RU2189591C1 - Method for determining helicobacter pylori-associated intragastral urease activity - Google Patents

Method for determining helicobacter pylori-associated intragastral urease activity Download PDF

Info

Publication number
RU2189591C1
RU2189591C1 RU2001102196A RU2001102196A RU2189591C1 RU 2189591 C1 RU2189591 C1 RU 2189591C1 RU 2001102196 A RU2001102196 A RU 2001102196A RU 2001102196 A RU2001102196 A RU 2001102196A RU 2189591 C1 RU2189591 C1 RU 2189591C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
gastric mucosa
degree
pylori
urease activity
biopsy
Prior art date
Application number
RU2001102196A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
А.А. Нижевич
В.У. Сатаев
Р.Ш. Хасанов
З.М. Мельникова
В.В. Логиновская
Р.З. Ахметшин
Original Assignee
Нижевич Александр Альбертович
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Нижевич Александр Альбертович filed Critical Нижевич Александр Альбертович
Priority to RU2001102196A priority Critical patent/RU2189591C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2189591C1 publication Critical patent/RU2189591C1/en

Links

Images

Abstract

FIELD: medicine, medicinal microbiology and gastroenterology. SUBSTANCE: method deals with detecting the degree of bacterial seeding volume of gastric mucosa at helicobacter gastritis, gastroduodenitis and ulcerous disease. One should take a biopsy fragment of gastric mucosa and put it into commercial solution. Incubation mixture is subjected for exposure, PEC- colorimetry is conducted at 540 nm wave length to compare optic density with incubation time of biopsy fragment and the weight of biopsy fragment (units of optic density/mg biopsy material/min). At urease activity values ranged 11.5-4 U one should detect a low degree of bacterial seeding volume of gastric mucosa, at its value within 5-10 U a moderate degree is detected and in case its value ranges 11-19 U a high degree of H.pylori seeding volume is concluded on. The method is of high specificity, enables to conduct a semi-quantitative analysis of bacterial seeding volume of gastric mucosa. EFFECT: higher efficiency. 2 ex, 1 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано в гастроэнтерологии для индикации Helicobacter pylori и определения степени бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка при хеликобактерных гастритах, гастродуоденитах и язвенной болезни. The invention relates to medicine, in particular to medical microbiology, and can be used in gastroenterology for indicating Helicobacter pylori and determining the degree of bacterial contamination of the gastric mucosa in Helicobacter pylori gastritis, gastroduodenitis and peptic ulcer disease.

Известен способ определения интрагастральной уреазной активности, ассоциированной с Helicobacter pylori [1]. Указанный способ включает взятие пробы желудочного содержимого в объеме 0,3 мл и помещение ее в стерильную пробирку вместе с мочевинусодержащим диском (из наборов СИБ производства Горьковского НИИЭМ). В верхнем конце пробирки закрепляют индикаторную бумагу на аммиак. Пробирки помещают в термостат при t=37oC на 24 часа. Появление розовой или красной окраски свидетельствует о положительной реакции на уреазу Н. pylori. Отсутствие изменения окраски среды свидетельствует об отрицательной реакции. Интенсивность образования NН3 в среде дополнительно контролируется тест-полосками индикаторной бумаги на определение NН3. Недостатком данного способа является качественный, а не количественный характер определения уреазы, а также низкий уровень чувствительности способа (13,3%) при сопоставлении его с цитологическим исследованием. Последнее связано с тем, что желудочное содержимое имеет кислую реакцию и само по себе способно затруднить диссоциацию индикатора. Следует также отметить, что в случае проведения визуальной оценки изменения окраски среды при слабой степени бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка бактериями H.pylori небольшую степень диссоциации индикатора можно не заметить. Кроме того, время реакции длительно (24 часа) и требует дополнительного использования лабораторного оборудования для постоянного поддержания температуры на уровне 37oС.A known method for determining intragastric urease activity associated with Helicobacter pylori [1]. The specified method includes taking a sample of gastric contents in a volume of 0.3 ml and placing it in a sterile test tube together with a urea-containing disk (from NIB kits manufactured by Gorky NIIEM). At the upper end of the tube, indicator paper is fixed on ammonia. The tubes are placed in a thermostat at t = 37 o C for 24 hours. The appearance of a pink or red color indicates a positive reaction to urease of H. pylori. The absence of a color change in the medium indicates a negative reaction. The intensity of the formation of NH 3 in the medium is additionally controlled by test strips of indicator paper for the determination of NH 3 . The disadvantage of this method is the qualitative rather than quantitative nature of the determination of urease, as well as the low level of sensitivity of the method (13.3%) when comparing it with a cytological study. The latter is due to the fact that the gastric contents have an acid reaction and in itself can hinder the dissociation of the indicator. It should also be noted that in the case of a visual assessment of the color change in the medium with a weak degree of bacterial contamination of the gastric mucosa by H. pylori bacteria, a small degree of indicator dissociation can not be noticed. In addition, the reaction time is long (24 hours) and requires the additional use of laboratory equipment to constantly maintain the temperature at 37 o C.

