RU2241474C1

RU2241474C1 - Препарат из плаценты и способ его получения

Info

Publication number: RU2241474C1
Application number: RU2003110453/15A
Authority: RU
Original assignee: Скаткин Михаил Георгиевич; Никифорова Ирина Валерьевна; Фомичёва Наталья Викторовна; Еньшина Елена Витальевна; Бойкова Наталья Валерьевна; Подтабачный Иван Васильевич
Priority date: 2003-04-14
Filing date: 2003-04-14
Publication date: 2004-12-10

Abstract

Изобретение относится к области косметологии и косметической промышленности. Изобретение заключается в том, что препарат из плаценты получают отделением пуповины, амниотической оболочки от гладкого и ворсинчатого хорионов, с последующим измельчением тканей, промыванием фильтрованной водой, гемолизом тканей в течение 35-48 ч и денатурацией в течение 2-3 суток с помощью раствора гипохлорита натрия, подвергая кислотному гидролизу при постоянной температуре, промыванием, смешиванием и диспергированием до гомогенного мелкодисперсного состояния и фасовки. Изобретение обеспечивает получение стабильного при длительном хранении, эффективно действующего препарата из плаценты животных с максимальным сохранением природного состава тканей. 2 с.п. ф-лы.

Description

Изобретение относится к области косметологии, косметической промышленности и касается тканевых препаратов из плаценты и способов их получения.

Издавна плацента используется в косметологии как высокоэффективное омолаживающее средство. Препараты плаценты содержат все необходимые человеку аминокислоты, белковые соединения, нуклеиновые кислоты, микроэлементы, витамины, ферменты и другие вещества, которые участвуют в обмене веществ, благотворно влияя на жизнедеятельность клеток, обеспечивая защиту от инфекционных, радиационных и других вредных факторов воздействия внешней среды. Плацентарные препараты обладают мощным противовоспалительным, заживляющим, рассасывающим, омолаживающим и иммуностимулирующим действием.

В современной косметологии выпускаются различные косметические средства на их основе, в том числе шампуни, лосьоны, крема.

Для приготовления косметических продуктов из плаценты животных ее подвергают глубокой переработке для разрушения высокомолекулярных соединений (белков, полисахаридов, нуклеиновых кислот и др.) и полной стерилизации.

Как правило, для получения препаратов с необходимым балансом пептидов, аминокислот и т.д. требуется проведение кислотного или ферментативного гидролиза. Гидролизат подвергают также другим операциям - очистке, диспергированию, гомогенизации, стерилизации. Каждая указанная стадия требует соблюдения определенных режимов, температурных, временных, которые существенно влияют на конечный состав плацентарного препарата и его свойства.

В настоящее время поиск сбалансированных плацентарных препаратов и способов их получения остается актуальным для исследователей.

Например, известен способ получения препарата из плаценты, включающий измельчение сырья, проведение слабого кислотного гидролиза, нагревание, центрифугирование, нейтрализацию надосадочной жидкости, выделение и очистку с последующим сублимационным высушиванием продукта (US 4054648 А). Недостатком указанного способа является получение препарата с недостаточно высокой степенью биологической активности.

Известен также способ получения биологически активного тканевого препарата из плаценты, включающий промывание тканей, измельчения на гомогенизаторе, гемолиза в течение 10-18 ч в воде при температуре 8-10°С, измельчения, обработки раствором перекиси водорода, повторного измельчения, фильтрации и фасовки (RU 2148408 С1, 10.05.2000). Готовый препарат содержит не менее 0,04 мг/мл нуклеиновых кислот, не менее 0,25 мг/мл гексуроновых кислот, не более 3 мг/мл белка. Однако он проявляет недостаточную активность, так как ряд биологически активных веществ теряется при многократных обработках материала.

Известен способ получения биологически активных веществ из плаценты, который может быть указан в качестве наиболее близкого аналога. Способ заключается в промывании плаценты, отделении амниона, пуповины и хориона, гемолизе каждого вида ткани в нейтральном растворе в течение 24 ч, денатурации с помощью окисляющего реагента - диоксида хлора при комнатной температуре, промывании денатурированных тканей, измельчении, диспергировании в стерильной воде с последующей фасовкой во флаконы (RU 2033797 С1, 30.04.1995). Указанный способ также не обеспечивает получение препарата с достаточно высокой активностью и стабильностью при хранении.

