RU2214827C1 - Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма - Google Patents
Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма Download PDFInfo
- Publication number
- RU2214827C1 RU2214827C1 RU2002107219A RU2002107219A RU2214827C1 RU 2214827 C1 RU2214827 C1 RU 2214827C1 RU 2002107219 A RU2002107219 A RU 2002107219A RU 2002107219 A RU2002107219 A RU 2002107219A RU 2214827 C1 RU2214827 C1 RU 2214827C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- collagen
- paragraphs
- extraction
- acid
- acetic acid
- Prior art date
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 126
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 126
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 116
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 230000007170 pathology Effects 0.000 title claims abstract description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 89
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 39
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 11
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Natural products OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 5-aminoisoindole-1,3-dione Chemical compound NC1=CC=C2C(=O)NC(=O)C2=C1 PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims abstract 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 32
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 14
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 14
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 13
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 12
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 5
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 claims description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 abstract 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 abstract 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 30
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 244000309466 calf Species 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 10
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 3
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 3
- -1 i.e. Polymers 0.000 description 3
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000003186 Stachytarpheta cayennensis Species 0.000 description 1
- 235000009233 Stachytarpheta cayennensis Nutrition 0.000 description 1
- 206010046543 Urinary incontinence Diseases 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound [Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000037336 dry skin Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000012716 precipitator Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical class O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 210000005070 sphincter Anatomy 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биологии, точнее к способам получения коллагена, и может быть использовано при лечении различной тканевой патологии, для клеточного культивирования. Способ включает очистку и размельчение коллагенсодержащего сырья, неколлагеновые белки экстрагируют 0,3-0,02 М Na2HPO4, pH 8,7-9,1, коллаген экстрагируют органической кислотой, затем коллаген последовательно осаждают NaCl из кислого раствора, диализуют против 0,02 М Na2HPO4 и растворяют диализом против 1 М - 0,017 М уксусной кислоты. В качестве сырья используют кожу человека, любые сухожилия, шкуры животных, с поверхности которых удаляют волос с применением бактериальной протеазы группы Bacillus или Bacillus licheniformis. В качестве органической кислоты при экстракции коллагена используют уксусную, лимонную или муравьиную кислоту. Технический результат: способ позволяет получить значительный выход коллагена высокого качества, который обладает низкой иммуногенной и аллергенной активностью, не способствует гиперцитокинообразованию и обеспечивает эффективное лечение различных патологий ткани организма. 16 з.п. ф-лы, 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, а именно к способам получения лекарственных средств, и клеточной биологии и может быть использовано при лечении различных патологий тканей организма, в том числе восстановления тканей и пр.
Коллаген - основной белок соединительной ткани, составляющий у млекопитающих 50-60% всех белков организма. Он содержится во всех его тканях, особенно много его в шкуре и сухожилиях.
Коллаген доступен в достаточно больших количествах. Он биосовместим, имеет очень слабую иммуногенность и является хорошим субстратом для всех типов клеток. Это обусловило его широкое применение в медицине (Chvapil M.W. , van Wrinkle W., "Medical and surgical application of collagen", International Reviews of Connective Tissue Research, v.6, p. 1-60, 1973) и в клеточном культивировании ( Ehrmann R.L., Gey G.O, "The growth of cells on a transparent gel of reconstituted rat-tail collagen", J. of National Cancer Institute, V. 16, p. 1375-1403, 1956 г. ; Bell E., Ivarson В., Merrill C. "Production of a tissuelike structure by contraction of collagen lattices by human fibroblasts of different proliferative potential in vitro". Proceedings of National Academy of Sciences of USA, v.76, p. 1274-1278, 1979 г.).
Структура коллагена в настоящее время хорошо известна. Он является фибриллярным белком; основная часть его молекулы представляет собой жесткую спираль из трех полипептидных цепей с неспиральными участками на концах. Нативный коллаген, т. е. коллаген с неповрежденной тройной спиралью, в физиологических условиях - при ионной силе 0,15 М хлористого натрия NaCl, рН 7-7,5 и температуре 37oC дает гели, являющиеся по структуре аналогом соединительной ткани. Все типы клеток при включении в такие гели или нанесении на их поверхность живут и размножаются.
