RU2283862C2 - Цирковирус свиней типа ii и его применение - Google Patents
Цирковирус свиней типа ii и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2283862C2 RU2283862C2 RU2000111496A RU2000111496A RU2283862C2 RU 2283862 C2 RU2283862 C2 RU 2283862C2 RU 2000111496 A RU2000111496 A RU 2000111496A RU 2000111496 A RU2000111496 A RU 2000111496A RU 2283862 C2 RU2283862 C2 RU 2283862C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pig
- immunogenic composition
- circovirus
- type
- virus
- Prior art date
Links
- 241000202347 Porcine circovirus Species 0.000 title abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 78
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 70
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 54
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 51
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 48
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 44
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 30
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 30
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 6
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims abstract 7
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims abstract 5
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 143
- 241001533384 Circovirus Species 0.000 claims description 111
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 59
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 51
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 47
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 42
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 42
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 42
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 42
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 36
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 36
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 29
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 claims description 27
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 24
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 21
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 17
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 15
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 14
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 12
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 102100031725 Cortactin-binding protein 2 Human genes 0.000 claims description 11
- 101710197985 Probable protein Rev Proteins 0.000 claims description 11
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 claims description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 11
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 10
- 101000748061 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 16.1 kDa protein Proteins 0.000 claims description 9
- 101000947615 Clostridium perfringens Uncharacterized 38.4 kDa protein Proteins 0.000 claims description 9
- 101000964391 Enterococcus faecalis UPF0145 protein Proteins 0.000 claims description 9
- 101000748063 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 11.1 kDa protein in rep-hol intergenic region Proteins 0.000 claims description 9
- 101000790840 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 49.5 kDa protein in cps region Proteins 0.000 claims description 9
- 101710110895 Uncharacterized 7.3 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 8
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 claims description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 7
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 6
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 5
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 5
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 claims description 4
- 201000008283 Atrophic Rhinitis Diseases 0.000 claims description 4
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039088 Rhinitis atrophic Diseases 0.000 claims description 4
- WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N avridine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CCCN(CCO)CCO)CCCCCCCCCCCCCCCCCC WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 claims description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 4
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 4
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 3
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 3
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 229950010555 avridine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 2
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 claims description 2
- 241000188845 Porcine adenovirus Species 0.000 claims description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 claims 7
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 claims 6
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims 6
- 101000787133 Acidithiobacillus ferridurans Uncharacterized 12.3 kDa protein in mobL 3'region Proteins 0.000 claims 5
- 101000827603 Bacillus phage SPP1 Uncharacterized 10.2 kDa protein in GP2-GP6 intergenic region Proteins 0.000 claims 5
- 101000977786 Lymantria dispar multicapsid nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 9.7 kDa protein in PE 3'region Proteins 0.000 claims 5
- 101001113905 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P4 Proteins 0.000 claims 5
- 241001673669 Porcine circovirus 2 Species 0.000 claims 3
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims 3
- 101000977065 Acidithiobacillus ferridurans Uncharacterized 11.6 kDa protein in mobS 3'region Proteins 0.000 claims 2
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 claims 2
- 101000861180 Cupriavidus necator (strain ATCC 17699 / DSM 428 / KCTC 22496 / NCIMB 10442 / H16 / Stanier 337) Uncharacterized protein H16_B0147 Proteins 0.000 claims 2
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 claims 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 2
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 claims 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims 2
- 101000818108 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 81.3 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000787132 Acidithiobacillus ferridurans Uncharacterized 8.2 kDa protein in mobL 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000827262 Acidithiobacillus ferrooxidans Uncharacterized 18.9 kDa protein in mobE 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000811747 Antithamnion sp. UPF0051 protein in atpA 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000666833 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 20.8 kDa protein in FGF-VUBI intergenic region Proteins 0.000 claims 1
- 101000977023 Azospirillum brasilense Uncharacterized 17.8 kDa protein in nodG 5'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000977027 Azospirillum brasilense Uncharacterized protein in nodG 5'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000827607 Bacillus phage SPP1 Uncharacterized 8.5 kDa protein in GP2-GP6 intergenic region Proteins 0.000 claims 1
- 101000961975 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 13.4 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000962005 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 23.6 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000961984 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 30.3 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000964407 Caldicellulosiruptor saccharolyticus Uncharacterized 10.7 kDa protein in xynB 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 208000005753 Circoviridae Infections Diseases 0.000 claims 1
- 101000644901 Drosophila melanogaster Putative 115 kDa protein in type-1 retrotransposable element R1DM Proteins 0.000 claims 1
- 101000785191 Drosophila melanogaster Uncharacterized 50 kDa protein in type I retrotransposable element R1DM Proteins 0.000 claims 1
- 101000747704 Enterobacteria phage N4 Uncharacterized protein Gp1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000747702 Enterobacteria phage N4 Uncharacterized protein Gp2 Proteins 0.000 claims 1
- 101000861206 Enterococcus faecalis (strain ATCC 700802 / V583) Uncharacterized protein EF_A0048 Proteins 0.000 claims 1
- 101000769180 Escherichia coli Uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000758599 Escherichia coli Uncharacterized 14.7 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000912350 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) DNA N-6-adenine-methyltransferase Proteins 0.000 claims 1
- 101000768777 Haloferax lucentense (strain DSM 14919 / JCM 9276 / NCIMB 13854 / Aa 2.2) Uncharacterized 50.6 kDa protein in the 5'region of gyrA and gyrB Proteins 0.000 claims 1
- 101000607404 Infectious laryngotracheitis virus (strain Thorne V882) Protein UL24 homolog Proteins 0.000 claims 1
- 101000790844 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 24.8 kDa protein in cps region Proteins 0.000 claims 1
- 101000735632 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 8.8 kDa protein in aacA4 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000768930 Lactococcus lactis subsp. cremoris Uncharacterized protein in pepC 5'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000976301 Leptospira interrogans Uncharacterized 35 kDa protein in sph 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000976302 Leptospira interrogans Uncharacterized protein in sph 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000778886 Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar Lai (strain 56601) Uncharacterized protein LA_2151 Proteins 0.000 claims 1
- 101000658690 Neisseria meningitidis serogroup B Transposase for insertion sequence element IS1106 Proteins 0.000 claims 1
- 101000748660 Pseudomonas savastanoi Uncharacterized 21 kDa protein in iaaL 5'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000584469 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P1 Proteins 0.000 claims 1
- 101001121571 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P2 Proteins 0.000 claims 1
- 241000287231 Serinus Species 0.000 claims 1
- 101000818100 Spirochaeta aurantia Uncharacterized 12.7 kDa protein in trpE 5'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000818096 Spirochaeta aurantia Uncharacterized 15.5 kDa protein in trpE 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000818098 Spirochaeta aurantia Uncharacterized protein in trpE 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000766081 Streptomyces ambofaciens Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in unstable DNA locus Proteins 0.000 claims 1
- 101001026590 Streptomyces cinnamonensis Putative polyketide beta-ketoacyl synthase 2 Proteins 0.000 claims 1
- 101001037658 Streptomyces coelicolor (strain ATCC BAA-471 / A3(2) / M145) Glucokinase Proteins 0.000 claims 1
- 101000804403 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized HIT-like protein Synpcc7942_1390 Proteins 0.000 claims 1
- 101000750910 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator Synpcc7942_2319 Proteins 0.000 claims 1
- 101000750896 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized protein Synpcc7942_2318 Proteins 0.000 claims 1
- 101000644897 Synechococcus sp. (strain ATCC 27264 / PCC 7002 / PR-6) Uncharacterized protein SYNPCC7002_B0001 Proteins 0.000 claims 1
- 101710193546 Tegument protein VP16 homolog Proteins 0.000 claims 1
- 101000916321 Xenopus laevis Transposon TX1 uncharacterized 149 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000916336 Xenopus laevis Transposon TX1 uncharacterized 82 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101001000760 Zea mays Putative Pol polyprotein from transposon element Bs1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000760088 Zymomonas mobilis subsp. mobilis (strain ATCC 10988 / DSM 424 / LMG 404 / NCIMB 8938 / NRRL B-806 / ZM1) 20.9 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000678262 Zymomonas mobilis subsp. mobilis (strain ATCC 10988 / DSM 424 / LMG 404 / NCIMB 8938 / NRRL B-806 / ZM1) 65 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 208000010399 Wasting Syndrome Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 11
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 101000768957 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 37.2 kDa protein Proteins 0.000 description 7
- 101000823746 Acidianus ambivalens Uncharacterized 17.7 kDa protein in bps2 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000916369 Acidianus ambivalens Uncharacterized protein in sor 5'region Proteins 0.000 description 7
- 101000769342 Acinetobacter guillouiae Uncharacterized protein in rpoN-murA intergenic region Proteins 0.000 description 7
- 101000823696 Actinobacillus pleuropneumoniae Uncharacterized glycosyltransferase in aroQ 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000786513 Agrobacterium tumefaciens (strain 15955) Uncharacterized protein outside the virF region Proteins 0.000 description 7
- 101000618005 Alkalihalobacillus pseudofirmus (strain ATCC BAA-2126 / JCM 17055 / OF4) Uncharacterized protein BpOF4_00885 Proteins 0.000 description 7
- 102100020724 Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 7
- 101000967489 Azorhizobium caulinodans (strain ATCC 43989 / DSM 5975 / JCM 20966 / LMG 6465 / NBRC 14845 / NCIMB 13405 / ORS 571) Uncharacterized protein AZC_3924 Proteins 0.000 description 7
- 101000823761 Bacillus licheniformis Uncharacterized 9.4 kDa protein in flaL 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000819719 Bacillus methanolicus Uncharacterized N-acetyltransferase in lysA 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000789586 Bacillus subtilis (strain 168) UPF0702 transmembrane protein YkjA Proteins 0.000 description 7
- 101000792624 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YbxH Proteins 0.000 description 7
- 101000790792 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YckC Proteins 0.000 description 7
- 101000819705 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxR Proteins 0.000 description 7
- 101000948218 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YtxJ Proteins 0.000 description 7
- 101000718627 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Putative RNA polymerase sigma-G factor Proteins 0.000 description 7
- 101000641200 Bombyx mori densovirus Putative non-structural protein Proteins 0.000 description 7
- 101000947633 Claviceps purpurea Uncharacterized 13.8 kDa protein Proteins 0.000 description 7
- 101000948901 Enterobacteria phage T4 Uncharacterized 16.0 kDa protein in segB-ipI intergenic region Proteins 0.000 description 7
- 101000805958 Equine herpesvirus 4 (strain 1942) Virion protein US10 homolog Proteins 0.000 description 7
- 101000790442 Escherichia coli Insertion element IS2 uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 description 7
- 101000788354 Escherichia phage P2 Uncharacterized 8.2 kDa protein in gpA 5'region Proteins 0.000 description 7
- 101000770304 Frankia alni UPF0460 protein in nifX-nifW intergenic region Proteins 0.000 description 7
- 101000797344 Geobacillus stearothermophilus Putative tRNA (cytidine(34)-2'-O)-methyltransferase Proteins 0.000 description 7
- 101000748410 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in fumA 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000772675 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) UPF0438 protein HI_0847 Proteins 0.000 description 7
- 101000631019 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Uncharacterized protein HI_0350 Proteins 0.000 description 7
- 101000768938 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 8.9 kDa protein in int-C1 intergenic region Proteins 0.000 description 7
- 101000785414 Homo sapiens Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 7
- 101000782488 Junonia coenia densovirus (isolate pBRJ/1990) Putative non-structural protein NS2 Proteins 0.000 description 7
- 101000811523 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 55.8 kDa protein in cps region Proteins 0.000 description 7
- 101000818409 Lactococcus lactis subsp. lactis Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in lacX 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000878851 Leptolyngbya boryana Putative Fe(2+) transport protein A Proteins 0.000 description 7
- 101000758828 Methanosarcina barkeri (strain Fusaro / DSM 804) Uncharacterized protein Mbar_A1602 Proteins 0.000 description 7
- 101001122401 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF3 Proteins 0.000 description 7
- 101001055788 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) Pentapeptide repeat protein MfpA Proteins 0.000 description 7
- 101000740670 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Protein C42 Proteins 0.000 description 7
- 101000769182 Photorhabdus luminescens Uncharacterized protein in pnp 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000961392 Pseudescherichia vulneris Uncharacterized 29.9 kDa protein in crtE 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000731030 Pseudomonas oleovorans Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase 2 Proteins 0.000 description 7
- 101001065485 Pseudomonas putida Probable fatty acid methyltransferase Proteins 0.000 description 7
