RU2240810C2

RU2240810C2 - Method for producing and applying embryonic antitumor modulator agent

Info

Publication number: RU2240810C2
Application number: RU2003101368/15A
Authority: RU
Inventors: н Левон Никитович Мкртч (AM); Левон Никитович Мкртчян
Original assignee: Левон Никитович Мкртчян
Priority date: 2002-01-30
Filing date: 2002-01-30
Publication date: 2004-11-27

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: method involves vaccinating patients with embryonic antitumor modulator agent containing wide range of oncofetal antigens. Vaccination is carried out in subcutaneous application once a year at a dose of 0.02-0.04 mg/kg. The preferential dose is equal to 0.03 mg/kg of body weight.

EFFECT: high stability of the agent; stimulated antitumor resistance.

4 cl, 2 dwg, 4 tbl

Description

Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии. Раскрытые в изобретении эмбриональный противоопухолевый модулятор, а также способ его получения могут быть использованы в медицинской промышленности для получения высокоэффективного средства для лечения предопухолевых состояний и профилактики злокачественных новообразований.The invention relates to medicine, in particular to oncology. The embryonic antitumor modulator disclosed in the invention, as well as the method for its preparation, can be used in the medical industry to obtain a highly effective agent for the treatment of precancerous conditions and the prevention of malignant neoplasms.

Уровень техникиState of the art

По сравнению с патогенными стимуляторами антимикробного, вирусного и паразитарного происхождения иммуногенность опухолеассоцированных антигенов довольно слаба. Это основное препятствие для формирования онкотоксических Т-клеток, для чего необходима связь опухолевых антигенов с главным комплексом гистосовместимости I-II класса. С целью решения этого вопроса для лечения отдельных видов злокачественных новообразований и профилактики рецидивов получен ряд вакцин.Compared with pathogenic stimulants of antimicrobial, viral and parasitic origin, the immunogenicity of tumor-associated antigens is rather weak. This is the main obstacle to the formation of oncotoxic T cells, which requires the connection of tumor antigens with the main histocompatibility complex of class I-II. In order to solve this issue, a number of vaccines have been obtained for the treatment of certain types of malignant neoplasms and the prevention of relapse.

Известны вакцины против меланомы, которые представляют собой аллогенные опухолевые клетки и их лизаты, аутогенные опухолевые клетки, различные антигены (MAGE-1, MAGE-3, MART-1, gr 100 и др.). Эти вакцины повышают активность цитотоксических лимфоцитов по отношению к малигнизированным клеткам, активизируют пролиферацию Т-лимфоцитов, инфильтрацию опухоли CD8+.Known vaccines against melanoma, which are allogeneic tumor cells and their lysates, autologous tumor cells, various antigens (MAGE-1, MAGE-3, MART-1, gr 100, etc.). These vaccines increase the activity of cytotoxic lymphocytes in relation to malignant cells, activate the proliferation of T-lymphocytes, tumor infiltration of CD8 +.

Известны также вакцины, которые применяются при лечении рака молочной, предстательной желез, почек и толстой кишки. Причем используют вакцины различной степени очищенности с применением термического воздействия, облучения и т.д. Получение вакцин основано на приемах генной инженерии, рекомбинации ДНК, введении в опухолевые клетки гена интерлейкина-2, фактора некроза опухоли и т.д. Они используются, главным образом, с целью противорецидивной иммунотерапии и не являются профилактическим средством в смысле повышения противоопухолевой устойчивости людей. Очевидно, что они не представляют собой универсальное профилактическое средство и их применяют против одной конкретной нозологической формы рака. Указанные вакцины содержат опухолевые клетки, хотя и нейтрализованные.Vaccines are also known for the treatment of cancer of the breast, prostate, kidney and colon. Moreover, vaccines of varying degrees of purity are used with the use of thermal effects, radiation, etc. The preparation of vaccines is based on genetic engineering techniques, DNA recombination, introduction of the interleukin-2 gene, tumor necrosis factor into tumor cells, etc. They are used mainly for the purpose of anti-relapse immunotherapy and are not a preventive measure in the sense of increasing the antitumor resistance of people. Obviously, they are not a universal prophylactic and are used against one specific nosological form of cancer. These vaccines contain tumor cells, although neutralized.

В работе Tsang K.Y. (et.al., 1995) раскрывается способ, в котором описана иммуногенность опухолевого эмбрионального антигена (ОЭА) для людей. Он содержит ОЭА-ген рекомбинантного вируса и вызывает у людей особую Т-клеточную реакцию. Эта вакцина может использоваться только при лечении таких опухолей человека, которые вызывает этот антиген.By Tsang K.Y. (et.al., 1995) discloses a method that describes the immunogenicity of a tumor embryonic antigen (OEA) for humans. It contains the OEA gene of the recombinant virus and causes a special T-cell response in humans. This vaccine can only be used in the treatment of such human tumors that cause this antigen.

Временная фармакопейная статья (ВФС 013-52-98), утвержденная Агентством по лекарствам и медицинским технологиям Минздрава Республики Армения 29.05.1998 г., раскрывает эмбриональный противоопухолевый модулятор (ЭПОМ), который является первым в ряду полученных автором данного изобретения. Данный модулятор имеет целый ряд преимуществ. Однако временная фармакопейная статья не предполагает и не раскрывает эти преимущества. Предлагаемое изобретение представляет собой результат продолжительных и строго контролируемых исследований, приведших к неожиданному открытию источника антимутагенных, иммуномодулирующих свойств, антивирусных и других активностей, объясняющих не только выраженный превентивный противоопухолевый эффект, но и санирующее воздействие при ряде других патологических состояний.The temporary pharmacopoeial article (VFS 013-52-98), approved by the Agency for Medicines and Medical Technologies of the Ministry of Health of the Republic of Armenia on May 29, 1998, discloses an embryonic antitumor modulator (EPOM), which is the first among the authors of this invention obtained. This modulator has a number of advantages. However, a temporary pharmacopoeial article does not suggest or disclose these benefits. The present invention is the result of lengthy and strictly controlled studies that led to the unexpected discovery of a source of antimutagenic, immunomodulating properties, antiviral and other activities that explain not only the pronounced preventive antitumor effect, but also the sanitizing effect in a number of other pathological conditions.

Сущность изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION

Таким образом, задачей настоящего изобретения является улучшение эффективности лечения ряда предопухолевых состояний и профилактики злокачественных новообразований. Эта задача решается путем повышения естественной противоопухолевой резистентности организма индивидуума.Thus, the objective of the present invention is to improve the effectiveness of the treatment of a number of precancerous conditions and the prevention of malignant neoplasms. This problem is solved by increasing the natural antitumor resistance of the individual organism.

Одним из аспектов указанной задачи является повышение специфической противоопухолевой устойчивости в группах высокого онкологического риска. В рамках этого аспекта предлагается вакцинопрофилактика эмбриональным противоопухолевым модулятором, который 1 раз в год вводят подкожно в эффективном количестве, предпочтительно в дозе от 0,02 до 0,04 мг/кг веса, наиболее предпочтительно в дозе 0,03 мг/кг.One of the aspects of this task is to increase the specific antitumor resistance in high cancer risk groups. Within this aspect, vaccine prophylaxis is proposed by an embryonic antitumor modulator, which is administered subcutaneously once a year in an effective amount, preferably at a dose of 0.02 to 0.04 mg / kg body weight, most preferably at a dose of 0.03 mg / kg.

По сравнению с известными способами и лекарственными средствами, предлагаемый способ и препарат предназначены для больных с предопухолевой патологией и лиц старше 35-40 лет, у которых повышен риск заболеть раком.Compared with known methods and drugs, the proposed method and drug are intended for patients with precancerous pathology and people over 35-40 years old who are at increased risk of developing cancer.

Особенностью предлагаемого способа является заполнение опросника (теста) и определение уровня предрасположенности к опухолевой патологии. Другая особенность состоит в том, что к группе высокого онкологического риска относят, в том числе, длительно курящих индивидуумов, лиц, имеющих семейную предрасположенность к раковым заболеваниям, а также тех пациентов, у которых количество фибриногена в крови в 1,5-2 раза превышает нормальный уровень.A feature of the proposed method is filling out a questionnaire (test) and determining the level of predisposition to tumor pathology. Another feature is that the group of high oncological risk includes, for example, long-term smoking individuals, persons with a family predisposition to cancer, as well as those patients in whom the amount of fibrinogen in the blood is 1.5-2 times higher normal level.

Гиперфибриногенемия также считается фактором риска в связи с тем, что, как было установлено исследованиями автора данной заявки, при ее наличии раковые клетки покрываются "фибриновым щитом", имитируют банальный общепатологический процесс и тем самым ускользают из-под иммунного надзора.Hyperfibrinogenemia is also considered a risk factor due to the fact that, as it was established by the studies of the author of this application, if it is present, the cancer cells are covered with a “fibrin shield”, imitate a common general pathological process and thereby escape from immune surveillance.

Достичь решения поставленной задачи позволяет использование в предлагаемом способе нового эмбрионального противоопухолевого модулятора, который содержит широкий пул нормальных фетальных протеогликанов (см. далее в разделе “Качественный и количественный состав целевого продукта (ЭПОМ)”).To achieve the solution of this problem allows the use in the proposed method of a new embryonic antitumor modulator, which contains a wide pool of normal fetal proteoglycans (see below in the section “Qualitative and quantitative composition of the target product (EPOM)”).

Предлагаемый в данном изобретении новый эмбриональный противоопухолевый модулятор Мкртчяна обладает превентивным противоопухолевым действием, антимутагенным и антикластогенным эффектом, интерфероногенным и иммуномодулирующим действием, а также антивирусной активностью.The new embryonic antitumor modulator Mkrtchyan proposed in this invention has a preventive antitumor effect, antimutagenic and anticlastogenic effect, interferonogenic and immunomodulating action, as well as antiviral activity.

