RU2191382C2

RU2191382C2 - Vessel to conduct quantitative determination of agglutination ( variants )

Info

Publication number: RU2191382C2
Application number: RU97103755/14A
Authority: RU
Inventors: Вальтер МИЛЧАНОСКИ; Милан ДЖОРИК; Кэтлин Дж. РАЙС; Дайан Е. БЕХТОЛЬД; Линда ДЭВИС; Томас М. СЕТКЭВЭДЖ; Дональд М. ДЭВИС
Original assignee: Орто-Клиникал Диагностикз, Инк.
Priority date: 1996-02-02
Filing date: 1997-03-13
Publication date: 2002-10-20
Also published as: CN1544948A; SG96584A1; CN1252475C; HRP970061B1; ZA97849B; HRP970061A2; MY128785A; PL189791B1; MY115233A; CN1198531A; PL318258A1; BR9700847A; PE104298A1; GR1003213B; CN1487298A; KR100503257B1; RU2276358C2; IL120120A0; SG78267A1; AR005685A1

Abstract

FIELD: quantitative determination of agglutination and separation of agglutinates. SUBSTANCE: in correspondence with one variant vessel to conduct quantitative determination of agglutination has upper chamber with hole to intake liquid reagents, lower chamber designed to take in liquid from upper chamber and carrying matrix for separation of agglutinates, barrier separating upper chamber from lower chamber and carrying fixture to hold liquid in upper chamber under conditions of normal gravitational force and atmospheric pressure. Barrier can secure passage of liquid from upper chamber to lower chamber under effect of pressure exceeding atmospheric pressure. Variants of invention differ by manufacture of barrier: in the form of spiral insert, spiral structure, diaphragm, porous plug. EFFECT: separation of sample and reagents, prevention of mixing of materials contained in vessel. 12 cl, 15 dwg, 11 tbl

Description

Эта заявка является частично продолжающей заявку на патент США под серийным N 08/093106, поданную 16 июля 1993 г., которая является продолжением заявки на патент США под серийным N 08/092157, поданной 15 июля 1993 г., и в настоящее время аннулированной. This application is partly a continuation of the US patent application under serial N 08/093106, filed July 16, 1993, which is a continuation of the US patent application under serial N 08/092157, filed July 15, 1993, and is currently canceled.

Предпосылки изобретения
Это изобретение относится к области количественных определений агглютинации и, в частности, к сосудам, используемым для проведения количественных определений агглютинации и отделения агглютинатов.BACKGROUND OF THE INVENTION
This invention relates to the field of quantitative determinations of agglutination and, in particular, to the vessels used to carry out quantitative determinations of agglutination and separation of agglutinates.

Серология групп крови требует определения совместимости клеток крови между донором и реципиентом крови перед трансфузией или трансплантацией органов пациенту. Совместимость клеток крови определяется отсутствием иммунологической реакции между антителами, содержащимися в сыворотке крови пациента, и антигенами, присутствующими на клетках крови от донора. Serology of blood groups requires determining the compatibility of blood cells between the donor and the recipient of blood before transfusion or organ transplantation to the patient. The compatibility of blood cells is determined by the absence of an immunological reaction between the antibodies contained in the patient's blood serum and the antigens present on the blood cells from the donor.

На поверхности эритроцитов каждого человека обнаруживается много различных антигенов групп крови. Определение группы крови, в целом, представляет собой процесс тестирования эритроцитов для определения, какие антигены присутствуют и какие отсутствуют. Это обычно осуществляется с помощью антител известной специфичности. On the surface of the red blood cells of each person, many different antigens of blood groups are found. Blood type determination, in general, is a red blood cell testing process to determine which antigens are present and which are absent. This is usually done using antibodies of known specificity.

Для выявления антител в сыворотке или плазме пациента реактивы, содержащие клетки крови, имеющие известные антигены, смешиваются с образцом сыворотки. Реактивы инкубируются в течение периода времени, достаточного для обеспечения агглютинации эритроцитов, которая происходит, когда присутствуют антитела против тех антигенов. Затем смесь центрифугируется, и если агглютинированные клетки крови присутствуют, такие агглютинаты отчетливо видны на дне реактора, указывая таким образом на присутствие антител в образце, направленных против известных антигенов на эритроцитах. Если в образце не присутствуют антитела, направленные против известных антигенов на эритроцитах, агглютинация не происходит, и на это указывает отсутствие агглютинированных эритроцитов после центрифугирования. To detect antibodies in the serum or plasma of a patient, reagents containing blood cells having known antigens are mixed with a serum sample. The reagents are incubated for a period of time sufficient to ensure red blood cell agglutination, which occurs when antibodies against those antigens are present. The mixture is then centrifuged, and if agglutinated blood cells are present, such agglutinates are clearly visible at the bottom of the reactor, thus indicating the presence of antibodies in the sample directed against known antigens on red blood cells. If antibodies directed against known antigens on red blood cells are not present in the sample, agglutination does not occur, and this is indicated by the absence of agglutinated red blood cells after centrifugation.

Недавно были разработаны системы, в которых реакция агглютинации проводится в одной части сосуда, а отделение агглютинированных эритроцитов происходит в другой части того же сосуда с помощью матрицы, которая отделяет агглютинированные клетки от других компонентов в смеси реагент/образец. Одна такая система раскрыта в описании в одновременно рассматриваемых заявках на патент США N 08/407747 и 08/112402, которые являются продолжением заявки на патент США серийного N 08/023500, в настоящее время аннулированной, причем обе заявки являются собственностью владельца данной заявки. Содержание каждой из этих заявок включено в эту заявку в виде ссылок. Сосуды для проведения реакции агглютинации и отделения агглютинатов в соответствии с настоящим изобретением и используемые также в изобретениях, раскрытых в упомянутых выше заявках, изготавливаются и продаются компанией "Ortho Diagnostic Systems Inc.", Raritan, New Jersey, под торговой маркой BIOVUE^TM. Такие реакционные сосуды изготавливаются в форме колонки, имеющей верхнюю камеру и нижнюю камеру, где верхняя камера имеет более широкий диаметр, чем нижняя камера. Нижняя камера содержит матрицу для отделения агглютинированных клеток от неагглютинированных клеток. Диаметр нижней камеры достаточно узок, настолько, что когда реактивы и пробы добавляются в верхнюю камеру, обычно с помощью пипетки, реактивы и образцы остаются в верхней камере и не поступают в нижнюю камеру до тех пор, пока не прикладывается дополнительная сила.Recently, systems have been developed in which an agglutination reaction is carried out in one part of a vessel, and agglutinated red blood cells are separated in another part of the same vessel using a matrix that separates agglutinated cells from other components in the reagent / sample mixture. One such system is disclosed in the description in simultaneously pending US patent applications Nos. 08/407747 and 08/112402, which are a continuation of the application for US patent serial N 08/023500, currently canceled, both applications are the property of the owner of this application. The content of each of these applications is incorporated into this application by reference. Vessels for carrying out the agglutination reaction and separation of agglutinates in accordance with the present invention and also used in the inventions disclosed in the above applications are manufactured and sold by Ortho Diagnostic Systems Inc., Raritan, New Jersey, under the trademark BIOVUE ^TM . Such reaction vessels are made in the form of a column having an upper chamber and a lower chamber, where the upper chamber has a wider diameter than the lower chamber. The lower chamber contains a matrix for separating agglutinated cells from non-agglutinated cells. The diameter of the lower chamber is narrow enough so that when reagents and samples are added to the upper chamber, usually with a pipette, the reagents and samples remain in the upper chamber and do not enter the lower chamber until additional force is applied.

Непрямая антиглобулиновая проба, известная как проба Кумбса, представляет собой анализ крови, используемый для определения наличия в сыворотке пациента IgG антител к определенным антигенам на поверхности эритроцитов. При пробе Кумбса сыворотка инкубируется в присутствии участвующих в реакции эритроцитов для обеспечения возможности связывания антител с антигенами на поверхности эритроцитов. Эти IgG антитела чаще всего сами по себе не агглютинируют эритроциты или агглютинируют лишь недостаточно для визуального выявления с помощью обычных методик. Для содействия видимой агглютинации обычно необходимо добавление второго антитела, направленного против IgG человека. An indirect antiglobulin test, known as the Coombs test, is a blood test used to determine if a patient has serum IgG antibodies to specific antigens on the surface of red blood cells. In the Coombs test, serum is incubated in the presence of red blood cells participating in the reaction to allow antibodies to bind to antigens on the surface of red blood cells. These IgG antibodies most often alone do not agglutinate red blood cells or agglutinate only insufficiently for visual detection using conventional techniques. To facilitate visible agglutination, the addition of a second antibody directed against human IgG is usually necessary.

Для типирования эритроцитов при анализе крови, используемом для определения, присутствуют ли определенные антигены на поверхности эритроцитов, анализируемые эритроциты добавляют в верхнюю камеру с последующим приложением силы, такой как, например, центробежная сила, которая перемещает их в нижнюю камеру, содержащую антитела, к определенным антигенам эритроцитов, и разделительную матрицу. Если эритроциты на своей поверхности имеют антиген(ы), способные соединяться со специфическими антителами в нижней камере, то будут образовываться агглютинаты и отделяться матрицей. For typing red blood cells in a blood test used to determine if certain antigens are present on the surface of red blood cells, the analyzed red blood cells are added to the upper chamber followed by the application of force, such as, for example, centrifugal force, which moves them to the lower chamber containing antibodies to certain erythrocyte antigens, and a separation matrix. If the red blood cells have antigen (s) on their surface that can bind to specific antibodies in the lower chamber, agglutinates will form and separate by a matrix.

При других типах анализов крови, таких как обратное типирование, при которых в сыворотке пациента производится количественное определение вызывающих прямую агглютинацию антител против антигенов эритроцитов, сыворотка пациента и реагент в виде эритроцитов с известными антигенами на их поверхности добавляются в верхнюю камеру, и прилагается сила, такая как, например, центробежная сила, которая перемещает реактивы в нижнюю камеру, содержащую жидкую среду и разделительную матрицу, но не антитело. При этом количественном определении присутствие в сыворотке пациента антител, вызывающих прямую агглютинацию, приведет к образованию агглютинатов, которые будут отделены матрицей. For other types of blood tests, such as reverse typing, in which the patient’s serum quantifies the direct agglutination of antibodies against red blood cell antigens, the patient’s serum and red blood cell reagent with known antigens on their surface are added to the upper chamber and a force is applied such such as centrifugal force, which moves the reagents into the lower chamber containing the liquid medium and the separation matrix, but not the antibody. In this quantitative determination, the presence of antibodies in the serum of the patient that cause direct agglutination will lead to the formation of agglutinates, which will be separated by a matrix.