- 101000711023 Rhizobium leguminosarum bv. trifolii Uncharacterized protein in tfuA 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000948156 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 47.3 kDa protein in thcA 5'region Proteins 0.000 description 7
- 101000917565 Rhodococcus fascians Uncharacterized 33.6 kDa protein in fasciation locus Proteins 0.000 description 7
- 101000790284 Saimiriine herpesvirus 2 (strain 488) Uncharacterized 9.5 kDa protein in DHFR 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000936719 Streptococcus gordonii Accessory Sec system protein Asp3 Proteins 0.000 description 7
- 101000788499 Streptomyces coelicolor Uncharacterized oxidoreductase in mprA 5'region Proteins 0.000 description 7
- 101001102841 Streptomyces griseus Purine nucleoside phosphorylase ORF3 Proteins 0.000 description 7
- 101000708557 Streptomyces lincolnensis Uncharacterized 17.2 kDa protein in melC2-rnhH intergenic region Proteins 0.000 description 7
- 101000649826 Thermotoga neapolitana Putative anti-sigma factor antagonist TM1081 homolog Proteins 0.000 description 7
- 101000827562 Vibrio alginolyticus Uncharacterized protein in proC 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000778915 Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6 (strain RIMD 2210633) Uncharacterized membrane protein VP2115 Proteins 0.000 description 7
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 7
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000833492 Homo sapiens Jouberin Proteins 0.000 description 5
- 101000651236 Homo sapiens NCK-interacting protein with SH3 domain Proteins 0.000 description 5
- 102100024407 Jouberin Human genes 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 4
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 description 3
- 101710159752 Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase subunit PhaE Proteins 0.000 description 3
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 description 3
- -1 Quil A saponin Chemical class 0.000 description 3
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000276427 Poecilia reticulata Species 0.000 description 2
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000621943 Acholeplasma phage L2 Probable integrase/recombinase Proteins 0.000 description 1
- 101000818123 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 17.2 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000818089 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 25.6 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000618348 Allochromatium vinosum (strain ATCC 17899 / DSM 180 / NBRC 103801 / NCIMB 10441 / D) Uncharacterized protein Alvin_0065 Proteins 0.000 description 1
- 101000781117 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 12.4 kDa protein in CTL-LEF2 intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000770875 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 14.2 kDa protein in PK1-LEF1 intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 241000201370 Autographa californica nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 1
- 101000708323 Azospirillum brasilense Uncharacterized 28.8 kDa protein in nifR3-like 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000770311 Azotobacter chroococcum mcd 1 Uncharacterized 19.8 kDa protein in nifW 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000748761 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized MFS-type transporter YcxA Proteins 0.000 description 1
- 101000765620 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxP Proteins 0.000 description 1
- 101000916134 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YqxJ Proteins 0.000 description 1
- 241000725138 Banana bunchy top virus Species 0.000 description 1
- 101000754349 Bordetella pertussis (strain Tohama I / ATCC BAA-589 / NCTC 13251) UPF0065 protein BP0148 Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101000827633 Caldicellulosiruptor sp. (strain Rt8B.4) Uncharacterized 23.9 kDa protein in xynA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000736909 Campylobacter jejuni Probable nucleotidyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 1
- 241000725585 Chicken anemia virus Species 0.000 description 1
- 241001533399 Circoviridae Species 0.000 description 1
- 101000947628 Claviceps purpurea Uncharacterized 11.8 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000686796 Clostridium perfringens Replication protein Proteins 0.000 description 1
- 241000252095 Congridae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 101000788129 Escherichia coli Uncharacterized protein in sul1 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000788370 Escherichia phage P2 Uncharacterized 12.9 kDa protein in GpA 3'region Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000787096 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in gldA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000941423 Grom virus Species 0.000 description 1
- 101000818121 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 18.2 kDa protein in rep-hol intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000976889 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 19.2 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000748060 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 8.3 kDa protein in rep-hol intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000623276 Herpetosiphon aurantiacus Uncharacterized 10.2 kDa protein in HgiBIM 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000623175 Herpetosiphon aurantiacus Uncharacterized 10.2 kDa protein in HgiCIIM 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000626850 Herpetosiphon aurantiacus Uncharacterized 10.2 kDa protein in HgiEIM 5'region Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 101000827627 Klebsiella pneumoniae Putative low molecular weight protein-tyrosine-phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101000790842 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 65.4 kDa protein in cps region Proteins 0.000 description 1
- 101000768313 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized membrane protein in cps region Proteins 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101000804418 Methanothermobacter thermautotrophicus (strain ATCC 29096 / DSM 1053 / JCM 10044 / NBRC 100330 / Delta H) Uncharacterized protein MTH_1463 Proteins 0.000 description 1
- 101001130841 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF5 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101000781204 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Uncharacterized 36.6 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000770870 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Uncharacterized 37.2 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040307 Protein FAM3B Human genes 0.000 description 1
- 241001092473 Quillaja Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 101000974028 Rhizobium leguminosarum bv. viciae (strain 3841) Putative cystathionine beta-lyase Proteins 0.000 description 1
- 101000756519 Rhodobacter capsulatus (strain ATCC BAA-309 / NBRC 16581 / SB1003) Uncharacterized protein RCAP_rcc00048 Proteins 0.000 description 1
- 101000948219 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 11.5 kDa protein in thcD 3'region Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 101000936711 Streptococcus gordonii Accessory secretory protein Asp4 Proteins 0.000 description 1
- 101000929863 Streptomyces cinnamonensis Monensin polyketide synthase putative ketoacyl reductase Proteins 0.000 description 1
- 101000788468 Streptomyces coelicolor Uncharacterized protein in mprR 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000845085 Streptomyces violaceoruber Granaticin polyketide synthase putative ketoacyl reductase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 101000711771 Thiocystis violacea Uncharacterized 76.5 kDa protein in phbC 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101710198378 Uncharacterized 10.8 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101710134973 Uncharacterized 9.7 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101710095001 Uncharacterized protein in nifU 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000711318 Vibrio alginolyticus Uncharacterized 11.6 kDa protein in scrR 3'region Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000002565 arteriole Anatomy 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003323 beak Anatomy 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N beta-D-glucosamine Chemical compound N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000000713 mesentery Anatomy 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 210000004043 pneumocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000008203 tachypnea Diseases 0.000 description 1
- 206010043089 tachypnoea Diseases 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000000264 venule Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
- A23C19/0321—Propionic acid bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
- A23C19/0323—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin using only lactic acid bacteria, e.g. Pediococcus and Leuconostoc species; Bifidobacteria; Microbial starters in general
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10021—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10061—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2750/10064—Methods of inactivation or attenuation by serial passage
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Предложены 5 штаммов цирковируса свиней типа II (РСЧ II). Штаммы являются возбудителями послеотъемного мультисистемного синдрома истощения (PMWS) у свиней. Кроме того, предложены различные иммуногенные композиции и вакцины, основанные на этих штаммах, предназначенные для борьбы с PMWS. Также предложены векторы, вирусные препараты, клеточные экстракты, супернатанты клеточных культур, содержащие вирус PCV II или его нуклеотидные или белковые компоненты. Предложен также способ диагностики заражения РСЧ II, а также диагностическая композиция и диагностический набор для его осуществления. Изобретение может быть использовано в ветеринарии для борьбы с PMWS свиней. 37 н. и 141 з.п. ф-лы, 7 ил., 5 табл.
Description
Настоящее изобретение касается штаммов нового цирковируса свиней (сокращенно называемого PCV), ответственных за синдром PMWS (многосистемный вастинг-синдром свиней, называемый также много системным вастинг-синдромом после прекращения грудного вскармливания), реагентов и способов, позволяющих их обнаруживать, способов вакцинации и вакцин, а также способов получения этих реагентов и вакцин.
PCV первоначально обнаружили в виде нецитопатогенного загрязнителя в клеточных линиях РК/15 почек свиней. Этот вирус классифицировали как относящийся к Circoviridae, к которым также относятся вирус анемии кур (сокращенно называемый CAV) и вирус PBFDV (вирус болезни клюва и перьев попугаев). Это мелкие (от 15 до 24 нм), не имеющие оболочки вирусы, общей характеристикой которых является то, что они содержат геном в форме кольцевой одноцепочечной ДНК размером от 1,76 до 2,31 т.п.н. Первоначально предполагали, что этот геном кодирует полипептид массой около 30 кДа (Todd et al., Arch. Virol. 1991, 117; 129-135). Однако недавно проведенные исследования показали более сложную транскрипцию (Meehan B.M. et al., 1997, 78; 221-227). Более того, не найдено существенной гомологии в нуклеотидных последовательностях или в обычных антигенных детерминантах между этими тремя известными типами цирковирусов.
PCV, происходящий из клеток РК/15, считается непатогенным. Его последовательность известна из работы В.М.Meehan et al., J. Gen. Virol., 1997 (78) 221-227). Еще совсем недавно некоторые авторы считали, что штаммы PCV могут быть патогенными и связанными с синдромом PMWS (Gupi P.S. Nayar et al., Can. Vet. J., vol.38, 1997: 385-387, и Clark E.G., Proc Am. Assoc. Swine Prac. 1997; 499-501). Nayar et al. с помощью метода ПЦР обнаружили ДНК PCV у свиней, имеющих синдром PMWS. Однако ни один штамм PCV дикого типа до сих пор не выделен.
Синдром PMWS, обнаруженный в Канаде, в Соединенных Штатах Америки и во Франции, клинически характеризуется постепенной потерей веса и такими проявлениями, как тахипноэ (учащенное дыхание без его углубления), одышка и желтуха. С точки зрения патологии он проявляется лимфоцитной или грануломатозной инфильтрацией, лимфаденопатиями и, реже, гепатитом или лимфоцитическим или грануломатозным нефритом (Clark E.G., Proc Am. Assoc. Swine Prac. 1997; 499-501; La Semaine Vétérinaire №26, supplement to La Semaine Vétérinaire 1996 (834); La Semaine Vétérinaire 1997 (857): 54; (Gupi P.S. Nayar et al., Can. Vet. J., vol.38, 1997: 385-387).
Заявителю удалось выделить пять новых штаммов PCV из легочных и ганглиозных образцов, полученных с ферм, расположенных в Канаде, в США (Калифорния) и во Франции (Бретань), далее называемых цирковирусами в соответствии с настоящим изобретением. Эти вирусы обнаружили в местах с патологическими изменениями у свиней с синдромом PMWS, а у здоровых свиней таких вирусов не обнаружено.
Кроме того, заявитель расшифровал геномы четырех из этих штаммов, а именно штаммов, полученных из Канады, США, а также двух штаммов из Франции. Эти штаммы проявляют очень сильную гомологию относительно друг друга на нуклеотидном уровне, превышающую 96%, и гораздо более слабую относительно штамма РК/15 - около 76%. Таким образом, новые штаммы можно считать представителями нового типа цирковирусов свиней, которые здесь называют типом II, а тип I представлен РК/15.
Поэтому предметом настоящего изобретения являются цирковирусы свиней типа II, определенные выше, изолированные или в форме очищенного препарата.
Изобретение касается любых цирковирусов свиней, которые можно выделить из физиологического образца или из тканевого образца, особенно из пораженных болезнью участков, из больных свиней, имеющих синдром PMWS, особенно с помощью способа, описанного в примерах, в частности, цирковируса типа II.
Более конкретно, предметом настоящего изобретения являются очищенные препараты пяти штаммов, депонированных в ЕСАСС (Европейской коллекции клеточных культур Центра прикладной микробиологии и научных исследований, Porton Down, Salisbury, Wiltshire S54 OJG, United Kingdom), в четверг 2 октября 1997:
- коллекционный № V97100219 (называемый здесь Imp.1008PCV);
- коллекционный № V97100218 (называемый здесь Imp.1010PCV);
- коллекционный № V97100217 (называемый здесь Imp.999PCV);
и полученных в пятницу 16 января 1998:
- коллекционный № V98011608 (называемый здесь Imp.1011-48285);
- коллекционный № V98011609 (называемый здесь Imp.1011-48121).
Изобретение ставит своей целью рассмотрение цирковирусов свиней, изолированных из больной свиньи, и/или цирковирусов, имеющих значительное серологическое подобие со штаммами по настоящему изобретению, и/или цирковирусов, перекрестно гибридизующихся со штаммами по настоящему изобретению, в условиях такой степени строгости, чтобы они не позволяли осуществление гибридизации со штаммом PCV РК/15.
Вирусные штаммы, выделенные из физиологического образца или из тканевого образца, особенно из пораженного болезнью участка, из свиньи, имеющей синдром PMWS, можно успешно размножать на клеточных линиях, особенно таких, как клеточные линии почек свиней, в частности клетки РК/15, свободные от контаминации (в частности, для PCV, а также для пестивирусов, аденовирусов свиней и парвовирусов свиней), с целью их размножения и особенно с целью продуцирования ими антигена, целого (например, вируса) и/или его субъединиц (например, полипептидов).
Очень примечательно и неожиданно, что эти изоляты оказались весьма продуктивными в культуре клеткок РК/15, что имеет несомненное преимущество для продуцирования вируса или антигена, в частности для выработки инактивированной вакцины.
Предметом настоящего изобретения являются также препараты цирковирусов, изолированных после пассирования на клетках, особенно на клеточных линиях, например на клетках РК/15, культивируемых in vitro при инфецировании по меньшей мере одним из цирковирусов по настоящему изобретению или любым цирковирусом свиней, который можно изолировать из физиологического образца или тканевого образца, особенно из пораженных болезнью участков, из свиней, имеющих синдром PMWS. Целью изобретения также является культуральный экстракт или надосадочная жидкость, которые могут быть очищены с помощью стандартных методов, и в общем любые антигенные препараты, полученные из культур in vitro.
Предметом изобретения также являются иммуногенно-активные ингредиенты и вакцины, содержащие по меньшей мере один антиген, как определено выше.
Они могут представлять собой иммуногенно-активные ингредиенты, основанные на аттенюированных (ослабленных) живых целых вирусах, или вакцины, полученные с помощью этих активных ингредиентов, причем аттенюирование (ослабление) проводят обычными способами, например путем пассирования на клетках, предпочтительно путем пассирования на клетках свиньи, особенно на линиях, таких как клеточная линия РК/15 (используя, например, от 50 до 150, особенно порядка 100 пассажей). Эти вакцины, как правило, включают носитель или разбавитель, пригодный с ветеринарной точки зрения, необязательно адъювант, пригодный с ветеринарной точки зрения, а также необязательно стабилизатор для лиофилизации.
Эти вакцины предпочтительно содержат от 103 до 106 TCID50.