Известен способ определения интрагастральной уреазной активности H.pylori при выделении колоний самого микроорганизма из биопсийного материала слизистой оболочки желудка [2]. Выполняется указанный способ следующим образом. В течение 4-5 дней из биопсийного материала, полученного во время эндоскопии на селективном агаре в микроаэрофильных условиях выращиваются культуры микроорганизма. После их идентификации культура погружается в забуференный до рН 7 раствор мочевины (с концентрацией 20 ммоль/л) и концентрация аммония, образовавшегося в результате реакции, измеряется NH3-селективным электродом и соотносится с сухим весом бактерий за единицу времени (микромоль NН3/мг бактерий/минуту).A known method for determining the intragastric urease activity of H. pylori when isolating colonies of the microorganism from the biopsy material of the gastric mucosa [2]. The specified method is performed as follows. Within 4-5 days, cultures of the microorganism are grown from biopsy material obtained during endoscopy on selective agar under microaerophilic conditions. After their identification, the culture is immersed in a urea solution buffered to pH 7 (with a concentration of 20 mmol / L) and the concentration of ammonia formed as a result of the reaction is measured with an NH 3 -selective electrode and correlated with the dry weight of bacteria per unit time (micromol NH 3 / mg bacteria / minute).

Недостатком данного способа является необходимость получения колоний микроорганизмов, что также требует длительного времени (4-5 суток) и значительных финансовых затрат на селективную среду и специализированное лабораторное оборудование (микроанаэростат и селективные NН3-электроды). Кроме того, H.pylori характеризуется низким процентом выделения культур (44 - 54%) вследствие "капризности" микроорганизма, крайне чувствительного к малейшим колебаниям параметров в процессе проведения культурирования.The disadvantage of this method is the need to obtain colonies of microorganisms, which also requires a long time (4-5 days) and significant financial costs for a selective medium and specialized laboratory equipment (microaerostat and selective NH 3 electrodes). In addition, H. pylori is characterized by a low percentage of crop isolation (44 - 54%) due to the "capriciousness" of the microorganism, which is extremely sensitive to the slightest fluctuations in the parameters during cultivation.

