RU2200196C2 - Recombinant plasmid dna ppho-sod 23 encoding synthesis of human superoxide dismutase and strain saccharomyces cerevisiae = d-11 vniischm as producer of human superoxide dismutase - Google Patents
Recombinant plasmid dna ppho-sod 23 encoding synthesis of human superoxide dismutase and strain saccharomyces cerevisiae = d-11 vniischm as producer of human superoxide dismutase Download PDFInfo
- Publication number
- RU2200196C2 RU2200196C2 RU2000129024/13A RU2000129024A RU2200196C2 RU 2200196 C2 RU2200196 C2 RU 2200196C2 RU 2000129024/13 A RU2000129024/13 A RU 2000129024/13A RU 2000129024 A RU2000129024 A RU 2000129024A RU 2200196 C2 RU2200196 C2 RU 2200196C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- superoxide dismutase
- sod
- fragment
- strain
- ppho
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологической и медицинской промышленности, в частности к технологии получения препаратов супероксиддисмутазы (СОД). The invention relates to the microbiological and medical industries, in particular to a technology for producing superoxide dismutase (SOD) preparations.
Описанный в настоящее время дрожжевой штамм-продуцент супероксиддисмутазы человека синтезирует целевой продукт конститутивно, что ограничивает рост, уменьшает выход биомассы и, соответственно, снижает продуктивность и генетическую стабильность. The currently described yeast strain producing human superoxide dismutase synthesizes the target product constitutively, which limits growth, reduces biomass yield and, accordingly, reduces productivity and genetic stability.
Известно получение СОД на основе дрожжевых штаммов (Biotechnology, 1987, v.5, p.363-366). It is known to obtain SOD based on yeast strains (Biotechnology, 1987, v.5, p.363-366).
Недостатком указанной технологии является необходимость использования дорогостоящих селективных сред, а также относительно невысокая стабильность штамма. The disadvantage of this technology is the need to use expensive selective media, as well as the relatively low stability of the strain.
Прототипом заявляемой группы изобретений является штамм Saccharomyces cerevisiae YBS13Chgk/pBr-SOD-PGKdel и используемая при его создании экспрессионная плазмида pBr-SOD-PGKdel (пат. РФ 2044771, 1995, кл. C 12 N 1/16). The prototype of the claimed group of inventions is a strain of Saccharomyces cerevisiae YBS13Chgk / pBr-SOD-PGKdel and the expression plasmid pBr-SOD-PGKdel used in its creation (US Pat. RF 2044771, 1995, class C 12 N 1/16).
Недостатком данного штамма и используемой при этом плазмиды является недостаточная стабильность свойств при культивировании. The disadvantage of this strain and used in this plasmid is the lack of stability of properties during cultivation.
Задачей, решаемой авторами, являлось создания плазмиды и штамма, позволяющих получать СОД с достаточно высоким выходом на относительно дешевых средах с более высокой стабильностью свойств при культивировании. The problem solved by the authors was the creation of a plasmid and strain, allowing to obtain SOD with a fairly high yield on relatively cheap media with a higher stability of properties during cultivation.
Задача была решена созданием дрожжевой экспрессионой плазмиды pPHO-SOD23, содержащей последовательность гена супероксиддисмутазы человека, находящегося под контролем дрожжевого фосфатазного промотора и алкогольдегидрогеназного терминатора транскрипции, а также содержащей последовательность Hbs-антигена гепатита В для стабилизации плазмидной конструкции в дрожжевых клетках; трансформацией этой плазмидой дрожжевого штамма Saccharomyces cerevisiae 20B12; и, в результате, созданием дрожжевого штамма продуцента супероксиддисмутазы человека. The problem was solved by creating a yeast expression plasmid pPHO-SOD23 containing the human superoxide dismutase gene sequence controlled by the yeast phosphatase promoter and the alcohol dehydrogenase transcription terminator, and also containing the hepatitis B Hbs antigen sequence to stabilize the plasmid construct in yeast cells; transformation of the yeast strain Saccharomyces cerevisiae 20B12 with this plasmid; and, as a result, the creation of a yeast strain of a producer of human superoxide dismutase.