Не претендуя на исчерпывающее и окончательное научное обоснование положительного влияния на организм предлагаемого модулятора, считается (на основании существующего знания в данной области), что в механизме реализации противоопухолевого действия ЭПОМа ключевую роль играет специфическая сенсибилизация эффекторных клеток иммунитета по отношению к онкофетальным антигенам, в силу чего усиливается киллинг малигнизированных клеток.Without claiming to be an exhaustive and final scientific justification of the positive effect of the proposed modulator on the body, it is believed (based on existing knowledge in this area) that the specific sensitization of effector immunity cells with respect to oncofetal antigens plays a key role in the mechanism of realization of the antitumor effect of EPOM. increased killing of malignant cells.

Основанием для такого вывода являются полученные автором данные реакции подавления прилипания лейкоцитов (РППЛ), реакции пассивной гемаглютинации (РПГА), реакции связывания комплемента (РСК) и реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ). Направленная стимуляция противоопухолевой защиты сопровождается повышением выработки γ -интерферона, IL-6 (в селезенке семикратно по отношению к контролю) и пролактина - уровень последнего в центральном органе иммуногенеза - тимусе, в 6 раз превышал исходный фон. Ниже (в таблицах 1-3) приводятся некоторые из названных выше наблюдений.The reason for this conclusion is the data obtained by the author of the suppression reaction of adhesion of leukocytes (RPPL), the reaction of passive hemagglutination (RPHA), the complement binding reaction (CSC) and the delayed-type hypersensitivity reaction (RGT). Targeted stimulation of antitumor protection is accompanied by an increase in the production of γ-interferon, IL-6 (seven times in the spleen in relation to the control) and prolactin — the level of the latter in the central organ of immunogenesis — the thymus, was 6 times higher than the initial background. Below (in tables 1-3) are some of the above observations.

Позитивный иммуномодулирующий эффект выявлен также у вакцинированных ЭПОМ лиц, страдающих предопухолевой патологией, длительно курящих и имеющих семейную предрасположенность к раку.A positive immunomodulatory effect was also detected in patients with EPOM vaccinated, suffering from pre-tumor pathology, smoking for a long time and having a family predisposition to cancer.

По ряду параметров - предупредительное действие в отношении возникновения гистогенетически разных форм опухолей, использование малых доз в виде подкожных инъекций в область внутренней поверхности предплечья с определением степени выраженности местной реакции, а также проведение "прививок" в год раз - эмбриональный противоопухолевый модулятор уподобляется поливалентной противораковой вакцине. В ходе наблюдения над пациентами оказалось также, что ЭПОМ обладает общеукрепляющим и омолаживающим воздействием на организм.For a number of parameters - a preventive effect against the occurrence of histogenetically different forms of tumors, the use of small doses in the form of subcutaneous injections in the inner surface of the forearm with the determination of the severity of the local reaction, as well as the "vaccination" once a year - the embryonic antitumor modulator is likened to a polyvalent anticancer vaccine . During the observation of patients, it also turned out that EPOM has a tonic and anti-aging effect on the body.

Следующим аспектом изобретения является разработка способа получения эмбрионального противоопухолевого модулятора, обеспечивающего получение целевого продукта, обладающего свойствами и качествами, раскрытыми выше.The next aspect of the invention is the development of a method for producing an embryonic antitumor modulator, which provides the target product having the properties and qualities described above.

Особенностями способа согласно данному изобретению являются: экстракция эмбриональных протеогликанов в состоянии, максимально близком к нативному, получение широкого пула онкофетальных антигенов из нормальных эмбриональных тканей различного генеза, лиофилизация (см. далее в разд. “Способ получения ЭПОМ”).The features of the method according to this invention are: extraction of embryonic proteoglycans in a state as close to native as possible, obtaining a wide pool of oncofetal antigens from normal embryonic tissues of various origins, lyophilization (see further in the section “Method for producing EPOM”).

Дополнительным аспектом изобретения является применение эмбрионального противоопухолевого модулятора согласно данному изобретению для производства препарата (в частности, противораковой вакцины) для лечения предопухолевых состояний и профилактики рака.An additional aspect of the invention is the use of an embryonic antitumor modulator according to this invention for the manufacture of a preparation (in particular an anti-cancer vaccine) for the treatment of precancerous conditions and cancer prevention.

Далее изобретение поясняется неисчерпывающими примерами вариантов выполнения и чертежами, которые предназначены только для демонстрации осуществимости изобретения, но не для ограничения.The invention is further illustrated by non-exhaustive examples of embodiments and drawings, which are intended only to demonstrate the feasibility of the invention, but not to limit.

Краткое описание фигурBrief Description of the Figures

На фиг.1 представлены результаты гельфильтрационной компьютерной хроматографии, выполненной на приборе ПЭВ-2 (Фармация).Figure 1 presents the results of gel filtration computer chromatography performed on a device PEV-2 (Pharmacy).

На фиг.2 представлены результаты жидкостной хроматографии под давлением (HPLC SP8000 PEV-2) (USA).Figure 2 presents the results of liquid chromatography under pressure (HPLC SP8000 PEV-2) (USA).

Подробное раскрытие изобретенияDetailed Disclosure of Invention

Способ получения ЭПОМаThe method of obtaining EPOM

Эмбриональные субстанции тщательно промываются в течение 4-5 часов в проточной воде и помещаются на 1,5 часа в 70° спирт (конечная концентрация). Затем ткань разрезается на кусочки, замораживается с помощью жидкого азота и гомогенизируется в специально приготовленном гомогенизаторе с большой ударной силой до порошкообразного состояния. Гомогенат разбавляется дистиллированной водой в соотношении 1:4, взбалтывается и суспензия на 20 минут помещается в шаровую мельницу, чаши и шары которой приготовлены из метаболитически инертных материалов. Предварительно последние охлаждаются до температуры 0° С. Число оборотов доводится до 400 в минуту. Контролем качества дезинтеграции эмбриональной ткани служит цитологическое исследование по выявлению рексированных клеточных ядер (более 80%), мельчайших цитоплазматических обрывов и фрагментов волокнистых структур. В плоской стеклянной посуде гомогенат подвергается ультрафиолетовому облучению в течение 25 минут, после чего центрифугируется в рефрижераторной центрифуге PC-6 в течение 15 минут при 6000 об/мин.Embryonic substances are thoroughly washed for 4-5 hours in running water and placed for 1.5 hours in 70 ° alcohol (final concentration). Then the tissue is cut into pieces, frozen with liquid nitrogen and homogenized in a specially prepared homogenizer with high impact force to a powder state. The homogenate is diluted with distilled water in a ratio of 1: 4, agitated and the suspension is placed in a ball mill for 20 minutes, the bowls and balls of which are prepared from metabolically inert materials. Previously, the latter are cooled to a temperature of 0 ° C. The number of revolutions is brought up to 400 per minute. The quality control of the disintegration of embryonic tissue is a cytological study to identify rectified cell nuclei (more than 80%), the smallest cytoplasmic breaks and fragments of fibrous structures. In a flat glass dish, the homogenate is exposed to ultraviolet radiation for 25 minutes, after which it is centrifuged in a PC-6 refrigerator centrifuge for 15 minutes at 6000 rpm.

В прозрачный супернатант добавляется 96° винный спирт в количестве, достаточном для доведения концентрации спирта в растворе до 84° , что обеспечивает выпадение в осадок гликопротеидов. Последние отделяются центрифугированием при 16-20 тыс. об/мин (g - 58400) в течение 20 минут в зональной роторной ультрацентрифуге типа UP-65. Осадок растворяется из объемного соотношения 1:2 в дистиллированной воде, обрабатывается в шаровой мельнице в течение 10 минут и вновь центрифугируется при 20 тыс. об/мин (ускорение - 58400) в течение 15 минут в центрифуге UP-65. В надосадочной жидкости определяется белок (42-57%), устанавливается вязкость (в разных сериях 13-18) и после проведения через стерилизирующие мембранные фильтры (миллипоры - 0,8) супернатант подвергается лиофилизации.96% wine alcohol is added to the clear supernatant in an amount sufficient to bring the alcohol concentration in the solution to 84 °, which ensures the precipitation of glycoproteins. The latter are separated by centrifugation at 16-20 thousand rpm (g - 58400) for 20 minutes in a zone rotary ultracentrifuge type UP-65. The precipitate is dissolved from a volume ratio of 1: 2 in distilled water, processed in a ball mill for 10 minutes and centrifuged again at 20 thousand rpm (acceleration - 58400) for 15 minutes in a UP-65 centrifuge. Protein (42-57%) is determined in the supernatant, viscosity is established (in different series 13-18), and after passing through sterilizing membrane filters (millipores - 0.8), the supernatant is lyophilized.

Пристеночная заморозка производится в специальной стерильной вращающейся камере при температуре 25-30° С. Закалка проводится в течение 24 часов в низкотемпературном шкафу. Постепенное поднятие температуры в течение 28-30 часов с -40 до +37° С осуществляет полную сублимацию.Parietal freezing is carried out in a special sterile rotating chamber at a temperature of 25-30 ° C. Quenching is carried out for 24 hours in a low-temperature cabinet. A gradual increase in temperature over 28-30 hours from -40 to + 37 ° C provides complete sublimation.