Из всех известных способов наиболее близким к изобретению по совокупности признаков является способ определения интрагастральной уреазной активности H.pylori с использованием желудочного содержимого у пациентов с язвенной болезнью и хроническим гастродуоденитом [3]. Способ выполняется следующим образом: у пациента откачивают базальную порцию желудочного содержимого, фильтруют и готовят инкубационную смесь из 0,3 мл фильтрата желудочного содержимого и 0,3 мл 0,05% раствора мочевины, приготовленного на 0,25 М фосфатном буфере (рН 7). Через 1 час к 0,2 мл смеси добавляется 1 мл 2% раствора диметила-минобензальдегида с целью остановки реакции. Смесь встряхивают и инкубируют еще 30 минут, затем колориметрируют на микро ФЭК при желтом фильтре в кювете с объемом 1 мл. В качестве контроля используют смесь, состоящую из 0,1 мл исследуемого желудочного содержимого, 0,1 мл 0,25 М фосфатного буфера (рН 7) и 1 мл диметиламинобензальдегида. Интрагастральную уреазную активность рассчитывают по формуле А= 7В/9, где А - активность уреазы в ед/л, В - количество мочевины в микрограммах, гидролизованной за 30 минут 0,1 мл желудочного содержимого. Концентрацию мочевины определяют по калибровочному графику, отражающему разведения мочевины от 75 до 300 мкг/мл. Of all known methods, the closest to the invention in terms of features is a method for determining the intragastric urease activity of H. pylori using gastric contents in patients with peptic ulcer and chronic gastroduodenitis [3]. The method is as follows: the patient is pumped out a basal portion of gastric contents, filtered and an incubation mixture is prepared from 0.3 ml of the filtrate of gastric contents and 0.3 ml of a 0.05% urea solution prepared in 0.25 M phosphate buffer (pH 7) . After 1 hour, 1 ml of a 2% solution of dimethyl-minobenzaldehyde is added to 0.2 ml of the mixture in order to stop the reaction. The mixture is shaken and incubated for another 30 minutes, then colorimetric on a micro FEK with a yellow filter in a 1 ml cuvette. As a control, a mixture is used consisting of 0.1 ml of the investigated gastric contents, 0.1 ml of 0.25 M phosphate buffer (pH 7) and 1 ml of dimethylaminobenzaldehyde. Intragastric urease activity is calculated by the formula A = 7B / 9, where A is the urease activity in units / l, B is the amount of urea in micrograms hydrolyzed in 30 minutes with 0.1 ml of gastric contents. Urea concentration is determined by a calibration graph reflecting urea dilutions from 75 to 300 μg / ml.

Недостатками указанного способа являются:
зонд при введении его в желудок через ротовую полость загрязняется контаминантной микрофлорой ротовой полости, обладающей собственной уреазной активностью, что потенциально обусловливает низкую специфичность данного способа (65%);
низкий процент содержания мочевины в диагностической среде (0,05%), потенциально затрудняющий детекцию микроорганизма;
полученные показатели не отражают величину бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка пациента, инфицированного Н. pylori;
необходимость каждый раз готовить стерильный раствор реагентов ex tempora;
необходимость постоянного участия дополнительного персонала в связи со сложной технологической последовательностью процесса;
необходимость калибровочной кривой для постоянного расчета концентраций субстрата реакции.
The disadvantages of this method are:
the probe, when introduced into the stomach through the oral cavity, is contaminated by the contaminant microflora of the oral cavity, which has its own urease activity, which potentially leads to the low specificity of this method (65%);
a low percentage of urea in the diagnostic medium (0.05%), potentially complicating the detection of a microorganism;
the obtained indicators do not reflect the amount of bacterial contamination of the gastric mucosa of a patient infected with H. pylori;
the need to prepare a sterile ex tempora reagent solution each time;
the need for continued participation of additional staff in connection with the complex technological sequence of the process;
the need for a calibration curve for continuous calculation of reaction substrate concentrations.

Технический результат - повышение специфичности способа, возможность проведения полуколичественного анализа бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка, упрощение способа. The technical result is an increase in the specificity of the method, the possibility of a semi-quantitative analysis of bacterial contamination of the gastric mucosa, a simplification of the method.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом: у больного берут биопсийный фрагмент слизистой оболочки желудка, погружают его в коммерческий раствор ("De-Nol test", Yamanouchi Europe b.v., Лейдердорп, Нидерланды). "De-Nol test" (Yamanouchi Europe b.v., Лейдердорп, Нидерланды) представляет собой коммерческий 6% раствор мочевины, предназначенный для качественного обнаружения уреазы микроорганизмов и в первую очередь Helicobacter pylori. Упаковка содержит 20 запечатанных пробирок объемом 1 мл с реагентом. Срок годности - 9 месяцев от даты изготовления. Хранение в холодильнике не требуется. Использование четырехчасового периода инкубации биопсийного фрагмента в диагностической среде позволяет обнаружить интрагастральную уреазную активность у пациентов даже с минимальной степенью бактериальной заселенности слизистой оболочки желудка. Инкубационную смесь подвергают экспозиции продолжительностью 4 часа, а затем колориметрируют на ФЭК при длине волны 540 нм и соотносят оптическую плотность с временем инкубации биопсийного фрагмента и весом биопсийного фрагмента (единицы оптической плотности / мг биопсийного материала / минуту). Для лучшей стандартизации результаты умножают на 1000. Контролем служит раствор "De-Nol test" без погружения биопсийного материала. The proposed method is as follows: a biopsy fragment of the gastric mucosa is taken from the patient, immersed in a commercial solution ("De-Nol test", Yamanouchi Europe b.v., Leiderdorp, Netherlands). "De-Nol test" (Yamanouchi Europe b.v., Leiderdorp, Netherlands) is a commercial 6% urea solution designed for the qualitative detection of urease of microorganisms, primarily Helicobacter pylori. The package contains 20 sealed 1 ml tubes with reagent. Shelf life - 9 months from the date of manufacture. Refrigerated storage is not required. The use of a four-hour incubation period of the biopsy fragment in the diagnostic medium allows one to detect intragastric urease activity in patients even with a minimal degree of bacterial population of the gastric mucosa. The incubation mixture is exposed for 4 hours, and then colorimetric at FEC at a wavelength of 540 nm and the optical density is correlated with the incubation time of the biopsy fragment and the weight of the biopsy fragment (optical density units / mg of biopsy material / minute). For better standardization, the results are multiplied by 1000. The control is a De-Nol test solution without immersion of the biopsy material.

