the average concentration of hemoglobin in the red blood cell is 34.42 g / dl,
что соответствует диагнозу больного В.which corresponds to the diagnosis of patient B.
Пример 2. Пациент М., 42 года, диагноз - обследование. Из локтевой вены натощак забирают 5 мл крови в пробирку с К2 ЭДТА, перемешивают и доставляют в лабораторию. К 4 мл крови добавляют 1 мл раствора цитрата натрия и тщательно перемешивают для получения образца А. Для приготовления лейкоцитарной суспензии к 0,4 мл образца А добавляют 0,7 мл лизирующего раствора, тщательно перемешивают, центрифугируют 3 минуты при 2000 об/мин, полностью отбирают надосадочную среду, добавляют к лейкоцитарному осадку 0,1 мл физиологического раствора. Перед заливкой в первое устройство для контроля биологических жидкостей суспензию тщательно перемешивают. Для получения тромбоцитарной суспензии 1 мл образца А центрифугируют 3 минуты при 2000 об/мин, 0,4 мл надосадочной среды, насыщенной тромбоцитами, отбирают, центрифугируют 3 мин при 5000 об/мин, полностью отбирают надосадочную среду, добавляют к тромбоцитарному осадку 0,1 мл физиологического раствора. Перед заливкой в первое устройство для контроля биологических жидкостей суспензию тщательно перемешивают. Для получения безтромбоцитарной среды надосадочную среду, полученную аналогичным образом, разводят физиологическим раствором в соотношении 1:3. Затем в акустические ячейки двух аналогичных подключенных к компьютеру устройств для контроля биологических жидкостей с поддерживаемой в них температурой от 15 до 40°С, которая в первом устройстве ниже, чем во втором, помещают физиологический раствор (0,9% раствор хлорида натрия) в первое устройство и образец А во второе устройство, пропускают через них ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц, и измеряют одновременно скорость прохождения ультразвука в физиологическом растворе и коэффициент его поглощения в образце А.Example 2. Patient M., 42 years old, diagnosis - examination. 5 ml of blood is taken from the ulnar vein on an empty stomach in a test tube with K2 EDTA, mixed and delivered to the laboratory. To 4 ml of blood add 1 ml of sodium citrate solution and mix thoroughly to obtain sample A. To prepare a white blood cell suspension, 0.4 ml of sample A is added to 0.4 ml of sample A, mix thoroughly, centrifuged for 3 minutes at 2000 rpm, completely the supernatant is taken, 0.1 ml of physiological saline is added to the leukocyte sediment. Before pouring into the first biological fluid control device, the suspension is thoroughly mixed. To obtain a platelet suspension, 1 ml of sample A is centrifuged for 3 minutes at 2000 rpm, 0.4 ml of platelet-saturated supernatant is removed, centrifuged for 3 minutes at 5000 rpm, the supernatant is completely removed, and 0.1 is added to the platelet ml of physiological saline. Before pouring into the first biological fluid control device, the suspension is thoroughly mixed. To obtain a platelet-free medium, the supernatant obtained in a similar manner is diluted with saline in a ratio of 1: 3. Then, in the acoustic cells of two similar devices connected to a computer for controlling biological fluids with a temperature of 15 to 40 ° С maintained in them, which in the first device is lower than in the second, physiological solution (0.9% sodium chloride solution) is placed in the first device and sample A into the second device, ultrasound is passed through them with a frequency varying in the range from 2 to 40 MHz, and the speed of ultrasound propagation in physiological saline and its absorption coefficient in sample A are measured simultaneously.
Затем в ячейку первого устройства вместо физиологического раствора последовательно в течение выбранного промежутка времени помещают лейкоцитарную суспензию, тромбоцитарную суспензию и безтромбоцитарную среду, пропускают ультразвуковой сигнал и измеряют скорость прохождения ультразвука. На протяжении этого промежутка времени в образце А измеряют скорость прохождения ультразвука.Then, in the cell of the first device, instead of physiological saline, a leukocyte suspension, platelet suspension and platelet-free medium are successively placed for a selected period of time, an ultrasonic signal is transmitted and the ultrasound transmission speed is measured. During this period of time, the speed of ultrasound is measured in sample A.
