RU2200571C1

RU2200571C1 - Complex of natural compounds of vegetable origin eliciting activity with regards to viral and other infections transferred by sexual way

Info

Publication number: RU2200571C1
Application number: RU2002104738A
Authority: RU
Inventors: В.А. Быков; С.А. Вичканова; Т.А. Сокольская; В.К. Колхир
Original assignee: Быков Валерий Алексеевич
Priority date: 2002-02-26
Filing date: 2002-02-26
Publication date: 2003-03-20

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: invention relates to agents prepared of medicinal plants eliciting antiviral activity against human immunodeficiency virus and pathogens of infections transferred by sexual way. Invention proposes the complex comprising hyporamine, flacoside or chelepin and chelepin D taken in the ratio = 1 : (2.0-4.0) : (2.0-2.5), respectively. Proposed composition of components provides the broad spectrum of antiviral and anti-infectious activities. EFFECT: valuable medicinal properties of complex. 3 tbl, 4 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к средствам из лекарственных растений, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса иммунодефицита человека и возбудителей инфекций, передаваемых половым путем. The invention relates to medicine, in particular to means from medicinal plants with antiviral activity against human immunodeficiency virus and sexually transmitted infections.

Проблема лечения и профилактики вирусных инфекций, в том числе передаваемых половым путем, приобретает с каждым годом все большую значимость. Общеизвестна возрастающая роль вирусов и в отношении ряда онкологических заболеваний, в том числе генитальной сферы. С ростом числа заболеваний вирусной этиологии увеличивается и актуальность создания эффективных средств не только их лечения, но и профилактики. The problem of treatment and prevention of viral infections, including sexually transmitted infections, is becoming increasingly important every year. The growing role of viruses is well known in relation to a number of oncological diseases, including the genital area. With the increase in the number of diseases of viral etiology, the relevance of creating effective tools not only for their treatment, but also for prevention, also increases.

Известны лекарственные средства из растений, разрешенные для медицинского применения, обладающие противовирусным действием, такие как флакозид, гипорамин, хелепин или хелепин Д. Known medicinal products from plants that are approved for medical use with antiviral effects, such as flacoside, hyporamine, helepin or helepin D.

Гипорамин разрешен для медицинского применения у взрослых и детей в качестве противовирусного средства. Обладает широким спектром антивирусной активности в отношении вирусов простого герпеса, цитомегаловируса, Varicella Zoster, вирусов иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекция) и др. Гипорамин представляет собой сумму полифенольных соединений из листьев облепихи крушиновидной, содержащую не менее 60% галлоэллаготаннинов. Биологически активными компонентами являются гидролизуемые таннины. (Новые отечественные лекарственные средства Сводный выпуск, М. 2000г. Гос. Реестр, т. 1, 2001 г). На основе гипорамина созданы препараты, например, против вируса СПИД (пат. РФ 1805967), для лечения вирусных заболеваний (пат. РФ 2118163). Hyporamine is approved for medical use in adults and children as an antiviral agent. It has a wide range of antiviral activity against herpes simplex viruses, cytomegalovirus, Varicella Zoster, human immunodeficiency viruses (HIV infection), etc. Hyporamine is the sum of polyphenolic compounds from buckthorn buckthorn leaves containing at least 60% galloellagotannins. Biologically active components are hydrolyzable tannins. (New domestic medicines Consolidated release, M. 2000. State. Register, t. 1, 2001). On the basis of hyporamine, preparations were created, for example, against the AIDS virus (US Pat. RF 1805967), for the treatment of viral diseases (US Pat. RF 2118163).

Флакозид разрешен для медицинского применения у взрослых и детей как противовирусное средство при острых вирусных гепатитах А и В, первичных и рецидивирующих формах простого герпеса экстрагенитальной и генитальной локализации, опоясывающем лишае и других инфекций. Флакозид - производное флавонов, получают из листьев бархата амурского (Машковский М.Д. "Лекарственные средства", т. 2, 2000г., Гос. Реестр лекарственных средств, 2001 г., т.1). Применение флакозида для лечения герпеса описано в авт.свид. СССР 491387. Flacoside is approved for medical use in adults and children as an antiviral agent for acute viral hepatitis A and B, primary and recurrent forms of herpes simplex extragenital and genital localization, herpes zoster and other infections. Flacoside is a derivative of flavones, obtained from the leaves of Amur velvet (Mashkovsky MD "Medicines", vol. 2, 2000, State. Register of medicines, 2001, vol. 1). The use of flacoside for the treatment of herpes is described in auth. USSR 491387.