Еще при одном типе анализа крови реактив в виде антитела с известной специфичностью к антигену эритроцитов помещается в верхнюю камеру вместе с эритроцитами пациента. Если антитело-реагент является антителом, вызывающим прямую агглютинацию, сила, такая как, например, центробежная сила, должна быть приложена без предшествующей инкубации, и содержимое под действием силы должно перемещаться в нижнюю камеру, содержащую разделительную матрицу в водном растворе. Затем с помощью матрицы должны отделяться агглютинаты. Альтернативно, эритроциты пациента помещаются в верхнюю камеру и добавляется реагентное IgG антитело с известной специфичностью с последующей инкубацией для обеспечения возможности прикрепления антитела к предположительным антигенам на поверхности эритроцитов. После инкубации прикладывается сила, такая как, например, центробежная сила, которая перемещает реактивы в нижнюю камеру, содержащую разделительную матрицу и анти-IgG антитела, специфичные для реагентного IgG антитела, используемого для инкубации эритроцитов в верхней камере. Если реагентное антитело присутствует на поверхности клеток пациента, анти-IgG антитело в нижней камере будет способствовать образованию агглютинатов, которые будут отделены матрицей. In another type of blood test, a reagent in the form of an antibody with known specificity for the red blood cell antigen is placed in the upper chamber along with the red blood cells of the patient. If the reagent antibody is a direct agglutination antibody, a force, such as, for example, centrifugal force, should be applied without prior incubation, and the contents should be moved by force to the lower chamber containing the separation matrix in the aqueous solution. Then, agglutinates should be separated using a matrix. Alternatively, the patient erythrocytes are placed in the upper chamber and reagent IgG antibody of known specificity is added, followed by incubation to allow the antibody to attach to the putative antigens on the surface of the red blood cells. After incubation, a force is applied, such as, for example, centrifugal force, which moves the reagents into the lower chamber containing the separation matrix and anti-IgG antibodies specific for the reagent IgG antibody used to incubate red blood cells in the upper chamber. If a reactant antibody is present on the surface of the patient’s cells, an anti-IgG antibody in the lower chamber will promote the formation of agglutinates, which will be separated by a matrix.

После того, как образцу и реактивам была предоставлена возможность инкубации в течение достаточного периода времени для обеспечения либо прямой агглютинации, как в случае пробы типирования эритроцитов, или реакции антител-антигенов, как в случае пробы Кумбса, сосуд, где происходит реакция, подвергается воздействию давления, например, посредством центрифугирования, так, что реактивы вытесняются в нижнюю часть колонки и на разделительную матрицу. В результате центрифугирования неагглютинированные материалы мигрируют вниз через разделительную матрицу, тогда как агглютинированные клетки остаются на верхней части разделительной матрицы или распределяются внутри матрицы в зависимости от степени агглютинации. Более сильные реакции агглютинации приводят к тому, что клетки остаются по направлению к верхней части разделительной матрицы, тогда как более слабые реакции агглютинации приводят к распределению агглютинатов на различные расстояния от поверхности матрицы. After the sample and reagents have been allowed to incubate for a sufficient period of time to provide either direct agglutination, as in the case of a red blood cell typing test, or in an antibody antigen reaction, as in the case of the Coombs test, the vessel where the reaction occurs is subjected to pressure , for example, by centrifugation, so that the reagents are displaced to the bottom of the column and to the separation matrix. As a result of centrifugation, non-agglutinated materials migrate downward through the separation matrix, while the agglutinated cells remain on top of the separation matrix or are distributed within the matrix depending on the degree of agglutination. Stronger agglutination reactions cause the cells to remain towards the top of the separation matrix, while weaker agglutination reactions lead to the distribution of agglutinates at different distances from the matrix surface.

Задержка образца и реактивов в верхней части колонки во время фазы инкубации является результатом поверхностного натяжения, действующего через верхний край нижней части колонки, где диаметр уменьшен относительно верхней части. Были установлены два потенциальных источника ошибки при проведении анализа с помощью колонки. Во-первых, если реактивы и образец пипетируются прямо вниз по центру реактивной камеры с избыточной силой, реактивы могут осаждаться прямо на верхушке разделительной матрицы в нижней камере и не задерживаться в верхней камере во время фазы инкубации. Таким образом, реактивы начнут поступать в разделительную матрицу перед завершением агглютинации. Во-вторых, есть возможность того, что растворитель или раствор, который содержит разделительную матрицу, может поступить в верхнюю камеру. Это может произойти в результате забрызгивания или других нарушений, например во время транспортировки и использования сосудов. The retention of the sample and reagents in the upper part of the column during the incubation phase is the result of surface tension acting across the upper edge of the lower part of the column, where the diameter is reduced relative to the upper part. Two potential sources of error were identified in the analysis using the column. First, if the reagents and the sample are pipetted directly down the center of the reaction chamber with excessive force, the reagents can be deposited directly on the top of the separation matrix in the lower chamber and not remain in the upper chamber during the incubation phase. Thus, reagents will begin to enter the separation matrix before agglutination is complete. Secondly, there is the possibility that a solvent or solution that contains a separation matrix may enter the upper chamber. This can occur as a result of splashing or other irregularities, for example during transportation and use of vessels.

В некоторых случаях, когда раствор или растворитель, содержащий разделительную матрицу, также содержит антитела или другие реактивы, которые непосредственно влияют на результат теста, такое забрызгивание может привести к перекрестному загрязнению колонок определенными реактивами из других колонок. Это может произойти, когда пользователь вставляет кончик пипетки в реактивную камеру, загрязняющую кончик разбрызганным реактивом, который может затем переноситься пипеткой в другой сосуд. Это может привести к ложным результатам при анализе агглютинации. In some cases, when the solution or solvent containing the separation matrix also contains antibodies or other reagents that directly affect the test result, such splashing can lead to cross-contamination of the columns with certain reagents from other columns. This can happen when the user inserts the tip of the pipette into the reaction chamber, contaminating the tip with the sprayed reagent, which can then be pipetted into another vessel. This can lead to false results in the analysis of agglutination.

Таким образом, задачей настоящего изобретения является создание усовершенствованного механизма для поддержания разделения образца и реактивов во время фазы инкубации анализа агглютинации. Еще одной задачей изобретения является создание средства предотвращения смешения материалов, содержащихся в нижней части колонки. Thus, it is an object of the present invention to provide an improved mechanism for maintaining the separation of sample and reagents during the incubation phase of an agglutination assay. Another objective of the invention is to provide a means of preventing the mixing of materials contained in the lower part of the column.

Сущность изобретения
Настоящее изобретение предоставляет усовершенствованный сосуд для проведения реакции агглютинации и отделения агглютинатов. Сосуд включает верхнюю камеру, которая содержит реагенты, нижнюю камеру, в которой отделяются агглютинаты, барьерное средство, разделяющее камеры, которое способно задерживать реактивы в верхней камере перед введением содержимого верхней камеры в разделительную матрицу и позволяет содержимому верхней камеры пройти из верхней камеры в нижнюю камеру, когда на барьер воздействует сила (т. е. превышающая атмосферное давление).SUMMARY OF THE INVENTION
The present invention provides an improved vessel for conducting an agglutination reaction and separating agglutinates. The vessel includes an upper chamber, which contains reagents, a lower chamber, in which agglutinates are separated, a barrier means separating the chambers, which is capable of retaining reagents in the upper chamber before introducing the contents of the upper chamber into the separation matrix and allows the contents of the upper chamber to pass from the upper chamber to the lower chamber when a force acts on the barrier (i.e., exceeding atmospheric pressure).

В предпочтительном варианте исполнения барьер включает суженный проход между верхней и нижней камерами. Такой суженный проход может обеспечиваться вкладышем, имеющим суженное отверстие, с помощью сгиба или прокладки, имеющей спиральную или другую аналогичную конфигурацию, которая может быть спрессована или вставлена между верхней и нижней камерами во время изготовления. Такой вкладыш обеспечивает физический барьер, который уменьшает размер отверстия между нижней камерой и верхней камерой, увеличивая предотвращение загрязнения верхней камеры содержимым нижней камеры. Далее вкладыш также усиливает разделение образца и реактивов во время инкубации. Когда вкладыш представляет собой спираль, проход, определяемый резьбой, центральным стержнем и стенками колонки, достаточно мал для предотвращения стекания жидкости из верхней камеры под влиянием силы тяжести и атмосферного давления. Например, диаметр спирального вкладыша находится в диапазоне приблизительно от 0,110 до 0,140 дюйма (0,28-0,38 см). Диаметр стержня спирального вкладыша составляет приблизительно от 0,030 до 0,090 дюйма (0,08-0,23 см). Спиральный вкладыш имеет приблизительно от 6 до 30 витков резьбы на дюйм (на 2,54 см). In a preferred embodiment, the barrier includes a narrowed passage between the upper and lower chambers. Such a constricted passage may be provided by a liner having a constricted opening, by means of a fold or gasket having a spiral or other similar configuration, which may be pressed or inserted between the upper and lower chambers during manufacture. Such an insert provides a physical barrier that reduces the size of the opening between the lower chamber and the upper chamber, increasing the prevention of contamination of the upper chamber by the contents of the lower chamber. Further, the liner also enhances the separation of sample and reagents during incubation. When the insert is a spiral, the passage defined by the thread, the central shaft and the walls of the column is small enough to prevent liquid from draining from the upper chamber under the influence of gravity and atmospheric pressure. For example, the diameter of the spiral liner is in the range of about 0.110 to 0.140 inches (0.28-0.38 cm). The diameter of the core of the spiral insert is approximately 0.030 to 0.090 inches (0.08-0.23 cm). The spiral insert has approximately 6 to 30 threads per inch (2.54 cm).

Суженный проход может также обеспечиваться ультразвуковой сваркой колонки, которая производится после загрузки колонки реактивами. Проход может, кроме того, содержать барьер в форме диафрагмы. В этом варианте изобретения диафрагма имеет центральную перфорацию, достаточно маленькую для предотвращения стекания жидкости из верхней камеры под влиянием силы тяжести и атмосферного давления. Диафрагма предпочтительно представляет собой силиконовую резину. Проход может, кроме того, содержать барьер в форме пористой заглушки. Пористая заглушка имеет проходы через нее достаточно маленькие для предотвращения стекания жидкости из верхней камеры под влиянием силы тяжести и атмосферного давления. Пористая заглушка предпочтительно представляет собой полипропилен. The narrowed passage can also be provided by ultrasonic welding of the column, which is performed after loading the column with reagents. The passage may further comprise a diaphragm barrier. In this embodiment, the diaphragm has a central perforation small enough to prevent liquid from draining from the upper chamber under the influence of gravity and atmospheric pressure. The diaphragm is preferably silicone rubber. The passage may further comprise a barrier in the form of a porous plug. The porous plug has passages through it small enough to prevent liquid from draining from the upper chamber under the influence of gravity and atmospheric pressure. The porous plug is preferably polypropylene.