Качественный и количественный состав целевого продукта (ЭПОМ)Qualitative and quantitative composition of the target product (EPOM)

Препарат содержит пул белков - гликопротеидов, извлеченных методом спиртового осаждения. Согласно результатам аналитического электрофореза в 10% полиакриламидном геле по Девису препарат содержит 5 фракций белка. В лиофилизированных сериях препарата концентрация общего белка (при определении по Лоури с последующим спектрофотометрическим анализом) колеблется в разных сериях, приблизительно от 42 до 57 мас.%. Помимо белков в состав ЭПОМ входят около 1,5% свободных и около 8 - 10% связанных углеводов. Из ферментов присутствует аланинаминотрансфераза (АЛТ) - приблизительно 1,4 ед/л, аспартатаминотрансфераза (ACT) - приблизительно 71,9 ммоль/л, лактатдегидрогеназа (ЛДГ) - приблизительно 3,0 ед/л, щелочная фосфатаза (ЩФ) - приблизительно 24,7 ед/л, содержатся также микроэлементы: Mg - приблизительно 1,7 ммоль/л, К - приблизительно 0,96 ммоль/л, Са - приблизительно 0,65 ммоль/л, Р - приблизительно 0,52 ммоль/л, (по данным биохимического анализатора Хитачи - 911, Япония).The drug contains a pool of proteins - glycoproteins, extracted by the method of alcohol deposition. According to the results of analytical electrophoresis in 10% polyacrylamide gel according to Davis, the preparation contains 5 fractions of protein. In the lyophilized series of the drug, the concentration of total protein (as determined by Lowry, followed by spectrophotometric analysis) varies in different series, from about 42 to 57 wt.%. In addition to proteins, EPOM contains about 1.5% free and about 8-10% bound carbohydrates. Of the enzymes, alanine aminotransferase (ALT) is present - approximately 1.4 U / L, aspartate aminotransferase (ACT) - approximately 71.9 mmol / L, lactate dehydrogenase (LDH) - approximately 3.0 u / L, alkaline phosphatase (AL) - approximately 24 , 7 u / l, also contains trace elements: Mg - approximately 1.7 mmol / L, K - approximately 0.96 mmol / L, Ca - approximately 0.65 mmol / L, P - approximately 0.52 mmol / L, (according to Hitachi's biochemical analyzer - 911, Japan).

Иммуноферментный анализ на основе моноклональных антител выявил следующие раковые эмбриональные антигены (5 мг лиофилизированного ЭПОМ растворяли в 2 мл дистиллированной воды):An enzyme-linked immunosorbent assay based on monoclonal antibodies revealed the following cancer embryonic antigens (5 mg of lyophilized EPOM was dissolved in 2 ml of distilled water):

РЭА - около 1,4-1,7 нг/млCEA - about 1.4-1.7 ng / ml

АФП - около 95,0-99,0 нг/млAFP - about 95.0-99.0 ng / ml

ХГ - около 2,2-5,5 мМЕ/млCG - about 2.2-5.5 mIU / ml

ТВГ - около 45,0-50,0 нг/млTWG - about 45.0-50.0 ng / ml

Са-125 - около 13,5-14,3 Е/млCa-125 - about 13.5-14.3 U / ml

Са-19,9 - около 79,8-102,2 Е/млCa-19.9 - about 79.8-102.2 U / ml

Сокращения:Abbreviations:

ХГ - хорионический гонадотропинCG - chorionic gonadotropin

РЭА - раково-эмбриональный антигенCEA - cancer-embryonic antigen

АФП - альфа-фетопротеинAFP - alpha-fetoprotein

ТВГ - трофобластический β ₁-гликопротеинTWG - trophoblastic β ₁ -glycoprotein

Са-125 - карбогидратный антигенCa-125 - carbohydrate antigen

Са-19,9 - карбогидратный антигенCa-19.9 - carbohydrate antigen

Эмбриональные антигены (ЭАГ) в составе препарата родственны многочисленным опухолевым антигенам и дают с ними перекрестные иммунные реакции. Помимо ЭАГ, наличие которых обуславливает подлинность ЭПОМ, в каждой серии препарата имеются и другие белки, с которыми связаны ее интерфероногенные, антивирусные и антимутагенные свойства. Для выявления этих белков были применены следующие биохимические методы: гельфильтрационная компьютерная хроматография, электрофорез в полиакриламидном геле, высокочувствительная жидкостная хроматография под давлением.Embryonic antigens (EAG) in the composition of the drug are related to numerous tumor antigens and give them cross-immune responses. In addition to EAG, the presence of which determines the authenticity of EPOM, in each series of the drug there are other proteins that are associated with its interferonogenic, antiviral and antimutagenic properties. The following biochemical methods were used to identify these proteins: gel filtration computer chromatography, polyacrylamide gel electrophoresis, high-pressure liquid chromatography under pressure.

Гельфильтрационная компьютерная хроматография - проводилась на аппарате фирмы “Фармация” (Франция), на колонках 5000 Р 7,5 мм × 30 см РВ, 005,5%. Получены три пика: наиболее значительный третий пик с мол. массой 150 КД и второй - с мол. массой 40 КД.Gel filtration computer chromatography - was carried out on an apparatus of the company "Pharmacy" (France), on columns 5000 R 7.5 mm × 30 cm PB, 005.5%. Three peaks were obtained: the most significant third peak with a pier. mass of 150 KD and the second - with a pier. weighing 40 cd.

Электрофорез в полиакриламидном геле - обнаружено наличие в сериях препаратов 5 фракций белков с мол. массой 72, 67, 58, 50 и 40 кД. Фракция белков с мол. массой 72 кД имела электрофоретическую активность, характерную для альбумина и АФП, которые сходны по молекулярным массам и биологическим свойствам (АФП - эмбриональный альбумин).Polyacrylamide gel electrophoresis - the presence of 5 protein fractions per mol. weighing 72, 67, 58, 50 and 40 kD. Protein fraction with mol. with a mass of 72 kD had an electrophoretic activity characteristic of albumin and AFP, which are similar in molecular weights and biological properties (AFP - embryonic albumin).

Жидкостная хроматография под давлением. Структурный анализ пептидов, содержащихся в препарате, проведен на хроматографе Р-8000 фирмы Спектро-Физико (США). Длина волны 214 нм. Наиболее значительный и четкий пик 3-й с временем задержки 2679 м. Остальные пики менее четкие.Liquid chromatography under pressure. Structural analysis of the peptides contained in the preparation was carried out on a R-8000 chromatograph from Spectro-Physico (USA). Wavelength 214 nm. The most significant and clear peak is the 3rd with a delay time of 2679 m. The remaining peaks are less clear.

Электронный парамагнитный резонанс (ЭПР). Учитывая важную биологическую роль свободных радикалов, образцы различных серий препарата были подвергнуты исследованию методом ЭПР на аппарате фирмы “Вариан” с чувствительностью 10¹¹-10¹²спин. Записи спектра эталона (марганцевый эталон) и 7 изучаемых образцов препарата показали, что концентрация парамагнитных частиц во всех образцах ниже чувствительности прибора, что свидетельствует об отсутствии в ЭПОМе свободных радикалов.Electronic paramagnetic resonance (EPR). Given the important biological role of free radicals, samples of various series of the preparation were subjected to EPR analysis on a Varian apparatus with a sensitivity of 10 ¹¹ -10 ¹² spin. Records of the spectrum of the standard (manganese standard) and 7 samples of the preparation studied showed that the concentration of paramagnetic particles in all samples is lower than the sensitivity of the device, which indicates the absence of free radicals in the EPOM.

Количественное определение белка. Активность определяется наличием в препарате белков. Определение пула белка осуществляли по методу Лоури с последующим определением интенсивности окрашивания на спектрофотометре (СФ-26 ЛОМО) при длине волны 750 нм.Quantification of protein. Activity is determined by the presence of proteins in the preparation. Determination of the protein pool was carried out according to the Lowry method, followed by determination of the staining intensity on a spectrophotometer (SF-26 LOMO) at a wavelength of 750 nm.

Наличие РЭА выявляли с помощью иммуноферментного и радиоиммунного методов. ИФА проводили с помощью имеющихся тест-наборов фирмы Роше. Содержание трофобластического β ₁-гликопротеина (ТБГ) определялось радиоиммунным методом отечественным набором.The presence of CEA was detected using enzyme-linked immunosorbent and radioimmune methods. ELISA was performed using available Roche test kits. The content of trophoblastic β ₁ -glycoprotein (TBH) was determined by the radioimmune method using a domestic kit.

Биологическая активность. Учитывая выраженную противоопухолевую активность препарата в эксперименте на перевиваемых опухолях (асцитная опухоль Эрлиха мышей, саркома 37 мышей, асцитная гепатома Зайделя, лимфосаркома Плисса и карциносаркома Уокера крыс) и при химическом канцерогенезе у крыс, индуцированном 7,12 - ДМБА и бензпиреном, за единицу активности препарата принимается такое его количество (однократная доза), которая обеспечивает 50% торможение роста опухоли. В качестве тест-системы используется лимфосаркома Плисса у крыс. В опытах использовались белые крысы самцы линии Vistar, прошедшие карантин не менее 10 дней, средний вес животных 145 г. Препарат вводили парэнтерально за неделю до введения суспензии опухолевых клеток.Biological activity. Given the pronounced antitumor activity of the drug in an experiment on transplanted tumors (Ehrlich mouse ascites tumor, 37 mouse sarcoma, Seidel’s ascites hepatoma, Pliss lymphosarcoma and rat Walker carcinosarcoma) and in rat carcinogenesis induced by 7.12 A unit of activity the drug is taken in such quantity (single dose), which provides 50% inhibition of tumor growth. Pliss lymphosarcoma in rats is used as a test system. In the experiments, white rats were used, male Vistar line, quarantined for at least 10 days, the average weight of animals was 145 g. The drug was administered parenterally a week before the introduction of a suspension of tumor cells.