Хелепин и хелипин Д оказывают ингибирующий эффект на вирусы герпеса I и II типа, разрешены для применения у взрослых и детей при простом герпесе генитальной и экстрагенитальной локализации, опоясывающем герпесе и других вирусных инфекций. Представляют собой очищенные экстракты, содержащие в качестве биологически активных компонентов суммы флавоноидов (изоориентин, витоксин, изовитексин и др.). Хелепин выделен из надземной части леспедеции копеечковой сем. Бобовых. Хелепин Д выделен из надземной части десмодиума канадского, сем. Бобовых. (Машковский Д. М. Лекарственные средства т.2, 2000г. Новые лекарственные средства, М. 2000г., Гос. Реестр, т.1, 2001 г.). Известно лекарственное средство на основе хелепина Д для лечения герпесвирусных и аденовирусных заболеваний глаз (пат. РФ 2120294). Helepin and Helipin D have an inhibitory effect on herpes simplex viruses type I and II, are approved for use in adults and children with herpes simplex genital and extragenital localization, herpes zoster and other viral infections. They are purified extracts containing, as biologically active components, amounts of flavonoids (isoorientin, vitoxin, isovitexin, etc.). Helepin isolated from the aerial part of the lespedia of the penny sem. Legumes. Helepin D isolated from the aerial part of the Canadian desmodium, fam. Legumes. (D. Mashkovsky. Medicines, vol. 2, 2000. New medicines, M. 2000, State Register, vol. 1, 2001). Known drug based on helepin D for the treatment of herpes virus and adenoviral eye diseases (US Pat. RF 2120294).

Факт установления наличия противовирусной активности в отношении определенного вида вируса может предполагать наличие противовирусного эффекта в отношении близкого вида вирусов. Так, например, действие флакозида на вирус гепатита А был установлен в опытах in vitro, лечебный эффект на гепатит А и В - в клинике. Таким образом можно сделать предположение о возможности действия флакозида и на вирус гепатита С. The fact of establishing the presence of antiviral activity against a specific type of virus may suggest the presence of an antiviral effect against a similar type of virus. So, for example, the effect of flacoside on hepatitis A virus was established in experiments in vitro, the therapeutic effect on hepatitis A and B in the clinic. Thus, we can make an assumption about the possibility of action of flacoside on hepatitis C.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому объекту является природное соединение растительного происхождения гипорамин, обладающий широким спектром противовирусной активности, в том числе против вируса СПИД (пат. РФ 1805967). The closest technical solution to the claimed object is a natural compound of plant origin hyporamine, which has a wide spectrum of antiviral activity, including against the AIDS virus (US Pat. RF 1805967).

Целью настоящего изобретения является создание комплекса природных соединений растительного происхождения активного в отношении вирусных и других инфекций, передаваемых половым путем. The aim of the present invention is to provide a complex of natural compounds of plant origin active against viral and other sexually transmitted infections.

Поставленная цель достигается за счет использования комплекса природных соединений растительного происхождения, включающего гипорамин и содержащего дополнительно флакозид и хелепин или хелепин Д, взятые соответственно в соотношении 1:(2,0-4,0):(2,0-2,5). This goal is achieved through the use of a complex of natural compounds of plant origin, including hyporamine and additionally containing flacoside and helepin or helepin D, respectively taken in the ratio 1: (2.0-4.0) :( 2.0-2.5).

Заявленный комплекс природных соединений растительного происхождения обладает ингибирующим эффектом в отношении широкого спектра вирусов, включая вирус СПИД, за счет вхождения в него заявляемых компонентов в определенных соотношениях. The claimed complex of natural compounds of plant origin has an inhibitory effect against a wide range of viruses, including the AIDS virus, due to the inclusion of the claimed components in certain proportions.