Еще в одном варианте исполнения изобретение содержит прокладку, которая принимает форму конического элемента, имеющего отверстие через суженную верхушку. Помещенная в верхнюю часть и простирающаяся в колонку реактора такая прокладка перед введением с помощью пипетки образца в сосуд предотвратит перекрестное загрязнение вследствие попадания растворителя или раствора из одного сосуда в другой сосуд, тогда как в противном случае во время такого введения с помощью пипетки может произойти перекрестное загрязнение. Указанная прокладка удобно вставляется в верхнюю часть колонки конечным пользователем перед введением реактивов с помощью пипетки. Прокладка может принимать форму единого блока, имеющего шесть конических элементов или ячеек, расположенных бок-о-бок; общая площадь и форма прокладки такие же, как и у верхней стороны кассеты BIOVUE^TM.In yet another embodiment, the invention comprises a gasket that takes the form of a conical element having an opening through a narrowed tip. Such a gasket placed in the upper part and extending into the column of the reactor before pipetting the sample into the vessel will prevent cross-contamination due to solvent or solution from one vessel entering the other vessel, while otherwise cross-contamination may occur during pipetting . This gasket is conveniently inserted into the top of the column by the end user before pipetting the reagents. The gasket may take the form of a single unit having six conical elements or cells located side-by-side; The total area and shape of the gasket is the same as on the top side of the BIOVUE ^TM cartridge.

Прокладка включает корпус и по крайней мере один конический элемент, зависящий от него, в котором указанный конический элемент имеет отверстие в его суженной верхушке, и герметизирующее приспособление, расположенное в позиции, отделенной от указанной суженной верхушки. Конический элемент содержит первый конец, содержащий указанную суженную верхушку, и второй конец, отделенный от него и примыкающий к корпусу, в котором указанное герметизирующее приспособление расположено на или примыкает к второму концу. The gasket includes a housing and at least one conical element depending on it, wherein said conical element has an opening in its constricted apex, and a sealing device located in a position separated from said constricted apex. The conical element contains a first end containing the specified narrowed tip, and a second end, separated from it and adjacent to the housing, in which the specified sealing device is located on or adjacent to the second end.

Герметизирующее приспособление включает уплотнительное кольцо, окружающее указанный конический элемент, и уплотнительное кольцо может быть объединено с указанным коническим элементом. В предпочтительном варианте исполнения прокладка имеет шесть конических элементов, линейно зависимых от корпуса, и размер прокладки подобран таким образом, чтобы подходить для реакторов кассеты. Прокладка предпочтительно изготовлена из акриловой смолы. The sealing device includes a sealing ring surrounding said conical element, and the sealing ring may be combined with said conical element. In a preferred embodiment, the gasket has six conical elements linearly dependent on the housing, and the gasket size is selected so as to be suitable for the cassette reactors. The gasket is preferably made of acrylic resin.

Изобретение далее предполагает уплотненную прокладкой из фольги кассету, содержащую шесть реакционных сосудов, расположенных в ней в линию, и прокладку, включающую корпус и шесть линейно зависимых от нее конических элементов, в которой конические элементы включают суженную верхушку, приспособленную для прокола указанного уплотнения с прокладкой из фольги и при вставлении такая прокладка входит во фрикционное зацепление с указанной кассетой так, чтобы герметизировать соединение между кассетой и вкладышем. Приспособлением для герметизации соединения являются уплотнительные кольца, окружающие каждый из конических элементов и предпочтительно являющиеся составной частью каждого из конических элементов. The invention further provides for a cassette sealed with a foil gasket containing six reaction vessels located in a line in it, and a gasket comprising a body and six conical elements linearly dependent on it, in which the conical elements include a tapered tip adapted to puncture said seal with a gasket of foil and when inserted, such a gasket is in friction mesh with the specified cartridge so as to seal the connection between the cartridge and the liner. A device for sealing the joints are o-rings surrounding each of the conical elements and preferably being an integral part of each of the conical elements.

Краткое описание чертежей
На фиг.1 показан сосуд для проведения реакции и отделения агглютинатов с имеющим узкое отверстие вкладышем, помещенным в верхнюю камеру для проведения реакции.Brief Description of the Drawings
Figure 1 shows a vessel for carrying out the reaction and separating agglutinates with a liner having a narrow hole, placed in the upper chamber for carrying out the reaction.

Фиг.2 представляет вид сверху кассеты шести сосудов, где происходит реакция, на которой четыре сосуда показаны без вкладыша, и один сосуд (второй слева), содержащий вкладыш, показанный на фиг.1, и один сосуд (третий слева) иллюстрирует содержание реагентов. FIG. 2 is a top view of a six-vessel cassette where a reaction occurs in which four vessels are shown without an insert, and one vessel (second from the left) containing the insert shown in FIG. 1 and one vessel (third from the left) illustrates the content of the reactants.

Фиг. 3 представляет поперечное сечение кассеты реакционных сосудов по линии 3-3 фиг.2. FIG. 3 is a cross section of a reaction vessel cartridge along line 3-3 of FIG. 2.

Фиг.4 представляет вид сбоку кассеты реакционных сосудов. Figure 4 is a side view of the cassette of the reaction vessels.

Фиг.5 представляет поперечное сечение вдоль линии 5-5 фиг.2, показывающее вкладыш с узким отверстием внутри верхней камеры реакционного сосуда. FIG. 5 is a cross section along line 5-5 of FIG. 2, showing a liner with a narrow hole inside the upper chamber of the reaction vessel.

На фиг.6 показана верхняя камера реакционного сосуда, сконструированная с узким отверстием,
На фиг. 7 показан вкладыш, имеющий выступающую часть с отверстием, расположенный в нижней камере.Figure 6 shows the upper chamber of the reaction vessel, designed with a narrow hole,
In FIG. 7 shows a liner having a protruding portion with an opening located in the lower chamber.

Фиг.8 представляет поперечное сечение вдоль линии 8-8 фиг.3. Fig. 8 is a cross section along line 8-8 of Fig. 3.

На фиг.9 показан сосуд для проведения реакции и отделения агглютинатов, который был изогнут непосредственно под верхней камерой. Figure 9 shows a vessel for carrying out the reaction and separating agglutinates, which was bent directly under the upper chamber.

Фиг.10 представляет поперечное сечение вдоль линии 10-10 фиг.9. Figure 10 is a cross section along line 10-10 of figure 9.

Фиг. 11 представляет вид сбоку сосуда для проведения реакции и отделения агглютинатов со спиральным вкладышем 1, помещенным в верхнюю камеру 2, причем нижняя часть 3 верхней камеры модифицирована для размещения указанного вкладыша. FIG. 11 is a side view of a vessel for conducting a reaction and separating agglutinates with a spiral insert 1 placed in the upper chamber 2, the lower part 3 of the upper chamber being modified to accommodate said insert.

Фиг. 12 представляет вид сбоку конфигураций спиральных вкладышей; (А) иллюстрирует вкладыш, имеющий общий диаметр (1)=0,120 дюйма (0,3 см), и внутренний стержень, имеющий диаметр (2)=0,060 дюйма, 0,15 см); (В) иллюстрирует вкладыш, имеющий общий диаметр (1)=0,120 дюйма (0,3 см), и внутренний стержень, имеющий диаметр (2)=0,080 дюйма (0,2 см). FIG. 12 is a side view of spiral insert configurations; (A) illustrates an insert having a total diameter (1) = 0.120 inches (0.3 cm) and an inner shaft having a diameter (2) = 0.060 inches, 0.15 cm); (B) illustrates an insert having a total diameter (1) = 0.120 inches (0.3 cm) and an inner shaft having a diameter (2) = 0.080 inches (0.2 cm).

На фиг.13 показан вид сбоку спирального вкладыша, имеющего общий диаметр (1)=0,120 дюйма (0,3 см), и внутренний стержень, имеющий диаметр 0,060 дюйма (0,15 см). 13 is a side view of a spiral liner having a total diameter (1) = 0.120 inches (0.3 cm) and an inner shaft having a diameter of 0.060 inches (0.15 cm).

На фиг.14 показана одна ячейка прокладки, сконструированная для обеспечения возможности помещения в верхнюю камеру колонки реакционного сосуда. Каждый конический элемент или ячейка имеет уплотнительное кольцо 1, расположенное вокруг ячейки ниже корпуса прокладки. On Fig shows one cell gasket, designed to allow placement in the upper chamber of the column of the reaction vessel. Each conical element or cell has an o-ring 1 located around the cell below the gasket body.

На фиг.15 показана прокладка, включающая шесть конических элементов или ячеек, имеющих заостренные верхушки, предназначенные для помещения в верхние камеры кассеты, имеющей шесть колонок реакционных сосудов. Каждый элемент имеет уплотнитедьное кольцо 1, окружающее элемент ниже корпуса прокладки. Кроме того, каждый элемент имеет верхушку 2, приспособленную для прокалывания уплотнительной прокладки из фольги, покрывающей колонки реакционных сосудов в кассете. On Fig shows a gasket comprising six conical elements or cells having pointed tops, designed to be placed in the upper chambers of a cartridge having six columns of reaction vessels. Each element has a sealing ring 1 surrounding the element below the gasket body. In addition, each element has an apex 2 adapted to pierce a foil gasket covering the columns of the reaction vessels in the cartridge.

Oписание изобретения
В соответствии с настоящим изобретением, сосуды для проведения реакций агглютинации и отделения агглютинатов будут описаны с точки зрения различных вариантов исполнения. Определенные варианты исполнения изобретения можно ясно понять из описания сосудов для проведения реакций агглютинации и отделения агглютинатов, которые изготавливаются и продаются компанией "Ortho Diagnostic Systems Inc.", Raritan, New Jersey, под торговой маркой BIOVUE^TM.Description of the invention
In accordance with the present invention, vessels for carrying out agglutination reactions and separating agglutinates will be described in terms of various embodiments. Certain embodiments of the invention can be clearly understood from the description of the vessels for agglutination reactions and separation of agglutinates, which are manufactured and sold by Ortho Diagnostic Systems Inc., Raritan, New Jersey, under the trademark BIOVUE ^TM .

Сосуды настоящего изобретения могут быть изготовлены из любого подходящего материала, который не будет мешать реакции агглютинации или отделению агглютинатов и зрительной оценке результатов, такого как стекло или различные пластики. В предпочтительном варианте исполнения сосуды изготовлены из полипропилена. The vessels of the present invention can be made of any suitable material that will not interfere with the agglutination reaction or the separation of agglutinates and visual assessment of the results, such as glass or various plastics. In a preferred embodiment, the vessels are made of polypropylene.

