RU2188203C2 - 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine-5'-[(ethoxy-carbonyl)(ethyl)phosphonate] as inhibitor of reproduction of human immunodeficiency virus - Google Patents
2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine-5'-[(ethoxy-carbonyl)(ethyl)phosphonate] as inhibitor of reproduction of human immunodeficiency virus Download PDFInfo
- Publication number
- RU2188203C2 RU2188203C2 RU2000125255A RU2000125255A RU2188203C2 RU 2188203 C2 RU2188203 C2 RU 2188203C2 RU 2000125255 A RU2000125255 A RU 2000125255A RU 2000125255 A RU2000125255 A RU 2000125255A RU 2188203 C2 RU2188203 C2 RU 2188203C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hiv
- drug
- didehydro
- phosphonate
- cells
- Prior art date
Links
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 title claims abstract description 11
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 title claims abstract description 6
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 title claims abstract description 6
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 title claims abstract description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 27
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 8
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 25
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 8
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 7
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 6
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 4
- HBOMLICNUCNMMY-UHFFFAOYSA-N 1-[4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- -1 2'3'-dideoxycytidine Chemical compound 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010078851 HIV Reverse Transcriptase Proteins 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N Didanosine Chemical compound O1[C@H](CO)CC[C@@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000003419 rna directed dna polymerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 229960000523 zalcitabine Drugs 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно к применению новых производных нуклеозидов для подавления репродукции вируса иммунодефицита человека. The invention relates to the field of molecular biology, virology and medicine, namely to the use of new derivatives of nucleosides to suppress the reproduction of the human immunodeficiency virus.
В настоящее время известен целый ряд соединений, обладающих противовирусной активностью в отношении ВИЧ, в том числе и используемых в медицинской практике. К ним относятся такие производные нуклеозидов, как 3 -азидо-3 -дезокситимидин (AZT), 2'3'-дидезоксицитидин, 2'3'-дидезоксиинозин, 2'3'-дидезокси-2'3'-дидегидротимидин и 2'3'-дидезокси-3'-тиотимидин [1-4]. Механизм действия указанных соединений состоит в проникновении в инфицированные клетки, где они подвергаются трифосфорилированию и специфично блокируют синтез ДНК, катализируемый обратной транскриптазой ВИЧ. Currently, there are a number of compounds with antiviral activity against HIV, including those used in medical practice. These include nucleoside derivatives such as 3-azido-3-deoxythymidine (AZT), 2'3'-dideoxycytidine, 2'3'-dideoxyinosine, 2'3'-dideoxy-2'3'-didehydrotimidine and 2'3 '-dideoxy-3'-thiotimidine [1-4]. The mechanism of action of these compounds consists in penetrating into infected cells, where they undergo triphosphorylation and specifically block DNA synthesis catalyzed by HIV reverse transcriptase.
Однако по сравнению с природными нуклеозидами процесс фосфорилирования модифицированных нуклеозидов клеточными ферментами происходит значительно менее эффективно, что дает время проникшему в клетки вирусу интегрироваться в геном в форме провирусной ДНК. Кроме этого, необходимость создания новых модифицированных производных нуклеозидов диктуется достаточно высокой токсичностью применяемых препаратов (AZT) и появлением резистентных штаммов даже в случае комбинированного лечения [5,6]. However, compared with natural nucleosides, the process of phosphorylation of modified nucleosides by cellular enzymes is much less efficient, which allows time for the virus that has entered the cells to integrate into the genome in the form of proviral DNA. In addition, the need to create new modified nucleoside derivatives is dictated by the rather high toxicity of the drugs used (AZT) and the emergence of resistant strains even in the case of combined treatment [5,6].
Технической задачей изобретения является создание новых нуклеозидных производных, высокоэффективных в отношении ВИЧ, устойчивых к действию ферментов дефосфорилирования, способных проникать внутрь клетки и обладающих избирательной активностью в подавлении синтеза ДНК, катализируемого обратной транскриптазой ВИЧ. An object of the invention is the creation of new nucleoside derivatives that are highly effective against HIV, resistant to dephosphorylation enzymes that can penetrate into the cell and have selective activity in inhibiting DNA synthesis catalyzed by HIV reverse transcriptase.