Они могут представлять собой иммуногенно-активные ингредиенты или вакцины, основанные на антигене цирковируса в соответствии с настоящим изобретением, в инактивированном состоянии. Кроме того, вакцина включает носитель или разбавитель, пригодные с ветеринарной точки зрения, с необязательной добавкой адъюванта, пригодного с ветеринарной точки зрения.
Цирковирусы по настоящему изобретению с фракциями, которые могут присутствовать, инактивируют в соответствии со способами, известными специалистам в данной области техники. Инактивацию предпочтительно осуществляют химически путем, например путем обработки антигена химическим агентом, таким как формальдегид (формалин), параформальдегид, β-пропиолактон или этиленимин или его производные. Предпочтительным способом инактивации для данного изобретения является обработка химическим агентом, в частности этиленимином или β-пропиолактоном.
Предпочтительно, к инактивированной вакцине по настоящему изобретению добавляют адъювант, который лучше использовать в форме эмульсий, например эмульсии воды в масле или масла в воде, в соответствии со способами, хорошо известными специалистам в данной области техники. Возможно также, чтобы адъювант поступал из обычного адъювантного соединения, включенного в активный ингредиент.
Из адъювантов, которые можно использовать, в качестве примеров можно упомянуть гидроксид алюминия, сапонины (например, сапонин Quillaja или Quil А; см. Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach, 1995, edited by Michael F. Powel and Mark J. Newman, Plennum Press, New-York and London, p.210), Avridine® (Vaccine Design, p.148), DDA (бромид диметилдиоктадецил-аммония, Vaccine Design, p.157), полифосфазен (Vaccine Design, p.204) или в качестве альтернативы - эмульсии масла в воде, основанные на минеральном масле, сквалене (например, эмульсия SPT, Vaccine Design, p.147), сквален (например, MF59, Vaccine Design, p.183), или эмульсии воды в масле, основанные на метаболизируемом масле (предпочтительно в соответствии с публикацией WO-A-94 20071), а также эмульсии, описанные в US-A-5422109. Можно также выбрать комбинации адъювантов, например Avridine® или DDA, с эмульсией.
Эти вакцины предпочтительно содержат от 106 до 108 TCID50.
Адъюванты для живых вакцин можно выбрать из адъювантов, приведенных для инактивированных вакцин. Предпочтительны эмульсии. К адъювантам, указанным для инактивированных вакцин, можно добавить адъюванты, описанные в публикации WO-A-9416681.
В качестве стабилизатора для лиофилизации, можно упомянуть, к примеру, SPGA (Bovarnik et al., J. Bacteriology 59, 509, 950), углеводы, такие как сорбит, маннит, крахмал, сахароза, декстран или глюкоза, белки, такие как альбумин или казеин, производные этих соединений, или буферы, такие как фосфаты щелочных металлов.
Кроме того, заявитель получил геномы четырех изолятов, обозначенные как последовательности (ПОСЛЕДОВ.) №№ от 1 до 4 и необязательно №6.
Поэтому предметом настоящего изобретения является фрагмент ДНК, содержащий все эти последовательности или их часть. Не стоит и говорить, что изобретение автоматически охватывает все эквивалентные последовательности, например последовательности, которые не изменяют функциональные свойства или штамм-специфичность описанной последовательности или кодируемых этой последовательностью полипептидов. Безусловно, изобретение также включает последовательности, отличающиеся вследствие вырожденности кода.
Изобретение также охватывает последовательности, эквивалентные в том смысле, что они способны гибридизоваться с вышеописанной последовательностью в условиях высокой степени строгости и/или имеют высокую гомологию со штаммами по настоящему изобретению и принадлежат к группе II, определенной выше.
Эти последовательности и их фрагменты можно удобно использовать для экспрессии полипептидов in vitro или in vivo с помощью соответствующих векторов.
В частности, открытые рамки считывания, образующие фрагменты ДНК в соответствии с настоящим изобретением, которые можно использовать для получения этого эффекта, идентифицировали на геномной последовательности цирковирусов типа II. Изобретение касается любого полипептида, содержащего по меньшей мере одну из этих открытых рамок считывания (соответствующую аминокислотную последовательность). Предпочтительно, изобретение касается белка, по существу состоящего из ORF4, ORF7, ORF10 или ORF13 (ORF - открытая рамка считывания).
Для экспрессии субъединиц in vitro в качестве средства экспрессии предпочтительно используют Е. coli или бакуловирус (US-A-4745051). Кодирующую последовательность (или последовательности) или их фрагменты встраивают в геном бакуловируса (нитевидного вируса) (например, baculovirus Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus AcNPV), а затем последний размножают в клетках насекомого, например Spodoptera frugiperda Sf9 (Образец из Американской коллекции клеточных культур АТСС CRL 1711). Субъединицы можно также продуцировать в клетках эукариот, таких как дрожжи (например, Saccharomyces cerevisiae) или в клетках млекопитающих (например, в клетках СНО- яичников китайского хомяка, в клетках ВНК).
Предметом настоящего изобретения также являются полипептиды, продуцируемые in vitro с помощью этих средств экспрессии, а затем необязательно очищаемые в соответствии с обычными методами. Предметом изобретения также является субъединичная (основанная на субъединицах) вакцина, включающая по меньшей мере один полученный таким образом полипептид или фрагмент, в носителе или разбавителе, пригодных с ветеринарной точки зрения, и необязательно адъювант, пригодный с ветеринарной точки зрения.
Для экспрессии in vivo, в целях продуцирования рекомбинантных живых вакцин, кодирующая последовательность или последовательности или их фрагменты встраивают в подходящий вектор экспрессии в условиях, обеспечивающих экспрессию данного полипептида или полипептидов. В качестве подходящих векторов можно использовать живые вирусы, предпочтительно способные к размножению в свиньях, непатогенные для свиней (обладающие естественной или искусственно приданной непатогенностью), в соответствии с методами, хорошо известными специалистам в данной области техники. В частности, можно использовать вирусы герпеса свиней, такие как вирус болезни Ауески (ложного бешенства), аденовирус свиней, вирусы оспы, особенно вирус коровьей оспы, вирус птичьей оспы, вирус оспы канареек, вирус оспы свиней. В качестве векторов можно также использовать плазмидные ДНК (WO-A-9011092, WO-A-9319813, WO-A-9421797, WO-A-9520660).
Предметом настоящего изобретения поэтому также являются векторы и рекомбинантные живые вакцины или плазмидные вакцины (полинуклеотидные или ДНК-вакцины), полученные таким образом, причем эти вакцины включают, кроме того, носитель или разбавитель, пригодный с ветеринарной точки зрения.
Вакцины в соответствии с настоящим изобретением (живые ослабленные, инактивированные, субъединичные, рекомбинантные и плазмидные вакцины) могут включать один или более активных ингредиентов (антигенов) одного или более (2 или 3) цирковирусов в соответствии с настоящим изобретением.
Для каждого вышеописанного типа вакцины настоящее изобретение также предлагает комбинированную вакцинацию против цирковирусов свиней с вакцинацией против других патогенов свиней, в частности против тех, которые могут быть связаны с синдромом PMSW. Поэтому вакцины в соответствии с настоящим изобретением, в частности инактивированные, могут включать другую валентность, соответствующую другому патогену свиней. Среди этих других патогенов свиней, предпочтительно можно назвать PRRS (репродуктивно-респираторный синдром свиней) (специалисты в данной области техники могут обратиться к следующим публикациям: WO-A-93/07898, WO-A-94/18311, FR-A-2709966; С.Chareyre et al., Proceedings of the 15th IPVS Congress, Birmingham, England. 5-9 July 1998, p.139, которые включены в настоящее описание в качестве ссылок) и/или Mycoplasma hyopneumonia (специалисты в данной области техники могут обратиться к следующим публикациям: ЕР-А-597852, ЕР-А-550477, ЕР-А-571-648; О.Martinon et al., р.157, 284, 285 and G.Reynaud et al., p.150, все в вышецитированном издании Proceedings of the 15th IPVS Congress, которые включены в настоящее описание в качестве ссылок). Среди других интересных валентностей можно упомянуть также Actinobacillus pleuropneumoniae, E. coli, атрофический ринит свиней, а также ложное бешенство (болезнь Ауески), холеру свиней, свиной грипп.
Предметом настоящего изобретения также является способ, позволяющий индуцировать у свиней иммунную реакцию на цирковирусы в соответствии с настоящим изобретением. Предметом изобретения, в частности, является способ вакцинации, который эффективен для свиней.
Способ предлагает введение свиньям одной или более порций вышеописанной вакцины. Можно также объединять несколько вышеописанных вакцин в одной и той же схеме вакцинации.
Этот способ применим не только для взрослых свиней, но также и для поросят или для беременных самок. Вакцинация последних делает возможным создание пассивного иммунитета у новорожденных (антитела материнского происхождения).
Изобретение также предлагает возможность диагностики присутствия цирковирусов по настоящему изобретению у свиней. Предметом изобретения поэтому также являются диагностические тесты и способы диагностики, связанные с использованием реагентов, которые будут описаны ниже.
Знание последовательностей различных цирковирусов позволяет определить общие последовательности, что в свою очередь делает возможным получение реагентов, способных распознавать все известные цирковирусы свиней.
Специалисты в данной области техники могут также выбрать фрагменты последовательностей, соответствующие областям, лишь в малой степени проявляющим гомологию или совсем не проявляющим гомологии с соответствующей последовательностью цирковируса РК/15, для того, чтобы поставить конкретный диагноз.
Сопоставление последовательностей позволяет специалистам в данной области техники выбрать реагент в соответствии с их пожеланиями.
Первый реагент состоит из описываемых здесь последовательностей ДНК и их фрагментов, которые, в частности, можно использовать в качестве зондов или праймеров в хорошо известных методах гибридизации или ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Второй реагент состоит из полипептидов, кодируемых этими последовательностями вируса, или экспрессируемых с помощью вектора (см. выше), или синтезированных химическим путем в соответствии с обычными способами синтеза пептидов.
Третий и четвертый реагенты соответственно состоят из поликлональных и моноклональных антител, которые можно получить в соответствии с обычными способами вирусов, полипептидов или фрагментов, экстрагированных или кодируемых последовательностями ДНК.
Эти второй, третий и четвертый реагенты можно использовать в способе диагностики, являющемся одним из предметов данного изобретения, в котором тестируют на образец физиологической жидкости (кровь, плазма, сыворотка и т.п.) или образец ткани (ганглий, печень, легкие, почки и т.п.), полученный от подлежащей тестированию свиньи, на присутствие антигена, специфичного для цирковируса в соответствии с настоящим изобретением, путем поиска и обнаружения либо самого антигена, либо антител, направленных против этого антигена.
Антигены и антитела по настоящему изобретению можно использовать в любом известном лабораторном методе диагностики.
Однако предпочтительно использовать их в методах, которые могут использовать непосредственно в полевых условиях ветеринарный врач, селекционер или владелец животного. Специалисты в данной области техники имеют в своем распоряжении различные лабораторные и полевые методы, и поэтому вполне могут адаптировать к своим условиям применение этого антигена и/или антител в качестве реагента или реагентов для диагностики.
Методами диагностики, которые предпочтительно использовать в рамках настоящего изобретения, являются вестерн-блотинг, иммунофлуоресцентный анализ, ИФА (иммуноферментный анализ) и иммунохроматография.
Что касается использования методов иммунохроматографии, то специалисты могут обратиться, в частности, к публикации Robert F.Zurk et al., Clin. Chem. 31/7, 1144-1150 (1985), а также к патентам и заявкам на патенты WO-A-88/08 534, WO-A-91/12528, ЕР-А-291176, ЕР-А-299428, ЕР-А-291194, ЕР-А-284232, US-A-5120643, US-A-5030558, US-A-5266497, US-A-4740468, US-A-5266497, US-A-4855240, US-A-5451-504, US-A-5141850, US-A-5232835 и US-A-5238652.
Соответственно, предпочтительно осуществлять поиск и обнаружение специфичных антител в образце с помощью непрямого теста, используя конкуренцию или замещение. Чтобы сделать это, в качестве реагента для диагностики используют сам антиген или фрагмент этого антигена, все еще способный распознаваться антителами. Мечение можно успешно осуществлять путем мечения пероксидазой или с помощью особых способов мечения, предпочтительно коллоидным золотом.
Может также быть желательным обнаружение самого антигена в образце с помощью меченого антитела, специфичного для данного антигена. Мечение лучше всего проводить так, как описано выше.
Под антителом, специфичным для антигена, которое можно использовать, в частности, при конкуренции или замещении или для обнаружения самого антигена, подразумеваются моноклональные или поликлональные антитела, специфичные для антигена, фрагменты этих антител, предпочтительно фрагменты Fab или F(ab)'2.
Другим признаком данного изобретения является получение поликлональных или моноклональных антител, специфичных для антигена в соответствии с настоящим изобретением, причем эти антитела затем можно использовать, в частности, в качестве реагентов для диагностики, для обнаружения антигена в образце физиологической жидкости или в образце ткани или даже для обнаружения антител, присутствующих в таких образцах. Изобретение также включает иммунологически функциональные фрагменты этих антител, в частности фрагменты F(ab) или F(ab)'2.
Антитела можно получить обычными способами. Можно, в частности, сослаться на следующие публикации: Antibodies, A Laboratory Manual, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory, USA или J.M.Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press Inc., содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.
В частности, можно, как это известно per se (само по себе), осуществить слияние клеток селезенки мышей, иммунизированных антигеном или по меньшей мере одним из его фрагментов, соответствующими миеломатозными клетками.