Нативный коллаген получают экстракцией коллагенсодержащих тканей, главным образом кожи или сухожилий, кислыми растворами или путем их обработки ферментами, чаще всего пепсином. При этом ферментативная обработка удаляет неспиральные участки молекулы, обеспечивающие в гелях межмолекулярную сшивку, и прочность гелей значительно понижается. Полученный без ферментативной обработки коллаген дает более прочные гели, что позволяет снизить его концентрацию, но требует очень тщательной очистки, т.к. сам коллаген является очень слабым иммуногеном, и по большей части его иммуногенность объясняется наличием примесей (Chvapil M., van Wrinkle W., Internal. Rev. Connect. Tis. Res., v. 6, p. 1-60, 1973 ). Очистку коллагена производят обычно путем осаждения, чаще всего хлористым натрием, из кислого или нейтрального раствора; возможна также очистка осаждением при диализе против щелочного раствора, обычно 0,02 М двузамещенного фосфата натрия Na2HPО4. Такое осаждение идет медленно и требует многократной смены диализного раствора. При этом сочетание осаждения из кислой и из нейтральной или щелочной среды дает более высокую степень очистки, т. к. удаляет различные примеси (E.J. Miller, B. Wray, "Preparation and characterization ofcollagens", Methods in enzymology, v.82, p. 33-64, 1982).
В патенте США 3949073, МПК: A 61 K 37/00, опубл. 6.04.1976, предложен способ укрепления соединительной ткани различных типов у млекопитающих при помощи введения в место укрепления полимеризующегося in situ раствора нативного коллагена, полученного с применением пепсина, т.е. лишенного неспиральных концов молекулы. Такие растворы коллагена могут быть введены в организм путем инъекции или нанесены на поверхность раны; при температуре тела эти растворы превращаются в гель. В них могут быть включены любые клетки, возможна также добавка к таким растворам других компонентов внеклеточного матрикса или лекарственных веществ. Это обусловило применение нативного коллагена, полученного с применением пепсина, с добавлением клеток и лекарственных препаратов или без них, для репарации различных тканевых патологий.
Нативный коллаген с сохраненными неспиральными концами молекулы также применялся для лечения ран (заявка 2000115816 на изобретение РФ, МКИ A 61 K 35/48, опубл. 13.06.2000) и в клеточном культивировании для получения различных тканевых эквивалентов (пат. США 4485096, МКИ A 61 K 35/12, опубл. 27.11.1984). В пат. США 4485096 нативный коллаген получали из сухожилий крысиного хвоста, в указанной выше заявке из сухожилий крысиного хвоста или из шкуры телят. Способ получения коллагена из шкуры телят в указанной выше заявке аналогичен методу П. М. Гэллопа, С. Зейферта (см. ниже) со всеми присущими последнему недостатками. Способ получения коллагена из сухожилий крысиного хвоста в обоих патентах не включает предварительной отмывки материала от неколлагеновых белков, что снижает чистоту коллагена (см. ниже).
Настоящее изобретение предлагает новый способ получения нативного коллагена с сохраненными неспиральными концами, пригодного для медицины и клеточного культивирования.
Известен способ получения коллагена по патенту США 5106949, МПК A 61 K 35/32, опубл. 21.04.1992 г. Согласно патенту коллаген получают из сухожилий (предпочтительно сухожилий сгибателя копыта телят). Далее производят следующие операции:
- удаляют оболочки сухожилий;
- измельчают материал;
- промывают измельченный материал физиологическим фосфатным буфером (PBS) (2 г хлористого калия КС1, 2 г однозамещенного фосфорнокислого калия KH2РО4, 80 г хлористого натрия и 79,3 г двузамещенного фосфата натрия на 1 л раствора), рН 6,5-8,5, разбавленным 1:3-1:1; наиболее эффективен разбавленный 1: 3 PBS с ионной силой 0,05 М (0,05 молярного) NaCl и 0,0022 М Na2HPO4 (6-кратная промывка по 2 ч);
- экстрагируют коллаген слабой кислотой (0,5-2 М уксусная кислота); предпочтительно 0,5 М уксусная кислота с добавкой 4 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА);
- осаждают коллаген с помощью NaCl (0,6-1,8 М);
- выделяют осадок и растворяют его в уксусной кислоте;
- переводят раствор диализом в 0,01 М уксусную кислоту.
- удаляют оболочки сухожилий;
- измельчают материал;
- промывают измельченный материал физиологическим фосфатным буфером (PBS) (2 г хлористого калия КС1, 2 г однозамещенного фосфорнокислого калия KH2РО4, 80 г хлористого натрия и 79,3 г двузамещенного фосфата натрия на 1 л раствора), рН 6,5-8,5, разбавленным 1:3-1:1; наиболее эффективен разбавленный 1: 3 PBS с ионной силой 0,05 М (0,05 молярного) NaCl и 0,0022 М Na2HPO4 (6-кратная промывка по 2 ч);
- экстрагируют коллаген слабой кислотой (0,5-2 М уксусная кислота); предпочтительно 0,5 М уксусная кислота с добавкой 4 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА);
- осаждают коллаген с помощью NaCl (0,6-1,8 М);
- выделяют осадок и растворяют его в уксусной кислоте;
- переводят раствор диализом в 0,01 М уксусную кислоту.