Изобретательский уровень заключается в выявлении новой совокупности признаков за счет наличия дополнительных компонентов, обеспечивающих новый спектр противовирусной и противоинфекционной активностей, а именно активности в отношении инфекций, передаваемых половым путем. The inventive step is to identify a new set of features due to the presence of additional components that provide a new range of antiviral and anti-infectious activities, namely activity against sexually transmitted infections.

Все соединения, входящие в комплекс в заявляемых соотношениях, не вступают в химическое взаимодействие друг с другом, не образуют новых веществ, обладающих новыми биологически активными свойствами или токсическим действием. Полное сохранение химических структур компонентов, входящих в данный комплекс, подтверждено аналитическими методами контроля, а именно, флакозид, хелепин и хелепин Д определяли спектрофотометрическим методом анализа с использованием стандарта, гипорамин определяли спектрофотометрическим методом анализа по коэффициенту удельного поглощения. Все указанные методы контроля вошли в нормативные документы, включая фармацевтический стандарт предприятия (ФСП). All compounds included in the complex in the claimed proportions do not enter into chemical interaction with each other, do not form new substances with new biologically active properties or toxic effects. The complete preservation of the chemical structures of the components included in this complex was confirmed by analytical control methods, namely, flacoside, helepin and helepin D were determined by spectrophotometric analysis using the standard, hyporamine was determined by spectrophotometric analysis by specific absorption coefficient. All these control methods are included in regulatory documents, including the pharmaceutical standard of the enterprise (FSP).

Сохранение в данном комплексе неизмененных химических структур компонентов приводит и к сохранению их биологической активности, указанной выше, присущей каждому компоненту, а именно, противовирусной активности гипорамина (в отношении ВИЧ-инфекции), флакозида (в отношении вируса герпеса и других вирусов) и хелепина или хелепина Д (в отношении вируса герпеса). The preservation in this complex of unchanged chemical structures of the components also leads to the preservation of their biological activity, indicated above, inherent in each component, namely, the antiviral activity of hyporamine (in relation to HIV infection), flacoside (in relation to herpes virus and other viruses) and helepin or helepin D (in relation to the herpes virus).

Проведены также новые биологические исследования, подтверждающие сохранение в комплексе противоинфекционной активности, присущей одному или нескольким компонентам, а именно исследован трепонемоцидный эффект заявляемого комплекса и входящих в него компонентов в отношении Treponema pallidum (возбудитель сифилиса). Проведенные исследования также показали, что эффект, установленный хотя бы для одного из компонентов (или для нескольких компонентов) полностью сохраняется для всего комплекса. New biological studies have also been carried out, confirming that the complex has the anti-infectious activity inherent in one or more components, namely, the treponemocidal effect of the claimed complex and its constituents with respect to Treponema pallidum (syphilis pathogen) has been studied. Studies have also shown that the effect established for at least one of the components (or for several components) is fully preserved for the entire complex.

Пример 1. Изучение активности в отношении Treponema pallidum. Example 1. The study of activity against Treponema pallidum.

Проведены исследования влияния комплекса природных соединений растительного происхождения, состоящего из гипорамина, флакозида и хелепина или хелепина Д, взятых в соотношении 1:(2,0-4,0):(2,0-2,5), на бледную трепонему - возбудителя сифилиса. Наряду с комплексом испытывали каждый компонент в отдельности: гипорамин, флакозид, хелепин и хелепин Д. The effect of a complex of natural compounds of plant origin, consisting of hyporamine, flacoside and helepin or helepin D, taken in the ratio 1: (2.0-4.0) :( 2.0-2.5), on the pale treponema, the pathogen, has been studied. syphilis. Along with the complex, each component was tested individually: hyporamine, flacoside, helepin and helepin D.