Предметом настоящего изобретения является также получение предпочтительно очищенных или частично очищенных, или даже неочищенных моноклональных или поликлональных антител, специфичных для антигена, особенно мышиных или кроличьих антител.
Настоящее изобретение также позволяет определить представляющие интерес эпитопы, особенно на основе описанных здесь последовательностей ДНК, независимо от того, представляют ли данные эпитопы интерес для вакцины или для диагностики. На основе последовательности ДНК генома цирковируса в соответствии с настоящим изобретением специалисты в данной области техники в состоянии определить эпитопы в соответствии с известными методами, например с помощью соответствующей компьютерной программы или метода PEPSCAN. Эпитопы представляют собой иммунодоминантные области белков, расположенные на поверхности белков. Поэтому их могут распознавать антитела и поэтому они особенно применимы в области диагностики либо для получения антител в целях диагностики, либо для продуцирования соответствующих пептидов, которые можно использовать в качестве реагентов для диагностики.
По меньшей мере, эпитоп представляет собой пептид, имеющий от 8 до 9 аминокислот. Обычно предпочтительным является, чтобы эпитоп имел минимум от 13 до 25 аминокислот.
Поэтому специалисты в данной области техники в состоянии, используя один или более этих методов, а также и другие подходящие методы, найти эпитопы для использования пептидов или антител в диагностических целях.
Предметом настоящего изобретения является также набор для диагностики, включающий этот антиген и/или поликлональные или моноклональные антитела, специфичные для этого антигена. В частности, это наборы для диагностики, соответствующие вышеописанным методам диагностики.
Далее изобретение описывается более подробно, с помощью неограничительных, приведенных в качестве примеров вариантов его осуществления со ссылками на чертежи, в которых:
Фиг.1: Последовательность ДНК генома штамма Imp.1011-48121.
Фиг.2: Последовательность ДНК генома штамма Imp.1011-48285.
Фиг.3: Последовательность ДНК генома штамма Imp. 999.
Фиг.4: Последовательность ДНК генома штамма Imp. 1010.
Фиг.5: Сопоставление 4 последовательностей в соответствии с фиг.1-4 с последовательностью штамма PCV РК/15.
Фиг.6: Последовательность ДНК генома штамма Imp.999, определенная при его первой регистрации во Франции 3 октября 1997.
Фиг.7: Сопоставления последовательности фиг.6 с последовательностью штамма РК/15.
Перечень последовательностей, №№ последовательностей.
ПОСЛЕДОВ. №1: Последовательность ДНК генома штамма Imp. 1011-48121.
ПОСЛЕДОВ. №2: Последовательность ДНК генома штамма Imp. 1011-48285.
ПОСЛЕДОВ. №3: Последовательность ДНК генома штамма Imp. 999.
ПОСЛЕДОВ. №4: Последовательность ДНК генома штамма Imp. 1010.
ПОСЛЕДОВ. №5: Последовательность ДНК генома штамма РК/15.
ПОСЛЕДОВ. №6: Последовательность ДНК генома штамма Imp. 999, определенная при его первой регистрации во Франции 3 октября 1997.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1. Культивирование и выделение штаммов цирковирусов свиней.
Образцы тканей отбирали во Франции, в Канаде и в США из легких и лимфатических узлов поросят. Эти поросята проявляли клинические признаки типичного многосистемного вастинг-синдрома после прекращения грудного вскармливания. Чтобы облегчить выделение вирусов, образцы тканей сразу же после аутопсии (вскрытия трупов) замораживали при -70°.
Для выделения вирусов готовили суспензии, содержащие около 15% образца ткани, в содержащей соли минимальной среде по Earl (ЕМЕМ, BioWhittaker UK Ltd., Wokingham, UK), пенициллин (100 мкг/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл) (среда MEM-SA), путем растирания тканей со стерильным песком с помощью ступки и пестика. Измельченный препарат переносили в среду MEM-SA, a затем центрифугировали при 3000 g в течение 30 минут при +4°С, чтобы получить и собрать надосадочную жидкость.
Перед инокуляцией клеточных культур к 2 мл каждой надосадочной жидкости добавляли по 100 мкл хлороформа и непрерывно перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре. Эту смесь затем переносили в микроцентрифужную пробирку, центрифугировали при 3000 g в течение 30 минут, после чего собирали надосадочную жидкость. Надосадочную жидкость использовали в качестве инокулята для экспериментов по выделению вирусов.
Все исследования по выделению вирусов выполняли на клеточных культурах РК/15, для которых было известно, что они не заражены цирковирусом свиней (PCV), пестивирусами, аденовирусами свиней и парвовирусами свиней (Allan G. et al., Pathogenesis of porcine circovirus experimental infections of colostrum-deprived piglets and examination of pig foetal material. Vet. Microbiol. 1995, 44, 49-64).
Выделение цирковирусов свиней осуществляли в соответствии со следующим методом:
Монослои клеток РК/15 диссоциировали посредством трипсинизации (смесью трипсина и версена) из конфлюэнтных (сливающихся) культур, а затем переносили в среду MEM-SA, содержащую 15% фетальной телячьей сыворотки, не загрязненную пестивирусом (среда MEM-G), с конечной концентрацией около 400000 клеток на 1 мл. Фракции этой суспензии аликвотами по 10 мл смешивали с 2-миллилитровыми аликвотами фракций вышеописанных инокулятов и окончательную смесь переносили аликвотами по 6 мл в 2 фальконовских флакона на 25 см2. Затем эти культуры инкубировали при температуре +37°С в течение 18 часов в атмосфере CO2.
После инкубации культуральную среду полуконфлюэнтных монослоев обрабатывали 300 мМ D-глюкозамина (Cat. № G48175, Sigma-Aldrich Company Limited, Poole, UK) (Tischr I. et al., Arch. Virol., 1987, 96, 39-57), затем продолжали инкубацию еще в течение 48-72 часов при +37°С. После этой последней инкубации один из двух фальконовских флаконов для каждого инокулята подвергали трем последовательным циклам замораживания/оттаивания. Клетки РК/15 из оставшихся флаконов обрабатывали раствором смеси трипсина и версена, вновь суспендировали в 20 мл среды MEM-G, а затем инокулировали в фальконовские флаконы на 75 см2 при концентрации 400000 клеток/мл. Затем свежеинокулированные флаконы суперинфецировали путем добавления 5 мл соответствующего лизата, полученного после циклов замораживания/оттаивания.
ПРИМЕР 2. Получение образцов клеточных культур для обнаружения цирковирусов свиней с помощью иммунофлуоресценции или путем гибридизации in situ.
Отбирали 5 мл суперинфецированной суспензии и инокулировали в чашки Петри диаметром 55 мм, в которых находились стерильные обезжиренные покровные стекла. Культуры в флаконах и на покровных стеклах инкубировали при +37°С и обрабатывали глюкозамином, как описано в примере 1. Через 24 до 48 часов после обработки глюкозамином культуры на покровных стеклах фиксировали либо ацетоном в течение 10 минут при комнатной температуре, либо 10%-ным забуференным формальдегидом в течение 4 часов. После этой фиксации все до использования фиксированных стекол для исследований по гибридизации in situ и иммуноцитохимическими методами покровные стекла хранили при -70°С на силикагеле.
ПРИМЕР 3. Методы обнаружения последовательностей PCV посредством гибридизации in situ.
Гибридизацию in situ осуществляли на тканях, взятых у больных свиней и фиксированных формальдегидом, а также на препаратах клеточных культур, инокулированных для выделения вирусов (см. пример 2) и фиксированных на покровных стеклах.
Использовали полные геномные зонды, соответствующие цирковирусам свиней (PCV) PK/15 и инфекционному вирусу анемии кур (CAV). Плазмиду pPCV1, содержащую репликативную форму генома PCV, клонированую в форме одинарной вставки величиной в 1,7 тысяч пар оснований (т.п.о.) (Meehan В. et al. Sequence of porcine circovirus DNA: affinities with plant circoviruses, J. Gen. Virol. 1997, 78, 221-227), использовали в качестве источника вирус-специфической PCV ДНК. Аналогичную плазмиду, рСАА1, содержащую репликативную форму цирковируса птиц CAV размером в 2,3 т.п.о., использовали в качестве отрицательного контроля. Соответствующие глицерольные штоки этих двух плазмид использовали для продуцирования и очистки плазмид методом щелочного лизиса (Sambrook J. et al. Molecular cloning: A laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989) с тем, чтобы далее использовать их в качестве матриц для получения зондов. Цирковирусные зонды, репрезентативные для полного генома PCV и CAV, получали из очищенных плазмид, описанных выше (по 1 мкг для каждого зонда), и из гексануклеотидных праймеров, для которых рандомизированно использовали коммерческий набор нерадиоактивных меток ("DIG DNA labelling kit", Boehringer Mannheim, Lewes, UK), в соответствии с рекомендациями изготовителя.
Меченые дигоксигенином зонды растворяли в 50-100 мкл стерильной воды прежде, чем использовать их для гибридизации in situ.
Образцы тканей больных свиней, заключенные в парафин и фиксированные формальдегидом, а также препараты инфецированных клеточных культур, фиксированные формальдегидом, получали для обнаружения нуклеиновых кислот PCV в соответствии со следующим методом:
Из тканевых блоков, заключенных в парафин, делали срезы толщиной 5 мкм, освобождали их от парафина, а затем дегидрировали в растворах с последовательно уменьшающимися концентрациями спирта. Срезы тканей и клеточные культуры, фиксированные формальдегидом, инкубировали соответственно в течение 15 и 5 минут при +37°С в растворе 0,5% протеиназы К в 0,05 М Трис-HCl-буфере, содержащем 5 мМ EDTA (рН 7,6). Затем предметные стекла с препаратами помещали в 1% раствор глицина в автоклавированной дистиллированной воде на 30 секунд, дважды промывали 0,01 М PBS (физраствором с фосфатным буфером) (рН 7,2) и, наконец, промывали в течение 5 минут в стерильной дистиллированной воде. Затем их окончательно высушивали на открытом воздухе и приводили в контакт с зондами.
Каждый препарат ткани/зонда покрывали чистым обезжиренным покровным стеклом, а затем помещали в печь с температурой +90°С на 10 минут, прикладывали кусок льда на 1 минуту и, наконец, инкубировали в течение 18 часов при +37°С. Затем препараты ненадолго погружали в 2XSSC (рН 7,0), чтобы удалить защитные покровные стекла, после чего дважды по 5 минут промывали 2Х SSC- и, наконец, дважды по 5 минут промывали PBS.
После этих промывок препараты погружали в раствор 0,1 М малеиновой кислоты, 0,15 М NaCl (рН 7,5) (малеиновый буфер) на 10 минут, а затем инкубировали в 1% растворе блокирующего реагента (Cat. №1096176, Boehringer Mannheim, Lewes, East Sussex, UK) в малеиновом буфере в течение 20 минут при +37°С.
Затем препараты инкубировали с 1/250 раствором антидигоксигениновых моноклональных антител (Boehringer Mannheim) в блокирующем буфере в течение 1 часа при +37°С, промывали PBS и, наконец, инкубировали с биотинилированными антимышиными антителами в течение 30 минут при +37°С. Препараты промывали PBS, активность эндогенной пероксидазы блокировали посредством обработки 0,5% раствором перекиси водорода в PBS в течение 20 минут при комнатной температуре. Затем препараты снова промывали PBS и инкубировали с субстратом 3-амино-9-диэтилкарбазоловым (AEC) (Cambridge Bioscience, Cambridge, UK), приготовленным непосредственно перед использованием.
После окончательной промывки водопроводной водой препараты подвергали контрастному окрашиванию гематоксилином, «подсинивали» под водопроводной водой, а затем заливали на покровном стекле для микроскопирования заливочной жидкостью (GVA Mount, Cambridge Bioscience, Cambridge, UK). Контрольные варианты включали использование неподходящего отрицательного зонда (CAV) и положительного зонда (PCV) на образцах, полученных от больных свиней и от здоровых свиней.
ПРИМЕР 4. Метод обнаружения PCV с помощью иммунофлуоресценции
Первоначальный скрининг всех препаратов клеточных культур, фиксированных ацетоном, осуществляли методом непрямой иммунофлуоресценции (IIF) с использованием пула сывороток взрослых свиней в разведении 1/100. Этот пул сывороток включал сыворотки от 25 взрослых свиноматок из Северной Ирландии, а также содержал антитела против широкого спектра вирусов свиней, включая PCV, парвовирус свиней, аденовирус свиней и вирус PRRS (репродуктивно-респираторного синдрома свиней). Анализ методом IIF выполняли путем инкубации сыворотки (разведенной PBS) с клеточными культурами в течение 1 часа при +37°С с последующей двукратной промывкой PBS. Затем клеточные культуры инкубировали с разведенными 1/80 PBS антителами кролика к свиному иммуноглобулину, конъюгированными с изотиоцианатом флуоресцеина (FITC) в течение 1 часа, после чего промывали PBS и заливали в глицериновом буфере перед микроскопическим исследованием под ультрафиолетовым светом.
ПРИМЕР 5. Результаты гибридизации in situ на тканях больных свиней.
Гибридизация in situ, проводившаяся с помощью зонда на основе генома PCV, выделенного из тканей, взятых у французских, канадских и калифорнийских поросят, имеющих патологические изменения, вызванные многосистемным вастинг-синдромом, и зафиксированных формальдегидом, продемонстрировала присутствие нуклеиновых кислот PCV, связанных с пораженными болезнью участками, в нескольких из изученных пораженных болезнью участков. Никаких сигналов не наблюдалось, когда зонды на основе генома PCV использовали на тканях, взятых у здоровых свиней, или когда на тканях больных свиней использовали зонд CAV. Присутствие нуклеиновой кислоты PCV идентифицировали в цитоплазме и ядре многочисленных одноядерных клеток, инфильтрующих пораженные болезнью участки в легких калифорнийских поросят. Было также продемонстрировано присутствие нуклеиновой кислоты PCV в пневмоцитах, бронхиальных и бронхиолярных эпителиальных клетках, а также в эндотелиальных клетках артериол, венулах и лимфатических сосудах.