Способ имеет следующие недостатки.
В качестве сырья используются сухожилия сгибателя копыт телят. Это недорогой материал, но его нужно специально собирать и обрабатывать (собирать и замораживать копыта сразу после забоя телят, затем перед получением коллагена размораживать их, извлекать сухожилия и очищать их от оболочек).
Использование в технологическом процессе всего одной стадии очистки коллагена осаждением хлористым натрием не может дать продукт нужной степени чистоты.
В способе по патенту США 5562946, МПК В 05 В 01/04, опубл. 08.10.95 г., коллаген получают из кожи зародышей свиней. Замораживают матки свиней вместе с зародышами, затем стерильно размораживают, извлекают зародыши и снимают с них кожу. Способ включает следующие операции:
- снимают кожу;
- измельчают материал;
- промывают измельченный материал разбавленным 1:2 физиологическим фосфатным буфером, как и в предыдущем патенте;
- экстрагируют коллаген 0,5 М уксусной кислотой;
- очищают коллаген осаждением 0,9 М хлористым натрием (операция производится последовательно дважды);
- растворяют осадок в уксусной кислоте;
- переводят раствор диализом в 0,01 М уксусную кислоту.
- снимают кожу;
- измельчают материал;
- промывают измельченный материал разбавленным 1:2 физиологическим фосфатным буфером, как и в предыдущем патенте;
- экстрагируют коллаген 0,5 М уксусной кислотой;
- очищают коллаген осаждением 0,9 М хлористым натрием (операция производится последовательно дважды);
- растворяют осадок в уксусной кислоте;
- переводят раствор диализом в 0,01 М уксусную кислоту.
Как видно из описания, операции этого способа совпадают с операциями предыдущего способа, за исключением используемого сырья и введения повторной операции очистки осаждением хлористым натрием. В качестве предпочтительного сырья используется кожа зародышей свиней - материал трудно доступный. Кожа взрослых или молодых свиней, также упомянутая в патенте как источник получения коллагена, потребовала бы предварительного удаления щетины и жирового слоя, о чем в рецептуре не упомянуто. Двух последовательных осаждений хлористым натрием из кислой среды также недостаточно для получения нужного качества продукции.
В статье П. М.Гэллопа и С.Зейферта "Получение растворимого коллагена и его свойства" (P. M. Gallop and S. Seifter "Preparation and properties of soluble collagen", Methods in Enzymology, A. P., N.Y., v.6, 1963 г., р. 635-641) описан способ, в качестве сырья в котором использована телячья шкура, с которой срезают рыхлую соединительную ткань и сбривают волосы.
Способ включает следующие операции:
- измельчают материал;
- промывают измельченный материал 0,5 М раствором NaOOCCH3 (ацетата натрия);
- осуществляют три последовательные экстракции с предварительной гомогенизацией ткани для выведения неколлагеновых белков и протеогликанов;
- экстрагируют коллаген 0,075 М цитратным буфером, рН 3,7 (смесь равных объемов растворов 0,05 М раствора трехзамещенного цитрата натрия Na3C8H8O7 и 0,1 М лимонной кислоты H3C8H8O7);
- отделяют экстракт центрифугированием;
- очищают коллаген осаждением экстракта при помощи диализа против 0,02 М двузамещенного фосфата натрия;
- отделяют осадок коллагена центрифугированием;
- промывают осадок коллагена водой, затем его сушат и растворяют в том же цитратном буфере.
- измельчают материал;
- промывают измельченный материал 0,5 М раствором NaOOCCH3 (ацетата натрия);
- осуществляют три последовательные экстракции с предварительной гомогенизацией ткани для выведения неколлагеновых белков и протеогликанов;
- экстрагируют коллаген 0,075 М цитратным буфером, рН 3,7 (смесь равных объемов растворов 0,05 М раствора трехзамещенного цитрата натрия Na3C8H8O7 и 0,1 М лимонной кислоты H3C8H8O7);
- отделяют экстракт центрифугированием;
- очищают коллаген осаждением экстракта при помощи диализа против 0,02 М двузамещенного фосфата натрия;
- отделяют осадок коллагена центрифугированием;
- промывают осадок коллагена водой, затем его сушат и растворяют в том же цитратном буфере.
Этот способ имеет следующие недостатки:
Удаление волос с телячьей шкуры производится механически - сбриванием. Подобная процедура трудоемка и не позволяет полностью удалить волосы, что затрудняет последующую промывку и гомогенизацию и таким образом снижает чистоту продукции и уменьшает ее выход.