Анализ результатов позволяет выявить зависимость между величиной интрагастральной уреазной активности по предлагаемому способу и стандартной шкалой обсемененности слизистой оболочки желудка Н.pylori по Л.И. Аруину, а также позволяет дифференцировать величину обсемененности с высокой степенью статистической достоверности. Определение обсемененности проводят следующим образом
при показателях уреазной активности от 1,5 до 4 единиц оптической плотности/мг биопсийного материала/минуту определяется слабая степень обсемененности слизистой оболочки желудка H.pylori;
при показателях уреазной активности от 5 до 10 единиц оптической плотности/мг биопсийного материала/минуту определяется умеренная степень обсемененности слизистой оболочки желудка H.pylori;
при показателях уреазной активности от 11 до 19 единиц оптической плотности/мг биопсийного материала/минуту определяется высокая степень обсемененности слизистой оболочки желудка H.pylori.
Analysis of the results allows us to identify the relationship between the magnitude of intragastric urease activity according to the proposed method and the standard scale of colonization of the gastric mucosa H. pylori according to L.I. Aruin, and also allows you to differentiate the amount of contamination with a high degree of statistical reliability. The determination of contamination is carried out as follows
with indicators of urease activity from 1.5 to 4 optical density units / mg of biopsy material / minute, a weak degree of contamination of the gastric mucosa of H. pylori is determined;
at indicators of urease activity from 5 to 10 optical density units / mg of biopsy material / minute, a moderate degree of contamination of the gastric mucosa of H. pylori is determined;
with urease activity indices from 11 to 19 optical density units / mg of biopsy material / minute, a high degree of contamination of the gastric mucosa of H. pylori is determined.

Общими для предлагаемого объекта изобретения и прототипа существенными признаками являются: забор биоматериала желудка, смешивание биоматериала с диагностической средой, содержащей мочевину в качестве субстрата реакции и оценка результата с использованием фотоэлектроколориметра по изменению оптической плотности диагностической среды после инкубации с изучаемым биоматериалом. The essential features common for the proposed object of the invention and prototype are: collecting biomaterial of the stomach, mixing the biomaterial with a diagnostic medium containing urea as a reaction substrate and evaluating the result using a photoelectric colorimeter to change the optical density of the diagnostic medium after incubation with the studied biomaterial.