Дополнительная характеристика целевого продуктаAdditional characteristics of the target product

ЭПОМ представляет собой пористую, мягкую массу желтовато-белого цвета без запаха и вкуса.EPOM is a porous, soft mass of yellowish-white color, odorless and tasteless.

При введении во флакон 2 мл изотонического 0,9% раствора NaCl ресуспензируется в течение около 15 минут без образования неразбивающихся хлопьев и комочков.When 2 ml of an isotonic 0.9% NaCl solution is introduced into the vial, it is resuspended for about 15 minutes without the formation of unbreakable flakes and lumps.

Инъекционный раствор представляет собой, предпочтительно, 0,02% непрозрачную гомогенную жидкость с желтоватым оттенком. Время полной деформации - около 15 минут.The injection solution is preferably a 0.02% opaque homogeneous liquid with a yellowish tint. The time of complete deformation is about 15 minutes.

Цветность раствора не превышает эталон цветности N 50 (ГФ XI, вып.1, стр.194).The color of the solution does not exceed the color standard N 50 (GF XI, issue 1, p. 194).

рН раствора: 6,5-8,5 (определен потенциометрически РФ XI, 1, стр.113).pH of the solution: 6.5-8.5 (determined potentiometrically RF XI, 1, p. 113).

Остаточная влага. Определение проводили из 0,1 грамма препарата при 100° С, в течение 1 часа (ГФ XI, 1). Содержание влаги не более 9%.Residual moisture. The determination was carried out from 0.1 grams of the drug at 100 ° C, for 1 hour (GF XI, 1). The moisture content is not more than 9%.

Растворимость. Препарат трудно растворим в воде и 0,9% изотоническом растворе NaCl; практически не растворяется в 95% спирте и эфире (ГФ XI, 1).Solubility. The drug is hardly soluble in water and 0.9% isotonic NaCl; practically insoluble in 95% alcohol and ether (HF XI, 1).

Подлинность. 0,003 г сухого порошка растворяют в 10 мл воды (раствор А).Authenticity. 0.003 g of dry powder is dissolved in 10 ml of water (solution A).

К 5 мл раствора А прибавляют 3-4 капли концентрированной азотной кислоты: сразу выпадает хлопьевидный осадок (белок).3-4 drops of concentrated nitric acid are added to 5 ml of solution A: a flocculent precipitate (protein) immediately precipitates.

К 5 мл раствора А прибавляют 0,1 мл 0,1% раствора нингидрина и нагревают до кипения. Появляется сине-фиолетовое окрашивание (аминокислотная часть).To 5 ml of solution A, 0.1 ml of a 0.1% solution of ninhydrin is added and heated to a boil. A blue-violet coloration appears (amino acid part).

Испытание на стерильность. Выдерживает требования, указанные в ГФ XI, вып.2, стр.187.Sterility test. Maintains the requirements specified in GF XI, issue 2, p. 187.

Механические включения. Определение механических включений проводят в соответствии с “Инструкцией по контролю на механические включения инъекционных растворов” (И 42-3-85), утвержденной МЗ СССР 10.10.85.Mechanical inclusion. The determination of mechanical inclusions is carried out in accordance with the “Instructions for the control of mechanical inclusions of injection solutions” (I 42-3-85), approved by the Ministry of Health of the USSR 10.10.85.

Испытания на токсичность. Препарат вводили животным в двух дозах, превышающих терапевтическую для человека в 200 раз (15 мг/кг) и 10 раз (0,7 мг/кг).Toxicity tests. The drug was administered to animals in two doses exceeding the therapeutic for humans 200 times (15 mg / kg) and 10 times (0.7 mg / kg).

Методика иммуноферментного определения РЭА в различных сериях препаратаEnzyme immunoassay for CEA in various series of the drug

Принцип реакции: основой иммуноферментного анализа (ИФА) является иммунная реакция испытуемых проб с моноклональными мышиными AT к определяемому АГ и с моноклональными AT к этим AT, ковалентно связанными с пероксидазой хрена. В одноступенчатом твердофазном ИФА, искомый в пробах РЭА может реагировать со специфическими моноклональными AT, и одновременно с конъюгированными анти-РЭА AT, образуя сэндвич-комплекс. После окончания иммунной реакции и отмывания следует инкубация с раствором рабочего субстрата - тетраметилбензидином. Результаты развивающейся окраски определяют количество связанного анти-РЭА пероксидазного конъюгата. По интенсивности окраски, вызываемой энзиматической реакцией, устанавливается концентрация искомого АГ в испытуемых пробах.Reaction principle: enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is the immune response of test samples with monoclonal murine ATs to detectable AG and monoclonal ATs to these ATs covalently linked to horseradish peroxidase. In a single-stage solid-phase ELISA, the CEA required in the samples can react with specific monoclonal ATs, and simultaneously with conjugated anti-CEA ATs, forming a sandwich complex. After the end of the immune reaction and washing, it should be incubated with a solution of the working substrate - tetramethylbenzidine. Developing coloration results determine the amount of bound anti-CEA peroxidase conjugate. The concentration of the desired AH in the test samples is determined by the color intensity caused by the enzymatic reaction.

Методика реакции. Для выявления различных РЭА лиофилизированные серии препарата растворяют в физиологическом растворе из расчета 1 мг/мл, хорошо размешивают и выдерживают, как и другие компоненты ИФА, в течение 1 часа при комнатной температуре.The reaction technique. To identify various CEA, lyophilized series of the drug are dissolved in physiological saline at a rate of 1 mg / ml, mixed well and kept, like other ELISA components, for 1 hour at room temperature.

Бусы с моноклональными AT помещают в дубликатные пробирки, куда прибавляют испытуемые пробы в объеме 50 мкл, стандарты определяемого РЭА, контроль - РЭА сыворотки человека, исключая одну пустую пробирку без бусинки - пустой реагент. Затем во все пробирки, кроме пустой, вносят по 250 мкл конъюгата против РЭА AT и инкубируют в термостате при 37° С, постоянно встряхивая в течение 15 минут. По окончании иммунной реакции буфер в пробирках промывают.Beads with monoclonal AT are placed in duplicate tubes, where test samples are added in a volume of 50 μl, the standards are determined by CEA, control - CEA of human serum, excluding one empty tube without a bead - an empty reagent. Then, in all tubes except the empty one, 250 μl of the conjugate against CEA AT were added and incubated in an incubator at 37 ° C, constantly shaking for 15 minutes. At the end of the immune reaction, the buffer in the tubes is washed.

После окончания иммунной реакции готовят раствор рабочего субстрата по прилагаемой к набору инструкции. Рабочий раствор в объеме 250 мкл добавляют во все пробирки. После 15 минут инкубации при 37° С, при постоянном встряхивании и защите от яркого света, реакцию прекращают добавлением 1 мл 5% раствора серной кислоты и смешиванием без разбрызгивания. В пределах 1 часа после остановки энзиматической реакции измеряют адсорбцию испытуемых проб, стандартов РЭА и контроля сыворотки против пустой пробы, на спектрофотометре при 450 нм.After the end of the immune reaction, a solution of the working substrate is prepared according to the instructions attached to the kit. A working solution in a volume of 250 μl is added to all tubes. After 15 minutes of incubation at 37 ° C, with constant shaking and protection from bright light, the reaction is stopped by adding 1 ml of 5% sulfuric acid solution and mixing without spraying. Within 1 hour after stopping the enzymatic reaction, the adsorption of test samples, CEA standards and control of serum against an empty sample is measured on a spectrophotometer at 450 nm.

Уровень искомого РЭА определяют по стандартной кривой, построенной по величинам абсорбции, полученным для каждого из стандартов РЭА, с определенной концентрацией РЭА в МЕ/мл.The level of the desired CEA is determined by a standard curve constructed from the absorbance values obtained for each of the CEA standards with a certain CEA concentration in IU / ml.

Неизвестные концентрации РЭА в испытуемых пробах определяют по стандартной кривой, используя величину средней абсорбции между контролем и каждой пробой.Unknown CEA concentrations in the test samples are determined from the standard curve using the average absorbance between the control and each sample.

Для выражения результатов реакции в нг/мл, полученные в ME, умножаются на 1,25.To express the reaction results in ng / ml, those obtained in ME are multiplied by 1.25.

Количественное определение белка. Около 0,1 г порошка препарата (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл и доводят объем изотоническим 0,9% раствором хлорида натрия до метки. Одновременно в колбы переносят по 1 мл полученного раствора и рабочего стандартного раствора (примечание 1), и воды (контрольный раствор), затем прибавляют по 1 мл 1,2% раствора едкого натра. Все смеси оставляют на 30 минут. Затем в эти три колбы прибавляют по 4 мл раствора В (примечание 3), перемешивают и оставляют на 10 минут, после чего добавляют 0,4 мл реактива Фолина (примечание 4), перемешивают и через 30 минут на спектрофотометре в кюветах толщиной слоя 1 см измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов по отношению к контрольному раствору при длине волны 750 нм.Quantification of protein. About 0.1 g of the powder of the drug (accurately weighed) is placed in a volumetric flask with a capacity of 200 ml and the volume is adjusted with an isotonic 0.9% sodium chloride solution to the mark. At the same time, 1 ml of the resulting solution and the working standard solution (Note 1) and water (control solution) are transferred to the flasks, then 1 ml of a 1.2% sodium hydroxide solution is added. All mixtures are left for 30 minutes. Then, 4 ml of solution B are added to these three flasks (Note 3), stirred and left for 10 minutes, after which 0.4 ml of Folin's reagent is added (Note 4), stirred and after 30 minutes on a spectrophotometer in cuvettes 1 cm thick. measure the optical density of the test and standard solutions with respect to the control solution at a wavelength of 750 nm.