Удаление волос с телячьей шкуры производится механически - сбриванием. Подобная процедура трудоемка и не позволяет полностью удалить волосы, что затрудняет последующую промывку и гомогенизацию и таким образом снижает чистоту продукции и уменьшает ее выход.
Низкий выход продукта - около 1% в расчете на сырую ткань.
Всего одна ступень очистки коллагена - осаждением при диализе против 0,02 М двузамещенного фосфата натрия, т.е. из щелочной среды - снижает качество продукции.
В патенте США 4019956, МПК: С 112 В 001/00, опубл. 30.07.1977 г. "Процесс сохранения волоса шкуры путем растворения шкуры или кожи" предложен другой способ обработки шкуры. Шкуру обрабатывали бактериальной протеазой в растворе тетрабората натрия Na2B4O7 с 1-10% мочевины CO(NH2)2, рН 8-10 при 50oC и с содержанием фермента 0,5-5% от веса сухой шкуры. Шкура или кожа полностью растворялась, волосы оставались.
Наиболее близким решением к предлагаемому можно считать способ, предложенный в статье П.М.Гэллопа и С.Зейферта "Получение растворимого коллагена и его свойства" (см. выше).
Задача предлагаемого решения - получение коллагена улучшенного качества с наименьшими затратами, пригодного для медицины и клеточного культивирования.
Для решения поставленной задачи в способе получения коллагена для лечения патологий тканей организма, включающем операции очистки и размельчения коллагенсодержащего сырья, экстрагирования неколлагеновых белков, экстрагирования коллагена, его очистки и растворения, изменены некоторые операции. Способ отличается от известных тем, что экстрагирование неколлагеновых белков производят 0,30-0,02 М Na2HPO4, рН 8,7-9,1, экстрагирование коллагена производят органической кислотой, очистку коллагена производят последовательно осаждением NaCl из кислого раствора и диализом против 0,02 М Na2HPО4, растворение коллагена производят диализом против 1 М - 0,017 М уксусной кислоты.
Способ позволяет использовать различное сырье, в том числе кожу человека, любые сухожилия и шкуры животных, с поверхности которых удаляют волос с применением бактериальной протеазы в количестве 0,125-0,1% от веса сырой шкуры в 0,05 М трис-буфере, рН 8, при температуре до 12oС в течение 48-72 ч.
В качестве бактериальной протеазы может быть использована протеаза из Bacillus licheniformis.
В качестве органической кислоты при экстракции коллагена может быть использована уксусная, лимонная или муравьиная кислота, в том числе 0,5-2 М уксусная кислота.
Осаждение коллагена производят 0,6-1,8 М NaCl, причем возможно повторение этой операции.
После первого осаждения осадок коллагена растворяется в 1 М уксусной кислоте.
В процессе растворения коллагена производят стерилизацию коллагена добавлением к диализному раствору 1 М уксусной кислоты 0,5% хлороформа.
Растворенный коллаген переводят в 0,017 М уксусную кислоту тремя последовательными диализами против указанной кислоты.
Предлагаемая операция подготовки сырья обеспечивает сохранение нативной структуры коллагена, а также расширяет номенклатуру используемого сырья, что упрощает организацию производственного процесса и снижает себестоимость продукции. Предлагаемый состав для предварительной отмывки исходного материала более эффективно растворяет неколлагеновые белки, разрыхляет структуру материала, способствует его набуханию в кислоте при последующих операциях и повышает выход коллагена. Применение при очистке осаждения коллагена как из кислой среды, так и при диализе против щелочного раствора, способствует повышению качества продукции.
Способ осуществляется следующим образом.
В качестве сырья используют шкуры животных (телят, коров, овец, кроликов и т.д.), возможно использование человеческой кожи, а также сухожилий. Далее приводится процесс изготовления коллагена из шкур животных.
Шкуру, свежую или размороженную (но замороженную сразу после забоя животного), отмывают от крови дистиллированной водой. Затем срезают рыхлую соединительную ткань.