У больных поросят из Франции присутствие нуклеиновой кислоты PCV обнаружили в цитоплазме многочисленных фолликулярных лимфоцитов и в интрасинусоидальных одноядерных клетках лимфатических узлов. Нуклеиновую кислоту PCV обнаружили также в некоторых синцитиях. В зависимости от результатов обнаружения нуклеиновой кислоты PCV, образцы легких калифорнийских свиней, лимфатических узлов брыжейки французских свиней и органов канадских свиней использовали для выделения новых штаммов цирковирусов свиней.
ПРИМЕР 6. Результаты культивирования клеток с новыми штаммами цирковируса свиней и обнаружение с помощью иммунофлуоресценции
Никакого цитопатического эффекта не наблюдалось в клеточных культурах, инокулированных образцами, взятыми у французских поросят (штамм Imp.1008), у калифорнийских поросят (штамм Imp.999) и у канадских поросят (штамм Imp.1010), проявляющих клинические признаки многосистемного вастинг-синдрома. Однако иммунное мечение препаратов, полученных из инокулированных клеточных культур, фиксированных ацетоном, и с пулом свиных поликлональных сывороток, выявило ядерную флуоресценцию в многочисленных клетках в культурах, инокулированных с использованием легких калифорнийских поросят (штамм Imp.999), с использованием лимфатических узлов брыжейки французских поросят (штамм Imp.1008) и с использованием органов канадских поросят (штамм Imp.1010).
ПРИМЕР 7. Экстрагирование геномной ДНК цирковирусов свиней.
Репликативные формы новых штаммов цирковируса свиней (PCV) получали путем инфецирования клеточных культур РК/15 (см. пример 1) (10 флаконов по 75 см3), собранных после 72-76 часов инкубации и обработанных глюкозамином, как описано для клонирования репликативной формы CAV (Todd D. et al. Dot blot hybridization assay for chicken anemia agent using a cloned DNA probe. J. Clin. Microbiol. 1991, 29, 933-939). Двухцепочечную ДНК репликативных форм экстрагировали в соответствии с модификацией метода Хирта (Hirt В. Selective extraction of polyoma virus DNA from infected cell cultures, J. Mol. Biol., 1967, 36, 365-369), описанной Молитором (Molitor T.W. et al. Porcine parvovirus DNA: characterization of the genomic and replicative form DNA of two virus isolates, Virology, 1984, 137, 241-254).
ПРИМЕР 8. Рестрикционная карта репликативной формы генома штамма Imp.999 цирковируса свиней.
ДНК (1-5 мкг), экстрагированную с помощью метода Хирта, обрабатывали S1-нуклеазой (Amersham) в соответствии с рекомендациями поставщика, а затем эту ДНК расщепляли различными рестрикционными ферментами (Boehringer Mannheim, Lewes, East Sussex, UK) и продукты расщепления разделяли с помощью электрофореза в 1,5%-ном агарозном геле в присутствии бромида этидия, как описано Тоддом и др. (Purification and biochemical characterization of chicken anemia agent. J. Gen. Virol. 1990, 71, 819-823). ДНК, экстрагированная из культур штамма Imp.999, обладает уникальным сайтом EcoRI, двумя сайтами SacI и не имеет ни одного сайта PstI. Поэтому этот профиль рестрикции отличается от профиля рестрикции штамма PCV PK/15 (Meehan В. et al. Sequence of porcine circovirus DNA; affinities with plant circoviruses, 1997, 78; 221-227), который, наоборот, имеет сайт PstI и не имеет ни одного сайта EcoRI.
ПРИМЕР 9. Клонирование генома штамма Imp.999 цирковируса свиней.
Рестрикционный фрагмент величиной около 1,8 т.п.о., полученный при расщеплении двухцепочечной репликативной формы штамма PCV Imp.999 EcoRI, выделяли после разделения электрофорезом в 1,5%-ном агарозном геле (см. пример 3) с помощью коммерческого набора Qiagen (QIAEXII Gel Extraction Kit, Cat # 20021, QIAGEN Ltd., Crawley, West Sussex, UK). Фрагмент EcoRI-EcoRI затем лигировали с вектором pGEM-7 (Promega, Medical Supply Company, Dublin, Ireland), предварительно расщепленным тем же рестрикционным ферментом и дефосфорилированным в соответствии со стандартными методами клонирования (Sambrook J. et al., Molecular cloning: A laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Полученными плазмидами трансформировали штамм Escherichia coli JM109 (Stratagene, La Jolla, USA) в соответствии со стандартными методами. Рестрикционный фрагмент EcoRI-EcoRI штамма PCV Imp.999 также клонировали в сайт EcoRI вектора pBlueScript SK+ (Stratagene Inc., La Jolla, USA). Среди клонов, полученных от каждого штамма, отобрали по меньшей мере 2 клона, содержащих фрагменты ожидаемого размера. Полученные клоны затем культивировали в малом объеме (2 мл) или в большом объеме (250 мл) и выделяли плазмиды, содержащие полный геном штамма Imp.999, в соответствии со стандартными методами получения и очистки плазмид.
ПРИМЕР 10. Секвенирование геномной ДНК (двухцепочечной репликативной формы) штамма PCV Imp.999.
Нуклеотидную последовательность двух клонов EcoRI (клоны pGEM-7/2 и pGEM-7/8) определяли дидеоксинуклеотидным методом Сангера (Sanger) с помощью набора для секвенирования "AmpliTaq DNA polymerase FS" (Cat # 402079 РЕ Applied Biosystems, Warrington, UK) и аппарата для автоматического секвенирования Applied Biosystems AB1373A в соответствии с рекомендациями поставщика. Первоначальные реакции секвенирования проводили с помощью «прямого» и «обратного» универсального праймеров М13. Последующие реакции секвенирования проводили в соответствии с методом «DNA-Walking». Олигонуклеотиды, необходимые для последующих секвенирований, были синтезированы компанией Life Technologies (Inchinnan Business Park, Paisley, UK).
Jghtltktyyst последовательности собирали и анализировали с помощью версии 3.2 компьютерной программы MacDNASIS (Cat. # 22020101, Appligene, Durham, UK). Различные открытые рамки считывания анализировали с помощью алгоритма BLAST, имеющегося на сервере Национального центра биотехнологической информации (NCBI, Bethesda, MD, USA).
Полная последовательность (фрагмент EcoRI-EcoRI), первоначально полученная из клона pGEM-7/8 (ПОСЛЕДОВ. №6), представлена на фиг.6. Она произвольно начинается после G сайта EcoRI и проявляет несколько неопределенностей с точки зрения нуклеотидов.
Затем секвенирование оптимизировали, и ПОСЛЕДОВ. № 3 (фиг.3) дает общую последовательность этого штамма, которая была получена таким образом, чтобы она произвольно начиналась от сайта EcoRI, т.е. G используется в качестве первого нуклеотида.
Подобным же образом получали последовательности других трех изолятов в соответствии с настоящим изобретением (см. ПОСЛЕДОВ. №№1, 2 и 4 и фиг.1, 2 и 4).
Величина генома этих четырех штаммов следующая:
Imp.1011-48121 | 1767 нуклеотидов |
Imp.1011-48285 | 1767 нуклеотидов |
Imp.999 | 1768 нуклеотидов |
Imp.1010 | 1768 нуклеотидов |
ПРИМЕР 11. Анализ последовательности штамма PCV Imp.999.
Анализ гомологии последовательности, полученной из штамма Imp.999, по отношению к последовательностям, содержащимся в банке данных GenBank, показал, что единственной обнаруженной значимой гомологией оказалась примерно 76%-ная гомология (на уровне нуклеиновой кислоты) с последовательностью штамма РК/15 (коллекционные номера Y09921 и U49186) (см. фиг.5).
На аминокислотном уровне тест на гомологию при трансляции последовательностей в 6 фазах с банками данных (алгоритм BLAST X на сервере NCBI) позволил продемонстрировать 94%-ную гомологию с открытой рамкой считывания, соответствующей теоретической репликазе вируса BBTV, подобного цирковирусам растений (идентификационный номер банка данных GenBank - 1841515), кодируемым последовательностью U49186 из банка данных GenBank.
Никакие другие последовательности, имеющиеся в банках данных, не продемонстрировали значительной гомологии с последовательностью, полученной из штамма PCV Imp.999.
Анализ последовательностей, полученных из штамма Imp.999, культивированного из участков больных органов и тканей, взятых у калифорнийских поросят, имеющих клинические признаки многосистемного вастинг-синдрома, ясно показывает, что этот вирусный изолят представляет собой новый штамм цирковируса свиней.
ПРИМЕР 12. Сравнительный анализ последовательностей
Провели сопоставление нуклеотидных последовательностей четырех новых штаммов PCV с последовательностью штамма PCV PK/15 (фигура 5). Разработали матрицу гомологии, которая учитывает четыре новых штамма и предшествующий им штамм PK/15. Получили следующие результаты:
1: Imp.1011-48121
2: Imp.1011-48285
3: Imp.999
4: Imp.1010
5: РК/15
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
1 | 1,0000 | 0,9977 | 0,9615 | 0,9621 | 0,7600 |
2 | 1,0000 | 0,9621 | 0,9632 | 0,7594 | |
3 | 1,0000 | 0,9949 | 0,7560 | ||
4 | 1,0000 | 0,7566 | |||
5 | 1,0000 |
Гомология между двумя французскими штаммами Imp.1011-48121 и Imp.1011-48285 составляет более 99% (0,9977).
Гомология между двумя североамериканскими штаммами Imp.999 и Imp.1010 также выше 99% (0,9949). Гомология между французскими штаммами и североамериканскими штаммами немного выше 96%.
Гомология между всеми этими штаммами и РК/15 находится в интервале между 75 и 76%.
Из этого следует, что штаммы по настоящему изобретению являются представителями нового типа цирковируса свиней, отличного от типа, представленного штаммом РК/15. Этот новый тип, выделенный из свиней, проявляющий синдром PMWS, назвали цирковирусом свиней типа II, а РК/15 представляет собой тип I. Штаммы, принадлежащие к типу II, проявляют значительную гомогенность нуклеотидных последовательностей, хотя фактически их выделили из образцов, поступивших из очень отдаленных друг от друга географических регионов.
ПРИМЕР 13. Анализ белков, кодируемых геномом новых штаммов PCV.
Нуклеотидная последовательность изолята Imp.1010 признана представителем других штаммов цирковируса, связанных с многосистемным вастинг-синдромом. Эту последовательность проанализировали более подробно с помощью алгоритма BLASTX (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403-410) и с помощью комбинации программ из комплекта программного обеспечения MacVector 6,0 (Oxford Molecular Group, Oxford OХ4 4GA, UK). Ha этой последовательности (кольцевом геноме) удалось обнаружить 13 открытых рамок считывания (ORF) размером свыше 20 аминокислот. Это следующие 13 открытых рамок считывания:
Название | Начало | Конец | Цепь | Размер ORF (нуклеотидов) (нт) | Размер белков (аминокислот) (ак) |
ORF1 | 103 | 210 | Смысловая | 108 | 35 |
ORF2 | 1180 | 1317 | Смысловая | 138 | 45 |
ORF3 | 1363 | 1524 | Смысловая | 162 | 53 |
ORF4 | 398 | 1342 | Смысловая | 945 | 314 |
ORF5 | 900 | 1079 | Смысловая | 180 | 59 |
ORF6 | 1254 | 1334 | Смысловая | 81 | 26 |
ORF7 | 1018 | 704 | Антисмысловая | 315 | 104 |
ORF8 | 439 | 311 | Антисмысловая | 129 | 42 |
ORF9 | 190 | 101 | Антисмысловая | 90 | 29 |
ORF10 | 912 | 733 | Антисмысловая | 180 | 59 |
ORF11 | 645 | 565 | Антисмысловая | 81 | 26 |
ORF12 | 1100 | 1035 | Антисмысловая | 66 | 21 |
ORF13 | 314 | 1381 | Антисмысловая | 702 | 213 |
Позиции начала и конца каждой ORF (открытой рамки считывания) относятся к последовательности, представленной на фиг.4 (ПОСЛЕДОВ. №4), генома штамма 1010. Границы ORF1 до ORF13 идентичны для штамма 999. Они идентичны также для штаммов 1011-48121 и 1011-48285 за исключением ORF3 и ORF13:
ORF3 1432-1539, смысловая, 108 nt, 35 аа
ORF13 314-1377, антисмысловая, 705 nt, 234 аа.
Из этих тринадцати ORF четыре имеют значительную гомологию с аналогичными ORF, расположенными на геноме клонированного вируса PCV РК-15. Проанализировали каждую из открытых рамок считывания, присутствующих на геноме всех изолятов цирковируса, связанного с многосистемным вастинг-синдромом. Эти четыре ORF следующие:
Название | Начало | Конец | Цепь | Размер ORF (нт) | Размер белка (ак) | Молекулярная масса (кДа) |
ORF4 | 398 | 1342 | смысловая | 945 | 314 | 37,7 |
ORF7 | 1018 | 704 | антисмысловая | 315 | 104 | 11,8 |
ORF10 | 912 | 733 | антисмысловая | 180 | 59 | 6,5 |
ORF13 | 314 | 1381 | антисмысловая | 702 | 233 | 27,8 |
Позиции начала и конца каждой ORF относятся к последовательности, представленной на фиг.4 (ПОСЛЕДОВ. №4). Размер ORF (в нуклеотидах - нт) включает терминирующий кодон.