Взвесь бледных трепонем получали из орхитов кролика на 7-й день после заражения кроликов сифилисом. Трепонемы наблюдали в темнопольном микроскопе - окуляр 40, объектив х7. Взвесь бледных трепонем сохранялась в стерильном физиологическом растворе. Для опытов использовали взвесь с содержанием около 100 бледных трепонем в поле зрения. Растворы данных соединений готовили из расчета 20 м г вещества в 1 мл жидкости: для водорастворимых соединений (гипорамин, хелепин, хелепин Д) 1 мл дистиллированной воды, для водонерастворимых (флакозид) - 5%-ный раствор этилового спирта + 0,9 мл дистиллированной воды. A suspension of pale treponemas was obtained from rabbit orchitis on the 7th day after infection of the rabbits with syphilis. Treponema was observed in a dark-field microscope - eyepiece 40, lens x7. A suspension of pale treponemas was maintained in sterile saline. For the experiments, a suspension with a content of about 100 pale treponemas in the field of view was used. Solutions of these compounds were prepared on the basis of 20 mg of the substance in 1 ml of liquid: for water-soluble compounds (hyporamine, helepin, helepin D) 1 ml of distilled water, for water-insoluble (flacoside) - 5% solution of ethyl alcohol + 0.9 ml of distilled water.

Трепонемоцидный эффект изучали методом прямого контакта в капле. Одну каплю (0,05 мл) каждого раствора помещали на предметное стекло, смешивали с равным объемом взвеси трепонем в изотоническом растворе хлористого натрия, накрывали покровным стеклом и просматривали под микроскопом. The treponemocidal effect was studied by direct contact in a drop method. One drop (0.05 ml) of each solution was placed on a glass slide, mixed with an equal volume of trepone suspension in an isotonic sodium chloride solution, covered with a coverslip and examined under a microscope.

Результаты сведены в табл.1. The results are summarized in table 1.

Аналогично получены результаты с использованием хелепина Д. Similarly, results were obtained using helepin D.

Таким образом, комплекс проявил Трепонемоцидный эффект и может быть рекомендован для создания лекарственных средств профилактического и лечебного действия. Thus, the complex showed Treponemocidal effect and can be recommended for the creation of preventive and therapeutic drugs.

Пример 2. Изучение активности в отношении ВИЧ-инфекции. Example 2. The study of activity against HIV infection.

Изучение эффективности объекта исследования (гипорамин) проводили в опытах in vitro в смешанной культуре клеток H9/IIIB и Н9, пермисивно зараженных вирусом СПИД (HTLV-III). Смесь культуры клеток (1:1) готовили непосредственно перед опытом, разливали по 2 мл в каждую лунку планшетов фирмы "Coster". Одновременно в лунки вносили объект исследования для получения конечной концентрации 30, 10, 5 и 1 мкг/мл. Планшеты инкубировали при температуре 37^oС при 5% CO₂ в течение 7 суток. Жизнеспособность клеточных культур контролировали ежедневно с помощью инвертированного микроскопа. Результаты опыта учитывали на 7-е сутки методом непрямой иммунофлуоресценции с использованием сыворотки больного ВИЧ-инфекцией (в разведении 1:30).The study of the effectiveness of the object of study (hyporamine) was carried out in vitro in a mixed culture of H9 / IIIB and H9 cells, permanently infected with the AIDS virus (HTLV-III). A cell culture mixture (1: 1) was prepared immediately before the experiment, 2 ml was poured into each well of Coster plates. At the same time, the test object was introduced into the wells to obtain a final concentration of 30, 10, 5, and 1 μg / ml. The plates were incubated at 37 ^{° C.} at 5% CO ₂ for 7 days. Cell viability was monitored daily using an inverted microscope. The results of the experiment were taken into account on the 7th day by indirect immunofluorescence using serum from a patient with HIV infection (diluted 1:30).

В результате исследования установлено, что гипорамин в концентрации 30 мкг/мл ингибирует вирусную продукцию в изученной системе клеток H9/IIIB и Н9 на 50% (ЕД₅₀). В более низких концентрациях (10 и 5 мкг/мл) ингибирующий эффект гипорамина выявлялся примерно в 40%.As a result of the study, it was found that hyporamine at a concentration of 30 μg / ml inhibits viral production in the studied system of H9 / IIIB and H9 cells by 50% (ED ₅₀ ). At lower concentrations (10 and 5 μg / ml), the inhibitory effect of hyporamine was detected in approximately 40%.