Основными отличиями заявляемого способа являются:
использование в качестве биоматериала желудка биопсийных фрагментов слизистой оболочки, позволяющее избежать контакта изучаемого биоматериала с ротовой полостью и ее секретом, за счет их изоляции в стерильном канале эндоскопа;
использование высокого процента содержания мочевины в диагностической среде (6%), что увеличивает надежность идентификации H.pylori;
соотнесение оптической плотности диагностической среды, содержащей исследуемый биоматериал, со временем инкубации и весом самого биопсийного фрагмента;
возможность полуколичественной оценки плотности бактериального заселения слизистой оболочки желудка H.pylori;
использование стандартного коммерческого стерильного раствора "De-Nol test", упрощающего процесс подготовки диагностической среды к процедуре;
упрощение технологии процесса, не требующее дополнительного участия персонала на период проведения реакции;
простота интерпретации результата, не требующая построения калибровочной кривой концентраций субстрата реакций, поскольку результат выражается в единицах оптической плотности.
The main differences of the proposed method are:
the use of biopsy fragments of the mucous membrane as gastric biomaterial, which avoids contact of the studied biomaterial with the oral cavity and its secret, due to their isolation in the sterile canal of the endoscope;
the use of a high percentage of urea in the diagnostic environment (6%), which increases the reliability of H.pylori identification;
correlation of the optical density of the diagnostic medium containing the studied biomaterial with the incubation time and the weight of the biopsy fragment itself;
the possibility of a semi-quantitative assessment of the density of the bacterial population of the gastric mucosa of H. pylori;
the use of a standard commercial sterile solution "De-Nol test", simplifying the process of preparing the diagnostic environment for the procedure;
simplification of the process technology, which does not require additional staff participation for the duration of the reaction;
simplicity of interpretation of the result, which does not require constructing a calibration curve of the concentration of the reaction substrate, since the result is expressed in units of optical density.

Сравнение заявляемого решения не только с прототипом, но и с другими решениями в данной области науки показало, что оптимальными диагностическими параметрами обладает 6% раствор мочевины, причем ложно-положительных результатов, зависящих от наличия других микроорганизмов (протей, клебсиелла) даже при внесении их в диагностическую среду в концентрации 107 не наблюдается [4, 5].Comparison of the proposed solution not only with the prototype, but also with other solutions in this field of science showed that 6% urea solution has optimal diagnostic parameters, and false-positive results, depending on the presence of other microorganisms (Proteus, Klebsiella) even when they are added to diagnostic environment at a concentration of 10 7 is not observed [4, 5].

Выявленные признаки, отличающие заявляемый способ, позволяют сделать вывод о соответствии критерию "изобретательский уровень". Приведенная совокупность существенных признаков в литературе не описана. Identified features that distinguish the claimed method, allow us to conclude that the criterion of "inventive step". The given set of essential features is not described in the literature.

Пробы биопсийного материала от 90 пациентов, извлеченные в процессе фиброгастроскопии, исследовали на наличие интрагастральной уреазной активности, ассоциированной с H.pylori инфекцией. Полученные данные верифицировали гисто- и цитологически, серологически (наборы "Anti-H.pylori EIA, Roche, Швейцария) и при помощи полимеразной цепной реакции на обнаружение фрагмента ДНК H. pylori кодирующего синтез субъединицы А уреазы микроорганизма. Верификация диагноза позволила выявить H.pylori инфекцию у 70 пациентов и ее отсутствие у 20 пациентов. Samples of biopsy material from 90 patients, extracted during fibrogastroscopy, were examined for the presence of intragastric urease activity associated with H. pylori infection. The data obtained were verified histologically and cytologically, serologically (Anti-H.pylori EIA kits, Roche, Switzerland) and by polymerase chain reaction to detect the H. pylori DNA fragment encoding the synthesis of the urease subunit A of the microorganism. Verification of the diagnosis revealed H.pylori infection in 70 patients and its absence in 20 patients.

Величина интрагастральной уреазной активности у семидесяти H.pylori-позитивных пациентов составила 9,45±2,98 единиц оптической плотности / мг биопсийного материала / минуту, а у двадцати H.pylori-негативных пациентов - 0,25±0,11 единиц оптической плотности / мг биопсийного материала / минуту. Согласно данным статистического анализа (тест Стьюдента) различие достоверно (р<0,001). Величины показателей интрагастральной уреазной активности в сопоставлении со степенью бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка Н.pylori представлены в таблице. The value of intragastric urease activity in seventy H. pylori-positive patients was 9.45 ± 2.98 units of optical density / mg of biopsy material / minute, and in twenty H. pylori-negative patients, 0.25 ± 0.11 units of optical density / mg biopsy material / minute. According to statistical analysis (Student's test), the difference is significant (p <0.001). The values of the indicators of intragastric urease activity in comparison with the degree of bacterial contamination of the gastric mucosa of H. pylori are presented in the table.