Содержание белка в % (X), вычисляют по формулеThe protein content in% (X), calculated by the formula

где Cn - концентрация белка в рабочем стандартном растворе альбумина; Cl - концентрация испытуемого раствора; D1 - показатель оптической плотности испытуемого раствора; Dn - показатель оптической плотности стандартного раствора альбумина; b - остаточная влага.where Cn is the concentration of protein in a working standard solution of albumin; Cl is the concentration of the test solution; D1 is an indicator of the optical density of the test solution; Dn is an indicator of the optical density of a standard albumin solution; b - residual moisture.

Содержание белка в препарате в пересчете на сухое вещество предпочтительно составляет 42-57%.The protein content in the preparation in terms of dry matter is preferably 42-57%.

Примечание:Note:

1. Приготовление рабочего стандартного раствора альбумина1. Preparation of a working standard solution of albumin

0,05 г бычьего альбумина, отвечающего требованиям (Aibumin bovine ciryst. Rcascarch grade. “SERVA”) растворяют в изотоническом 0,9% растворе NaCl в мерной колбе вместительностью 100 мл и доводят до метки тем же изотоническим раствором. 1 мл стандартного раствора содержит 0,0005 г альбумина.0.05 g of bovine eligible albumin (Aibumin bovine ciryst. Rcascarch grade. “SERVA”) was dissolved in an isotonic 0.9% NaCl solution in a 100 ml volumetric flask and adjusted to the mark with the same isotonic solution. 1 ml of a standard solution contains 0.0005 g of albumin.

2. Приготовление раствора А2. Preparation of solution A

К 2,5 мл 2,5% раствора виннокислого калия и натрия прибавляют 2,5 мл 2% раствора CuSО₄× 5H₂О и 0,12 мл 1,2% раствора едкого натра (раствор А).2.5 ml of a 2% solution of CuSO ₄ × 5H ₂ O and 0.12 ml of a 1.2% sodium hydroxide solution (solution A) are added to 2.5 ml of a 2.5% solution of potassium tartrate and sodium.

3. Приготовление раствора В3. Preparation of solution B

К 20 мл 2% раствора карбоната натрия прибавляют 0,4 мл раствора А (раствор В). Раствор В готовят непосредственно перед использованием.0.4 ml of solution A (solution B) is added to 20 ml of a 2% sodium carbonate solution. Solution B is prepared immediately before use.

4. Приготовление реактива Фолина4. Preparation of Folin's reagent

В круглодонную колбу на 300-500 мл помещают 20 г двуводного вольфрамовокислого натрия и растворяют в 140 мл дистиллированной воды. К раствору добавляют 10 мл 85% фосфорной кислоты и 20 мл концентрированной соляной кислоты. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят в течение 10 часов. Затем в колбу добавляют 30 г сернокислого лития (Li₂SO₄× Н₂О), 10 мл дистиллированной воды и несколько капель брома. Смесь кипятят 15 минут для удаления избытка брома без холодильника под тягой. Раствор охлаждают, объем реактива доводят до 200 мл. Реактив может храниться длительное время. Перед употреблением нужное для работы количество реактива Фолина разбавляют дистиллированной водой в два раза.In a 300-500 ml round-bottom flask, 20 g of sodium tungstate is added and dissolved in 140 ml of distilled water. 10 ml of 85% phosphoric acid and 20 ml of concentrated hydrochloric acid are added to the solution. A reflux condenser was attached to the flask and the mixture was boiled for 10 hours. Then, 30 g of lithium sulfate (Li ₂ SO ₄ × H ₂ O), 10 ml of distilled water and a few drops of bromine are added to the flask. The mixture is boiled for 15 minutes to remove excess bromine without a refrigerator under draft. The solution is cooled, the volume of the reagent is adjusted to 200 ml. Reagent can be stored for a long time. Before use, the amount of Folin reagent required for work is diluted with distilled water twice.

Согласно требованиям, предъявляемым к новым лекарственным средствам, были изучены возможная острая и хроническая токсичность ЭПОМ на различных видах экспериментальных животных: мышах, крысах, кроликах, морских свинках и собаках.According to the requirements for new drugs, we studied the possible acute and chronic toxicity of EPOM in various types of experimental animals: mice, rats, rabbits, guinea pigs and dogs.

Исследование на возможную острую токсичность ЭПОМStudy of possible acute toxicity of EPOM

Исследования проведены на 38 белых беспородных мышах, 35 сингенных мышах линии СВА, а также 38 белых беспородных и 35 крысах линии Вистар. Использованы гематологические и биохимические методы, проведены морфологические исследования внутренних органов, изучено состояние сердечно-сосудистой, нервной, выделительной систем, деятельности желудочно-кишечного тракта.The studies were performed on 38 white mongrel mice, 35 syngeneic mice of the CBA line, as well as 38 white mongrel and 35 Wistar rats. Hematological and biochemical methods were used, morphological studies of internal organs were carried out, the state of the cardiovascular, nervous, excretory systems, and the activity of the gastrointestinal tract were studied.

Животные были распределены по 5-7 в каждой группе. ЭПОМ вводился п/к и внутрибрюшинно. Исходная масса тела у белых мышей колебалась в пределах 19,0-24,4 г, крыс линии Вистар в среднем – 140 г.Animals were distributed in 5-7 in each group. EPOM was administered sc and intraperitoneally. The initial body weight in white mice ranged from 19.0-24.4 g, of Wistar rats, on average, 140 g.

Для определения ЛД₅₀ мышам были введены максимально возможные дозы: для п/к введения - 2,5 мг белка в 0,5 мл раствора и для в/б введения - 2,5 мг белка в 0,5 мл раствора. Введение указанных максимальных доз не вызывало гибели животных в течение 2-недельного срока наблюдения.To determine the LD, ₅₀ mice were given the maximum possible doses: for sc administration, 2.5 mg of protein in 0.5 ml of solution and for iv administration, 2.5 mg of protein in 0.5 ml of solution. The introduction of these maximum doses did not cause the death of animals during the 2-week observation period.

Для выявления ЛД₅₀ ЭПОМ у крыс также были использованы максимально возможные дозы: п/к - 5,0 мг ЭПОМ в 1,0 мл раствора и в/б - 5,0 мг ЭПОМ в 1,0 мл раствора. В течение всего срока наблюдения ни разу не отмечалась гибель крыс ни в опытной, ни в контрольной группах. Ежедневное наблюдение не выявило изменений в поведении животных по сравнению с контролем. Судорог и нарушений координации движений не наблюдалось, тонус скелетных мышц был в норме. Реакции на болевые, звуковые, тактильные и световые раздражители не отличались от таковых у контрольных животных. Волосяной покров тела оставался без изменений, диспептические явления отсутствовали, потребление корма и воды было нормальным. Масса тела подопытных животных определялась 2 раза в течение срока наблюдения. В конце опыта установлено увеличение массы тела как опытных, так и контрольных мышей в пределах от 2 до 5 г и у крыс - от 20 до 23 г. Общий и биохимический анализ крови в опытной и контрольной группах не выявил отклонений.To detect LD _{50 of} EPOM in rats, the maximum possible doses were also used: sc - 5.0 mg of EPOM in 1.0 ml of solution and ip - 5.0 mg of EPOM in 1.0 ml of solution. During the entire observation period, death of rats was never observed in either the experimental or control groups. Daily observation did not reveal changes in the behavior of animals compared with the control. Convulsions and impaired coordination of movements were not observed, skeletal muscle tone was normal. Reactions to painful, sound, tactile and light stimuli did not differ from those in control animals. Body hair remained unchanged, dyspeptic phenomena were absent, feed and water intake was normal. The body weight of the experimental animals was determined 2 times during the observation period. At the end of the experiment, an increase in body weight of both experimental and control mice was found to be in the range from 2 to 5 g and in rats from 20 to 23 g. A general and biochemical blood test in the experimental and control groups did not reveal deviations.

Исследование на возможную хроническую токсичность ЭПОМStudy for possible chronic toxicity of EPOM

Исследование проводили на 180 беспородных крысах, разделенных на 2 группы. В опытной группе были по 80 самцов и самок, в контрольной - по 10 самцов и самок. Вес животных составил 120-140 г. Животным вводили ЭПОМ в течение трех дней, пути введения - п/к и в/б. Наблюдение над животными велись в течение 2 месяцев. Были использованы 3 дозы - 2,5; 5,0 и 10,0 мг на кг веса, которые вводились трехкратно. Суммарные дозы соответственно 7,5; 15; 30 мг/кг веса.The study was performed on 180 outbred rats, divided into 2 groups. In the experimental group were 80 males and females, in the control - 10 males and females. The weight of the animals was 120-140 g. The animals were given EPOM for three days, the route of administration was s / c and / b. Observation of animals was carried out for 2 months. 3 doses were used - 2.5; 5.0 and 10.0 mg per kg of body weight, which were administered three times. Total doses, respectively 7.5; fifteen; 30 mg / kg of body weight.

Ежедневные наблюдения за состоянием и поведением животных показало, что все животные переносят введение ЭПОМ хорошо, не отмечалось никаких изменений в их поведении по сравнению с контролем плацебо. Ни одна из использованных доз ЭПОМ не вызывала у крыс изменений волосяного покрова, нарушений со стороны ЖКТ и выделительной системы.Daily monitoring of the condition and behavior of animals showed that all animals tolerate the introduction of EPOM well, there were no changes in their behavior compared with the placebo control. None of the doses of EPOM used in rats caused changes in the hairline, disorders of the gastrointestinal tract and excretory system.