Далее со шкуры удаляют волосы ферментативным методом с применением протеазы Bacillus licheniformis, которая используется в способе, описанном в патенте США 4019956, см. выше, однако предлагается иной режим проведения данной операции. Применяемая протеаза представляет собой концентрат культуральной жидкости Bacillus licheniformis, полученный в результате ее ультрафильтрации и лиофильной сушки (сушки при низкой температуре). Это щелочная протеаза с оптимумом активности при рН 8 и температуре 60oC. Поскольку при температуре 60oC происходит разрушение нативной структуры коллагена, была проведена работа по исследованию возможности применения этого фермента при температурах не выше 12oC, с минимально возможным количеством фермента, и определено время проведения процесса. На основании этих исследований в предлагаемом способе применены менее жесткие условия - удаление волос производят при количестве фермента 0,125-0,1% от веса сырой шкуры в 0,05 М трис-буфере, рН 8, при температуре 4-10oC течение 48-72 ч. Таким образом применяется более низкая температура, в растворе отсутствуют денатурирующие добавки (мочевина) и значительно более низкая концентрация фермента. При такой обработке разрушается только базальная мембрана, и волосы с эпидермой отделяются от неповрежденной дермы. Этим обеспечено сохранение нативной структуры коллагена.
Освобожденную от волос дерму отмывают от фермента водой, затем полученный материал измельчают.
Измельченный материал обрабатывают большими объемами 0,05-0,02 М Na2HPО4, pH 8,7-9,1 для выведения неколлагеновых белков. Операцию экстракции повторяют шестикратно. Двузамещенный фосфат натрия, как и другие реактивы, используемые при получении и очистке коллагена - хлористый натрий, уксусная кислота и хлороформ, изготовляются промышленно и имеются в торговой сети. Применялись реактивы квалификации чистоты не ниже х.ч. (химически чистый), и все растворы готовились на деионизованной или бидистиллированной воде (вода, специально очищенная для клеточного культивирования). Все операции производят при температуре не выше 12oC.
Далее производят три последовательные экстракции коллагена 0,5-2 М уксусной кислотой (предпочтительно 0,5 М с добавкой 5 мМ этилендиаминотетрауксусной кислоты (ЭДТА) с предварительной гомогенизацией ткани (не растворившуюся ткань отделяют от экстракта центрифугированием), а затем осуществляют осаждение коллагена из объединенных экстрактов 0,6-1,8 М NaCl, предпочтительно 0,9 М NaCl.
Осадок коллагена отделяют центрифугированием и растворяют его в уксусной кислоте (предпочтительно 1 М). Не растворившиеся агрегаты отделяют повторным центрифугированием и переосаждают коллаген NaCl, предпочтительно 0,9 М. Далее повторяют операции отделения осадка коллагена центрифугированием, растворения его в уксусной кислоте, отделения центрифугированием агрегатов, если они есть, и производят диализ раствора против большого количества (20-50 объемов) 0,02 М Na2HPО4 с 4-5 переменами раствора для третьего переосаждения коллагена. Диализ - замена растворителя в растворе высокомолекулярного соединения. Высокомолекулярное соединение, в данном случае, коллаген, помещают в мешок из пленки, чаще всего ацетилцеллюлозы, проницаемой только для низкомолекулярных соединений - солей и кислот, и непроницаемой для высокомолекулярных, и помещают мешок в сравнительно большое количество - 10-50-кратное по отношению к объему содержимого мешка - того растворителя, в который вещество нужно перенести. Выравнивание концентраций происходит путем диффузии; обычно требуется 3 перемены диализного (внешнего) раствора. При переосаждении коллагена путем диализа против 0,02 М двузамещенного фосфата натрия требуется, как указывалось выше, 3-4 перемены раствора.
Далее производят обработку полученного коллагена - растворение и стерилизацию. Для этого отделяют осадок коллагена центрифугированием, добавляют к нему ледяную уксусную кислоту до концентрации 0,5-1 М, переносят осадок в диализный мешок и диализуют против 10-20 объемов 1 М уксусной кислоты с добавлением 0,5% хлороформа в течение 2 суток. Перенос в диализный мешок именно диспергированного с кислотой осадка, без предварительного его растворения позволяет получить на выходе достаточно концентрированный раствор коллагена.
Далее коллаген переводят диализом в 0,017 М уксусную кислоту, т.к. только такая или более низкая концентрация уксусной кислоты хорошо переносится клетками млекопитающих и человека, что необходимо для биологического и медицинского применения коллагена. Для этого производят три последовательных диализа раствора коллагена против 20-30 объемов указанной кислоты, каждый в течение суток.
Затем полученный вязкий раствор коллагена стерильно разливают по пенициллиновым флаконам. Полученный раствор имеет обычно концентрацию 7-10 мг/мл, выход 4-6% от веса сырой обезволошенной дермы.
Предлагаемый технологический процесс изготовления имеет следующие преимущества перед известными:
1. Ферментативное мягкое снятие волоса без повреждения дермы. Это способствует диспергированию ткани и повышению выхода коллагена. Полное предварительное снятие волоса также способствует получению более чистого продукта.
1. Ферментативное мягкое снятие волоса без повреждения дермы. Это способствует диспергированию ткани и повышению выхода коллагена. Полное предварительное снятие волоса также способствует получению более чистого продукта.