Цель настоящего изобретения - получение стабильного при длительном хранении, эффективно действующего препарата из плаценты животных с максимальным сохранением природного состава тканей.

Поставленная цель достигается при использовании нового тканевого препарата из плаценты, представляющего собой сбалансированный комплекс биологически активных веществ, полученный с помощью способа, включающего следующие стадии:

- отмывку, измельчение и гемолиз ворсинчатого и гладкого хорионов, пуповины и амниотической оболочки плаценты;

- денатурацию тканей с помощью окисляющего раствора;

- диспергирование полученного полупродукта;

- при необходимости, фасовку готового продукта.

Для осуществления способа размороженную плаценту животных (свиньи, коровы) отмывают фильтрованной водой. Отделяют пуповину и амниотическую оболочку (оболочка помещается в отдельный сборник с фильтрованной водой). Ворсинчатый и гладкий хорионы, а также пуповину измельчают и помещают в отдельные сборники с фильтрованной водой. Все указанные части промывают проточной фильтрованной водой от крови и включений, заливают каждую из них в отдельных емкостях дистиллированной водой в объемном соотношении 1:2. При механическом измельчении, замораживании и оттаивании тканей происходит выделение белка. При добавлении воды эритроциты набухают и разрушаются. Гемоглобин переходит в раствор. Это явление носит название гемолиза. Процесс гемолиза предлагается проводить в течение 36-48 ч при комнатной температуре. Меняя воду, окружающую ткани, можно отделить высокомолекулярные белки от низкомолекулярных. По завершении стадии гемолиза все ткани отделяют от воды и передают на денатурацию.

Стадия денатурации представляет собой процесс расщепления тканей с их одновременной стерилизацией с помощью окисляющего раствора (гипохлорит натрия), рН которого в интервале 1,2-1,5. Процесс длится в течение 48-72 ч при постоянной температуре и обновлении раствора. Денатурированные ткани помещаются в емкости, плотно закрываются и подвергаются кислотному гидролизу при постоянной температуре.

Кислотный гидролиз и постоянный температурный режим позволяют проводить полное расщепление белков до аминокислот, избегая жестких воздействий, сохраняя и делая активными их максимальное количество.

Затем полученный полупродукт промывают до рН промывных вод 2,5-3,0 и диспергируют 3-4 раза на стерилизующем диспергаторе с получением готового препарата, который при необходимости фасуют в стерильные емкости.

На стадии диспергирования проходит процесс экстрагирования аминокислот в водную фазу. Применение ультразвуковых колебаний и высокого давления ускоряет процесс во много раз. Кроме этого, освобождаются и становятся активными и другие вещества: липиды, нуклеиновые кислоты, витамины, микро- и макроэлементы. При этом уничтожается оставшаяся после денатурации микробная флора, разрушаются гормоны. Оставшиеся следовые количества гормонов в готовом препарате не могут изменить и как-либо повлиять на гормональный фон потребителя.

Более подробно возможность осуществления способа может быть показана на следующем конкретном примере:

Пример 1.

Получение препарата из плаценты свиней.

Плаценту свиньи размораживают, промывают водой для удаления остатков крови, соломы и других включений. Отделяют пуповину, амниотическую оболочку. Часть плаценты, представляющую собой участки ворсинчатого хориона, соединенные гладким хорионом, а также пуповину, подвергают механическому измельчению. Далее ткани подвергают гемолизу в дистиллированной воде в течение 36-48 ч при комнатной температуре. По завершении стадии гемолиза все ткани отделяют от воды и передают на денатурацию с предварительным измерением их объема.

1 этап. Ворсинчатый и гладкий хорионы заливают дистиллированной водой в соотношении объемов 1:1 и добавляют окисляющий раствор гипохлорит натрия, полученный с помощью установки “Элма”. Объем добавляемого гипохлорита натрия составляет ¹/₂ от объема заливаемых тканей. Денатурация пуповины осуществляется аналогично денатурации ворсинчатого и гладкого хорионов. Амниотическую оболочку заливают дистиллированной водой в соотношении объемов 1:2 и добавляют гипохлорит натрия в объеме ¹/₂ от объема заливаемых тканей. Значение рН раствора гипохлорита натрия должно находиться в интервале 1,2-1,5 и держатся в этих пределах в течение всех этапов. Концентрация гипохлорита натрия 4,43 г/л.