Сравнение организации геномов изолятов PCV Imp.1010 и PCV РК-15 позволило идентифицировать 4 рамки считывания, сохранившиеся в геномах двух вирусов. Следующая таблица показывает степень наблюдавшейся гомологии:
ORF Imp.1010/ORF PVC PK-15 | Процент гомологии |
ORF4/ORF1 | 86% |
ORF13/ORF2 | 66,4% |
ORF7/ORF3 | 61,5% (на уровне перекрывания (104 ак)) |
ORF10/ORF4 | 83% (на уровне перекрывания (59 ак)) |
Самую большую идентичность последовательностей наблюдали между ORF4 Imp.1010 и ORF1 РК-15 (гомология 86%). Это было ожидаемым, поскольку этот белок, по-видимому, участвует в репликации вирусной ДНК и является существенным для репликации вирусов (Meehan et al., J. Gen. Virol., 1997, 78, 221-227); Mankertz et al., J. Gen. Virol., 1998, 79, 381-384).
Идентичность последовательностей между ORF13 Imp.1010 и ORF2 РК-15 меньше (гомология 66,4%), но каждая из этих двух ORF действительно демонстрирует хорошо сохранившуюся N-концевой базовую область, идентичную N-концевей области основного структурного белка цирковируса птиц CAV (Meehan et al., Arch. Virol., 1992, 124, 301-319). Кроме того, наблюдались большие различия между ORF7 Imp.1010 и ORF3 РК-15 и между ORF10 Imp.1010 и ORF4 РК-15. В каждом случае имеется делеция в С-концевой области ORF7 и ORF10 изолята Imp.1010, если их сравнивать с ORF3 и ORF4 штамма PCV РК-15. Наибольшую гомологию последовательностей наблюдали на уровне N-концевых областей ORF7/ORF3 (гомология 61,5% на уровне перекрывания) и ORF10/ORF4 (гомология 83% на уровне перекрывания).
Выяснилось, что геномная организация цирковируса свиней довольно сложная, как следствие чрезвычайной плотности его генома. Основной структурный белок, по-видимому, происходит в результате сплайсинга между несколькими рамками считывания, расположенными на одной и той же цепи генома цирковируса свиней. Поэтому можно считать, что любая открытая рамка считывания (от ORF1 до ORF13), описанная в вышеприведенной таблице, может представлять собой весь антигенный белок или часть этого белка, кодируемого цирковирусом свиней типа II, и поэтому потенциально является антигеном, который можно использовать для установления конкретного диагноза и/или для вакцинации. Поэтому изобретение касается любого белка, включающего по меньшей мере одну из этих открытых рамок считывания. Предпочтительно, изобретение касается белка, по существу состоящего из ORF4, ORF7, ORF10 или ORF13.
ПРИМЕР 14. Инфекционный характер генома PCV, клонированного из новых штаммов.
Плазмидой pGEM-7/8, содержащей полный геном (репликативную форму) изолята Imp.999, трансфецировали клетки РК/15 в соответствии с методом, описанным Meehan В. et al. (Characterization of viral DNAs from cells infected with chicken anemia agent: sequence analysis of the cloned replicative form and transfection capabilities of cloned genome fragments. Arch. Virol. 1992, 124, 301-319). Иммунофлуоресцентный анализ (см. пример 4), выполненный при первом пассаже после трансфецирования на неконтаминированных клетках РК/15, показал, что плазмида клона pGEM7/8 способна индуцировать продуцирование инфекционного вируса PCV. Наличие клона, содержащего инфекционный генетический материал PCV, позволяет осуществлять любые полезные манипуляции на вирусном геноме для того, чтобы продуцировать модифицированные вирусы PCV (либо ослабленные в свиньях, либо дефектные), которые можно использовать для выработки ослабленных или рекомбинантных вакцин или для продуцирования антигенов для диагностических наборов.
ПРИМЕР 15. Продуцирование антигенов PCV путем культивирования in vitro.
Культивирование неконтаминированных клеток РК/15 и размножение вирусов осуществляли теми же методами, которые описаны в примере 1. Инфецированные клетки собирали после трипсинизации, после 4 суток инкубации при 37°С и подсчитывали. Следующий пассаж инокулировали инфецированными клетками с концентрацией в 400000 инфецированных клеток на 1 мл.
ПРИМЕР 16 Инактивация вирусных антигенов
В конце культивирования с вирусами инфецированные клетки собирали и лизировали с помощью ультразвука (Branson Sonifer) или с помощью коллоидной мельницы роторно-статорного типа (UltraTurrax, IKA). Затем суспензию центрифугировали при 3700 g в течение 30 минут. Суспензию вирусов инактивировали 0,1%-ным этиленимином в течение 18 часов при +37°С или 0,5%-ным бета-пропиолактоном в течение 24 часов при +28°С. Если титр вирусов перед инактивацией был недостаточным, суспензию вирусов концентрировали путем ультрацентрифугирования, используя мембрану пропускающую соединения до 300 кДа (Millipore РТМК300). Инактивированную суспензию вирусов хранили при +5°С.
ПРИМЕР 17 Получение вакцины в форме эмульсии на основе минерального масла
Вакцину получали в соответствии со следующей формулой:
Суспензия инактивированного цирковируса свиней | 250 мл |
Montanide® ISA 70 (SEPPIC) | 750 мл |
Водную фазу и масляную фазу стерилизовали по отдельности с помощью фильтрации. Эмульсию готовили путем смешивания и гомогенизации ингредиентов с помощью турбинного эмульгатора модели Silverson.
Одна доза вакцины содержит около 107,5 TCID50. Объем одной дозы вакцины составляет 0,5 мл для внутрикожного введения и 2 мл для внутримышечного введения.
ПРИМЕР 18 Получение вакцины в форме метаболизируемой эмульсии на основе масла
Вакцину получали в соответствии со следующей формулой:
Суспензия инактивированного цирковируса свиней | 200 мл |
Dehymuls HRE 7 (Henkel) | 60 мл |
Radia 7204 (Oleofina) | 740 мл |
Водную фазу и масляную фазу стерилизовали по отдельности с помощью фильтрации. Эмульсию готовили путем смешивания и гомогенизации ингредиентов с помощью турбинного эмульгатора модели Silverson.
Одна доза вакцины содержит около 107,5 TCID50. Объем одной дозы вакцины составляет 2 мл для внутримышечного введения.
ПРИМЕР 19 Результаты непрямого флуоресцентного анализа штаммов вируса PCV из США и Франции и РК/15 с гипериммунной сывороткой (PCV-T), с применением набора моноклональных антител F99, полученных из РК/15, и гипериммунной сывороткой, полученной из канадского штамма (PCV-C)
ВИРУС | |||
РК/15 | США | Франция | |
Антисыворотка PCV-T | ≥ 6400 | 200 | 800 |
Антисыворотка PCV-C | 200 | ≥ 6,400 | ≥ 6,400 |
F99 1Н4 | ≥ 10000 | < 100 | 100 |
F99 4В10 | ≥ 10000 | < 100 | < 100 |
F99 2В7 | ≥ 10000 | 100 | < 100 |
F99 2Е12 | ≥ 10000 | < 100 | < 100 |
F99 1С9 | ≥ 10000 | < 100 | 100 |
F99 2Е1 | ≥ 10000 | < 100 | < 100 |
F99 1Н4 | ≥ 10000 | 100 | < 100 |
* При взаимодействии с последним разведением сыворотки и с моноклональным антителом, дающим положительную реакцию при непрямой иммунофлуоресценции. |
Claims (182)
1. Выделенный штамм цирковируса свиней типа II, являющийся возбудителем послеотъемного мультисистемного синдрома истощения (PMWS), депонированный в ЕСАСС под депонентным номером V97100219.
2. Выделенный штамм цирковируса свиней типа II, являющийся возбудителем послеотъемного мультисистемного синдрома истощения (PMWS), депонированный в ЕСАСС под депонентным номером V97100218.
3. Выделенный штамм цирковируса свиней типа II, являющийся возбудителем послеотъемного мультисистемного синдрома истощения (PMWS), депонированный в ЕСАСС под депонентным номером V97100217.
4. Выделенный штамм цирковируса свиней типа II, являющийся возбудителем послеотъемного мультисистемного синдрома истощения (PMWS), депонированный в ЕСАСС под депонентным номером V98011608.
5. Выделенный штамм цирковируса свиней типа II, являющийся возбудителем послеотъемного мультисистемного синдрома истощения (PMWS), депонированный в ЕСАСС под депонентным номером V98011609.
6. Выделенный фрагмент ДНК, включающий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID No 1, 2, 3, 4 и 6, представляющий собой геномную последовательность цирковируса свиней типа II по пп.1-5 соответственно.
7. Выделенный фрагмент ДНК по п.6, включающий SEQ ID No 1, представляющий собой геномную нуклеотидную последовательность выделенного штамма цирковируса свиней типа II V98011609 по п.5.
8. Выделенный фрагмент ДНК по п.6, включающий SEQ ID No 2, представляющий собой геномную нуклеотидную последовательность выделенного штамма цирковируса свиней типа II V98011608 по п.4.
9. Выделенный фрагмент ДНК по п.6, включающий SEQ ID No 3, представляющий собой геномную нуклеотидную последовательность выделенного штамма цирковируса свиней типа II V97100217 по п.3.
10. Выделенный фрагмент ДНК по п.6, включающий SEQ ID No 4, представляющий собой геномную нуклеотидную последовательность выделенного штамма цирковируса свиней типа II V97100218 по п.2.
11. Выделенный фрагмент ДНК по п.6, включающий SEQ ID No 6, представляющий собой геномную нуклеотидную последовательность выделенного штамма цирковируса свиней типа II V97100219 по п.1.
12. Выделенный фрагмент ДНК, включающий нуклеотидную последовательность, кодирующую эпитоп, специфичный для PCVII и не специфичный для PCVI.
13. Вирусный препарат, содержащий цирковирус свиней типа II, вызывающий послеотъемный мультисистемный синдром истощения (PMWS), нуклеотидная последовательность которого гибридизируется с геномной нуклеотидной последовательностью SEQ ID No 1, 2, 3, 4 или 6 по п.6 цирковируса свиней типа II по любому из пп.1-5 или ее фрагментом, в строгих условиях, при которых отсутствует гибридизация с геномной нуклеотидной последовательностью PCVI SEQ ID No 5.
14. Вирусный препарат по п.13, характеризующийся тем, что он выращен в культуре клеток in vitro, которые были инфицированы штаммом цирковируса свиней типа II, выделенным из образца, взятого у свиньи с PMWS.
15. Вирусный препарат по п.14, характеризующийся тем, что образец происходит из пораженной ткани.
16. Вирусный препарат по п.14 или 15, характеризующийся тем, что клетки представляют собой линию почечных клеток свиньи.
17. Вирусный препарат по п.16, характеризующийся тем, что линия почечных клеток свиньи представляет собой РК/15.
18. Вирусный препарат по любому из пп.13-17, который является ослабленным.
19. Вирусный препарат по любому из пп.13-17, который является инактивированным.
20. Вирусный препарат, содержащий цирковирус свиней типа II, вызывающий послеотъемный мультисистемный синдром истощения (PMWS), геномная нуклеотидная последовательность которого на 96% или больше гомологична геномной нуклеотидной последовательности SEQ ID No 1, 2, 3, 4 или 6 по п.6 цирковируса свиней типа II по любому из пп.1-5.
21. Вирусный препарат по п.20, характеризующийся тем, что он выращен в культуре клеток in vitro, которые были инфицированы штаммом цирковируса свиней типа II, выделенным из образца, взятого у свиньи с PMWS.
22. Вирусный препарат по п.21, характеризующийся тем, что образец происходит из пораженной ткани.
23. Вирусный препарат по п.21 или 22, характеризующийся тем, что клетки представляют собой линию почечных клеток свиньи.
24. Вирусный препарат по п.23, характеризующийся тем, что линия почечных клеток свиньи представляет собой РК/15.
25. Вирусный препарат по любому из пп.20-24, который является ослабленным.
26. Вирусный препарат по любому из пп.20-24, который является инактивированным.
27. Вирусный препарат, содержащий цирковирус свиней типа II, геномная нуклеотидная последовательность которого на 76% или меньше гомологична геномной нуклеотидной последовательности PCVI SEQ ID No 5.
28. Вирусный препарат по п.27, характеризующийся тем, что он выращен в культуре клеток in vitro, которые были инфицированы штаммом цирковируса свиней типа II, выделенным из образца, взятого у свиньи с PMWS.
29. Вирусный препарат по п.28, характеризующийся тем, что образец происходит из пораженной ткани.
30. Вирусный препарат по п.28 или 29, характеризующийся тем, что клетки представляют собой линию почечных клеток свиньи.
31. Вирусный препарат по п.30, характеризующийся тем, что линия почечных клеток свиньи представляет собой РК/15.
32. Вирусный препарат по любому из пп.27-31, который является ослабленным.
33. Вирусный препарат по любому из пп.27-31, который является инактивированным.
34. Вирусный препарат, содержащий цирковирус свиней типа II, являющийся возбудителем послеотъемного мультисистемного синдрома истощения (PMWS), нуклеотидная последовательность которого на 96% или больше гомологична геномной нуклеотидной последовательности SEQ ID No 1, 2, 3, 4 или 6 по п.6 цирковируса свиней типа II по любому из пп.1-5 и на 76% или меньше гомологична геномной нуклеотидной последовательности PCVI SEQ ID No 5.