Схема плазмиды pPHO-SOD23 представлена на фиг.1, где А - соответствует EcoRI/BamHI фрагменту коммерческой плазмиды р33 и содержит:
А1 - дрожжевой фосфотазный промотор рРНО5,
А2 - фрагмент дрожжевой 2 мкм плазмиды В-типа, содержащий ori этой плазмиды,
A3 - дрожжевой активный ген TRP1,
А4 - фрагмент плазмиды pBR322, содержащий ori и ген BLA этой плазмиды,
А5 - дрожжевой фосфатазный терминатор транскрипции tPHО5;
В - соответствует последовательности Hbs-антигена гепатита В, фланкированного BamHI сайтами;
С - соответствует последовательности алкогольдегидрогеназного терминатора транскрипции (HindIII/BamHI фрагменту);
D - экспрессионная кассета с геном SOD, фланкированная сайтами EcoRI/KpnI, которая имеет следующий вид (см. последовательность 1).The scheme of the plasmid pPHO-SOD23 is shown in figure 1, where a - corresponds to the EcoRI / BamHI fragment of the commercial plasmid p33 and contains:
A1 - yeast phosphatase promoter pRNO5,
A2 is a fragment of a yeast 2 μm B-type plasmid containing ori of this plasmid,
A3 - yeast active gene TRP1,
A4 is a fragment of plasmid pBR322 containing ori and the BLA gene of this plasmid,
A5 — yeast phosphatase transcriptional terminator of tPHO5;
B - corresponds to the sequence of Hbs-antigen of hepatitis B, flanked by BamHI sites;
C - corresponds to the sequence of the alcohol dehydrogenase transcription terminator (Hind III / BamHI fragment);
D is an expression cassette with the SOD gene, flanked by EcoRI / KpnI sites, which has the following form (see sequence 1).
Плазмида pPHO-SOD23 была получена следующим образом. Комплементарная ДНК (кДНК) была синтезирована обратной транскрипцией на матрице информационной РНК, выделенной из плаценты человека. Ген СОД был получен методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на матрице кДНК плаценты человека с затравками, представляющими собой последовательности начала и конца гена СОД человека, содержавшими его сайт инициации (ATG) и терминации (TAATGA) трансляции. К продукту, полученному методом ПЦР, пришивали HindIII адаптеры и клонировали ген СОД человека в HindIII сайт коммерческой плазмиды рААН5. Затем EcoRI-BamHI фрагмент полученной плазмиды, содержащий ген СОД и дрожжевой алкогольдегидрогеназный терминатор транскрипции, был объединен с большим EcoRI-BamHI фрагментом коммерческой плазмиды р33. В полученную плазмиду был встроен BamHI фрагмент плазмиды р33, содержащий последовательность Hbs-антигена гепатита В. Plasmid pPHO-SOD23 was obtained as follows. Complementary DNA (cDNA) was synthesized by reverse transcription on a messenger RNA matrix isolated from human placenta. The SOD gene was obtained by polymerase chain reaction (PCR) on a human placenta cDNA matrix with seeds representing the start and end sequences of the human SOD gene containing its initiation site (ATG) and translation termination (TAATGA). HindIII adapters were sewn onto the product obtained by PCR and the human SOD gene was cloned into the HindIII site of the commercial plasmid pAAN5. Then, an EcoRI-BamHI fragment of the obtained plasmid containing the SOD gene and yeast alcohol dehydrogenase transcription terminator was combined with a large EcoRI-BamHI fragment of the commercial p33 plasmid. A BamHI fragment of plasmid p33 containing the sequence of hepatitis B Hbs antigen was inserted into the obtained plasmid.
В качестве реципиентного штамма при трансформации плазмидой pPHO-SOD23 использовали дрожжевой штамм Saccharomyces cerevisiae 20B12 генотипа trp1. Трансформанты отбирали по способности к росту на среде, не содержащей триптофана. Один из таких клонов отобран в качестве продуцента и обозначен 20B12/pPHO-SOD23. The yeast strain Saccharomyces cerevisiae 20B12 of the trp1 genotype was used as the recipient strain during transformation with plasmid pPHO-SOD23. Transformants were selected for growth ability on tryptophan-free media. One of these clones was selected as a producer and designated 20B12 / pPHO-SOD23.