Вследствие своей технологической простоты и доступности лабораторного оборудования предлагаемый способ может быть использован в любой биохимической лаборатории, где имеется фотоэлектроколориметр. Предлагаемый способ наряду с клинической практикой может успешно применяться в научных исследованиях для изучения влияния интрагастральной уреазной активности in vivo на различные параметры человеческого организма (морфологические сдвиги и т.д.). Due to its technological simplicity and accessibility of laboratory equipment, the proposed method can be used in any biochemical laboratory where there is a photoelectric colorimeter. The proposed method along with clinical practice can be successfully used in scientific research to study the effect of intragastric urease activity in vivo on various parameters of the human body (morphological changes, etc.).

Способ иллюстрируется следующими примерами. The method is illustrated by the following examples.

Пример 1. Больная Ирина В., 11 лет, обратилась в клинику с жалобами на боли в области пупка и в эпигастральной области, возникающие через 2 часа после приема пищи, а также отрыжку, тошноту и изжогу. При проведении фиброгастроскопии обнаружена язва угла желудка, диаметр 5 мм, а также язва двенадцатиперстной кишки, диаметр 8 мм, в сочетании с гипертрофическим гастритом. После тестирования биопсийного материала по описанному способу была определена интрагастральная уреазная активность - 9,21 единиц оптической плотности / мг биопсийного материала / минуту, что соответствует умеренной степени обсемененности слизистой оболочки желудка Н.pylori. При цитологическом, серологическом и молекулярно-биологическом исследовании диагноз H.pylori инфекции был подтвержден. При сопоставлении величины показателя с визуально-аналоговой шкалой Л.И. Аруина обнаружена умеренная степень бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка. Example 1. Patient Irina V., 11 years old, came to the clinic with complaints of pain in the navel and in the epigastric region that occur 2 hours after eating, as well as belching, nausea and heartburn. During fibrogastroscopy, an ulcer of the stomach angle, 5 mm in diameter, as well as a duodenal ulcer, 8 mm in diameter, was found in combination with hypertrophic gastritis. After testing the biopsy material according to the described method, an intragastric urease activity was determined - 9.21 units of optical density / mg biopsy material / minute, which corresponds to a moderate degree of contamination of the gastric mucosa of H. pylori. A cytological, serological, and molecular biological study confirmed the diagnosis of H. pylori infection. When comparing the value of the indicator with a visual-analogue scale L.I. Aruin found a moderate degree of bacterial contamination of the gastric mucosa.

Пример 2. Больная Мария З., 9 лет, обратилась в клинику с жалобами на боли в области пупка, не связанные с приемом пищи и горький вкус во рту. При проведении фиброгастроскопии обнаружен поверхностный гастродуоденит с признаками дуодено-гастрального рефлюкса III степени. После тестирования биопсийного материала по описанному способу была определена интрагастральная уреазная активность - 3,3 единицы оптической плотности / мг биопсийного материала / минуту, что соответствует слабой степени бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка H.pylori. При цитологическом, серологическом и молекулярно-биологическом исследовании диагноз H.pylori инфекции был подтвержден. При сопоставлении величины показателя с визуально-аналоговой шкалой Л.И. Аруина обнаружена слабая степень бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка. Example 2. Patient Maria Z., 9 years old, came to the clinic with complaints of pain in the navel, not associated with food intake and a bitter taste in the mouth. During fibrogastroscopy, superficial gastroduodenitis with signs of duodenal-gastric reflux of the third degree was detected. After testing the biopsy material using the described method, an intragastric urease activity was determined - 3.3 optical density units / mg biopsy material / minute, which corresponds to a weak degree of bacterial contamination of the gastric mucosa of H. pylori. A cytological, serological, and molecular biological study confirmed the diagnosis of H. pylori infection. When comparing the value of the indicator with a visual-analogue scale L.I. Aruin found a weak degree of bacterial contamination of the gastric mucosa.

Проведенное исследование свидетельствует о том, что предложенный способ определения интрагастральной уреазной активности, ассоциированной с H.pylori, является эффективным и надежным, как в диагностике Н.pylori инфекции, так и в определении степени бактериальной обсемененности слизистой оболочки желудка вышеуказанным микроорганизмом. The study indicates that the proposed method for determining the intragastric urease activity associated with H. pylori is effective and reliable both in the diagnosis of H. pylori infection and in determining the degree of bacterial contamination of the gastric mucosa by the above mentioned microorganism.