На основании полученных данных и применения формул для определения гемоглобина, гематокрита, количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и скорости оседания эритроцитов получают следущие показатели клинического анализа крови:Based on the data obtained and the use of formulas for determining hemoglobin, hematocrit, the number of red blood cells, white blood cells, platelets and the erythrocyte sedimentation rate, the following blood counts are obtained:
гемоглобин - 146 г/л,hemoglobin - 146 g / l,
эритроциты - 4,45*1012/л,erythrocytes - 4.45 * 10 12 / l,
гематокрит - 41,7%,hematocrit - 41.7%,
СОЭ - 6 мм/час,ESR - 6 mm / hour,
тромбоциты - 320*109/л,platelets - 320 * 10 9 / l,
лейкоциты - 4,8*109/л,white blood cells - 4.8 * 10 9 / l,
средний объем эритроцита - 93,5 фл,the average volume of the red blood cell is 93.5 fl,
среднее содержание гемоглобина в эритроците - 32,87 пг,the average hemoglobin content in the red blood cell is 32.87 pg,
средняя концентрация гемоглобина в эритроците - 35,14 г/дл,the average concentration of hemoglobin in the red blood cell is 35.14 g / dl,
что соответствует норме.which is the norm.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет достаточно точно и быстро определить все показатели общего клинического анализа крови, в том числе скорость оседания эритроцитов.Thus, the proposed method allows you to accurately and quickly determine all the indicators of a general clinical blood test, including the erythrocyte sedimentation rate.
Источники информацииInformation sources
1. Клиническая лабораторная аналитика. Том.2. Под редакцией В.В.Меньшикова. Москва, Лабинформ-РАМЛД, 1999 г., стр.9-11.1. Clinical laboratory analytics. Volume 2. Edited by V.V. Menshikov. Moscow, Labinform-RAMLD, 1999, pp. 9-11.
2. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. Лабораторная гематология. Москва, ЮНИМЕД-пресс, 2002 г., стр.68.2. Lugovskaya S.A., Morozova V.T., Postman M.E., Dolgov V.V. Laboratory hematology. Moscow, UNIMED-press, 2002, p. 68.
3. Клиническая лабораторная аналитика. Том.2. Под редакцией В.В.Меньшикова. Москва, Лабинформ-РАМЛД, 1999 г., стр.13-15, 34-40.3. Clinical laboratory analytics. Volume 2. Edited by V.V. Menshikov. Moscow, Labinform-RAMLD, 1999, pp. 13-15, 34-40.
4. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. Лабораторная гематология, Москва, ЮНИМЕД-пресс, 2002 г., стр.81.4. Lugovskaya S.A., Morozova V.T., Postman M.E., Dolgov V.V. Laboratory hematology, Moscow, UNIMED-press, 2002, p. 81.
5. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. Лабораторная гематология, Москва, ЮНИМЕД-пресс, 2002 г., стр.83-85.5. Lugovskaya S.A., Morozova V.T., Postman M.E., Dolgov V.V. Laboratory hematology, Moscow, UNIMED-press, 2002, pp. 83-85.