Верхняя камера сосуда может быть любой формы и размера, пригодных для удерживания реагентов и образца в то время, пока проводится инкубация. Обычно, верхняя камера имеет цилиндрическую форму в своей самой верхней части. Барьер между верхней и нижней камерами обычно определяет нижнюю границу верхней камеры и верхнюю границу нижней камеры. В предпочтительном варианте исполнения барьер, который образует нижнюю часть верхней камеры, имеет форму конуса с верхушкой, простирающейся по направлению или внутрь нижней камеры, как показано на любой из фиг.1, 5, 6, 7. Часть барьера сконструирована таким образом, чтобы удерживать реагенты и образец в верхней камере во время инкубации в условиях нормальной силы тяжести и атмосферного давления, в то же время обеспечивая возможность перетекания жидкости из первой камеры во вторую камеру, когда прилагается сила, такая как повышенное давление или центробежная сила. Это может достигаться различными средствами, такими как маленькое отверстие, мембрана, заглушка, сужение, вкладыш, имеющий любую из нескольких конфигураций, или экран и любая их комбинация. В предпочтительном варианте исполнения барьер включает отверстие, имеющее диаметр, достаточно маленький, чтобы предотвратить проход жидкости из первой камеры во вторую камеру в условиях нормальной силы тяжести и атмосферного давления, в то же время обеспечивая возможность потока жидкости при повышенном давлении. Отверстие 1 расположено на верхушке конической части верхней камеры либо на вкладыше 2, как показано на фиг 1, 5 или 7, либо оно образовано как составная часть в верхней камере, как показано на фиг.6. The upper chamber of the vessel can be of any shape and size, suitable for holding the reagents and sample while incubation is being carried out. Typically, the upper chamber is cylindrical in its uppermost part. The barrier between the upper and lower chambers usually defines the lower boundary of the upper chamber and the upper boundary of the lower chamber. In a preferred embodiment, the barrier that forms the lower part of the upper chamber has a cone shape with an apex extending in the direction or inward of the lower chamber, as shown in any of Figures 1, 5, 6, 7. A part of the barrier is designed to hold reagents and a sample in the upper chamber during incubation under conditions of normal gravity and atmospheric pressure, while allowing fluid to flow from the first chamber to the second chamber when a force is applied, such as increased pressure or centrifugal force. This can be achieved by various means, such as a small hole, a membrane, a plug, a narrowing, an insert having any of several configurations, or a screen and any combination thereof. In a preferred embodiment, the barrier includes an opening having a diameter small enough to prevent the passage of fluid from the first chamber to the second chamber under normal gravity and atmospheric pressure, while allowing fluid to flow at elevated pressure. The hole 1 is located on the top of the conical part of the upper chamber or on the insert 2, as shown in FIGS. 1, 5 or 7, or it is formed as an integral part in the upper chamber, as shown in FIG. 6.

Отверстие может иметь любой диаметр, который достаточно мал, так что поверхностное натяжение жидкости в верхней камере предотвратит поток из верхней камеры в нижнюю камеру в условиях нормальной силы тяжести и атмосферного давления, в то же время обеспечивая возможность преодоления поверхностного натяжения и, следовательно, способствуя проходу содержимого из верхней камеры в нижнюю камеру под действием повышенного давления или силы тяжести. Диаметр отверстия может изменяться в соответствии с величиной используемой силы, т.е. диаметр меньше, когда прилагаемая сила больше, и диаметр больше, когда прилагаемая сила меньше. Диаметр может также изменяться для соответствия частицам различного размера в реагентах. В предпочтительном варианте исполнения диаметр отверстия находится в диапазоне от 0,010 до 0,050 дюйма (0,025-0,13 см). В особенно предпочтительном варианте исполнения диаметр отверстия составляет 0,020 дюйма (0,05 см). The hole may have any diameter that is small enough so that the surface tension of the liquid in the upper chamber will prevent flow from the upper chamber to the lower chamber under normal gravity and atmospheric pressure, while at the same time providing the ability to overcome surface tension and, therefore, facilitating passage contents from the upper chamber to the lower chamber under the action of increased pressure or gravity. The diameter of the hole may vary in accordance with the magnitude of the used force, i.e. the diameter is smaller when the applied force is larger, and the diameter is larger when the applied force is smaller. The diameter can also be varied to fit particles of different sizes in the reagents. In a preferred embodiment, the diameter of the hole is in the range from 0.010 to 0.050 inches (0.025-0.13 cm). In a particularly preferred embodiment, the hole diameter is 0.020 inches (0.05 cm).

В другом варианте исполнения барьерное приспособление, разделяющее верхнюю и нижнюю камеры, включает спиральный вкладыш; такая спираль может иметь конфигурацию винтовой резьбы. Спираль является предпочтительно круглой или цилиндрической в диаметре, хотя овальная конфигурация также рассматривается. Как и отверстие, описанное выше, проход, обеспечиваемый стержнем, витками спирали и стенками камеры, имеет диаметр, достаточно маленький, чтобы предотвратить проход жидкости из верхней камеры в нижнюю камеру в условиях нормальной силы тяжести или атмосферного давления, в то же время обеспечивая возможность потока жидкости при воздействии увеличенной силы или давления. Еще одной функцией вкладыша является уменьшение возможности забрызгивания растворителя или раствора из нижней камеры в верхнюю камеру, и, таким образом, загрязнения верхней камеры. Такое забрызгивание может, например, происходить во время транспортировки или манипуляций. Спираль расположена в верхней камере на основании верхней камеры 3, как показано на фиг.11, или может быть спаяна в качестве составной части в таком положении с реакционным сосудом. In another embodiment, the barrier device separating the upper and lower chambers includes a spiral insert; such a spiral may have a screw thread configuration. The spiral is preferably circular or cylindrical in diameter, although an oval configuration is also contemplated. Like the hole described above, the passage provided by the shaft, the coils of the spiral and the walls of the chamber has a diameter small enough to prevent the passage of fluid from the upper chamber to the lower chamber under normal gravity or atmospheric pressure, while allowing flow liquids when exposed to increased force or pressure. Another function of the liner is to reduce the possibility of splashing the solvent or solution from the lower chamber into the upper chamber, and thus, contamination of the upper chamber. Such splashing may, for example, occur during transport or handling. The spiral is located in the upper chamber on the base of the upper chamber 3, as shown in Fig. 11, or can be soldered as an integral part in this position with the reaction vessel.

В случае, когда спиральный вкладыш отдельно вставляется в верхнюю камеру, вкладыш может отливаться из любого подходящего материла, который не будет мешать реакции агглютинации или отделению агглютинатов, или визуальной оценке результатов, такого, например, как стекло или пластик. Материал является предпочтительно пластиком, таким как, например, полипропилен, полиамиды, такие как нейлон, ацетальные смолы, такие как Delrin^TM или Delrin Р^TM, перекрестно связанные полистирол/дивинилбензол, такие как Rexolite^TM, поликарбонаты или полиэтилены. В предпочтительном варианте исполнения материалом является полипропилен.In the case where the spiral insert is separately inserted into the upper chamber, the insert can be cast from any suitable material that will not interfere with the agglutination reaction or the separation of agglutinates, or the visual evaluation of the results, such as for example glass or plastic. The material is preferably plastic, such as, for example, polypropylene, polyamides, such as nylon, acetal resins, such as Delrin ^™ or Delrin P ^™ , cross-linked polystyrene / divinylbenzene, such as Rexolite ^™ , polycarbonates or polyethylenes. In a preferred embodiment, the material is polypropylene.

Спираль может быть любой конфигурации, так, чтобы поверхностное натяжение жидкости в верхней камере предотвратило поток из верхней камеры в нижнюю камеру в условиях нормальной силы тяжести и атмосферного давления, в то же время обеспечивая возможность преодоления поверхностного натяжения и, следовательно, способствуя проходу содержимого из верхней камеры в нижнюю камеру под действием повышенного давления или силы тяжести. Например, шаг витков спирали может быть под любым углом, который обеспечит возможность прохода жидкости (например, содержащей клетки крови) в условиях повышенного давления из верхней в нижнюю камеру, в то же время препятствуя загрязнению верхней камеры жидкостью или матрицей из нижней камеры. Шаг может изменяться в соответствии с величиной используемой силы, т.е., меньшая площадь, обеспечиваемая стержнем спирали, витками и стенкой камеры, когда прикладывается большая сила, и большая площадь, когда прикладывается меньшая сила. Конфигурация спирали также может изменяться для соответствия частицам различного размера в реагентах. Кроме того, вкладыш усиливает предотвращение забрызгивания содержимого колонки (растворителя или раствора, содержащего разделительную матрицу) в верхнюю камеру. The spiral can be of any configuration, so that the surface tension of the liquid in the upper chamber prevents flow from the upper chamber to the lower chamber under normal gravity and atmospheric pressure, while at the same time providing the ability to overcome surface tension and, therefore, facilitating the passage of contents from the upper chamber into the lower chamber under the influence of increased pressure or gravity. For example, the pitch of the turns of the spiral can be at any angle that will allow the passage of fluid (for example, containing blood cells) under increased pressure from the upper to the lower chamber, while at the same time preventing the upper chamber from becoming contaminated with liquid or matrix from the lower chamber. The pitch may vary in accordance with the magnitude of the force used, i.e., the smaller area provided by the helix rod, the turns and the chamber wall when a large force is applied, and the large area when a smaller force is applied. The configuration of the spiral can also be changed to fit particles of different sizes in the reagents. In addition, the liner enhances the prevention of splashing of the contents of the column (solvent or solution containing the separation matrix) into the upper chamber.

В исполнении спирального вкладыша изобретения количество витков спирали на дюйм и глубина витков спирали будут ограничиваться только эффективностью такой полученной в результате спирали в предотвращении загрязнения верхней камеры жидкостью из нижней камеры (на нижней границе диапазона), и способностью образца, например эритроцитов, проходить вниз по спирали под действием повышенного давления (на верхней границе диапазона). По причине возможного отказа и для облегчения продвижения эритроцитов и других агглютинатов, которые будут проходить через барьерное приспособление, предпочтительно, чтобы витки спирали, центральный стержень и стенки колонки, обеспечивающие проход, были относительно гладкими по структуре и полированными. Стенки резьбовой части спирального вкладыша, которые примыкают к стенкам колонки, могут быть острыми или плоскими. In the execution of the spiral insert of the invention, the number of turns of the spiral per inch and the depth of the turns of the spiral will be limited only by the effectiveness of the resulting spiral in preventing the upper chamber from becoming contaminated with liquid from the lower chamber (at the lower end of the range) and the ability of the sample, for example, red blood cells, to pass down the spiral under the influence of high pressure (at the upper limit of the range). Due to possible failure and to facilitate the movement of red blood cells and other agglutinates that will pass through the barrier device, it is preferable that the coils of the spiral, the central core and the walls of the column providing the passage are relatively smooth in structure and polished. The walls of the threaded portion of the spiral liner that are adjacent to the walls of the column may be sharp or flat.