Задача решена тем, что согласно изобретению заявляется новое соединение - производное 2'3'-дидезокси-2'3'-дидегидротимидина (d4T) [прототип; 4]-2', 3'-дидегидро-2', 3'-дидезокситимидин-5'[(этоксикарбонил) (этил)фосфонат], с химической формулой:
Ингибирование репродукции ВИЧ включает культивирование первично инфицированных лимфоидных клеток МТ-4 в присутствии исследуемого препарата, конечная концентрация которого в культуральной среде составляет 0,001-100 мкг/мл, на протяжении одного пассажа - в течение 4 суток.The problem is solved by the fact that according to the invention a new compound is claimed - a derivative of 2'3'-dideoxy-2'3'-didehydrothymidine (d4T) [prototype; 4] -2 ', 3'-didehydro-2', 3'-dideoxythymidine-5 '[(ethoxycarbonyl) (ethyl) phosphonate], with the chemical formula:
Inhibition of HIV reproduction involves the cultivation of initially infected MT-4 lymphoid cells in the presence of the test drug, the final concentration of which in the culture medium is 0.001-100 μg / ml, over a passage of 4 days.
Об ингибировании репродукции ВИЧ в культуре чувствительных клеток судят по снижению накопления вирусспецифического белка р24 (по данным иммуноферментного анализа), а также по увеличению жизнеспособности клеток в присутствии препарата по сравнению с контролем, определяемому на 4 сутки культивирования методом исключения трипанового синего. Inhibition of HIV reproduction in a culture of sensitive cells is judged by a decrease in the accumulation of the virus-specific protein p24 (according to enzyme-linked immunosorbent assay), as well as by an increase in cell viability in the presence of the drug compared to the control determined on the 4th day of cultivation by trypan blue exclusion.
Из полученных экспериментальных данных, приведенных в таблице, видно, что исследуемый препарат, помимо спрособности защищать клетки от гибели (>50% в дозе 0,28 мкМ/мл), в высокой степени подавляет репродукцию вируса иммунодефицита 1 типа в культуре клеток МТ-4 (>50% в дозе 0,0027 мкМ/мл и >90% в дозе 0,28 мкМ/мл), что соответственно в 100 и 10 раз превышает аналогичные характеристики для d4T. Терапевтический индекс исследуемого соединения (отношение токсической дозы препарата к его эффективной дозе) в 200 раз больше, чем у d4T (таблица). From the obtained experimental data shown in the table, it can be seen that the studied drug, in addition to the need to protect cells from death (> 50% at a dose of 0.28 μM / ml), highly inhibits the reproduction of
Фиг. 1. Анти-ВИЧ действие 2', 3'-дидегидро-2', 3'-дидезокситимидин-5'[(этоксикарбонил) (этил)фосфоната]:
■ - токсичность препарата; % жизнеспособности клеток МТ-4 по отношению к контролю,
■ - toxicity of the drug; % cell viability MT-4 in relation to the control,
Ниже приведены конкретные примеры, раскрывающие сущность изобретения. The following are specific examples that reveal the essence of the invention.
Пример 1. Синтез 2',3'-дидегидро-2',3'-дидезокситимидин-5'[(этоксикарбонил) (этил)фосфоната]. Example 1. Synthesis of 2 ', 3'-didehydro-2', 3'-dideoxythymidine-5 '[(ethoxycarbonyl) (ethyl) phosphonate].