Таким образом, активность гипорамина проявляется в смешанной системе клеток H9/IIIB и Н9. Получен высокий химиотерапевтический индекс гипорамина, так как хорошо переносимая концентрация гипорамина, не снижающая темпов роста культуры клеток Н9 в течение всего периода наблюдения, составляла 30 мкг/мл, а ингибирующий эффект гипорамина в отношении смешанной культуры клеток H9/IIIB и Н9 проявлялся при его использовании даже в концентрации 1 мкг/мл. Thus, the activity of hyporamine is manifested in a mixed system of H9 / IIIB and H9 cells. A high chemotherapeutic index of hyporamine was obtained, since a well-tolerated concentration of hyporamine, which did not reduce the growth rate of the H9 cell culture during the entire observation period, was 30 μg / ml, and the inhibitory effect of hyporamine on the mixed cell culture of H9 / IIIB and H9 was manifested when using it even at a concentration of 1 μg / ml.

Пример 3. Изучение активности в отношении вирусов герпеса. Example 3. The study of activity against herpes viruses.

Клинические исследования проведены на пациентах взрослого и детского возраста. Объекты исследования - хелепин и хелепин Д. Анализ полученных результатов представлен в табл. 3. Объекты исследования показали хорошую переносимость, отсутствие побочных явлений и высокую эффективность. Clinical studies have been conducted on adult and pediatric patients. Objects of study - helepin and helepin D. The analysis of the results is presented in table. 3. The objects of the study showed good tolerance, the absence of side effects and high efficiency.

Пример 4. Изучение активности в отношении вируса гепатита в опытах in vitro. Example 4. The study of activity against hepatitis virus in experiments in vitro.

В эксперименте использовали культуру клеток AGMK (линия BS-C-1) и адаптированный к ней штамм вируса гепатита А ИМ-175. Проведены серии экспериментов с учетом времени внесения объекта исследования (флакозид) по отношению к моменту заражения культуры клеток вирусом гепатита: до заражения, одновременно с заражением, после заражения вирусом. Во всех сериях опытов выявлено, что объект исследования подавлял размножение вируса гепатита А в культурах по сравнению с контролем. При учете результатов методом непрямой иммунофлюоресценции объект в концентрации 0,1 мг/мл вызывал ингибирование размножения ВГА на 30-35% при внесении в культуру клеток одновременно с заражением вирусом. При учете результатов иммуноферментным методом также установлено, что ингибирование размножения ВГА в концентрациях 1, 0,5 и 0,1 мг/мл происходило в тех же условиях опыта. Ни в одной из примененных концентраций токсического действия объекта исследования на клетки не наблюдали. An AGMK cell culture (BS-C-1 line) and a hepatitis A virus strain IM-175 adapted to it were used in the experiment. A series of experiments was carried out taking into account the time of introducing the object of study (flacoside) in relation to the moment of infection of the cell culture with hepatitis virus: before infection, simultaneously with infection, after infection with the virus. In all series of experiments, it was revealed that the object of the study suppressed the reproduction of hepatitis A virus in cultures as compared with the control. When taking into account the results by indirect immunofluorescence, the object at a concentration of 0.1 mg / ml caused inhibition of HAV multiplication by 30-35% when introduced into the cell culture at the same time as the virus was infected. When taking the results into account by the enzyme-linked immunosorbent assay, it was also found that inhibition of HAV reproduction at concentrations of 1, 0.5, and 0.1 mg / ml occurred under the same experimental conditions. In none of the applied concentrations of the toxic effect of the test object on the cells was not observed.

Таким образом, показано противовирусное действие объекта исследования в отношении вируса гепатита человека. Thus, the antiviral effect of the object of study in relation to the human hepatitis virus is shown.

Во всех примерах опыты проводили в нескольких повторностях в заявляемых соотношениях. В примерах усреднены результаты исследований. In all examples, the experiments were carried out in several repetitions in the claimed proportions. In the examples, the research results are averaged.

Таким образом, заявленный комплекс природных соединений растительного происхождения является перспективным для создания лекарственных средств для лечения и профилактики инфекций, передаваемых половым путем. Thus, the claimed complex of natural compounds of plant origin is promising for the creation of drugs for the treatment and prevention of sexually transmitted infections.

Claims

A complex of natural compounds of plant origin, active against viral infections and other sexually transmitted infections, including hyporamine, characterized in that the complex additionally contains flacoside and helepin or helepin D, taken in the ratio 1: (2.0-4.0) : (2.0-2.5).