В предпочтительном варианте исполнения и для использования в современной конфигурации кассеты BIOVUE^TM, которая включает шесть реакционных сосудов, спираль будет иметь приблизительно от 6 до приблизительно 30 витков спирали на дюйм (на 2,54 см), более предпочтительно, приблизительно от 12 до приблизительно 20 витков спирали на дюйм, а шаг витков спирали, измеренный в дюймах от верхушки одного витка спирали до верхушки следующего витка спирали, в диапазоне приблизительно от 0,033 до приблизительно 0,166 (0,08-0,42 см), более предпочтительно от 0,050 до приблизительно 0,083 дюйма (0,13-0,21 см).In a preferred embodiment and for use in the current configuration of the BIOVUE ^™ cartridge, which includes six reaction vessels, the spiral will have from about 6 to about 30 turns of the spiral per inch (2.54 cm), more preferably from about 12 to about 20 turns of the spiral per inch, and the pitch of the turns of the spiral, measured in inches from the top of one turn of the spiral to the top of the next turn of the spiral, in the range from about 0.033 to about 0.166 (0.08-0.42 cm), more preferably from 0.050 to about 0.083 inches (0.13-0.21 cm) in total.

Общий диаметр спирального вкладыша находится в диапазоне приблизительно от 0,110 до приблизительно 0,140 дюйма (0,28-0,38 см), более предпочтительно, приблизительно от 0,120 до приблизительно 0,130 дюйма (0,3-0,33 см). The total diameter of the spiral liner is in the range of about 0.110 to about 0.140 inches (0.28-0.38 cm), more preferably about 0.120 to about 0.130 inches (0.3-0.33 cm).

Диаметр стержня спирального вкладыша находится в диапазоне от приблизительно 0,030 дюйма до приблизительно 0,090 дюйма (0,08-0,23 см), более предпочтительно, приблизительно от 0,060 до приблизительно 0,080 дюйма (0,15-0,2 см). Ссылка дана на фиг.11, 12 и 13, описывающие примеры относительных конфигураций компонентов вкладыша. При ссылке на фиг.13 приблизительная конфигурация (в дюймах) может быть следующей (см. табл.А). The diameter of the core of the spiral insert is in the range from about 0.030 inches to about 0.090 inches (0.08-0.23 cm), more preferably from about 0.060 to about 0.080 inches (0.15-0.2 cm). Reference is made to FIGS. 11, 12 and 13, describing examples of relative configurations of liner components. With reference to FIG. 13, an approximate configuration (in inches) may be as follows (see Table A).

В качестве альтернативы круглому профилю спирального вкладыша, помещенного в модифицированную нижнюю часть верхней камеры, как показано на фиг. 11, здесь также предоставляется спираль овальной формы, которая может иметь аналогичную конфигурацию шага витков спирали. Как ранее описано для спирального вкладыша круглого профиля, овальное барьерное приспособление может принимать либо форму вкладыша, либо спиральной конструкции, отлитой единым блоком с камерами. As an alternative to the circular profile of the spiral insert placed in the modified lower part of the upper chamber, as shown in FIG. 11, an oval-shaped spiral is also provided here, which may have a similar pitch configuration of the spiral turns. As previously described for a circular round spiral insert, the oval barrier device can take either the shape of the insert or a spiral structure cast in a single unit with chambers.

В качестве еще одной альтернативы, суженный проход между верхней и нижней камерами может быть обеспечен ультразвуковой сваркой колонки после ее загрузки реагентами. Альтернативно, барьер может включать диск или заглушку из пористого материала, расположенную на верхушке нижней камеры или колонки. Заглушка имеет форму цилиндра с размером, подходящим для помещения между верхней и нижней камерами, и приспособлена для задержки забрызгивания содержимого нижней камеры (например, реактива и разделительной матрицы) в верхнюю камеру. Пористая заглушка, кроме того, приспособлена для препятствования преждевременному прохождению образца (например, перед центрифугированием), но через которую образец пройдет под давлением, превышающим атмосферное (например, в условиях центрифугирования). Пористая заглушка изготовлена из любого материала, который не помешает реакции агглютинации или разделению, или любой зрительной оценке результатов, или не будет неспецифически связываться с любым их компонентом, например из стекла, а более точно просветленного стекла, или пластика, например полипропилена. As another alternative, the narrowed passage between the upper and lower chambers can be provided by ultrasonic welding of the column after it is loaded with reagents. Alternatively, the barrier may include a disk or plug of porous material located at the top of the lower chamber or column. The plug is in the form of a cylinder with a size suitable for placement between the upper and lower chambers, and is adapted to delay splashing of the contents of the lower chamber (e.g., reagent and separation matrix) into the upper chamber. The porous plug is also adapted to prevent premature passage of the sample (for example, before centrifugation), but through which the sample will pass under atmospheric pressure (for example, under centrifugation). The porous plug is made of any material that does not interfere with the agglutination reaction or separation, or any visual assessment of the results, or will not non-specifically bind to any of their components, for example glass, or more precisely clear glass, or plastic, for example polypropylene.

Другие подходящие барьеры могут принимать форму фланцев, фиксированных на спирали, ступенчато расположенных вокруг внутренней стенки камеры, или других аналогичных конструкций с извилистым каналом, которые будут функционировать, как описано выше, в плане предотвращения загрязнения содержимого верхней камеры. Барьер может также принимать форму кольцевого клапана или диафрагмы, помещенной в колонку. Такая диафрагма может, например, иметь центральное отверстие или перфорацию, и также радиальные лепестки от стенки колонки до центральной перфорации. После приложения силы диафрагма откроется, позволяя содержимому пробы пройти из верхней камеры в нижнюю камеру. Диафрагма будет изготовлена из любого подходящего материала, который не будет мешать реакции агглютинации или отделению, или любой зрительной оценке
результатов. Диафрагма будет изготовлена из любого подходящего гибкого, податливого материала, такого как, например, силиконовая резина.Other suitable barriers may take the form of flanges fixed on a spiral, stepwise arranged around the inner wall of the chamber, or other similar structures with a winding channel, which will function as described above to prevent contamination of the contents of the upper chamber. The barrier may also take the form of an annular valve or diaphragm placed in a column. Such a diaphragm may, for example, have a central hole or perforation, and also radial lobes from the column wall to the central perforation. After the application of force, the diaphragm opens, allowing the contents of the sample to pass from the upper chamber to the lower chamber. The diaphragm will be made of any suitable material that will not interfere with the agglutination reaction or separation, or any visual assessment
results. The diaphragm will be made of any suitable flexible, pliable material, such as, for example, silicone rubber.

Когда сосуд настоящего изобретения используется для проведения реакции агглютинации и отделения агглютинатов, реагенты и образец добавляются в верхнюю камеру для инкубации. Барьер задерживает образец и реагенты в верхней камере, пока происходит инкубация. В предпочтительном варианте исполнения, в котором барьер имеет отверстие, или в котором он представлен в форме спирального вкладыша, диаметр отверстия или конфигурация спирали, соответственно, достаточно мала, с тем, чтобы поверхностное натяжение жидкости и пробы поперек отверстия или спирали, задерживало содержимое в верхней камере в условиях действия нормальной силы тяжести и атмосферного давления. После достаточного времени инкубации на барьер воздействуют силой, прилагаемой любым из различных средств, таких как центрифугирование, давление или отсасывание, в направлении в основном вдоль оси от верхней камеры к нижней камере. Сила должна быть достаточной для преодоления барьера и обеспечения возможности прохода содержимого верхней камеры в нижнюю камеру. В предпочтительном варианте исполнения, при котором барьер имеет отверстие, или в котором барьерное приспособление включает спиральный вкладыш, поверхностное натяжение преодолевается силой, и содержимое стекает из верхней камеры в нижнюю камеру на разделительную матрицу. When the vessel of the present invention is used to conduct an agglutination reaction and separation of agglutinates, the reagents and sample are added to the upper incubation chamber. The barrier traps the sample and reagents in the upper chamber while incubation occurs. In a preferred embodiment, in which the barrier has an opening, or in which it is presented in the form of a spiral insert, the diameter of the hole or the configuration of the spiral, respectively, is sufficiently small so that the surface tension of the liquid and the sample across the hole or spiral retains the contents in the upper chamber under normal gravity and atmospheric pressure. After sufficient incubation time, the barrier is exposed to a force applied by any of various means, such as centrifugation, pressure or suction, in a direction generally along the axis from the upper chamber to the lower chamber. The force must be sufficient to overcome the barrier and allow passage of the contents of the upper chamber to the lower chamber. In a preferred embodiment, in which the barrier has an opening, or in which the barrier device includes a spiral insert, the surface tension is overcome by force, and the contents flow from the upper chamber to the lower chamber onto the separation matrix.

Барьер также важен в обеспечении средства для уменьшения загрязнения верхней камеры растворителем или раствором из нижней камеры, которое может в противном случае произойти путем забрызгивания или других нарушений во время транспортировки и манипуляций. The barrier is also important in providing a means to reduce the contamination of the upper chamber with solvent or solution from the lower chamber, which might otherwise occur by splashing or other irregularities during transport and handling.

Еще одним вариантом исполнения изобретения является прокладка, которая может быть вставлена в верхушку реакционного сосуда непосредственно перед добавлением образца. Такая прокладка включает корпус и один или предпочтительно множество элементов или ячеек, в зависимости от корпуса, причем такие ячейки имеют коническую или воронкообразную форму. Суженная верхушка ячейки, имеющая отверстие, при вставлении в кассету ориентирована по направлению внутрь сосуда, как показано на фиг.14 и 15. Прокладка может использоваться в сосудах, имеющих и не имеющих барьерные приспособления, такие как изгибы или вкладыши. В предпочтительном варианте исполнения, прокладка включает ячейку, имеющую отверстие с диаметром (1), достаточно маленьким для удержания образца, введенного в сосуд, до тех пор, пока сосуд не будет подвержен воздействию силы (например, путем центрифугирования), при условии, что время инкубации не увеличивается любым теплоизолирующим влиянием воздушного зазора между верхушкой и разделительной матрицей в колонке; или (2) достаточно большим, чтобы дать возможность введенному образцу свободно пройти в камеру реакционного сосуда, при условии, что тестирующая система может выдерживать ранний контакт с брызгами реагента. Ячейки прокладки предпочтительно имеют герметизирующее приспособление, расположенное на расстоянии от суженной верхушки, например на ее наружных верхних частях, непосредственно ниже корпуса прокладки. В этом отношении сделаны ссылки на фиг.14 и 15. Герметизирующим приспособлением является возвышающееся кольцо, предпочтительно являющееся составной частью прокладки. Ячейка прокладки соответствует по размеру верхней камере сосуда, где происходит реакция, так, чтобы она не стала легко смещаемой во время обычных манипуляций. Возвышающееся кольцо или уплотнительное кольцо упрется в край вокруг сосуда на верхней поверхности кассеты, герметизируя, таким образом, контакт между прокладкой и кассетой. Возвышающееся кольцо или уплотнительное кольцо препятствует капиллярному действию любого содержимого колонки, забрызгиваемого из одной колонки в другую. Another embodiment of the invention is a gasket that can be inserted into the top of the reaction vessel immediately before adding the sample. Such a gasket includes a housing and one or preferably a plurality of elements or cells, depending on the housing, such cells having a conical or funnel shape. The narrowed cell top having a hole, when inserted into the cassette, is oriented inwardly to the vessel, as shown in FIGS. 14 and 15. The gasket can be used in vessels with and without barrier devices, such as bends or inserts. In a preferred embodiment, the gasket includes a cell having an opening with a diameter (1) small enough to hold the sample introduced into the vessel until the vessel is subjected to force (for example, by centrifugation), provided that the time incubation is not increased by any heat-insulating effect of the air gap between the apex and the separation matrix in the column; or (2) large enough to allow the introduced sample to pass freely into the chamber of the reaction vessel, provided that the test system can withstand early contact with the spray of the reagent. The gasket cells preferably have a sealing device located at a distance from the narrowed tip, for example on its outer upper parts, directly below the gasket body. In this regard, reference is made to FIGS. 14 and 15. The sealing device is a towering ring, preferably an integral part of the gasket. The gasket cell corresponds to the size of the upper chamber of the vessel where the reaction takes place, so that it does not become easily displaced during normal manipulations. The rising ring or o-ring will abut against the edge around the vessel on the upper surface of the cartridge, thus sealing the contact between the gasket and the cartridge. A towering ring or o-ring prevents the capillary action of any column contents sprayed from one column to another.