К раствору диэтил[(этокси)карбонил]фосфоната (190 мкл, 1 ммоль) в абсолютном CCl4 (10 мл) добавляют PCl5 (210 мг, 1 ммоль). Кипятят с обратным холодильником 3 часа. Упаривают растворитель, сухой остаток растворяют в диметилформамиде (4 мл). Полученный раствор охлаждают до -50oС и добавляют охлажденный до той же температуры раствор 2 ,3 -дидeгидpo-2 ,3 -дидезокситимидина (70 мг, 0.3 ммоль) в диметилформамиде (2 мл). Перемешивают ночь при комнатной температуре. Упаривают растворитель. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (2•25 см), элюируя системой хлороформ-метанол 96:4. Выход 89%. УФ (H2O, λмакс): 266 нм. 1Н ЯМР (CDCl3), δ м.д.: 8.50с (1Н, NH), 7.28с, 7,30с (1Н, Н6,),7.01с (1Н, Н1'), 6.32м (1Н, Н3'), 5.91м (1Н, Н2'), 5.00м (1Н, Н4'), 4.42м (2Н, Н5'), 4.31м (4Н, 
Пример 2. Оценка цитотоксичности соединения. Цитотоксичность препарата оценивают путем добавления его разведений в среде RPMI-1640 к клеточной суспензии МТ-4, помещенной в лунки 96-луночного планшета ("Cel-Cult", England), до конечных концентраций 0,001-100 мкг/мл (по три лунки на каждую дозу) с последующим культивированием при 37oС в течение 4 суток. Посевная концентрация составляет 0,5•106 клеточных частиц в миллилитре. Контролем служат клетки без добавления препарата. Жизнеспособность клеток подсчитывают в камере Горяева с предварительным окрашиванием трипановым синим. Токсичность различных доз препарата определяют по жизнеспособности клеток относительно контроля (см. чертеж), по полученным результатам рассчитывают дозу, на 50% снижающую жизнеспособность клеток (CD50). Данные приведены в таблице. Следует отметить, что токсическое действие на клетки МТ-4, выражающееся в изменении их морфологии, снижении репродуктивности и жизнеспособности, оказывают только высокие концентрации препарата (>150 мкМ/мл), что более чем в два раза выше, чем у d4T и в 50000 раз превышает эффективные в отношении ВИЧ-1 дозы (таблица).Example 2. Evaluation of the cytotoxicity of the compound. The cytotoxicity of the drug is assessed by adding dilutions in RPMI-1640 medium to MT-4 cell suspension, placed in the wells of a 96-well plate (Cel-Cult, England), to final concentrations of 0.001-100 μg / ml (three wells per each dose), followed by cultivation at 37 o C for 4 days. The inoculum concentration is 0.5 • 10 6 cell particles per milliliter. The control cells are without adding the drug. Cell viability is counted in a Goryaev chamber with preliminary trypan blue staining. The toxicity of various doses of the drug is determined by the viability of the cells relative to the control (see drawing), the dose calculated by the obtained results is calculated, which reduces the cell viability by 50% (CD 50 ). The data are given in the table. It should be noted that the toxic effect on MT-4 cells, manifested in a change in their morphology, decreased reproduction and viability, is exerted only by high drug concentrations (> 150 μM / ml), which is more than two times higher than that of d4T and 50,000 times the effective dose for HIV-1 (table).
Пример 3. Изучение влияния исследуемого препарата на репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4. Example 3. The study of the effect of the study drug on the reproduction of HIV-1 in cell culture MT-4.
Исследование противовирусной активности препарата в отношении ВИЧ-1 проводят на перевиваемой линии чувствительных клеток МТ-4. Для заражения используют супернатант инфицированных клеток, хранившийся в жидком азоте, множественность заражения составляет 0,2-0,5 инфекционных единиц на клетку. Суспензию клеток МТ-4 с концентрацией 2,0•106 клеточных частиц в миллилитре и жизнеспособностью не менее 90% помещают в лунки 96-луночного планшета ("Cel-Cult", England) непосредственно после внесения вируссодержащего материала и сразу же добавляют исследуемые препараты, разведенные в среде RPMI-1640 без сыворотки, до конечных концентраций 0,001-100 мкг/мл (по три лунки на каждую дозу). Контролями служат инфицированные ВИЧ-1 клетки МТ-4 без добавления препарата (вместо препарата вносят такое же количество среды RPMI-1640 без добавок) и неинфицированные клетки.The study of the antiviral activity of the drug against HIV-1 is carried out on the transplantable line of sensitive cells MT-4. For infection using the supernatant of infected cells stored in liquid nitrogen, the multiplicity of infection is 0.2-0.5 infectious units per cell. A suspension of MT-4 cells with a concentration of 2.0 • 10 6 cell particles per milliliter and a viability of at least 90% is placed in the wells of a 96-well plate (Cel-Cult, England) immediately after application of the virus-containing material and the test preparations are added immediately diluted in serum-free RPMI-1640 medium to a final concentration of 0.001-100 μg / ml (three wells per dose). The controls are HIV-1 infected MT-4 cells without drug addition (instead of the drug, the same amount of RPMI-1640 medium without additives is added) and uninfected cells.