2 этап. Через сутки проводится добавление ко всем тканям раствора гипохлорита натрия в соотношении ¹/₄ от первоначального объема тканей.

3 этап. Еще через сутки проводится добавление раствора гипохлорита натрия аналогично 2 этапу.

По окончании денатурации растворы сливаются, ткани не отжимаются. Денатурированные ткани должны быть белого с желтоватым оттенком цвета и мягкие на ощупь.

После проведения денатурации полупродукт оставляют в плотно закрытых емкостях для проведения кислотного гидролиза.

Затем полупродукт промывают и помещают в подготовленную емкость в пропорциях, согласно рецептуры и, в асептических условиях проводится 3-кратное диспергирование на стерилизующем диспергаторе при скорости 18 тысяч оборотов в минуту до получения гомогенной суспензии. Готовая продукция фасуется в стерильные флаконы. Полученный препарат представляет собой белую с желтовато-серым оттенком гомогенную суспензию со специфическим запахом, рН 2,5-4,0. Препарат содержит биологически активный комплекс, включающий аминокислоты, полисахариды, жирные кислоты, липиды, витамины (А, В1, В2, В6, В12, С, D, Р, РР, пантотеновую кислоту, биотин), микро- и макроэлементы, включая магний, кальций, кремний, калий, марганец, цинк, селен, медь, железо, натрий, цитокины, коэнзим Q10.

Результаты исследования аминокислотного состава показали, что препарат содержит оксипролин, аспарагиновую и глутаминовую кислоты, треонин, серин, пролин, глицин, аланин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, оксилизин, орнитин, лизин, гистидин, аргинин, альфа- ААА.

Пример 2.

Исследования биологической активности.

Препарат, полученный указанным способом, был испытан в лабораторных условиях и на практике.

Были отмечены: репарирующий эффект, бактерицидное, осветляющее действие, увлажняющее и омолаживающее действие на кожу, иммуностимулирующее действие.

Комплекс активных веществ обогащает кожу, восполняет недостаток в питании, повышает эластичность.

Наблюдалось усиление микроциркуляции крови, повышение эластичности и упругости кожи, улучшение цвета лица и разглаживание мелких морщин.

Препарат обладает ярко выраженным противовоспалительным, иммунотропным, заживляющим, защитным и противоожоговым действием.

Антиоксидантное действие препарата во много раз превышает действие супероксиддисмутазы, антиоксиданта, широко применяющегося в дорогой, элитной косметике.

Выделенный комплекс может применяться самостоятельно в виде аппликаций и в составе различных косметических средств. Мелкодисперсная структура суспензии из плаценты обеспечивает высокую активность препаратов на ее основе. Использование такой косметики в виде кремов, масок, шампуней, гелей проявляет эффект не только на поверхностных, но и глубокорасположенных тканях.

Claims

1. Способ получения препарата из плаценты, включающий отделение пуповины, амниотической оболочки, гладкого и ворсинчатого хорионов, измельчение, промывание, гемолиз, денатурацию каждой ткани с помощью окисляющего раствора, диспергирование полученного полупродукта, отличающийся тем, что для промывания используют фильтрованную воду, гемолиз тканей проводят в течение 36-48 ч, денатурация осуществляется в течение 2-3 суток с помощью раствора гипохлорита натрия, затем ткани без промывания отделяют от раствора и подвергают кислотному гидролизу при постоянной температуре, промывают до рН промывных вод 2,5-3,0, смешивают и 3-4 раза диспергируют до гомогенного мелкодисперсного состояния.

2. Препарат из плаценты, характеризующийся тем, что он получен по п.1 и включает компоненты: аминокислоты (оксипролин, аспарагиновую и глутаминовую кислоты, треонин, серин, пролин, глицин, аланин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаламин, оксилизин, орнитин, лизин, гистидин, аргинин, альфа-ААА, полисахариды, жирные кислоты, липиды), витамины (А, В1, В2, В6, В12, С, D, Р, РР, пантотеновую кислоту, биотин), микро- и макроэлементы, включая магний, кальций, кремний, калий, марганец, цинк, селен, медь, железо, натрий, цитокин, коэнзим Q10.