Как обсуждалось выше, при отсутствии вкладыша, которым снабжены сосуды, растворитель или раствор, содержащий разделительную матрицу, может попасть в верхнюю камеру во время транспортировки и манипуляций. В таком случае, и когда разделительная матрица может также содержать антитела или другие реагенты, которые будут непосредственно влиять на результаты теста, такое забрызгивание может привести к перекрестному загрязнению колонки реагентом из других колонок. Это может произойти, когда пользователь вставляет кончик пипетки в верхнюю камеру реакционного сосуда, загрязняя кончик разбрызганным реагентом, который может быть затем на пипетке перенесен в другой сосуд. Последнее может привести к ложным результатам количественного метода определения агглютинации. As discussed above, in the absence of the liner provided with the vessels, the solvent or solution containing the separation matrix may enter the upper chamber during transport and handling. In such a case, and when the separation matrix may also contain antibodies or other reagents that will directly affect the test results, such splashing can lead to cross-contamination of the column with reagent from other columns. This can happen when the user inserts the tip of the pipette into the upper chamber of the reaction vessel, contaminating the tip with the sprayed reagent, which can then be pipetted to another vessel. The latter can lead to false results of a quantitative method for determining agglutination.

Целью применения вкладыша является предотвращение перекрестного загрязнения реагентом из одного сосуда в следующий во время переноса пипеткой; этот реагент может забрызгиваться в верхнюю камеру во время транспортировки и манипуляций. The purpose of the insert application is to prevent cross-contamination with the reagent from one vessel to the next during pipetting; this reagent can be sprayed into the upper chamber during transportation and handling.

Прокладка может принимать форму одиночного конического элемента или ячейки для индивидуального помещения поверх каждого сосуда, где происходит реакция. Однако в предпочтительном варианте исполнения и со ссылкой на фиг.15 прокладка принимает форму одиночного блока, имеющего шесть таких конических ячеек, расположенных бок-о-бок, как составной части корпуса прокладки. Такая конфигурация позволяет помещать одиночный блок прокладки, содержащий шесть отдельных ячеек, поверх кассеты BIOVUE^TM из шести реакционных сосудов.The gasket can take the form of a single conical element or cell for individual placement on top of each vessel where the reaction occurs. However, in a preferred embodiment and with reference to FIG. 15, the gasket takes the form of a single unit having six such conical cells arranged side-by-side as an integral part of the gasket body. This configuration allows you to place a single gasket block, containing six separate cells, on top of the BIOVUE ^™ cassette of six reaction vessels.

Со ссылкой на фиг.14 и 15 каждая коническая ячейка прокладки имеет суженную заостренную верхушку с проходящим через нее отверстием. Поскольку сосуды BIOVUE^TM предоставляются в виде кассеты, включающей шесть колонок, покрытых сверху уплотнительной прокладкой в виде полоски фольги, при ручном надавливании заостренные верхушки прокладки проколят уплотнительную прокладку из фольги над всеми шестью колонками. Проба (пробы) образца затем может быть перенесена пипеткой прямо в ячейки. Чистые ячейки прокладки таким образом свободны от любого загрязняющего реагента или разделительной матрицы, которые в противном случае могут вступить в контакт с образцом и могут быть перенесены в другую колонку.With reference to FIGS. 14 and 15, each conical cell of the gasket has a narrowed pointed apex with an opening passing through it. Since BIOVUE ^™ vessels are provided in the form of a cassette comprising six columns coated on top with a gasket in the form of a foil strip, with manual pressure, the pointed tips of the gasket will pierce the foil gasket over all six columns. The sample (s) of the sample can then be pipetted directly into the cells. Clean pad cells are thus free of any contaminant or separation matrix that could otherwise come into contact with the sample and could be transferred to another column.

Прокладка удобно вставляется в колонки конечным пользователем вручную или с помощью снабженного зубцами инструмента. Для вставления шестиячеечной прокладки в кассету BIOVUE^TM фольга кассеты протыкается наконечниками прокладки, и прокладка полностью вставляется с помощью качательного движения. Использование снабженного зубцами инструмента помогает выравниванию прокладки и кассеты во время вставления. Поскольку корпус прокладки имеет для удобства такую же площадь и форму, как и верхняя поверхность кассеты, прокладка может удобно оставаться на месте во время обработки кассеты. Использование прокладок таким образом не мешает проведению количественного определения и не искажает его результаты (например, центрифугирование, свободное прохождение неагглютинированных эритроцитов через разделительную матрицу и вход агглютинированных эритроцитов в колонку). Однако колонки без уплотнительных колец не предотвращали перекрестное загрязнение колонок реагентом во время использования. Сравнительные функциональные тесты прокладок с уплотнительными кольцами и без них представлены в примерах 10 и 11. Представленные там результаты демонстрируют, что уплотнительные кольца предотвращают перекрестное загрязнение колонок реагентом, которое может происходить вследствие "капиллярного затекания" реагента между фольгой кассеты и прокладкой, что в результате ведет к потоку реагента по верхней части кассеты.The gasket is conveniently inserted into the columns by the end user manually or using a serrated tool. To insert a six-cell gasket into the BIOVUE ^TM cassette, the cassette foil is pierced by the gasket tips and the gasket is fully inserted using a rocking motion. Using a serrated tool helps align the gasket and cassette during insertion. Since the casing of the gasket has for convenience the same area and shape as the upper surface of the cassette, the gasket can conveniently remain in place during processing of the cassette. The use of pads in this way does not interfere with the quantification and does not distort its results (for example, centrifugation, free passage of non-agglutinated red blood cells through the separation matrix and the entry of agglutinated red blood cells into the column). However, columns without o-rings did not prevent cross-contamination of the columns with reagent during use. Comparative functional tests of gaskets with and without O-rings are presented in Examples 10 and 11. The results presented there demonstrate that O-rings prevent cross-contamination of the columns with reagent, which may occur due to “capillary leakage” of the reagent between the cassette foil and the gasket, which results in to the reagent stream along the top of the cartridge.

Прокладка и ее ячейки могут быть изготовлены из любого подходящего материала, который не помешает реакции агглютинации или отделению агглютинатов, такого как, например, стекло или пластик. Материал должен быть подходящим для протыкания уплотнительной прокладки из фольги на кассете. Для обеспечения возможности эффективной подачи пробы в верхнюю камеру из ячейки прокладки, предпочтительно, чтобы стенка ячейки прокладки была относительно гладкой по структуре и полированной. Материалом является предпочтительно пластик, такой как, например, полиэфирный пластик, ацеталь, акриловая смола, акрилоннитрилбутадиенстирол (АБС), нейлон, поликарбонат, полиамид или полипропилен. В предпочтительном варианте исполнения материал является акриловой смолой. The pad and its cells may be made of any suitable material that does not interfere with the agglutination reaction or separation of the agglutinates, such as, for example, glass or plastic. The material must be suitable for piercing the foil seal on the cassette. In order to enable efficient feeding of the sample into the upper chamber from the gasket cell, it is preferable that the wall of the gasket cell is relatively smooth in structure and polished. The material is preferably plastic, such as, for example, polyester plastic, acetal, acrylic resin, acrylonitrile butadiene styrene (ABS), nylon, polycarbonate, polyamide or polypropylene. In a preferred embodiment, the material is an acrylic resin.

В системе BIOVUE^TM инкубация 10 мкл реагентных эритроцитов в 40 мкл сыворотки пациента совместно с 40 мкл раствора с низкой ионной силой происходит в верхней камере в течение 10 минут, чтобы позволить предполагаемым IgG антителам пациента связаться с поверхностным антигеном (антигенами) эритроцитов. Эти компоненты количественного определения добавляются отдельно, и важно, чтобы они оставались в верхней камере с тем, чтобы они не могли смешаться, чтобы обеспечить постоянное соотношение между раствором с низкой ионной силой, эритроцитами и сывороткой от определения к определению. Барьер способствует достижению этого в условиях нормальной силы тяжести и давления. Он также способствует снижению вероятности попадания под влиянием силы тяжести любого из компонентов количественного определения в нижнюю камеру во время добавления образца. Барьер также обеспечивает возможность для компонентов количественного определения оставаться в верхней камере в течение периода инкубации.In the BIOVUE ^™ system, incubation of 10 μl of reagent erythrocytes in 40 μl of patient serum together with 40 μl of low ionic strength solution takes place in the upper chamber for 10 minutes to allow the patient’s alleged IgG antibodies to bind to the surface erythrocyte antigen (s). These quantification components are added separately, and it is important that they remain in the upper chamber so that they cannot mix in order to ensure a constant ratio between the solution with low ionic strength, red blood cells and serum from determination to determination. The barrier contributes to this under normal gravity and pressure. It also helps to reduce the likelihood of gravity of any of the components of the quantification in the lower chamber during the addition of the sample. The barrier also provides the ability for the quantification components to remain in the upper chamber during the incubation period.

Барьер также важен для предотвращения преждевременного связывания анти-IgG антител человека с предположительными антиэритроцитарными антителами в сыворотке пациента перед тем, как они связались с эритроцитами, снижая вероятность агглютинации, происходящей в конечном счете в нижней камере. После инкубации прилагается центробежная сила для передвижения содержимого верхней камеры через барьер в нижнюю камеру, которая содержит анти-IgG антитела человека, которые связываются с IgG пациента на поверхности реагентных эритроцитов, вызывая образование агглютинатов, которые не проходят через матрицу на дно нижней камеры. The barrier is also important in preventing premature binding of human anti-IgG antibodies to suspected anti-erythrocyte antibodies in the patient's serum before they bind to red blood cells, reducing the likelihood of agglutination eventually occurring in the lower chamber. After incubation, centrifugal force is applied to move the contents of the upper chamber through the barrier into the lower chamber, which contains human anti-IgG antibodies that bind to the patient's IgG on the surface of reagent red blood cells, causing the formation of agglutinates that do not pass through the matrix to the bottom of the lower chamber.