6. Клиническая лабораторная аналитика. Том.2. Под редакцией В.В.Меньшикова. Москва, Лабинформ-РАМЛД, 1999 г., стр.34-40.6. Clinical laboratory analytics. Volume 2. Edited by V.V. Menshikov. Moscow, Labinform-RAMLD, 1999, pp. 34-40.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005105884/15A RU2289133C1 (en) | 2005-03-03 | 2005-03-03 | Method for determining hemoglobin, erythrocytes, leukocytes, blood platelets quantity, hematokrit and erythrocyte sedimentation rate in whole blood |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005105884/15A RU2289133C1 (en) | 2005-03-03 | 2005-03-03 | Method for determining hemoglobin, erythrocytes, leukocytes, blood platelets quantity, hematokrit and erythrocyte sedimentation rate in whole blood |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2289133C1 true RU2289133C1 (en) | 2006-12-10 |
Family
ID=37665688
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005105884/15A RU2289133C1 (en) | 2005-03-03 | 2005-03-03 | Method for determining hemoglobin, erythrocytes, leukocytes, blood platelets quantity, hematokrit and erythrocyte sedimentation rate in whole blood |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2289133C1 (en) |
-
2005
- 2005-03-03 RU RU2005105884/15A patent/RU2289133C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MOOG R. et al. «Collection of WBC-reduced single-donor PLT concentrates with a new blood cell separator: results of a multicenter study», Transfusion. 2003, Aug; 43(8): 1107-1114. * |
| MOOG R. et al., «Evaluation of a concurrent multicomponent collection system for the collection and storage of WBC-reduced RBC apheresis concentrates». Transfusion. 2001, Sep; Vol.41(9): p.1159-1164. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6127184A (en) | Calibration of a whole blood sample analyzer | |
| Bain et al. | Basic haematological techniques | |
| CN103471982B (en) | Blood cell analysis chip, analyzer and analysis method | |
| US7771658B2 (en) | Disposable cartridge for characterizing particles suspended in a liquid | |
| US9176121B2 (en) | Identification of blood elements using inverted microscopy | |
| Clark et al. | Manual, semiautomated, and point-of-care testing in hematology | |
| US5071247A (en) | Method for analysis of blood platelet aggregations and apparatus therefor | |
| Brittin et al. | Automated optical counting of blood platelets | |
| Erhabor et al. | Evaluation of the QBC Star centrifugal three-part differential haematology system | |
| JP4704036B2 (en) | Disposable cartridge for characterizing particles suspended in liquid | |
| EP0635131A1 (en) | Apparatus for analysing blood and other samples | |
| RU2289133C1 (en) | Method for determining hemoglobin, erythrocytes, leukocytes, blood platelets quantity, hematokrit and erythrocyte sedimentation rate in whole blood | |
| Stephen et al. | Analytical comparison between microhematocrit and automated methods for packed cell volume (PCV) determination | |
| Dalton JR et al. | A side-by-side evaluation of four platelet-counting instruments | |
| Piva et al. | Determination of the length of sedimentation reaction (erythrocyte sedimentation rate) in non-anticoagulated blood with the Microtest 1 | |
| JP6729558B2 (en) | ELECTRICAL CHARACTERISTIC MEASURING DEVICE, ELECTRICAL CHARACTERISTIC MEASURING METHOD, BLOOD CONDITION ANALYSIS SYSTEM, AND ELECTRICAL CHARACTERISTIC MEASURING PROGRAM FOR IMPLEMENTING THE METHOD IN A COMPUTER | |
| Clark et al. | Routine and point-of-care testing in hematology: Manual and semiautomated methods | |
| EP4187228A1 (en) | System, apparatus, and method for measuring erythrocyte sedimentation rate | |
| Passos et al. | Red blood cell sedimentation rate measurements in a high aspect ratio microchannel | |
| Pannu et al. | Warfarin related nephropathy: a case report from a tertiary hospital of north India and review of literature | |
| CN220473302U (en) | Cell analyzer capable of measuring erythrocyte osmotic fragility | |
| Tanaka et al. | Automated hematology analyzer XE-5000–overview and basic performance | |
| Clark et al. | Manual, Semiautomated, and | |
| Walter et al. | A rapid semiautomatic system of chemical analysis using true microspecimens | |
| Clark et al. | PART III Laboratory Evaluation of Blood Cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070304 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20100427 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190304 |