2. Предварительная отмывка неколлагеновых белков раствором двузамещенного фосфата натрия с рН 8,7-9,1, предпочтительно ионной силы 0,05-0,02 М. Такой раствор является осадителем коллагена, достаточно хорошо растворяет неколлагеновые белки и, по-видимому, из-за своей низкой ионной силы, разрыхляет структуру дермы, способствуя ее набуханию в кислоте и повышению выхода коллагена.
3. Три ступени очистки коллагена переосаждением, включающие осаждение как из кислой, так и из щелочной среды, позволяют получить продукт высокой степени чистоты.
Ниже в таблице 1 приведены результаты сравнительного анализа различных способов получения коллагена из телячьей шкуры с удаленными волосами.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить с высоким выходом коллаген высокого качества из дешевого и доступного сырья.
Лечение коллагеном, полученным по указанной методике, различных патологий тканей организма млекопитающих и человека производится следующим образом. Для усиления соединительной ткани применяли метод, аналогичный описанному в патенте США 3949073 - к стерильному раствору коллагена в 0,017 М уксусной кислоте при температуре 0oC (на льду) стерильно добавляли 1/9 объема также охлажденного 10-кратного PBS с добавленным нетоксичным для клеток красителем феноловым красным (20 мг/л) или 10-кратной среды для культивирования клеток с тем же красителем, перемешивали и стерильно нейтрализовали смесь 1,5 М гидроокисью натрия NaOH. Все это перемешивали, помещали в охлажденный шприц и путем инъекции вводили в поврежденную ткань организма. В месте введения коллаген полимеризовывался (образовывал гель), и возникал аналог соединительной ткани, который в течение недели начинал заселяться фибробластами и васкуляризоваться.
Для разных тканей и патологий применяли различные концентрации коллагена, который, если необходимо, следует предварительно разбавить стерильной охлажденной водой до нужной концентрации. Например, для репарации мочевого сфинктера (лечение недержания мочи) применяют концентрацию коллагена 6-8 мг/мл, для закрытия кожных ран 23 мг/мл. К коллагену могут быть добавлены любые клетки, компоненты межклеточного матрикса или лекарственные препараты, как например в цитированной выше заявке 2000115816, где нативный коллаген с сохраненными неспиральными участками применялся для лечения кожных ран в сочетании с эмбриональными фибробластами человека и другими компонентами межклеточного матрикса, например хондроитинсульфатом, и лекарственными препаратами.
Как показали испытания, полученный по данному способу коллаген обладает низкой иммуногенной и аллергенной активностью. Он не способствует гиперцитокинообразованию. Макрофаги проявляют по отношению к введенному под кожу полученному по предлагаемому методу коллагену низкую адгезионную активность. При введении телячьего коллагена под кожу крысам по методу, указанному выше, имплантат также в течение недели колонизируется фибробластами и васкуляризуется.
Предлагаемый коллаген также пригоден для получения тканевых эквивалентов и коллагеновых конструкций. При добавлении к охлажденному нейтрализованному раствору коллагена, полученному, как указано выше, фибробластов легких эмбриона человека эти клетки после превращения коллагена с добавленными клетками в гель выдерживанием в течение 30 мин при температуре 37oС хорошо себя в нем чувствуют и успешно его сокращают, так что он вполне пригоден для производства, в частности, дермального эквивалента по методу патента США 4485096.
Таким образом, данный коллаген можно считать пригодным для усиления соединительной ткани и лечения различных патологий как в сочетании с клетками или лекарствами, так и без них, т.е. полученный продукт может найти широкое применение в медицине.
Claims (17)
1. Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма, включающий операции очистки и размельчения коллагенсодержащего сырья, экстрагирования неколлагеновых белков, экстрагирования коллагена, его очистки и растворения, отличающийся тем, что экстрагирование неколлагеновых белков производят 0,3-0,02 М Na2HPO4 pH 8,7-9,1, экстрагирование коллагена производят органической кислотой, очистку коллагена производят последовательно осаждением NaCl из кислого раствора и диализом против 0,02 М Na2HPO4, растворение коллагена производят диализом против 1-0,017 М уксусной кислоты.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве сырья используют кожу человека.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве сырья используют любые сухожилия.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве сырья используют шкуры животных, с поверхности которых удаляют волос с применением бактериальной протеазы.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в качестве бактериальной протеазы используют протеазу бактерий группы Bacillus.
6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в качестве бактериальной протеазы используют протеазу из Bacillus licheniformis.
7. Способ по любому из пп. 4-6, отличающийся тем, что бактериальную протеазу применяют в количестве 0,125-0,1% от веса шкуры.