Следующие примеры приводятся только в целях иллюстрации, а не в форме ограничения сферы притязаний изобретения. The following examples are provided for illustrative purposes only and not in the form of limiting the scope of the invention.

Пример 1
Колонки BIOVUE^TM с вкладышами сравнивают с колонками без вкладышей для определения эффективности каждой конструкции в поддержании воздушного пространства, которое отделяет реагенты от разделительной матрицы во время периода инкубации. Используют вкладыши, имеющие отверстие размером 0,040 дюйма (0,1 см). 40 мкл Буферного раствора добавляют в каждую из 840 испытуемых колонок. Для подачи 40 мкл используют ручную пипетку, которую держат под углом приблизительно 45^o к вертикальной оси колонки. Затем проводят наблюдение за колонками для определения того, сохраняется ли воздушное пространство ниже реакционной камеры. Количество "прорывов" представлено в таблице 1.Example 1
BIOVUE ^™ columns with liners are compared with columns without liners to determine the effectiveness of each structure in maintaining the airspace that separates the reagents from the separation matrix during the incubation period. Use liners having a hole size of 0.040 inches (0.1 cm). 40 μl of Buffer solution is added to each of the 840 test columns. To supply 40 μl using a manual pipette, which is kept at an angle of approximately 45 ^o to the vertical axis of the column. The columns are then monitored to determine if airspace remains below the reaction chamber. The number of “breakthroughs” is presented in table 1.

Пример 2
Реагенты также добавляют в колонки (с вкладышами и без вкладышей) и инкубируют в течение 10 минут при 37^oС. 40 мкл Буфера, 40 мкл сыворотки и 10 мкл суспензии эритроцитов добавляют в каждую из 480 испытуемых колонок. Для подачи реагентов используют пипетку, удерживаемую под углом приблизительно 45^o. После периода инкубации колонки осматривают для определения того, сохраняется ли воздушное пространство ниже реакционной камеры. Частота "прорывов" представлена в таблице 2.Example 2
Reagents are also added to the columns (with and without inserts) and incubated for 10 minutes at 37 ^° C. 40 μl of Buffer, 40 μl of serum and 10 μl of a suspension of red blood cells are added to each of the 480 test columns. For the supply of reagents using a pipette held at an angle of approximately 45 ^o . After an incubation period, the columns are inspected to determine if airspace remains below the reaction chamber. The frequency of “breakouts” is presented in table 2.

Пример 3
Колонки заполняют 40 мкл буфера с помощью автоматической пипетки, удерживаемой под углом приблизительно 45^o. Обычно автоматические пипетки обеспечивают подачу с большей силой, чем модели с ручным приводом. Оценку проводят после заполнения для определения того, сохраняется ли воздушное пространство ниже реакционной камеры. Результаты в колонках с вкладышами и без вкладышей представлены в таблице 3.Example 3
Columns were filled with 40 μl of buffer using an automatic pipette held at an angle of approximately 45 ^o . Typically, automatic pipettes deliver more force than hand-operated pipettes. The evaluation is carried out after filling to determine whether airspace remains below the reaction chamber. The results in columns with inserts and without inserts are presented in table 3.

Пример 4
240 колонок заполняют 40 мкл буфера с помощью одной пипетки, удерживаемой вертикально. При вертикальном расположении пипетки жидкость проталкивается через отверстие под более высоким давлением, и, следовательно, выше вероятность нарушения воздушного пространства, отделяющего реакционную камеру от разделительной камеры. Результаты этого эксперимента представлены в таблице 4.Example 4
240 columns were filled with 40 μl of buffer using a single pipette, held vertically. With a vertical pipette, the liquid is pushed through the hole at a higher pressure, and, therefore, there is a greater likelihood of disturbance of the air space separating the reaction chamber from the separation chamber. The results of this experiment are presented in table 4.

Пример 5
Реакционные камеры 240 колонок также заполняют 40 мкл буфера с помощью автоматической пипетки, удерживаемой вертикально, что повышает вероятность нарушения воздушного пространства ниже реакционной камеры по сравнению с тем, когда автоматическую пипетку удерживают под углом. Результаты этих испытаний с использованием колонок с вкладышами и колонок без вкладышей представлены в таблице 5.Example 5
The reaction chambers of the 240 columns also fill 40 μl of the buffer with an automatic pipette held vertically, which increases the likelihood of disturbing the air space below the reaction chamber compared to when the automatic pipette is held at an angle. The results of these tests using columns with liners and columns without liners are presented in table 5.

Пример 6
В дополнение к поддержанию воздушного пространства между реакционной камерой и разделительной матрицей во время стадии инкубации испытания, изобретение также функционирует как средство предотвращения забрызгивания, которое может произойти во время транспортировки и манипуляций, при котором часть содержимого нижней разделительной камеры может забрызгиваться в верхнюю реакционную камеру. Для испытания эффективности предотвращения забрызгивания кассеты с вкладышами и без вкладышей были доставлены из Нью Джерси в Калифорнию и обратно. Перевозку проводили по воздуху и по земле, включая погрузку, разгрузку и доставку в лабораторию. Использованный способ был обычным для этой технологической линии. После обратной перевозки кассеты обследовали на присутствие жидкости, попавшей вследствие забрызгивания в реакционные камеры. Результаты представлены в таблице 6.Example 6
In addition to maintaining airspace between the reaction chamber and the separation matrix during the test incubation step, the invention also functions as a means of preventing splashing that may occur during transport and handling, in which part of the contents of the lower separation chamber can be sprayed into the upper reaction chamber. To test the effectiveness of splashing prevention, cassettes with and without liners were shipped from New Jersey to California and vice versa. Transportation was carried out by air and by land, including loading, unloading and delivery to the laboratory. The method used was usual for this production line. After the return transportation, the cartridges were examined for the presence of liquid that had got into the reaction chambers due to splashing. The results are presented in table 6.

Пример 7
Дополнительное исследование транспортировки проводят для испытания уменьшения забрызгивания с помощью вкладышей, имеющих отверстия уменьшающегося размера. Отверстия между реакционной камерой и разделительной матрицей имеют диаметр 0.025, 0.020 и 0.015 дюйма (0.06, 0.05, 0.04 см). В 600 колонок помещают каждый из этих вкладышей. В контроле вкладышей нет. Кассеты упаковывают и подвергают исследованию в виде имитационной транспортировки в помещении, при которой ящик сбрасывают 10 раз с высоты 3 фута (0.91 м). Угол падения ящика контролируют таким образом, чтобы контейнер падал на все шесть его плоских поверхностей, а также на один угол и на три края. Это стандартизованное испытание представляет наихудший случай транспортировки и манипуляций. Результаты, представленные в таблице 7, показывают обратную зависимость между размером отверстия и уменьшением забрызгивания.Example 7
An additional transportation study is conducted to test the reduction of spatter using liners having openings of decreasing size. The holes between the reaction chamber and the separation matrix have a diameter of 0.025, 0.020 and 0.015 inches (0.06, 0.05, 0.04 cm). Each of these inserts is placed in 600 columns. There are no inserts in the control. The cassettes are packaged and examined in the form of simulated transportation in a room in which the box is dropped 10 times from a height of 3 feet (0.91 m). The angle of incidence of the box is controlled so that the container falls on all six of its flat surfaces, as well as one corner and three edges. This standardized test represents the worst case of transportation and handling. The results presented in table 7 show the inverse relationship between the size of the hole and the reduction of splashing.

Пример 8
Еще одним средством, с помощью которого отверстие между реакционной камерой и разделительной камерой под ней может быть уменьшено, является "гофрирование" кассеты. Это может быть достигнуто прессованием ударным выдавливанием, при котором на шейку кассеты непосредственно ниже реакционной камеры воздействуют ударной силой. Сила и продолжительность удара определяет степень, до которой уменьшается отверстие. Форма ударного инструмента определяет форму отверстия. Возможно несколько конфигураций. Процесс "гофрирования" может осуществляться в технологической линии после того, как колонки загружаются реагентами и стеклянными бусинами.Example 8
Another means by which the opening between the reaction chamber and the separation chamber below it can be reduced is to “crimp” the cassette. This can be achieved by shock extrusion pressing, in which impact force is applied to the neck of the cartridge directly below the reaction chamber. The strength and duration of the impact determines the extent to which the hole is reduced. The shape of the percussion instrument determines the shape of the hole. Several configurations are possible. The corrugation process can be carried out in the production line after the columns are loaded with reagents and glass beads.

816 Колонок из производственной линии гофрировали, как описано выше, с целью сужения отверстия между реакционной камерой и разделительной матрицей. Изгиб дает в результате форму поперечного сечения, показанную на фиг.10, через область, показанную скобкой на фиг.9. Эти колонки наряду с 768 негофрированными контрольными колонками упаковали и перевезли в Калифорнию и обратно, как описано ранее. Уменьшение забрызгивания в реакционные камеры, вызванное условиями транспортировки, представлено в таблице 8. 816 columns from the production line were corrugated as described above to narrow the opening between the reaction chamber and the separation matrix. Bending results in the cross-sectional shape shown in FIG. 10 through the region shown by the bracket in FIG. 9. These columns along with 768 non-corrugated control columns were packed and transported to California and vice versa, as previously described. The reduction in splashing into the reaction chambers caused by the transport conditions is shown in Table 8.

Пример 9
Барьерное средство в виде спирального вкладыша может использоваться для ограничения размера отверстия между реакционной (верхней) камерой и разделительной (нижней) камерой. Спиральный вкладыш отливают из полипропилена и вставляют в шейку кассеты непосредственно ниже модифицированной верхней камеры. Спиральный вкладыш помещают в шейку кассеты во время процесса производства после того, как колонки были загружены реагентами и разделительной матрицей (например, стеклянными бусинами).Example 9
A barrier means in the form of a spiral insert can be used to limit the size of the hole between the reaction (upper) chamber and the separation (lower) chamber. The spiral insert is molded from polypropylene and inserted into the neck of the cartridge immediately below the modified upper chamber. The spiral insert is placed in the neck of the cartridge during the manufacturing process after the columns have been loaded with reagents and a separation matrix (for example, glass beads).

Пример 10
Колонки BIOVUE^TM с прокладками, имеющими уплотнительные кольца, сравнивали с колонками с прокладками без уплотнительных колец для определения того, предохраняют ли уплотнительные кольца от перекрестного загрязнения колонок реагентом.Example 10
BIOVUE ^™ columns with gaskets having o-rings were compared with columns with gaskets without o-rings to determine if the o-rings prevent cross-contamination of the columns with reagent.