35. Вирусный препарат по п.34, характеризующийся тем, что он выращен в культуре клеток in vitro, которые были инфицированы штаммом цирковируса свиней типа II, выделенным из образца, взятого у свиньи с PMWS.
36. Вирусный препарат по п.35, характеризующийся тем, что образец происходит из пораженной ткани.
37. Вирусный препарат по п.35 или 36, характеризующийся тем, что клетки представляют собой линию почечных клеток свиньи.
38. Вирусный препарат по п.37, характеризующийся тем, что линия почечных клеток свиньи представляет собой РК/15.
39. Вирусный препарат по любому из пп.35-38, который является ослабленным.
40. Вирусный препарат по любому из пп.35-38, который является инактивированным.
41. Вирусный препарат, содержащий цирковирус свиней типа II, геномная нуклеотидная последовательность которого кодирует белки ORF 4, 13, 7 и 10, при этом белок ORF 4 на 86% или меньше гомологичен белку ORF 1 PCVI, белок ORF 13 на 66,4% или меньше гомологичен белку ORF 2 PCVI, белок ORF 7 на 61,5% или меньше гомологичен белку ORF 3 PCVI и белок ORF 10 на 83% или меньше гомологичен белку ORF 4 PCVI.
42. Вирусный препарат по п.41, характеризующийся тем, что он выращен в культуре клеток in vitro, которые были инфицированы штаммом цирковируса свиней типа II, выделенным из образца, взятого у свиньи с PMWS.
43. Вирусный препарат по п.42, характеризующийся тем, что образец происходит из пораженной ткани.
44. Вирусный препарат по п.42 или 43, характеризующийся тем, что клетки представляют собой линию почечных клеток свиньи.
45. Вирусный препарат по п.44, характеризующийся тем, что линия почечных клеток свиньи представляет собой РК/15.
46. Вирусный препарат по любому из пп.41-45, который является ослабленным.
47. Вирусный препарат по любому из пп.41-45, который является инактивированным.
48. Клеточный экстракт, вызывающий послеотъемный мультисистемный синдром истощения (PMWS), характеризующийся тем, что указанный экстракт был получен из культуры клеток in vitro, которая была инфицирована цирковирусом свиней типа II по любому из пп.1-5 или вирусным препаратом по любому из пп.13-47.
49. Супернатант клеточной культуры, вызывающий послеотъемный мультисистемный синдром истощения (PMWS), характеризующийся тем, что указанный супернатант был получен из культуры клеток in vitro, которая была инфицирована цирковирусом свиней типа II по любому из пп.1-5 или вирусным препаратом по любому из пп.13-47.
50. Иммуногенная композиция, включающая выделенный штамм цирковируса свиней типа II по любому из пп.1-5, вирусный препарат по любому из пп.13-47, клеточный экстракт по п.48 или супернатант клеточной культуры по п.49 и фармацевтически приемлемый носитель.
51. Иммуногенная композиция по п.50, содержащая цирковирус свиней типа II.
52. Иммуногенная композиция по п.50, содержащая инактивированный цирковирус свиней типа II.
53. Иммуногенная композиция по любому из пп.50-52, которая включает штамм цирковируса свиней типа II, размноженный в клеточной линии.
54. Иммуногенная композиция по п.53, в которой клеточная линия представляет собой линию почечных клеток свиньи.
55. Иммуногенная композиция по п.51, включающая от 103 до 106 TCID50 ослабленного цирковируса свиней типа II.
56. Иммуногенная композиция по п.55, включающая от 106 до 108 TCID50 штамма цирковируса свиней типа II.
57. Иммуногенная композиция по любому из пп.50-56, изготовленная в лиофилизованной форме.
58. Иммуногенная композиция по п.57, дополнительно включающая стабилизатор лиофилизации.
59. Иммуногенная композиция по п.58, в которой стабилизатор лиофилизации выбран из группы, состоящей из SPGA, сорбита, маннита, крахмала, сахарозы, декстрана, глюкозы; альбумина, казеина и фосфата щелочного металла.
60. Иммуногенная композиция по любому из пп.50-59, дополнительно включающая адъювант.
61. Иммуногенная композиция по п.60, в которой адъювант выбран из группы, состоящей из гидроокиси алюминия, сапонина, авридина (N,N-диоктадецил-N',N'-бис(2-гидроксиэтил)пропандиамина), DDA.
62. Иммуногенная композиция по любому из пп.50-59, изготовленная в виде эмульсии.
63. Иммуногенная композиция по п.62, в которой эмульсия представляет собой эмульсию вода-в-масле.
64. Иммуногенная композиция по п.62, в которой эмульсия представляет собой эмульсию масло-в-воде.
65. Иммуногенная композиция по любому из пп.50-64, включающая концентрированную культуру цирковируса свиней типа II.
66. Иммуногенная композиция по п.52, в которой цирковирус свиней был инактивирован с помощью химического средства.
67. Иммуногенная композиция по п.66, в которой химическое средство выбрано из группы, состоящей из формальдегида, параформальдегида, β-пропиолактона и этиленимина.
68. Иммуногенная композиция по любому из пп.50-67, дополнительно включающая еще один патоген свиней.
69. Иммуногенная композиция по п.68, в которой дополнительный патоген свиней выбран из группы, состоящей из вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRS), Mycoplasma hyopneumoniae, Actinobacillus pleuropneumoniae, Escherichia coli, Pasteurella multocida (вызывает атрофический ринит), вируса ложного бешенства (вызывает болезнь Aujeszky), вируса лихорадки свиней (вызывает свиную холеру) и вируса свиного гриппа.
70. Иммуногенная композиция по п.69, в которой дополнительный патоген свиней представляет собой вирус PRRS.
71. Иммуногенная композиция по п.69, в которой дополнительный патоген свиней представляет собой Mycoplasma hyopneumoniae.
72. Иммуногенная композиция по любому из пп.50-71, которая является вакциной.
73. Иммуногенная композиция, включающая какую-либо субъединицу выделенного цирковируса свиней типа II.
74. Иммуногенная композиция по п.73, в которой субъединица получена путем экспрессии in vitro.
75. Иммуногенная композиция по п.74, в которой субъединица экспрессирована с помощью бакуловируса.
76. Иммуногенная композиция по п.74, в которой субъединица экспрессирована в Е. coli.
77. Иммуногенная композиция по п.73, в которой субъединица получена путем экспрессии в эукариотических клетках.
78. Иммуногенная композиция по п.77, в которой эукариотические клетки представляют собой дрожжевые клетки.
79. Иммуногенная композиция по п.78, в которой дрожжевые клетки представляют собой S. cerevisiae.
80. Иммуногенная композиция по п.78, в которой эукариотические клетки представляют собой клетки млекопитающих.
81. Иммуногенная композиция по п.80, в которой клетки млекопитающих выбраны из группы, состоящей из клеток СНО и клеток ВНК.
82. Иммуногенная композиция по любому из пп.74-81, в которой субъединица получена in vitro путем экспрессии какой-либо открытой рамки считывания цирковируса свиней типа II.
83. Иммуногенная композиция по п.82, в которой открытая рамка считывания представляет собой ORF4.
84. Иммуногенная композиция по п.82, в которой открытая рамка считывания представляет собой ORF7.
85. Иммуногенная композиция по п.82, в которой открытая рамка считывания представляет собой ORF10.
86. Иммуногенная композиция по п.82, в которой открытая рамка считывания представляет собой ORF13.
87. Иммуногенная композиция по любому из пп.73-86, дополнительно включающая адъювант.
88. Иммуногенная композиция по любому из пп.73-86, дополнительно включающая еще один патоген свиней.
89. Иммуногенная композиция по п.88, в которой дополнительный патоген свиней выбран из группы, состоящей из вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRS), Mycoplasma hyopneumoniae, Actinobacillus pleuropneumoniae, Escherichia coli, Pasteurella multocida (вызывает атрофический ринит), вируса ложного бешенства (вызывает болезнь Aujeszky), вируса лихорадки свиней (вызывает свиную холеру) и вируса свиного гриппа.
90. Иммуногенная композиция по п.89, в которой дополнительный патоген свиней представляет собой вирус PRRS.
91. Иммуногенная композиция по п.89, в которой дополнительный патоген свиней представляет собой Mycoplasma hyopneumoniae.
92. Иммуногенная композиция по любому из пп.73-91, включающая инактивированный или ослабленный PCVII либо субъединицы PCVII из более чем одного штамма цирковируса свиней типа II.
93. Иммуногенная композиция по любому из пп.73-92, которая является вакциной.
94. Иммуногенная композиция, включающая вектор, который содержит и экспрессирует in vivo в клетках свиньи-хозяина фрагмент нуклеиновой кислоты или ее фрагмент, кодирующий полипептид или пептид цирковируса свиней типа II, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
95. Иммуногенная композиция по п.94, в которой вектор представляет собой вирусный вектор.
96. Имуногенная композиция по п.94, в которой вектор представляет собой плазмиду.
97. Иммуногенная композиция по п.94, которая индуцирует иммунологический ответ у свиньи-хозяина против цирковируса свиней типа II.
98. Иммуногенная композиция по пп.94-97, дополнительно включающая еще один антиген другого патогена свиней.
99. Иммуногенная композиция по п.98, в которой дополнительный антиген происходит из патогена свиней, выбранного из группы, состоящей из вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRS), Mycoplasma hyopneumoniae, Actinobacillus pleuropneumoniae, E. coli, атрофического ринита свиней, ложного бешенства (болезни Aujeszky), свиной холеры и свиного гриппа.
100. Иммуногенная композиция по п.98, в которой дополнительный антиген происходит из PRRS.
101. Иммуногенная композиция по п.98, в которой дополнительный антиген происходит из Mycoplasma hyopneumoniae.
102. Иммуногенная композиция по любому из пп.94-101, в которой вектор экспрессирует полипептид или пептид, включающий по меньшей мере один иммуноген или один эпитоп штамма цирковируса свиней типа II.
103. Иммуногенная композиция по любому из пп.94-102, в которой вектор экспрессирует полипептиды или пептиды из более чем одного штамма цирковируса свиней типа II.
104. Иммуногенная композиция по любому из пп.94-103, которая является вакциной.
105. Вектор, включающий выделенный фрагмент ДНК, содержащий
(a) последовательность, приведенную в SEQ ID No 1, 2, 3, 4 или 6, либо
(b) фрагмент, который кодирует полипептид или пептид, содержащий вирусспецифический эпитоп, причем указанный фрагмент (b) гибридизируется с последовательностью (а) в строгих условиях, при которых отсутствует гибридизация с геномной нуклеотидной последовательностью PCVI.
106. Вектор по п.105, у которого фрагмент ДНК включает SEQ ID No 1.
107. Вектор по п.105, у которого фрагмент ДНК включает SEQ ID No 2.
108. Вектор по п.105, у которого фрагмент ДНК включает SEQ ID No 3.
109. Вектор по п.105, у которого фрагмент ДНК включает SEQ ID No 4.
110. Вектор по п.105, у которого фрагмент ДНК включает SEQ ID No 6.
111. Вектор по любому из пп.105-110, который экспрессирует полипептид или пептид, включающий по меньшей мере один иммуноген или один эпитоп штамма цирковируса свиней типа II.
112. Вектор по п.111, обеспечивающий экспрессию встроенного в него фрагмента ДНК in vitro.
113. Вектор по п.111, обеспечивающий экспрессию встроенного в него фрагмента ДНК in vivo.
114. Вектор по п.113, представляющий собой плазмиду.
115. Вектор по п.113, представляющий собой вирус.
116. Вектор по п.115, в котором вирус выбран из группы, состоящей из свиного герпесвируса, свиного аденовируса и поксвируса.
117. Вектор по п.116, в котором вирус выбран из группы, состоящей из вируса ложного бешенства (болезни Aujeszky), вируса коровьей оспы, оспенного вируса птиц и оспенного вируса свиней.
118. Вектор по п.117, в котором вирус представляет собой оспенный вирус канареек.
119. Вектор, включающий выделенный фрагмент ДНК, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из ORF 4, 7, 10 и 13 цирковируса свиней типа II.
120. Вектор по п.119, у которого ORF представляет собой ORF 4.
121. Вектор по п.119, у которого ORF представляет собой ORF 7.
122. Вектор по п.119, у которого ORF представляет собой ORF 10.
123. Вектор по п.119, у которого ORF представляет собой ORF 13.
124. Вектор по любому из пп.119-123, обеспечивающий экспрессию встроенного в него фрагмента ДНК in vitro.
125. Вектор по любому из пп.119-123, обеспечивающий экспрессию встроенного в него фрагмента ДНК in vivo.
126. Вектор по п.125, представляющий собой плазмиду.
127. Вектор по п.125, представляющий собой вирус.
128. Вектор по п.127, в котором вирус выбран из группы, состоящей из свиного герпесвируса, свиного аденовируса и поксвируса.
129. Вектор по п.128, в котором вирус выбран из группы, состоящей из вируса ложного бешенства (болезни Aujeszky), вируса коровьей оспы, оспенного вируса птиц и оспенного вируса свиней.
130. Вектор по п.129, в котором вирус представляет собой оспенный вирус канареек.
131. Вектор, включающий выделенный фрагмент ДНК по п.12.
132. Вектор по п.131, обеспечивающий экспрессию встроенного в него фрагмента ДНК in vitro.
133. Вектор по п.131, обеспечивающий экспрессию встроенного в него фрагмента ДНК in vivo.