Исходя из метода конструирования, в случае утери плазмиды образуется реципиентная клетка генотипа trp-; такие клетки не способны вести биосинтез триптофана и являются нежизнеспособными на селективной среде. Таким образом, созданный штамм продуцент обладает способностью к селективному поддержанию экспрессионной плазмиды на средах любого состава, не содержащих триптофана.Based on the construction method, in the case of loss of the plasmid, a recipient cell of the trp - genotype is formed ; such cells are not capable of biosynthesis of tryptophan and are not viable in selective medium. Thus, the created producer strain has the ability to selectively maintain the expression plasmid on media of any composition not containing tryptophan.
Штамм Saccharomyces cerevisiae 20B12/pPHO-SOD23 депонирован в коллекции ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии (ВНИИСХМ) под номером Д-11 ВНИИСХМ. The strain Saccharomyces cerevisiae 20B12 / pPHO-SOD23 was deposited in the collection of the All-Russian Research Institute of Agricultural Microbiology (VNIISKhM) under the number D-11 VNIISKHM.
Штамм характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками. The strain is characterized by the following cultural-morphological and physiological-biochemical characteristics.
Вегетативные клетки двухсуточной культуры, выращенной на твердой питательной среде с 2% глюкозы в качестве единственного источника углерода, имеют овальную форму, размер клеток 10-15 мкм, протоплазма гомогенная, размножение почкованием. Vegetative cells of a two-day culture grown on solid nutrient medium with 2% glucose as the sole carbon source have an oval shape, cell size 10-15 microns, protoplasm homogeneous, reproduction by budding.
При выращивании на богатой твердой среде YEPD при 30oС через 72 ч роста колонии имеют следующий вид: колонии белого цвета с ровным или слегка зазубренным краем, матовой поверхностью, приподнятые, непрозрачные.When grown on a rich solid YEPD medium at 30 ° C. after 72 hours of growth, the colonies have the following appearance: white colonies with a smooth or slightly serrated edge, a dull surface, raised, opaque.
Рост в жидкой селективной глюкозо-минеральной среде без фосфата, содержащей 0,1% дрожжевого экстракта при 28-32oС: в течение первых 24 ч культивирования жидкость мутная, осадок белый, не комкуется, пристеночных пленок не образует. Температура роста 25-33oС (оптимум 28oС), рН культивирования 4,8-7,0 (оптимум 6,0).Growth in a liquid selective glucose-mineral medium without phosphate containing 0.1% yeast extract at 28-32 o C: during the first 24 hours of cultivation, the liquid is cloudy, the precipitate is white, does not clump, does not form wall films. The growth temperature of 25-33 o C (optimum 28 o C), the pH of the cultivation of 4.8-7.0 (optimum 6.0).
Ассимиляция источников углерода: сбраживает глюкозу, галактозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу, декстрины, крахмал, ассимилирует этанол, глицерин, лактат; не ассимилирует ацетат. Assimilation of carbon sources: ferments glucose, galactose, fructose, maltose, sucrose, dextrins, starch, assimilates ethanol, glycerin, lactate; Does not assimilate acetate.
Ассимиляция источников азота: усваивает аминокислоты, мочевину, соли аммония; нитраты не востанавливает. Assimilation of nitrogen sources: assimilates amino acids, urea, ammonium salts; nitrates does not restore.
Штамм Saccharomyces cerevisiae Д-11 ВНИИСХМ не патогенен. Штамм хранится на агаризованной богатой среде YEPD с глюкозой в течение 3 месяцев при +4oС.The strain Saccharomyces cerevisiae D-11 ARRIAH is not pathogenic. The strain is stored on agar rich YEPD medium with glucose for 3 months at + 4 o C.
Возможность практического применения штамма иллюстрируется следующим примером. The possibility of practical use of the strain is illustrated by the following example.