Источники информации
1. Баженов Л.Г., Саидханов Б.А., Ходжаева Н.У. // Определение C.pylori у больных с гастродуоденальной патологией // Лаб. дело 1990, 10, с. 71-73.
Sources of information
1. Bazhenov L.G., Saidkhanov B.A., Khodjaev N.U. // Definition of C. pylori in patients with gastroduodenal pathology // Lab. Case 1990, 10, p. 71-73.

2. Shallcross T.M., Wyatt J.I., Millar M.R., Heatley R.V. // Is urease activity a virulence factor for C.pylori? // Klin. Wochenschr. 1989, vol. 67 (Suppl. 18), p. 63-64. 2. Shallcross T.M., Wyatt J.I., Millar M.R., Heatley R.V. // Is urease activity a virulence factor for C. pylori? // Klin. Wochenschr. 1989, vol. 67 (Suppl. 18), p. 63-64.

3. Масевич Ц.Г., Соколовский В.В., Пак С.Ф. // Диагностика кампилобактерной инфекции у больных с заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки // Клин. мед. 1989, 11, с. 80-81. 3. Masevich Ts.G., Sokolovsky VV, Pak S.F. // Diagnosis of campylobacter infection in patients with diseases of the stomach and duodenum // Klin. honey. 1989, 11, p. 80-81.

4. Баженов Л.Г. // Методы выделения и идентификации Campylobacter pylori // Лаб. дело 1991, 1, с. 48 - 53. 4. Bazhenov L.G. // Methods of isolation and identification of Campylobacter pylori // Lab. Case 1991, 1, p. 48 - 53.

5. Vaira D., Holton J., Cairns S. et al. // Urease tests for Campylobacter pylori: care in interpretation // J. Clin. Pathol. 1988, vol. 41, 7, p. 812 - 813. 5. Vaira D., Holton J., Cairns S. et al. // Urease tests for Campylobacter pylori: care in interpretation // J. Clin. Pathol. 1988, vol. 41, 7, p. 812 - 813.

Claims (1)

Способ количественной оценки инфицированности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori (НР), включающий забор биоматериала желудка, смешивание его с диагностической средой, содержащей раствор мочевины в качестве субстрата реакции, с последующим колориметрированием диагностической среды, определением уреазной активности и оценкой результата по изменению оптической плотности диагностической среды после инкубации с изучаемым биоматериалом, отличающийся тем, что в качестве биоматериала используют биоптат слизистой оболочки желудка, определяют уреазную активность как соотношение оптической плотности диагностической среды к единице веса биоптата (мг) за единицу времени (мин) и при ее значении от 1,5 до 4 единиц определяют слабую степень обсемененности слизистой оболочки желудка НР, при ее значении от 5 до 10 единиц - умеренную степень обсемененности и при значении от 11 до 19 единиц - высокую степень обсемененности слизистой оболочки желудка НР. A method for the quantitative assessment of infection of the gastric mucosa of Helicobacter pylori (HP), including sampling of the biomaterial of the stomach, mixing it with a diagnostic medium containing a urea solution as a reaction substrate, followed by colorimetric diagnostic environment, determination of urease activity and evaluation of the result by changing the optical density of the diagnostic environment after incubation with the studied biomaterial, characterized in that the biopsy material of the gastric mucosa is used as the biomaterial, divide urease activity as the ratio of the optical density of the diagnostic medium to the unit of biopsy weight (mg) per unit of time (min) and, with its value from 1.5 to 4 units, a weak degree of contamination of the gastric mucosa of the HP is determined, with its value from 5 to 10 units - a moderate degree of contamination and with a value from 11 to 19 units - a high degree of contamination of the mucous membrane of the stomach HP.
RU2001102196A 2001-01-24 2001-01-24 Method for determining helicobacter pylori-associated intragastral urease activity RU2189591C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001102196A RU2189591C1 (en) 2001-01-24 2001-01-24 Method for determining helicobacter pylori-associated intragastral urease activity

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001102196A RU2189591C1 (en) 2001-01-24 2001-01-24 Method for determining helicobacter pylori-associated intragastral urease activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2189591C1 true RU2189591C1 (en) 2002-09-20