В соответствующей таблице приводится количество эритроцитов × 10¹² и лейкоцитов × 10⁸, а также морфологический состав крови - базофилы, эозинофилы, нейтрофилы, лимфоциты, моноциты - после введения, на 24-й день и в начале опыта. Заключение: гематологические показатели у крыс опытной и контрольной групп в означенные выше сроки наблюдений были сходны.The corresponding table shows the number of red blood cells × 10 ¹² and white blood cells × 10 ⁸ , as well as the morphological composition of blood - basophils, eosinophils, neutrophils, lymphocytes, monocytes - after administration, on the 24th day and at the beginning of the experiment. Conclusion: the hematological parameters in rats of the experimental and control groups in the above observation periods were similar.

Сахар крови в контроле в конце срока наблюдения был 81 мг/%, а в опытной группе 82,3 мг/%, остаточный азот соответственно - 24,2 и 25,1 мг/%, общий белок - 6,3 и 6,1 мг/% соответственно.Blood sugar in the control at the end of the observation period was 81 mg /%, and in the experimental group 82.3 mg /%, residual nitrogen, respectively, 24.2 and 25.1 mg /%, total protein 6.3 and 6.1 mg /%, respectively.

Внутренние органы, а также головной мозг беспородных крыс, получивших трехкратно ЭПОМ п/к в суммарной дозе 30,0 мг, был подвергнут гистологическому исследованию с применением как обычных методов гистологического исследования, так и некоторых гистохимических методов. В кардиомиоцитах, гепатоцитах и эпителии проксимального отдела нефрона - слабо выраженная белковая дистрофия, а также умеренно выраженное застойное полнокровие легких, печени и почек.The internal organs, as well as the brain of outbred rats, which received three times EPOM sc in a total dose of 30.0 mg, were subjected to histological examination using both conventional histological examination methods and some histochemical methods. In cardiomyocytes, hepatocytes and epithelium of the proximal nephron there is a mild protein dystrophy, as well as a mild congestive congestion of the lungs, liver and kidneys.

Аналогичные данные выявлены при изучении возможной хронической токсичности у кроликов. У всех животных проводились электрокардиографические исследования: ZCC - 150-160 в минуту, PQ - 0,07 сек, QRS - 0,04 сек, QT - 0,14 сек. Зубцы P_i част.(-), Р_II,III(+) - 0,03-0,04; P_i<P_II<P_III, r₂0,07 -0,25; R₃>R₂, R₃ 0,08 - 0,35, Т_II - высокий, сегмент ST - на изолинии.Similar data were revealed in the study of possible chronic toxicity in rabbits. All animals underwent electrocardiographic studies: ZCC - 150-160 per minute, PQ - 0.07 sec, QRS - 0.04 sec, QT - 0.14 sec. Prongs P _i frequent (-), P _{II, III} (+) - 0.03-0.04; P _i <P _II <P _III , r ₂ 0.07 -0.25; R ₃ > R ₂ , R ₃ 0.08 - 0.35, T _II - high, ST segment - on the isoline.

Дыхательный коэффициент - 0,83, частота дыхания в состоянии покоя 0,97 Гц (75 в минуту).The respiratory coefficient is 0.83, the respiratory rate at rest is 0.97 Hz (75 per minute).

Проведено тщательное изучение возможной хронической токсичности эмбрионального противоопухолевого модулятора на собаках.A thorough study of the possible chronic toxicity of the embryonic antitumor modulator in dogs has been carried out.

Эксперименты были проведены на 24 беспородных половозрелых собаках (12 самцов и 12 самок) с начальной массой тела 15,2-18,1 кг согласно "Правилам доклинической оценки безвредности фармакологических средств", Москва, 1998.The experiments were conducted on 24 outbred mature dogs (12 males and 12 females) with an initial body weight of 15.2-18.1 kg according to the Rules for Preclinical Evaluation of the Safety of Pharmacological Products, Moscow, 1998.

После трехнедельного карантина и акклиматизации собаки получили ЭПОМ в 1 терапевтической для человека дозе (0,03 мг/кг), 10-кратной терапевтической дозе и 25-кратной дозе (0,75 мг/кг).After three weeks of quarantine and acclimatization, the dogs received EPOM in 1 therapeutic dose for humans (0.03 mg / kg), 10-fold therapeutic dose and 25-fold dose (0.75 mg / kg).

Изучены следующие параметры: динамика массы тела, число сердечных сокращений в минуту, частота дыхания, ЭКГ, ректальная температура, картина периферической крови, биохимические показатели сыворотки крови (глюкоза, общий белок, креатин, мочевина, холестерин, активность ЩФ, ЛДГ, АЛТ, ACT), биохимические показатели мочи (белок, глюкоза, биллирубин, мочевина, электролиты). Исследования проводились 2 раза - до начала введения ЭПОМ (на 8-е и 15-е сутки после помещения собак в виварий), 3 раза в течение эксперимента (на 7-е, 15-е и 29-е сутки).The following parameters were studied: body weight dynamics, heart rate per minute, respiratory rate, ECG, rectal temperature, peripheral blood picture, serum biochemical parameters (glucose, total protein, creatine, urea, cholesterol, alkaline phosphatase activity, LDH, ALT, ACT ), biochemical parameters of urine (protein, glucose, bilirubin, urea, electrolytes). The studies were conducted 2 times - before the introduction of EPOM (on the 8th and 15th day after placing the dogs in the vivarium), 3 times during the experiment (on the 7th, 15th and 29th day).

Данный раздел "Изучение фармакологической активности и безвредности ЭПОМ" занимает 114 страниц отчета и снабжен 43 таблицами. С тем, чтобы не загромождать текстуальную часть патента цифровыми данными, отметим лишь общий вывод - отсутствие токсичности ЭПОМ в эксперименте на собаках.This section "Study of the pharmacological activity and harmlessness of EPOM" occupies 114 pages of the report and is equipped with 43 tables. In order not to clutter up the textual part of the patent with digital data, we only note the general conclusion - the absence of toxicity of EPOM in an experiment on dogs.

Исследование возможной кластогенности, мутагенности и гонадотоксичности ЭПОМStudy of possible clastogenicity, mutagenicity and gonadotoxicity of EPOM

Согласно требованиям Национального института по изучению рака США соединения, которые могут применяться для химиопрофилактики рака, не должны обладать токсичностью и мутагенностью и вместе с этим оказывать антимутагенный эффект (Boone C.W., Kellofl G.J. Development of surrogate endpoint biomarkers for clinical trials of cancer chemopreventive agents. - J.Cell Biochem., 1994, Suppl. 19, 10-22).According to the requirements of the National Cancer Institute of the United States, compounds that can be used for cancer chemoprevention should not be toxic and mutagenic, and at the same time have an antimutagenic effect (Boone CW, Kellofl GJ Development of surrogate endpoint biomarkers for clinical trials of cancer chemopreventive agents .-- J. Cell Biochem., 1994, Suppl. 19, 10-22).

ЭПОМ был тестирован на 20 крысах и 80 мышах на наличие кластогенных свойств согласно требованиям ВОЗ. Даже высокие дозы ЭПОМ при многократном введении не индуцировали цитогенетический эффект в клетках костного мозга грызунов.EPOM was tested on 20 rats and 80 mice for the presence of clastogenic properties according to WHO requirements. Even high doses of EPOM with repeated administration did not induce a cytogenetic effect in rodent bone marrow cells.

Изучение антимутагенной (антикластогенной) активности ЭПОМ проводилось на крысах, которым ЭПОМ вводился за 15 и 5 суток (общая доза 5 мг белка) до воздействия бенз(а)пирена (40 мг/кг) или 7,12 - диметилбенз(а)антрацена (10 мг/кг). Изучение клеток костного мозга крыс через 24 часа показало достоверное уменьшение количества мегакариоцитов с хромосомными аберрациями (в 1,5 раза в обоих случаях; р<0.001) по сравнению с контролем (только воздействие канцерогенов).The study of antimutagenic (anticlastogenic) activity of EPOM was carried out in rats, which were administered EPOM 15 and 5 days later (total dose of 5 mg protein) before exposure to benzo (a) pyrene (40 mg / kg) or 7.12 - dimethylbenz (a) anthracene ( 10 mg / kg). The study of rat bone marrow cells after 24 hours showed a significant decrease in the number of megakaryocytes with chromosomal aberrations (1.5 times in both cases; p <0.001) compared with the control (only carcinogens).

Определение длительности антимутагенного эффекта, вызываемого ЭПОМ, было проведено на мышах. ЭПОМ вводился животным по описанной выше схеме (общая доза 1 мг белка). В качестве мутагена использовали циклофосфан (30 мг/кг, внутрибрюшинно), который вводили мышам на 6, 7, 8, 11, 13, 16, 21 и 36 сутки после второго введения ЭПОМ. Показано, что ЭПОМ достоверно снижает кластогенный эффект, выявляемый по наличию микроядер в эритроцитах костного мозга с 6 по 11 сутки (на 29-50%).Determination of the duration of the antimutagenic effect caused by EPOM was carried out in mice. EPOM was administered to animals according to the scheme described above (total dose of 1 mg protein). Cyclophosphamide (30 mg / kg, ip) was used as a mutagen, which was administered to mice on days 6, 7, 8, 11, 13, 16, 21, and 36 after the second administration of EPOM. It was shown that EPOM significantly reduces the clastogenic effect, revealed by the presence of micronuclei in bone marrow erythrocytes from 6 to 11 days (by 29-50%).

Таким образом, ЭПОМ при отсутствии кластогенных свойств обладает выраженной антимутагенной активностью.Thus, EPOM in the absence of clastogenic properties has a pronounced antimutagenic activity.