Пример
Клетки штамма-продуцента Д-11 ВНИИСХМ и исходного штамма 20В12 выращивали в колбах при 29±1oС и аэрации на среде следующего состава на 1 л: дигидрофосфат кальция 1 г, хлорида натрия 0,1 г, сульфат аммония 5 г, казаминовые кислоты (или пептон - НСl гидролизат) 10 г, глюкоза безводная 20 г, сернокислый магний 0,5 г, хлористый кальций 0,1 г, йодистый калий 100 мкг, борная кислота 10 мкг, сернокислое железо 50 мкг, сернокислый марганец 10 мкг, урацил 20 мкг, инозин 10 мкг, канамицин 50 мкг, рибофлавин 0,2 мкг, никотиновая кислота 0,2 мкг, 4-аминобензойная кислота 0,2 мкг, пантетонат кальция 0,2 мкг, пиридоксин 0,2 мкг, тиамин бромид 0,2 мкг, биотин 0,002 мкг. Исходный титр культур составлял 102 кл./мл. Через 18-20 ч выращивания (5•106 кл./мл) культуры переводили на среду, содержащую на 1 л: хлористый калий 1 г, хлористый натрий 0,1 г, сульфат аммония 5 г, казаминовые кислоты (или пептон - НСl гидролизат) 10 г, дрожжевой экстракт 1 г, сульфат цинка 16 мг, глюкоза безводная 20 г, сернокислый магний 0,5 г, хлористый кальций 0,1 г, йодистый калий 100 мкг, борная кислота 10 мкг, сернокислое железо 50 мкг, сернокислый марганец 10 мкг, урацил 20 мкг, инозин 10 мкг, канамицин 50 мкг, рибофлавин 0,2 мкг, никотиновая кислота 0,2 мкг, 4-аминобензойная кислота 0,2 мкг, пантетонат кальция 0,2 мкг, пиридоксин 0,2 мкг, тиамин бромид 0,2 мкг, биотин 0,002 мкг. При этом исходную культуру разводили в 5 раз, до титра 1•106 кл. /мл. Через 20-24 ч культивирования культуры переходили в стационарную фазу роста при титре 1,2•108 кл./мл. Выход биомассы дрожжей, 80%-ной влажности, составлял 15 г/л. Биомассу, собранную в этот период культивирования, использовали для анализа супероксиддисмутазы. Клетки из 20 мл культуры собирали центрифугированием, промывали водой, суспендировали в 20 мл 20 mM фосфатного буфера и разрушали после добавления равного объема стеклянных шариков на вибраторе типа "Вортекс" 4 раза по 5 мин. Для получения фракции растворимых белков дебрис отделяли центрифугированием при 16000 об/мин в течение 20 мин. Осветленный таким образом клеточный экстракт анализировали электрофоретически и определяли в нем содержание супероксиддисмутазы. По результатам электрофореза (фиг.2, где дорожка 1 - чистый препарат СОД человека, дорожка 2 - экстракт клеток штамма 20В12, дорожка 3 - экстракт клеток штамма Д-11 ВНИИСХМ) видно, что штамм-продуцент содержит существенное количество супероксиддисмутазы человека, отсутствующей в экстракте исходного штамма. Из данных денситометрии полосы 3 этой электрофореграммы следует, что супероксиддисмутаза человека составляет 20% растворимого клеточного белка.Example
The cells of the producer strain D-11 VNIISKhM and the initial strain 20B12 were grown in flasks at 29 ± 1 ° C and aeration on 1 liter medium of the following composition: calcium dihydrogen phosphate 1 g, sodium chloride 0.1 g, ammonium sulfate 5 g, casamic acids (or peptone - HCl hydrolyzate) 10 g, anhydrous glucose 20 g, magnesium sulfate 0.5 g, calcium chloride 0.1 g, potassium iodide 100 μg, boric acid 10 μg, iron sulfate 50 μg, manganese sulfate 10 μg, uracil 20 mcg, inosine 10 mcg, kanamycin 50 mcg, riboflavin 0.2 mcg, nicotinic acid 0.2 mcg, 4-aminobenzoic acid 0.2 mcg, panteto atm calcium 0.2 mg, 0.2 mg pyridoxine, thiamine bromide 0.2 ug, biotin 0.002 micrograms. The initial titer of the cultures was 10 2 cells / ml. After 18-20 hours of cultivation (5 × 10 6 cells / ml), the cultures were transferred to a medium containing 1 l: potassium chloride 1 g, sodium chloride 0.1 g, ammonium sulfate 5 g, casamic acids (or peptone – HCl hydrolyzate) 10 g, yeast extract 1 g, zinc sulfate 16 mg, anhydrous glucose 20 g, magnesium sulfate 0.5 g, calcium chloride 0.1 g, potassium iodide 100 μg, boric acid 10 μg, iron sulfate 50 μg, sulfate manganese 10 mcg, uracil 20 mcg, inosine 10 mcg, kanamycin 50 mcg, riboflavin 0.2 mcg, nicotinic acid 0.2 mcg, 4-aminobenzoic acid 0.2 mcg, calcium pantetonate 0.2 