134. Вектор по п.133, представляющий собой плазмиду.
135. Вектор по п.133, представляющий собой вирус.
136. Вектор по п.135, в котором вирус выбран из группы, состоящей из свиного герпесвируса, свиного аденовируса и поксвируса.
137. Вектор по п.136, в котором вирус выбран из группы, состоящей из вируса ложного бешенства (болезни Aujeszky), вируса коровьей оспы, оспенного вируса птиц и оспенного вируса свиней.
138. Вектор по п.136, в котором вирус представляет собой оспенный вирус канареек.
139. Иммуногенная композиция, включающая вектор по любому из пп.105-118.
140. Иммуногенная композиция по п.139, которая является вакциной.
141. Иммуногенная композиция, включающая вектор по любому из пп.119-130.
142. Иммуногенная композиция по п.141, которая является вакциной.
143. Иммуногенная композиция, включающая вектор по любому из пп.131-138.
144. Иммуногенная композиция по п.143, которая является вакциной.
145. Выделенный вирусспецифический полипептид цирковируса свиней типа II, кодируемый фрагментом ДНК по любому из пп.6-12 или экспрессируемый вектором по любому из пп.105-138.
146. Иммуногенная композиция, включающая выделенный полипептид по п.145.
147. Иммуногенная композиция по п.146, которая является вакциной.
148. Поликлональное или моноклональное антитело, которое индуцировано или связывается со штаммом цирковируса свиней типа II по любому из пп.1-5, вирусным препаратом по любому из пп.13-47, клеточным экстрактом по п.48, супернатантом по п.49 или выделенным полипептид ом по п.145.
149. Способ индуцирования иммунологического ответа или индуцирования антител против цирковируса свиней типа II, включающий введение свинье иммуногенной композиции по любому из пп.50-104, 139-144 и 146-147.
150. Способ обнаружения цирковируса свиней типа II в образце, включающий тестирование образца на присутствие антигена цирковируса свиней типа II, либо на присутствие антител против цирковируса свиней типа II или против антигена цирковируса свиней типа II, либо на нуклеиновую кислоту цирковируса свиней типа II.
151. Способ получения штамма цирковируса свиней типа II по пп.1-5, вирусного препарата по любому из пп.13-47, клеточного препарата по п.48 или супернатанта по п.49, включающий выращивание в и выделение из клеточной культуры in vitro клеток, которые были инфицированы штаммом цирковируса свиней типа II.
152. Клеточный экстракт, содержащий штамм цирковируса свиней типа II, полученный в соответствии со способом по п.151, который может применяться в качестве антигена.
153. Клеточный супернатант, содержащий штамм цирковируса свиней типа II, полученный в соответствии со способом по п.151, который может применяться в качестве антигена.
154. Антитело, способное связываться с цирковирусом свиней типа II, полученное способом по п.149.
155. Способ диагностики заражения цирковирусом свиней типа II (PCVII), вызывающим послеотъемный мультисистемный синдром истощения (PMWS), который включает контактирование образца физиологической жидкости или ткани свиньи с диагностическим реагентом, специфичным к PCVII, и детектирование присутствия или отсутствия в образце или ткани антигена PCVII или антител, специфичных к PCVII, или нуклеиновой кислоты, специфичных для PCVII.
156. Способ по п.155, в котором диагностический реагент включает по меньшей мере один ДНК-зонд или праймер, специфичный к PCVII.
157. Способ по п.155, в котором диагностический реагент включает SEQ ID No 1, 2, 3, 4 или 6.
158. Способ по п.156, в котором зонд или праймер включает по меньшей мере один фрагмент последовательности SEQ ID No 1, 2, 3, 4 или 6.
159. Способ по любому из пп.155-158, в котором детектирование заключается в детектировании молекул нуклеиновой кислоты, специфичных к PCVII, методом гибридизации или ПЦР.
160. Способ по п.155, в котором диагностический реагент включает антиген, специфичный для PCVII.
161. Способ по п.155, в котором антиген, специфичный для PCVII, включает выделенный штамм цирковируса свиней типа II по любому из пп.1-5, вирусный препарат по любому из пп.13-47, клеточный экстракт по п.48 или супернатант клеточной культуры по п.49.
162. Способ по п.161, в котором диагностический реагент включает эпитоп или полипептид, специфичный для PCVII и кодируемый фрагментом последовательности SEQ ID No 1, 2, 3, 4 или 6.
163. Способ по п.161 или 162, в котором детектирование заключается в детектировании антител, специфичных к PCVII.
164. Способ по п.156, в котором диагностический реагент включает антитело, специфичное к PCVII.
165. Способ по п.156, в котором диагностический реагент включает антиген, специфичный для PCVII, и антитело, специфичное к PCVII.
166. Способ по любому из пп.161-165, в котором детектирование включает western-блот, иммунофлуоресценцию, ELISA или иммунохроматографию.
167. Способ по п.166, в котором детектирование включает непрямую иммунофлуоресценцию, конкурентный вариант ELISA или иммунохроматографию.
168. Диагностическая композиция, содержащая антитела, специфичные к штамму цирковируса свиней типа II (PCVII), ответственному за послеотъемный мультисистемный синдром истощения (PMWS), которые получают из PCVII или его антигенного фрагмента, или из полипептида, кодируемого фрагментом последовательности SEQ ID No 1, 2, 3, 4 или 6.
169. Композиция по п.168, в которой PCVII представляет собой депонированный выделенный штамм цирковируса свиней типа II по любому из пп.1-5 или вирусный препарат по любому из пп.13-47.
170. Композиция по п.168 или 169, в которой антитела представляют собой поликлональные антитела или моноклональные антитела.
171. Композиция по любому из пп.168-170, в которой антитела являются мечеными антителами.
172. Композиция по п.171, в которой антитела мечены пероксидазой или меткой в виде частиц.
173. Композиция по п.172, в которой метка в виде частиц представляет собой метку из коллоидного золота.
174. Диагностическая композиция, содержащая антиген, специфичный для штамма цирковируса свиней типа II (PCVII), ответственного за послеотъемный мультисистемный синдром истощения (PMWS), который распознается антителами, специфичными к PCVII.
175. Диагностический набор для диагностики цирковируса свиней типа II, вызывающего PMWS, включающий по меньшей мере одну композицию по любому из пп.168-174.
176. Набор по п.175, дополнительно включающий western-блот, иммунофлуоресценцию, ИФА или иммунохроматографию как средства диагностики.
177. Набор по п.176, включающий средства для непрямой иммунофлуоресценции, конкурентного варианта ИФА или иммунохроматографии.
178. Вирусспецифическое средство, вызывающее послеотъемный мультисистемный синдром истощения (PMWS), содержащее выделенный штамм цирковируса свиней типа II по любому из пп.1-5, вирусный препарат по любому из пп.13-47, клеточный экстракт по п.48 или 148 или супернатант клеточной культуры по п.49 или 153.
Приоритет по пунктам;
03.10.1997 - пп.1-3, 9, 12, 27, 131-138, 143-144, 150, 155-156, 160, 164-167;
22.01.1998 - пп.4-8, 10-11, 13, 20, 34, 105-118, 139-142, 157-159, 168;
20.03.1998 - пп.14-19, 21-26, 28-33, 35-68, 73-88, 94-98, 119-130, 145-149, 151-154, 161-163, 169-178;
01.10.1998 - пп.69-72, 89-93, 99-104.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR97/12382 | 1997-10-03 | ||
FR9712382A FR2769321B1 (fr) | 1997-10-03 | 1997-10-03 | Nouveaux circovirus porcins, vaccins et reactifs de diagnostics |
FR9800873A FR2769322B1 (fr) | 1997-10-03 | 1998-01-22 | Nouveaux circovirus porcins, vaccins et reactifs de diagnostic |
FR98/00873 | 1998-01-22 | ||
FR98/03707 | 1998-03-20 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000111496A RU2000111496A (ru) | 2002-08-20 |
RU2283862C2 true RU2283862C2 (ru) | 2006-09-20 |
Family
ID=26233844
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000111496A RU2283862C2 (ru) | 1997-10-03 | 1998-10-01 | Цирковирус свиней типа ii и его применение |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
FR (1) | FR2769322B1 (ru) |
RU (1) | RU2283862C2 (ru) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2491092C2 (ru) * | 2007-09-04 | 2013-08-27 | Бёрингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. | Снижение сопутствующих инфекций у свиней с помощью антигена pcv2 |
RU2493254C2 (ru) * | 2007-12-21 | 2013-09-20 | ВАЙЕТ ЭлЭлСи | Способы и композиции для иммунизации свиней против свиного цирковируса |
RU2687001C2 (ru) * | 2013-01-25 | 2019-05-06 | Фундасан Ди-Ампаро А Пескиза Ду-Эстаду Ди-Минас Жерайс-Фапемиг | Рекомбинантные антигены цирковируса свиней типа 2 (pcv-2) для композиций вакцин, диагностический набор и их применение |
RU2695330C1 (ru) * | 2018-06-19 | 2019-07-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" | Способ диагностики цирковирусной инфекции свиней второго типа прямым иммуногистохимическим анализом на основании моноклональных антител |
RU2697849C1 (ru) * | 2019-04-26 | 2019-08-21 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" (ФГБНУ ВНИТИБП) | Способ диагностики цирковируса свиней |
RU2744193C2 (ru) * | 2015-10-16 | 2021-03-03 | Канзас Стейт Юниверсити Рисерч Фаундейшн | Иммуногенные композиции для иммунизации свиней против цирковируса типа 3 и способы их получения и применения |
RU2746142C1 (ru) * | 2020-06-23 | 2021-04-07 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Штамм "pcv2/shbc" цирковируса свиней для производства профилактических и диагностических препаратов |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2772047B1 (fr) | 1997-12-05 | 2004-04-09 | Ct Nat D Etudes Veterinaires E | Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection |
US6497883B1 (en) * | 1999-06-10 | 2002-12-24 | Merial | Porcine circovirus recombinant poxvirus vaccine |
DE10044648A1 (de) * | 2000-09-08 | 2002-03-21 | Aventis Behring Gmbh | Verfahren zur Vermehrung oder zur Entfernung von Cirocoviren aus biologischem Material |
US7279166B2 (en) | 2001-12-12 | 2007-10-09 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Chimeric infectious DNA clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof |
US7276353B2 (en) | 2001-12-12 | 2007-10-02 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Chimeric infectious DNA clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof |
SI1833992T1 (sl) * | 2004-12-30 | 2015-06-30 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 imunogeni sestavki in postopki proizvodnje takšnih sestavkov |
CA2925281C (en) | 2013-09-25 | 2022-05-03 | Zoetis Services Llc | Pcv2b divergent vaccine composition and methods of use |
-
1998
- 1998-01-22 FR FR9800873A patent/FR2769322B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-01 RU RU2000111496A patent/RU2283862C2/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ALLAN G.M. et all, «Production, premiminary characterisation and application of monoclonal antibodies to porcine circovirus», Vet Immunol Immunopathol, 1994 Nov; 43(4): 357-71. * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2491092C2 (ru) * | 2007-09-04 | 2013-08-27 | Бёрингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. | Снижение сопутствующих инфекций у свиней с помощью антигена pcv2 |
RU2493254C2 (ru) * | 2007-12-21 | 2013-09-20 | ВАЙЕТ ЭлЭлСи | Способы и композиции для иммунизации свиней против свиного цирковируса |
RU2493254C9 (ru) * | 2007-12-21 | 2013-12-20 | ВАЙЕТ ЭлЭлСи | Способы и композиции для иммунизации свиней против свиного цирковируса |
RU2687001C2 (ru) * | 2013-01-25 | 2019-05-06 | Фундасан Ди-Ампаро А Пескиза Ду-Эстаду Ди-Минас Жерайс-Фапемиг | Рекомбинантные антигены цирковируса свиней типа 2 (pcv-2) для композиций вакцин, диагностический набор и их применение |
RU2744193C2 (ru) * | 2015-10-16 | 2021-03-03 | Канзас Стейт Юниверсити Рисерч Фаундейшн | Иммуногенные композиции для иммунизации свиней против цирковируса типа 3 и способы их получения и применения |
RU2695330C1 (ru) * | 2018-06-19 | 2019-07-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" | Способ диагностики цирковирусной инфекции свиней второго типа прямым иммуногистохимическим анализом на основании моноклональных антител |
RU2697849C1 (ru) * | 2019-04-26 | 2019-08-21 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" (ФГБНУ ВНИТИБП) | Способ диагностики цирковируса свиней |
RU2746142C1 (ru) * | 2020-06-23 | 2021-04-07 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Штамм "pcv2/shbc" цирковируса свиней для производства профилактических и диагностических препаратов |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2769322B1 (fr) | 2002-03-08 |
FR2769322A1 (fr) | 1999-04-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7122192B2 (en) | Porcine circoviruses, vaccines and diagnostic reagents | |
KR100736129B1 (ko) | 돼지 서코바이러스, 백신 및 진단시약 | |
RU2237492C2 (ru) | Иммуногенная композиция, вызывающая иммунный ответ против парвовируса и цирковируса свиньи, вакцина против многосистемного синдрома истощения свиней (pmws) (варианты), набор для вакцинации и способ ее осуществления | |
RU2283862C2 (ru) | Цирковирус свиней типа ii и его применение | |
CN101445802A (zh) | 新猪环病毒、疫苗及诊断试剂 | |
AU2002302120B2 (en) | Porcine circoviruses, vaccines and diagnostic reagents | |
MXPA00003263A (en) | Porcine circoviruses, vaccines and diagnostic reagents |