При изучении возможной гонадотоксичности ЭПОМ, методом доминантных летальных мутаций (ДЛМ), использовано 20 самцов нелинейных крыс массой 130-150 г. ЭПОМ вводился в дозе, соответствующей 200 человеческим дозам. К каждому самцу подсаживали по 3 самки. Метод ДЛМ основан на изучении эмбриональной смертности в потомстве самцов, подвергшихся действию какого-либо агента. Метод отражает чувствительность: I неделя - зрелых сперматозоидов; II неделя - поздних сперматид; III - неделя средних и ранних сперматид. Всего использовано в экспериментах 180 самок (140-160 г) - 90 в опыте и 90 в контроле. Оплодотворенных самок вскрывали на 19-20 день беременности и подсчитывали количество живых и мертвых эмбрионов, число желтых тел в яичниках, смертность до и после имплантации. Статистическую обработку полученных результатов проводили по методу Стьюдента - Фишера и критерию Х-квадрат.When studying the possible gonadotoxicity of EPOM, using the method of dominant lethal mutations (DLM), 20 male non-linear rats weighing 130-150 g were used. EPOM was administered in a dose corresponding to 200 human doses. 3 females were planted for each male. The DLM method is based on the study of embryonic mortality in the offspring of males exposed to an agent. The method reflects sensitivity: I week - mature sperm; II week - late spermatids; III - a week of medium and early spermatids. A total of 180 females (140-160 g) were used in the experiments - 90 in the experiment and 90 in the control. Fertilized females were opened on the 19-20th day of pregnancy and the number of live and dead embryos, the number of corpus luteum in the ovaries, and mortality before and after implantation were counted. Statistical processing of the results was carried out according to the Student-Fisher method and the X-square criterion.

На основании полученных данных следует прийти к выводу, что ЭПОМ в дозе 15 мг/кг (200 человеческих доз) не влияет на мужские половые клетки, т.е. не обладает гонадотоксичностью и не индуцирует ДЛС у крыс.Based on the data obtained, it should be concluded that EPOM at a dose of 15 mg / kg (200 human doses) does not affect male germ cells, i.e. does not have gonadotoxicity and does not induce DLS in rats.

Испытания на аллергические свойства и пирогенностьAllergy and pyrogenicity tests

Возможная аллергенность ЭПОМ изучалась на морских свинках весом 250-330 г. Их иммунизировали в/б 2,5 мг ЭПОМ в объеме 1 мл физраствора. В качестве контроля вводилась сыворотка крупного рогатого скота. Спустя 21 день животным вводили также в/б разрешающую дозу ЭПОМ, равную сенсибилизирующей (5,0 мг). Сыворотка крупного рогатого скота - 5.4 мг. Самцов было 10, самок - 8.Possible allergenicity of EPOM was studied in guinea pigs weighing 250-330 g. They were immunized with b / w 2.5 mg EPOM in a volume of 1 ml of saline. Cattle serum was introduced as a control. After 21 days, the animals were also given an i.v. resolving dose of EPOM equal to a sensitizing one (5.0 mg). Serum of cattle - 5.4 mg. There were 10 males, 8 females.

Введение разрешающей дозы ЭПОМ не вызвало гибели животных и симптомов анафилактического шока. Признаки слабой аллергизации выявлены лишь у 20% морских свинок. Они выражались в кратковременном почесывании мордочки, взъерошенности шерсти и единичных чиханиях.The introduction of a permissible dose of EPOM did not cause the death of animals and symptoms of anaphylactic shock. Signs of mild allergization were detected in only 20% of guinea pigs. They were expressed in short-term scratching of the muzzle, ruffled hair and single sneezing.

Полученные данные позволяют оценить аллергизирующую реакцию на введение ЭПОМ как слабо положительную (“+”). В контрольной группе, получавшей сыворотку крупного рогатого скота, все животные погибли от анафилактического шока.The data obtained make it possible to evaluate the allergic reaction to the introduction of EPOM as weakly positive (“+”). In the control group treated with cattle serum, all animals died from anaphylactic shock.

Для определения пирогенной реакции ЭПОМ были использованы кролики весом 1,5-2,0 кг. В течение 3-х суток до опыта проводились измерения температуры с помощью медицинского термометра.To determine the pyrogenic reaction of EPOM, rabbits weighing 1.5–2.0 kg were used. Within 3 days before the experiment, temperature measurements were carried out using a medical thermometer.

Накануне опыта вечером у животных отобрали остатки корма и воды. Использованные шприцы и иглы, а также лекарственное вещество и растворитель (физраствор) были стерильны. ЭПОМ в количестве 5 мг растворяли в 2 мл стерильного не пирогенного физраствора. За 30 минут до введения раствора измеряли температуру тела животных. Раствор подогревали до 37° С и вводили в ушную вену кроликам в течение 2 минут. После введения раствора ЭПОМ, трижды с промежутками в 1 час, измеряли температуру тела животных.On the eve of the experiment, the remains of feed and water were taken from the animals in the evening. The syringes and needles used, as well as the drug and solvent (saline) were sterile. EPOM in an amount of 5 mg was dissolved in 2 ml of sterile non-pyrogenic saline. 30 minutes before the introduction of the solution was measured body temperature of the animals. The solution was heated to 37 ° C and injected into the ear vein of rabbits for 2 minutes. After the introduction of the EPOM solution, three times at intervals of 1 hour, the body temperature of the animals was measured.

После введения раствора ни у одного из трех кроликов ни в одном из трех измерений не наблюдалось повышения температуры более чем на 0,2° С. Следовательно, раствор ЭПОМ не обладает пирогенными свойствами.After administration of the solution, none of the three rabbits showed a temperature increase of more than 0.2 ° C in any of the three measurements. Therefore, the EPOM solution does not have pyrogenic properties.

Некоторые клинические наблюденияSome clinical observations

При традиционной форме фетальной (клеточной) терапии больным вводят взятые из эмбриональных тканей животных или человека специально обработанные живые клетки. На определенной стадии эмбриогенеза эти клетки не иммуногенны, поскольку еще не "перешли" барьер видовой специфичности. Но несмотря на это клеточная эмбриональная терапия не может считаться абсолютно безвредной формой лечения различных заболеваний. В этом отношении заслуживают внимания изолированные гуморальные компоненты клеточной терапии и, прежде всего, протеогликаны как носители эмбриональных свойств. При такой постановке вопроса особую актуальность приобретает получение белкового экстракта в состоянии, максимально близком к нативному, и, естественно, использование таких приемов, которые полностью исключают контаминирование вирусных и иных патогенных агентов.In the traditional form of fetal (cell) therapy, patients are treated with specially treated living cells taken from the embryonic tissues of animals or humans. At a certain stage of embryogenesis, these cells are not immunogenic, since they have not yet “crossed” the species specificity barrier. But despite this, cell embryonic therapy cannot be considered an absolutely harmless form of treatment for various diseases. In this regard, isolated humoral components of cell therapy and, above all, proteoglycans as carriers of embryonic properties deserve attention. With this formulation of the problem, it becomes especially urgent to obtain a protein extract in a state as close to native as possible, and, of course, to use such techniques that completely exclude the contamination of viral and other pathogenic agents.

Более 5 лет мы наблюдаем пациентов из групп высокого онкологического риска, получавших эмбриональный противоопухолевый модулятор с целью предотвращения возможной неопластической патологии.For more than 5 years, we have been observing patients from high cancer risk groups who received an embryonic antitumor modulator in order to prevent a possible neoplastic pathology.

На месте подкожной инъекции (внутренняя поверхность предплечья вдали от контуров сосудов) в течение первых 2-х суток возникают гиперемия и инфильтрация, которые через 48 часов бесследно проходят. Размеры указанной местной реакции - в среднем 4,5× 6 см. Лишь в единичных случаях имело место повышение температуры тела в пределах субфебрильной (у 2 из 100 пациентов). Отсутствие местной реакции настораживает нас в плане предрасположенности к онкопатологии, а именно толерантности иммунной системы данного индивидуума к онкофетальным антигенам - онкомаркерам.At the site of subcutaneous injection (the inner surface of the forearm far from the contours of the vessels) during the first 2 days there is hyperemia and infiltration, which pass without a trace after 48 hours. The dimensions of the indicated local reaction are on average 4.5 × 6 cm. Only in isolated cases has there been an increase in body temperature within subfebrile (in 2 out of 100 patients). The lack of a local reaction alarms us in terms of a predisposition to oncopathology, namely, the tolerance of the immune system of this individual to oncofetal antigens - tumor markers.

Почти все пациенты после иммунизации отмечают улучшение самочувствия, некоторый общеукрепляющий и омолаживающий эффект. Более того, имеется небольшое число наблюдений адъювантного терапевтического влияния ЭПОМ на течение сахарного диабета, гипертонической болезни и высокого коагуляционного потенциала крови при ишемической болезни сердца.Almost all patients after immunization note improvement in well-being, some general strengthening and anti-aging effect. Moreover, there is a small number of observations of the adjuvant therapeutic effect of EPOM on the course of diabetes mellitus, hypertension and high blood coagulation potential in coronary heart disease.

ЭПОМ зарекомендовал себя и как средство противорецидивной иммунотерапии, особенно в тех случаях, когда онкобольные после радикальной операции по тем или иным причинам отказываются от дальнейшего химиолучевого лечения. Это обстоятельство имеет чрезвычайно важное значение, поскольку в отличие от химиопрепаратов, ЭПОМ не вызывает иммуносупрессии, а наоборот, повышает как специфическую, так и неспецифическую противоопухолевую защиту.EPOM has also established itself as a means of anti-relapse immunotherapy, especially in cases when cancer patients after radical surgery for one reason or another refuse further chemoradiation treatment. This circumstance is extremely important, because, unlike chemotherapy drugs, EPOM does not cause immunosuppression, but rather increases both specific and non-specific antitumor protection.