mcg, pyridoxine 0.2 mcg, thiamine bromide 0.2 mcg, biotin 0.002 mcg. In this case, the initial culture was bred 5 times, to a titer of 1 • 10 6 cells. / ml After 20-24 hours of cultivation, the cultures transferred to the stationary phase of growth at a titer of 1.2 • 10 8 cells / ml. The yield of yeast biomass, 80% moisture, was 15 g / l. The biomass collected during this cultivation period was used for superoxide dismutase analysis. Cells from 20 ml of culture were collected by centrifugation, washed with water, suspended in 20 ml of 20 mM phosphate buffer and destroyed after adding an equal volume of glass beads on a Vortex vibrator 4 times for 5 minutes. To obtain a soluble protein fraction, debris was separated by centrifugation at 16,000 rpm for 20 minutes. The cell extract thus clarified was analyzed electrophoretically and the content of superoxide dismutase was determined in it. According to the results of electrophoresis (figure 2, where lane 1 is a pure preparation of human SOD, lane 2 is an extract of cells of strain 20B12, lane 3 is an extract of cells of strain D-11 VNIISCHM) it can be seen that the producer strain contains a significant amount of human superoxide dismutase, which is absent in extract of the original strain. From the densitometry data of strip 3 of this electrophoregram, it follows that human superoxide dismutase makes up 20% of soluble cellular protein.
Наличие супероксиддисмутазы в клеточных экстрактах измеряли с помощью иммуноферментного анализа по взаимодействию целевого белка с парой моноклональных антител, одно из которых коньюгировано с пероксидазой хрена, что позволяет количественно тестировать присутствие супероксиддисмутазы человека в образцах. Было установлено, что содержание СОД в лизате составляет 4200 мкг на мл лизата. The presence of superoxide dismutase in cell extracts was measured using an enzyme-linked immunosorbent assay for the interaction of the target protein with a pair of monoclonal antibodies, one of which is conjugated to horseradish peroxidase, which allows quantitative testing of the presence of human superoxide dismutase in samples. It was found that the content of SOD in the lysate is 4200 μg per ml of lysate.
Claims (2)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000129024/13A RU2200196C2 (en) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Recombinant plasmid dna ppho-sod 23 encoding synthesis of human superoxide dismutase and strain saccharomyces cerevisiae = d-11 vniischm as producer of human superoxide dismutase |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000129024/13A RU2200196C2 (en) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Recombinant plasmid dna ppho-sod 23 encoding synthesis of human superoxide dismutase and strain saccharomyces cerevisiae = d-11 vniischm as producer of human superoxide dismutase |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000129024A RU2000129024A (en) | 2002-11-10 |
RU2200196C2 true RU2200196C2 (en) | 2003-03-10 |
Family
ID=20242373
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000129024/13A RU2200196C2 (en) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Recombinant plasmid dna ppho-sod 23 encoding synthesis of human superoxide dismutase and strain saccharomyces cerevisiae = d-11 vniischm as producer of human superoxide dismutase |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2200196C2 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD4243C1 (en) * | 2012-10-31 | 2014-02-28 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Strain of Saccharomyces cerevisiae yeast - source of superoxide dismutase |
CN115011493A (en) * | 2022-06-14 | 2022-09-06 | 深圳中科欣扬生物科技有限公司 | Saccharomyces cerevisiae strain for separating and producing SOD (superoxide dismutase) from hot spring soil in Quzhuomu region in Tibet and application thereof |
-
2000