Family

ID=20245214

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2001102196A RU2189591C1 (en) 2001-01-24 2001-01-24 Method for determining helicobacter pylori-associated intragastral urease activity

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2189591C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2588469C1 (en) * 2015-05-14 2016-06-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" Method of determining sensitivity of helicobacter pylori to antibiotics
RU2597777C1 (en) * 2015-07-02 2016-09-20 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Тверской ГМУ Минздрава России) Method of determining urease activity of oral fluid for screening of contamination of the oral cavity by urease-positive microbiota

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
МАСЕВИЧ Ц.Г. и др. Диагностика кампилобактерной инфекции у больных с заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки.-Клиническая медицина, 1989, № 11, с.80-81. *
СТАРОСТИН Б.И. и др. Экспресс-метод диагностики инфицированности Helicobacter pylori желудка и двенадцатиперстной кишки.-Клиническая медицина, № 2, 1989, с.51. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2588469C1 (en) * 2015-05-14 2016-06-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" Method of determining sensitivity of helicobacter pylori to antibiotics
RU2597777C1 (en) * 2015-07-02 2016-09-20 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Тверской ГМУ Минздрава России) Method of determining urease activity of oral fluid for screening of contamination of the oral cavity by urease-positive microbiota

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4748113A (en) Compositions and methods for the diagnosis of gastrointestinal disorders involving urease
Ruddell et al. Gastric-juice nitrite: a risk factor for cancer in the hypochlorhydric stomach?
CA2160916C (en) Test composition for the rapid detection of helicobacter pylori in gastric biopsy tissue
US5498528A (en) Detection of helicobacter pylori
EP0204438B1 (en) Compositions and methods for the detection of urease for the diagnosis of campylobacter pyloridis infection
US6187556B1 (en) Composition, kit, and method for detecting Helicobacter pylori in biopsy
US9410179B2 (en) Diagnostic method for the determination of Helicobacter pylori
Mégraud 5 Diagnosis of Helicobacter pylori
RU2189591C1 (en) Method for determining helicobacter pylori-associated intragastral urease activity
ITVR970122A1 (en) COLORIMETRIC METHOD TO ASSESS THE SENSITIVITY OF THE HELICOBACTER PY LORI TO ANTIMICROBIAL SUBSTANCES AND KITS TO IMPLEMENT THIS METHOD
JP2949474B2 (en) Helicobacter pylori eradication determination method based on change rate of pepsinogen I / II ratio
AU601363B2 (en) Compositions and methods for the detection of urease for the diagnosis of gastrointestinal disorder
KR100306587B1 (en) Diagnosis method of Helicobacter pylori infection and rapid urease reaction kit for it
RU2809015C1 (en) Method of differential diagnostics of oral cavity dysbiosis in patients with chronic biliary-dependent pancreatitis with different execretory activity
RU165352U1 (en) DIAGNOSTIC METHOD OF H.PYLORI IN PATIENTS WITH A GASTROINTESTINAL PATHOLOGY
JPS60222768A (en) Saliva diagnostic test for detecting illness of alveolar periosteum
JPH10148636A (en) Method for judging elimination of germ of helicobacter pylori based on change rate of pepsinogen i/ii ratio
RU2189592C1 (en) Method for diagnostics of pyloric helicobacteriosis
RU2299689C1 (en) Method of diagnosing helicobacter pylory in stomach mucosa in patients suffering from stomach ulcer
Asyari et al. Overview of Helicobacter pylori Detection Using Rapid Urease Test and Giemsa Modification Staining in Chronic Tonsillitis Patients. Open Access Maced J Med Sci. 2020 Oct 30; 8 (B): 1105-1109
RU2027994C1 (en) Method of diagnosis of bacterial sepsis in children
RU2124725C1 (en) Method and composition for diagnosing gastroenteric disease
RU2231073C1 (en) Method for predicting severity degree in the flow of infectious faucial diseases in children
WO2022025843A1 (en) Rapid and sensitive urease test containing anthocyanine for detection of h. pylori from gastric biopsy specimen and bacterial culture
RU2270610C2 (en) Method for predicting chronic gastroduodenitis and functional dyspepsia in children