В разных сериях индуцированного (7,12 - ДМБА и бенз/а/пирена) канцерогенеза и в опытах на моделях перевиваемых опухолей различного гистогенеза ЭПОМ полностью предотвращал возникновение злокачественных опухолей в 40-70%.In different series of induced (7.12 - DMBA and benz / a / pyrene) carcinogenesis and in experiments on transplanted tumor models of different histogenesis, EPOM completely prevented the onset of malignant tumors in 40-70%.

В группах лиц с высоким риском онкологического заболевания вакцинотерапия ЭПОМом не влияла на уровень СД4+ клеток, но проявила тенденцию к увеличению как относительных, так и абсолютных показателей СД4/СД8 клеток.In groups of people with a high risk of cancer, EPOM vaccine therapy did not affect the level of CD4 + cells, but showed a tendency to increase both relative and absolute indicators of CD4 / SD8 cells.

Динамика иммунологических показателей в группе онкологического риска, вакцинированной ЭПОМ, показана в таблице 4.The dynamics of immunological parameters in the cancer risk group vaccinated with EPOM is shown in table 4.

Отмечены достоверное повышение после вакцинации количества Т-клеток и тенденция к увеличению ЕКК. Вакцинация существенно не влияла на относительный и абсолютный показатели В-клеток. Онкофетальные антигены обладают иммуносупрессивным воздействием. Данные таблицы свидетельствуют о том, что полученный нами пул эмбриональных протеогликанов не оказал супрессивного воздействия на субпопуляции лимфоцитов.A significant increase after the vaccination of the number of T cells and a tendency towards an increase in EKK were noted. Vaccination did not significantly affect the relative and absolute values of B cells. Oncofetal antigens have an immunosuppressive effect. The data in the table indicate that the pool of embryonic proteoglycans that we obtained did not have a suppressive effect on subpopulations of lymphocytes.

Данные применения ЭПОМ и способа профилактики в условиях клиникиData on the use of EPOM and a method of prevention in a clinic

Способ осуществляется следующим образом. Формируют группу риска, при этом учитывают возраст индивидуума, профессию, предопухолевое заболевание, курение, семейную предрасположенность, гиперфибриногенемию, количество онкомаркеров в периферической крови; рассчитывают уровень опухолевого риска.The method is as follows. A risk group is formed, taking into account the age of the individual, profession, pre-tumor disease, smoking, family predisposition, hyperfibrinogenemia, the number of tumor markers in peripheral blood; calculate the level of tumor risk.

С учетом названных показателей проводят вакцинацию индивидуума ЭПОМом из расчета от 0,02 до 0,04 мг/кг веса, наиболее предпочтительно 0,03 мг/кг веса.Given these indicators, the individual is vaccinated with EPOM from a rate of 0.02 to 0.04 mg / kg body weight, most preferably 0.03 mg / kg body weight.

В процессе 17-летнего экспериментального изучения противоопухолевой активности и безвредности ЭПОМа на моделях индуцированного 7,12 - ДМБА и бенз(а)пиреном канцерогенеза, а также на гистогенетически различных перевиваемых опухолях (асцитная опухоль Эрлиха, саркома - 37, саркома - 180, асцитная гепатома Зайделя, карциносаркома Уокера, лимфосаркома Плисса), было продемонстрировано, что ЭПОМ в 40-70% случаев полностью предотвращает возникновение злокачественных новообразований.In the course of a 17-year experimental study of the antitumor activity and the safety of EPOM on models of 7.12-induced DMBA and benzo (a) carcinogenesis pyrene, as well as on histogenetically different transplanted tumors (Ehrlich ascites tumor, 37 sarcoma, 180, sarcoma, hepatitis, and ascites hepatoma Seidel, Walker carcinosarcoma, Pliss lymphosarcoma), it was demonstrated that EPOM in 40-70% of cases completely prevents the occurrence of malignant neoplasms.

У вакцинированных ЭПОМом лиц с высоким онкологическим риском в процессе многолетних наблюдений не выявлена онкологическая патология. Модулятор проявил лечебные свойства при предопухолевых состояниях женских гениталий и успешно использован в гинекологии. Он также показан для противорецидивной иммунотерапии. У наблюдаемых больных биологически активная доза не влияла на популяции Т-хелперов и Т-супрессоров. Даже в случае десятикратного превышения дозы наблюдался рост количества Т-супрессоров на фоне неизмененного количества Т-хелперов.In patients with high oncological risk vaccinated with EPOM, no oncological pathology was revealed during long-term observations. The modulator showed healing properties in pre-tumor conditions of female genitalia and has been successfully used in gynecology. It is also indicated for anti-relapse immunotherapy. In the observed patients, the biologically active dose did not affect the populations of T-helpers and T-suppressors. Even in the case of a ten-fold excess of the dose, an increase in the number of T-suppressors was observed against the background of an unchanged number of T-helpers.

Пример 1Example 1

Пациент М., 55 лет. Долго курил, питание неправильное, по характеру работы - административный работник, гиподинамичен, имеет аденому предстательной железы (количество простатического антигена в крови - 7,8 нг/мл, фибриноген А - 540 мг/%, В - положит).Patient M., 55 years old. He smoked for a long time, the diet was wrong, by the nature of the work he was an administrative worker, hypodynamic, had prostate gland adenoma (the amount of prostatic antigen in the blood was 7.8 ng / ml, fibrinogen A - 540 mg /%, B - put).

Подсчитан уровень онкологического риска, который соответствовал степени умеренного риска (23 единицы). Затем произведена вакцинация модулятором. Доза - 0,03 мг/кг. Кожная реакция положительная (3× 2 см, легкая инфильтрация, на 3-й день местная реакция прошла). Вакцинацию ЭПОМом проводили ежегодно в течение 5 лет. Образ жизни не изменился, гуморальные показатели иммунитета и онкомаркеры нормализовались, новообразований не обнаружено.The oncological risk level was calculated, which corresponded to the degree of moderate risk (23 units). Then vaccination with a modulator is made. Dose - 0.03 mg / kg. The skin reaction is positive (3 × 2 cm, slight infiltration, on the 3rd day the local reaction has passed). EPOM vaccination was carried out annually for 5 years. The lifestyle has not changed, humoral immunity indicators and tumor markers returned to normal, and no neoplasms were found.

Пример 2Example 2

Пациент К., 44 года, медсестра, курила, питание неправильное, мать скончалась от рака яичников, анализ крови в норме. Выявлено предопухолевое состояние шейки матки: дисплазия эпителия I-II степени, лейкоплакия вульвы.Patient K., 44 years old, nurse, smoked, malnutrition, mother died of ovarian cancer, blood count is normal. The pre-tumor state of the cervix was revealed: epithelial dysplasia of the I-II degree, leukoplakia of the vulva.

Подсчитан уровень онкологического риска, который соответствовал степени умеренного риска (21 единица), затем проводили ежегодные вакцинации модулятором (5 лет). Образ жизни не изменился. Объективно: эпителий шейки матки в нормальном состоянии, после проведенного лечения рецидивы не наблюдались; в иммунной системе выявлены положительные сдвиги. Новообразований не обнаружено.The level of oncological risk was calculated, which corresponded to the degree of moderate risk (21 units), then annual vaccinations with a modulator (5 years) were carried out. The lifestyle has not changed. Objectively: the cervical epithelium is in a normal state; no relapse was observed after the treatment; positive changes were detected in the immune system. No tumors were found.

Claims

1. A method of obtaining an embryonic antitumor modulator, characterized in that the embryonic native tissue is removed, washed, kept in alcohol, crushed, frozen in liquid nitrogen, homogenized to a powder state, diluted with water and disintegrated in a cooled ball mill until revealing rectified cell nuclei (more 80%), the smallest cytoplasmic clippings and fragments of fibrous structures, process the resulting homogenate with ultraviolet light, centrifuge and process the resulting supernatant with alcohol to isolate glycoproteins in the precipitate, process the glycoprotein precipitate in a ball mill and separate them into the precipitate by centrifugation and then sterilize the filtration and lyophilization of the target product.

2. The embryonic antitumor modulator obtained by the method according to claim 1, containing, according to the data of analytical electrophoresis in a 10% Davis polyacrylamide gel, 5 protein fractions in an amount of from about 42 to 57 wt.%, As well as about 1.5 wt.% Free and about 8-10 wt.% bound carbohydrates, alanine aminotransferase (ALT) - about 1.4 u / l, aspartate aminotransferase (AST) - about 71.9 mmol / l, lactate dehydrogenase (LDH) - about 3.0 u / l, alkaline phosphatase (AL) - about 24.7 units, and trace elements: Mg - about 1.7 mmol / L, K - about 0.96 mmol / L, Ca - colo 0.65 mmol / L, P - about 0.52 mmol / L, (according to the Hitachi biochemical analyzer) and CEA - approximately 1.4-1.7 ng / ml, AFP - approximately 95.0-99.0 ng / ml, CG - approximately 2.2-5.5 mIU / ml, TWG - approximately 45.0-50.0 ng / ml, Ca-125 - approximately 13.5-14.3 U / ml, Ca- 19.9 - approximately 79.8-102.2 U / ml.

3. The embryonic antitumor modulator according to claim 2 for the manufacture of a medicament useful to individuals with a suspicion of a possible cancer disease to prevent the disease and its relapse.

4. A method for the prevention and treatment of precancerous pathological conditions, characterized in that it includes vaccination of persons belonging to groups of high cancer risk according to the test results, and the vaccination is carried out by the embryonic antitumor modulator described in paragraph 2, which is administered subcutaneously once a year in an effective amount, preferably at a dose of 0.04-0.01 mg / kg