Кассеты подвергали имитационной транспортировке для создания забрызгивания в верхнюю камеру и на фольгу путем постукивания или ударов кассеты о твердую рабочую поверхность. The cartridges were simulated to create splashing into the upper chamber and onto the foil by tapping or striking the cartridge against a solid work surface.

Исследовали 192 кассеты с прокладками, не имеющими уплотнительных колец, на наличие капиллярного затекания после вставления в колонки кассеты. Половина прокладок (98) вставлялась в кассеты вручную, а другая половина - с помощью снабженного двумя зубцами инструмента, обсужденного выше. We examined 192 cassettes with gaskets without sealing rings for capillary leakage after insertion into the cassette columns. Half of the gaskets (98) were manually inserted into the cassettes, and the other half using the two-pronged tool discussed above.

Исследовали 336 кассет с прокладками, имеющими уплотнительные кольца, на наличие капиллярного затекания, как указано выше. Половина прокладок (168) вставлялась в кассеты вручную, а 168 вставлялись с помощью снабженного двумя зубцами инструмента. 336 cassettes with gaskets having o-rings were examined for capillary leakage, as described above. Half of the gaskets (168) were inserted into the cassettes manually, and 168 were inserted using a tool equipped with two teeth.

Капиллярное затекание в колонки оценивают визуально путем осмотра верхней стороны кассеты. Капиллярное затекание определяют при обнаружении жидкости реагента между покровной фольгой кассеты и пространством под корпусом прокладки. Column capillary leakage is visually evaluated by examining the upper side of the cassette. Capillary leakage is determined when a reagent liquid is detected between the cover foil of the cartridge and the space under the gasket body.

В таблице 9 представлено количество и процент кассет с капиллярным затеканием по отношению к общему количеству испытанных кассет. Способ вставления прокладки не влиял на результаты при использовании прокладки, имеющей уплотнительное кольцо, но влиял на результаты при использовании прокладки без уплотнительного кольца. Как показано, количество кассет с затекшим реагентом, когда прокладки вставляются вручную (кассеты в перевернутом положении), почти вдвое превышает количество таких кассет при вставлении прокладок с использованием инструмента (кассеты в нормальном вертикальном положении). Table 9 presents the number and percentage of cassettes with capillary flow in relation to the total number of tested cassettes. The gasket insertion method did not affect the results when using a gasket having an o-ring, but did affect the results when using a gasket without an o-ring. As shown, the number of cassettes with leaked reagent, when the gaskets are inserted manually (cassettes in the inverted position), almost double the number of such cassettes when inserting the gaskets using the tool (cassettes in the normal vertical position).

Пример 11
Кассеты с прокладками, не имеющими уплотнительных колец, сравнивали в функциональном испытании с кассетами, имеющими уплотнительные кольца.Example 11
Cassettes with gaskets without o-rings were compared in a functional test with cassettes having o-rings.

Кассеты подвергают имитационной транспортировке для создания забрызгивания реагента в верхнюю камеру и на фольгу, как описано в примере 10. The cartridges are subjected to simulated transportation to create a spray of the reagent in the upper chamber and on the foil, as described in example 10.

Прокладки вставляют в колонки кассеты как вручную, так и с помощью инструмента с двумя зубцами, как описано выше. В половину кассет в каждую колонку вносят 10 мкл 4%-ной суспензии эритроцитов (в физиологическом растворе) с помощью пипетки BIOVUE^TM BioHit (Ortho Diagnostic Systems Inc., Raritan, NJ). В колонки другой половины кассет вносят пипеткой 50 мкл 0,8%-ной суспензии эритроцитов (в физиологическом растворе), имеющих поверхностный антиген, как показано ниже в таблице 10. В половине испытуемых кассет используют кассету Ortho BIOVUE^TM ABE International (Ortho Diagnostic Systems Inc., Raritan, NJ); в другой половине испытуемых кассет используют кассету BIOVUE^TM RHK (Ortho Diagnostic Systems Inc., Raritan, NJ). Кассеты АВЕ и RHK подготавливают с антителами в соответствующих колонках, как показано ниже в таблице 10.The gaskets are inserted into the cassette columns both manually and using a tool with two teeth, as described above. In half of the cassettes, 10 μl of a 4% erythrocyte suspension (in saline) was pipetted into each column using a BIOVUE ^™ BioHit pipette (Ortho Diagnostic Systems Inc., Raritan, NJ). 50 μl of a 0.8% erythrocyte suspension (in saline) having a surface antigen is pipetted into the columns of the other half of the cassettes, as shown in Table 10 below. Ortho BIOVUE ^™ ABE International (Ortho Diagnostic Systems Inc) cassette is used in half of the cassettes tested ., Raritan, NJ); in the other half of the test cassettes, a BIOVUE ^™ RHK cassette (Ortho Diagnostic Systems Inc., Raritan, NJ) was used. The ABE and RHK cassettes are prepared with antibodies in the appropriate columns, as shown in Table 10 below.

При использовании кассет ABE в качестве образца используют клетки А₁ rr. При использовании кассет RHK в качестве образца используют клетки R₁ R₁ (-). Пилотирование проводят, начиная с самой крайней слева колонки кассеты и продвигаясь вправо. Кассеты центрифугируют в центрифуге Ortho BIOVUE^TM (Ortho Diagnostic Systems Inc. , Raritan, NJ); в течение 2 минут при (794±16)xg, затем в течение 3 минут - при (1510±30)xg. Каждую колонку с отрицательной реакцией (отсутствие агглютинации эритроцитов) оценивают на полноту свободного прохождения эритроцитов через всю колонку. Ложно положительная реакция произойдет, если, например, анти-А антитело из колонки 1 кассеты ABE переносится в колонку 2, и теперь клетки вступают в реакцию в колонке 2.When using ABE cassettes, A ₁ rr cells are used as a sample. When using RHK cassettes, R ₁ R ₁ (-) cells are used as a sample. Piloting is carried out starting from the leftmost column of the cartridge and moving to the right. The cassettes are centrifuged in an Ortho BIOVUE ^™ centrifuge (Ortho Diagnostic Systems Inc., Raritan, NJ); for 2 minutes at (794 ± 16) xg, then for 3 minutes at (1510 ± 30) xg. Each column with a negative reaction (the absence of red blood cell agglutination) is evaluated for the completeness of free passage of red blood cells through the entire column. A false positive reaction will occur if, for example, an anti-A antibody from column 1 of the ABE cassette is transferred to column 2, and now the cells react in column 2.

Результаты показаны в таблице 11. В колонках с уплотнительным кольцом все ожидаемые положительные реакции были положительными. Однако все ожидаемые отрицательные реакции не были отрицательными. Был один ложно положительный результат. Причиной этого, хотя она не установлена, было не капиллярное затекание реагента. The results are shown in Table 11. In the O-ring columns, all expected positive reactions were positive. However, all expected negative reactions were not negative. There was one false positive. The reason for this, although not established, was not capillary leakage of the reagent.

В таблице 11 представлено количество и процент кассет и колонок с ложно положительной реакцией по отношению к общему количеству испытанных кассет. Способ вставления прокладки не влиял на результаты при использовании прокладки с уплотнительными кольцами, но косвенно влиял на результаты при использовании прокладки без уплотнительных колец, потому что все ложно положительные результаты были в кассетах с видимым затеканием реагента. Table 11 shows the number and percentage of cassettes and columns with a false positive reaction with respect to the total number of cassettes tested. The gasket insertion method did not affect the results when using gaskets with o-rings, but indirectly affected the results when using gaskets without o-rings, because all the false positive results were in cassettes with visible reagent leakage.

Claims

1. A vessel for quantitative determination of agglutination, containing an upper chamber having an opening for receiving liquid reagents, a lower chamber located to receive liquid from the upper chamber and containing a matrix for separating agglutinates, a barrier separating the upper chamber from the lower chamber and having a delay device liquid in the upper chamber under conditions of normal gravity and atmospheric pressure, while the barrier has the ability to ensure the passage of fluid from the upper chamber to the lower chamber under the action of m a pressure exceeding atmospheric pressure, characterized in that said barrier comprises a helical structure having a passage formed by the turns of the helix, the central shaft and column walls configured to delay fluid in the upper chamber under normal gravity and atmospheric pressure.

2. The vessel according to claim 1, characterized in that the spiral structure is made in the form of a spiral liner.

3. A vessel for carrying out a quantitative determination of agglutination, comprising an upper reaction chamber having an opening for receiving liquid reagents, characterized in that it comprises an opening defined by a spiral liner configured to trap liquid in said upper reaction chamber against gravity and atmospheric pressure, and a lower chamber communicating with the upper chamber through a spiral insert and which contains a matrix for separating agglutinates.

4. The vessel according to claim 3, characterized in that the spiral liner is made of polypropylene or rexolite.

5. A vessel for quantitative determination of agglutination, containing a first chamber for receiving and holding a liquid sample and reagents, a second chamber in communication with the first chamber for receiving liquid from the first chamber and which contains a matrix for separating agglutinates, a barrier separating these first and second chambers capable of preventing the passage of fluid from the first chamber to the second chamber under conditions of normal gravity and atmospheric pressure, while allowing fluid to pass from the first chamber to the second chamber in under pressure exceeding atmospheric pressure, characterized in that said barrier comprises a helical insert.

6. The vessel according to claim 5, characterized in that the diameter of the spiral liner is in the range of 0.28-0.36 cm

7. The vessel according to claim 5, characterized in that the diameter of the spiral insert is in the range of 0.08-0.23 cm.

8. The vessel according to claim 5, characterized in that the spiral insert has from 6 to 30 turns of a spiral of 2.54 cm

9. A vessel for quantitative determination of agglutination, including an upper chamber having an opening for receiving liquid reagents, a lower chamber located to receive liquid from the upper chamber and containing a matrix for separating agglutinates, a barrier separating the upper chamber from the lower chamber and having a delay device liquid in the upper chamber under conditions of normal gravity and atmospheric pressure, while the barrier has the ability to ensure the passage of fluid from the upper chamber to the lower chamber under the action of m a pressure exceeding atmospheric pressure, characterized in that said barrier comprises a central aperture with perforations sized to hold up the liquid in the upper chamber under normal gravity and atmospheric pressure.

10. The vessel according to claim 9, characterized in that the diaphragm is made of silicone rubber.

11. A vessel for quantitative determination of agglutination, containing an upper chamber having an opening for receiving liquid reagents, a lower chamber located to receive liquid from the upper chamber and containing a matrix for separating agglutinates, a barrier separating the upper chamber from the lower chamber and having a delay device liquid in the upper chamber under conditions of normal gravity and atmospheric pressure, while the barrier has the ability to ensure the passage of fluid from the upper chamber to the lower chamber under the action of a pressure exceeding atmospheric pressure, characterized in that said barrier comprises a porous plug with through channels configured to hold fluid in the upper chamber under normal gravity and atmospheric pressure.

12. The vessel according to claim 11, characterized in that the porous plug is made of polypropylene.