8. Способ по любому из пп. 4-7, отличающийся тем, что удаление волоса производят в трис-буфере рН 8.
9. Способ по любому из пп. 4-8, отличающийся тем, что удаление волоса производят при температуре не выше 12oС.
10. Способ по любому из пп. 4-9, отличающийся тем, что операцию по удалению волоса производят в течение 48-72 ч.
11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что в качестве органической кислоты при экстракции коллагена используют уксусную, лимонную или муравьиную кислоту.
12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что при экстракции коллагена применяют 0,5-2 М уксусную кислоту.
13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что осаждение коллагена производят 0,6-1,8 M NaCl.
14. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что осаждение коллагена NaCl производят два раза подряд.
15. Способ по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что после первого осаждения осадок коллагена растворяют в 1 М уксусной кислоте.
16. Способ по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что в процессе растворения коллагена производят стерилизацию коллагена добавлением к диализному раствору 1 М уксусной кислоты 0,5% хлороформа.
17. Способ по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что вслед за растворением коллагена производят перевод раствора в 0,017 М уксусную кислоту путем трех последовательных диализов против указанной кислоты.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002107219A RU2214827C1 (ru) | 2002-03-15 | 2002-03-15 | Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002107219A RU2214827C1 (ru) | 2002-03-15 | 2002-03-15 | Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2214827C1 true RU2214827C1 (ru) | 2003-10-27 |
| RU2002107219A RU2002107219A (ru) | 2003-11-20 |
Family
ID=31988924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002107219A RU2214827C1 (ru) | 2002-03-15 | 2002-03-15 | Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2214827C1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2240818C1 (ru) * | 2003-12-24 | 2004-11-27 | Общество с ограниченной ответственностью "МАГНЭС" | Коллагенсодержащий продукт медицинского назначения "кололень" и способ его получения |
| RU2273489C1 (ru) * | 2004-08-17 | 2006-04-10 | Андрей Федорович Панасюк | Способ получения коллагена из костной ткани |
| RU2286790C1 (ru) * | 2005-03-16 | 2006-11-10 | Государственное учреждение Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии Российской академии медицинских наук | Способ лечения стрессового недержания мочи |
| RU2306845C1 (ru) * | 2006-05-11 | 2007-09-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА) | Способ оценки тяжести состояния и выбора хирургического доступа у больных с внутрибрюшным кровотечением в акушерстве и гинекологии |
| RU2551195C2 (ru) * | 2013-06-13 | 2015-05-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Синап" | Способ получения коллагеновой субстанции из сырья животного происхождения (варианты) |
| RU2715715C1 (ru) * | 2019-03-06 | 2020-03-03 | Общество с ограниченной ответственностью фирмы "Имтек" | Стерильный прозрачный концентрированный раствор биосовместимого коллагена, способ его получения и применения |
| RU2825463C1 (ru) * | 2023-06-22 | 2024-08-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения ксеногенного биоматериала из коллагена дермы северного оленя в виде пленки |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994005702A1 (en) * | 1992-09-03 | 1994-03-17 | Edmond Pharma Srl | Extraction of collagen |
| EP0419111B1 (en) * | 1989-09-15 | 1995-06-28 | Organogenesis Inc. | Collagen compositions and methods for preparation thereof |
| RU2059383C1 (ru) * | 1992-11-26 | 1996-05-10 | Ефим Семенович Вайнерман | Способ получения полифункционального коллагенового препарата |
| US5558875A (en) * | 1994-06-06 | 1996-09-24 | Wang; Su | Method of preparing collagenous tissue |
| RU2076718C1 (ru) * | 1993-04-09 | 1997-04-10 | Курский Государственный Медицинский Институт | Способ получения коллагена |
| DE10010113A1 (de) * | 2000-03-03 | 2001-09-13 | Wolfgang Schatton | Verfahren zur Isolierung von Schwammkollagen sowie Herstellung von nanoparikulärem Kollagen |
| FR2806415A1 (fr) * | 2000-03-15 | 2001-09-21 | Biovaleur Sa | Procede de preparation d'une composition a base de collagene issu de peaux de poissons |
-
2002