- 2000-11-22 RU RU2000129024/13A patent/RU2200196C2/en not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD4243C1 (en) * | 2012-10-31 | 2014-02-28 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Strain of Saccharomyces cerevisiae yeast - source of superoxide dismutase |
CN115011493A (en) * | 2022-06-14 | 2022-09-06 | 深圳中科欣扬生物科技有限公司 | Saccharomyces cerevisiae strain for separating and producing SOD (superoxide dismutase) from hot spring soil in Quzhuomu region in Tibet and application thereof |
CN115011493B (en) * | 2022-06-14 | 2023-07-18 | 深圳中科欣扬生物科技有限公司 | Saccharomyces cerevisiae strain for producing SOD by separating hot spring soil in Qu Zhuomu-Tibet region and application thereof |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH0773499B2 (en) | Recombinant DNA expression vector and DNA compound encoding isopenicillin N synthase from Penicillium chrysogenum | |
JP3342049B2 (en) | Tocopherol cyclase | |
CN113755354B (en) | Recombinant saccharomyces cerevisiae for producing gastrodin by utilizing glucose and application thereof | |
Howard et al. | Cell‐free synthesis of ethyl acetate by extracts from Saccharomyces cerevisiae | |
CN109609525A (en) | Grifola frondosus glucan synthase, its encoding gene and application | |
May et al. | Effect of molybdenum and tungsten on synthesis and composition of formate dehydrogenase in Methanobacterium formicicum | |
JPH04501807A (en) | Urate oxidase active protein, recombinant gene encoding it, expression vector, microorganism and transformed cell | |
CA2032963C (en) | Process for producing 7-aminocephem compound or salts thereof | |
GB2068969A (en) | Gene expression | |
Tøttrup et al. | A process for the production of human proinsulin in Saccharomyces cerevisiae | |
RU2200196C2 (en) | Recombinant plasmid dna ppho-sod 23 encoding synthesis of human superoxide dismutase and strain saccharomyces cerevisiae = d-11 vniischm as producer of human superoxide dismutase | |
CN105734066B (en) | A kind of building of the eukaryon Hansenula yeast engineering bacteria containing recombinant hepatitis B virus gene and the production method of hepatitis B surface antigen | |
CN105755035B (en) | A kind of building of Hansenula yeast specific expression vector and hepatitis B virus surface antigen is being improved in the method for expressed by Hansenula yeast amount | |
Veenhuis et al. | Excessive membrane development following exposure of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha to oleic acid‐containing media | |
RU2489481C1 (en) | METHOD TO PRODUCE PROTEIN E7-HSP70 AND YEAST STRAIN Saccharomyces cerevisiae FOR ITS REALISATION | |
JPH0753102B2 (en) | Yeast high in glutathione and method for producing the same | |
RU1660388C (en) | Recombinant plasmid dna pvgib encoding bovine gamma-interferon, method of its preparing and yeast strain saccharomyces cerevisiae - a producer of bovine gamma-interferon | |
Shiba et al. | Effect of ethanol on the production of carboxypeptidase Y using the GAL10 promoter in a Saccharomyces cerevisiae gal80 mutant | |
US5132218A (en) | Hybrid plasmids and microorganisms containing them | |
CN113493745B (en) | Genetically engineered bacterium for producing cephalosporin C and construction method thereof | |
RU2752896C1 (en) | Strain of yeast schizosaccharomyces pombe, producing l-lactic acid, containing genes of three different heterologous lactate dehydrogenases in chromosome | |
CN108486027A (en) | A kind of FAD is the production of the glucose dehydrogenase of prothetic group, purification process | |
RU2044771C1 (en) | Yeast strain saccharomyces cerevisiae producing human dismutase superoxide | |
JPH03175993A (en) | Acceleration of growth of recombinant host containing mutagen in biosynthesis of cell wall and/or cell membrane and acceleration acceleration of expression of mutational protein in said recombinant host | |
RU2701640C1 (en) | Recombinant yeast strain komagataella kurtzmanii - producer of beta-glucanase |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20051123 |