- 2002-03-15 RU RU2002107219A patent/RU2214827C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0419111B1 (en) * | 1989-09-15 | 1995-06-28 | Organogenesis Inc. | Collagen compositions and methods for preparation thereof |
| WO1994005702A1 (en) * | 1992-09-03 | 1994-03-17 | Edmond Pharma Srl | Extraction of collagen |
| RU2059383C1 (ru) * | 1992-11-26 | 1996-05-10 | Ефим Семенович Вайнерман | Способ получения полифункционального коллагенового препарата |
| RU2076718C1 (ru) * | 1993-04-09 | 1997-04-10 | Курский Государственный Медицинский Институт | Способ получения коллагена |
| US5558875A (en) * | 1994-06-06 | 1996-09-24 | Wang; Su | Method of preparing collagenous tissue |
| DE10010113A1 (de) * | 2000-03-03 | 2001-09-13 | Wolfgang Schatton | Verfahren zur Isolierung von Schwammkollagen sowie Herstellung von nanoparikulärem Kollagen |
| FR2806415A1 (fr) * | 2000-03-15 | 2001-09-21 | Biovaleur Sa | Procede de preparation d'une composition a base de collagene issu de peaux de poissons |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| GALLOP P.M et al. Preparation and properties of soluble collagen, Method in Enzymology, A.P., N.Y., 1963, v.6, p.635-641. * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2240818C1 (ru) * | 2003-12-24 | 2004-11-27 | Общество с ограниченной ответственностью "МАГНЭС" | Коллагенсодержащий продукт медицинского назначения "кололень" и способ его получения |
| RU2273489C1 (ru) * | 2004-08-17 | 2006-04-10 | Андрей Федорович Панасюк | Способ получения коллагена из костной ткани |
| RU2286790C1 (ru) * | 2005-03-16 | 2006-11-10 | Государственное учреждение Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии Российской академии медицинских наук | Способ лечения стрессового недержания мочи |
| RU2306845C1 (ru) * | 2006-05-11 | 2007-09-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА) | Способ оценки тяжести состояния и выбора хирургического доступа у больных с внутрибрюшным кровотечением в акушерстве и гинекологии |
| RU2551195C2 (ru) * | 2013-06-13 | 2015-05-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Синап" | Способ получения коллагеновой субстанции из сырья животного происхождения (варианты) |
| RU2715715C1 (ru) * | 2019-03-06 | 2020-03-03 | Общество с ограниченной ответственностью фирмы "Имтек" | Стерильный прозрачный концентрированный раствор биосовместимого коллагена, способ его получения и применения |
| RU2825463C1 (ru) * | 2023-06-22 | 2024-08-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения ксеногенного биоматериала из коллагена дермы северного оленя в виде пленки |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100977744B1 (ko) | 콜라겐과 그 생산방법 | |
| EP0419111B1 (en) | Collagen compositions and methods for preparation thereof | |
| CN101622007A (zh) | 天然(端肽)胎盘胶原组合物 | |
| US7396912B2 (en) | Collagen production method | |
| JP2015180622A (ja) | 水生動物からのコラーゲン抽出物 | |
| KR101916759B1 (ko) | 고농도, 고순도의 동종 콜라겐 제조 방법 및 동종 콜라겐 지지체의 제조방법 | |
| CN113827774A (zh) | 一种无鳞淡水鱼皮制备的生物组织工程再生支架技术和应用方式 | |
| RU2214827C1 (ru) | Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма | |
| Frater et al. | In vitro growth of postembryonic hair. | |
| CN1800372A (zh) | 组织工程化细胞外基质的制备方法 | |
| EP1504774A1 (en) | Artificial extracellular matrix and process for producing the same | |
| US5354269A (en) | Method for treating cancer resections | |
| CN115245586B (zh) | 含海洋生物源的胶原蛋白-基材料及其制备方法 | |
| RU2103360C1 (ru) | Питательная среда для культивирования клеток эукариотов и способ получения основы питательной среды - протеолитического гидролизата | |
| CN101307093B (zh) | 从鲨鱼皮分离纯化生物医药用胶原蛋白的方法 | |
| CN1333082C (zh) | 一种碱溶胀－酸酶解高效提取胶原的方法 | |
| RU2020153C1 (ru) | Способ получения ферментативного гидролизата и питательная среда для культивирования клеток эукариотов | |
| RU2068879C1 (ru) | Способ получения ферментативного гидролизата и питательная среда "эпидермат-2" для культивирования клеток эукариотов | |
| CN113832208B (zh) | 一种水解蛋白组合物的制备工艺及产物和应用 | |
| JP3542818B2 (ja) | Ｉｖ型コラーゲンゲルの製造方法 | |
| AU2005201970B2 (en) | Collagen and method for producing same | |
| JPS6350992B2 (ru) | ||
| JPS6221542B2 (ru) | ||
| RU2015697C1 (ru) | Препарат для борьбы с гнойно-некротическими заболеваниями дистального отдела конечностей крупного рогатого скота "процеол" | |
| CN120098888A (zh) | 一种羊皮去细胞蛋白基质胶的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20090116 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140316 |