Планшет инкубируют в течение часа при 37oС для адсорбции вируса, затем клетки разводят до посевной концентрации (0,5•106 в миллилитре) питательной средой RPMI-1640 с добавлением 10% фетальной сыворотки КРС, предварительно инактивированной прогреванием при 56oС в течение 30 минут, 300 мг/мл L-глютамина и 100 мкг/мл гентамицина. Затем планшет помещают в термостат на 37oС в атмосфере 5% СО2. На 4 сутки культивирования подсчитывают концентрацию и жизнеспособность клеток методом исключения трипанового синего. В лунки планшета добавляют Твин-80 до конечной концентрации 0,1% и оставляют его на 24 часа при 4oС для инактивации ВИЧ. По полученным данным строят график зависимости прироста жизнеспособности клеток относительно контроля под действием возрастающих доз препарата (см. чертеж), т.е. определяют способность препарата защищать инфицированные клетки от цитопатогенного действия вируса (таблица). Затем проводят оценку анти-ВИЧ активности соединения с использованием количественного определения вирусспецифического белка р24 методом прямого иммуноферментного анализа, как описано в [10], и строят дозозависимую кривую, по которой рассчитывают концентрации, на 50 и 90% подавляющие прирост вирусного антигена (ID50 и ID90). Результаты представлены в таблице. На основании этих количественных показателей ингибирования можно судить об эффективности противовирусного действия препарата, заключающейся в высокой степени подавления размножения ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4 и превышающей эффективность d4T.The plate is incubated for one hour at 37 ° C to adsorb the virus, then the cells are diluted to a seed concentration (0.5 x 10 6 per milliliter) with RPMI-1640 nutrient medium with the addition of 10% fetal bovine serum pre-inactivated by heating at 56 ° C in for 30 minutes, 300 mg / ml L-glutamine and 100 μg / ml gentamicin. Then the tablet is placed in a thermostat at 37 o C in an atmosphere of 5% CO 2 . On the 4th day of cultivation, the concentration and viability of the cells are calculated by the exclusion of trypan blue. Tween-80 is added to the wells of the plate to a final concentration of 0.1% and left for 24 hours at 4 ° C. to inactivate HIV. According to the data obtained, a graph is built of the dependence of the increase in cell viability relative to the control under the influence of increasing doses of the drug (see drawing), i.e. determine the ability of the drug to protect infected cells from the cytopathogenic effect of the virus (table). Then, the anti-HIV activity of the compound is evaluated using the quantification of the virus-specific p24 protein by direct enzyme immunoassay as described in [10], and a dose-dependent curve is constructed that calculates concentrations that suppress the growth of the viral antigen by 50 and 90% (ID 50 and ID 90 ). The results are presented in the table. Based on these quantitative indicators of inhibition, one can judge the effectiveness of the antiviral effect of the drug, which consists in a high degree of suppression of the multiplication of HIV-1 in MT-4 cell culture and exceeding the efficiency of d4T.
Относительную степень защиты инфицированных клеток от гибели различными дозами препарата рассчитывают по формуле:
Защита (%) = (А-O)/(В-O)*100,
где А - % жизнеспособности инфицированных клеток в присутствии препарата на 4 сутки культивирования, В - % жизнеспособности в контроле клеток, О - % жизнеспособности инфицированных клеток без добавления препарата (контроль вируса).The relative degree of protection of infected cells from death by various doses of the drug is calculated by the formula:
Protection (%) = (A-O) / (B-O) * 100,
where A is the% viability of infected cells in the presence of the drug on the 4th day of cultivation, B is% viability in the control of cells, O is% viability of infected cells without adding the drug (virus control).
Относительную степень ингибирования репродукции вирусного белка считают по формуле:
%ингибир.= (Рх-Ро)/(Р-Ро)*100,
где Рх - концентрация белка р24 на 4 сутки культивирования в присутствии препарата, Ро - концентрация р24 после 1 часа инкубирования ВИЧ-1 с клетками без добавления препарата ("O" точка), Р - концентрация р24 на 4 сутки культивирования ВИЧ-1 в клетках без добавления препарата (контроль вируса).The relative degree of inhibition of viral protein reproduction is calculated by the formula:
% Ing. = (P-Ro) / (P-Ro) * 100,
where Px is the concentration of p24 protein on the 4th day of cultivation in the presence of the drug, Po is the concentration of p24 after 1 hour of incubation of HIV-1 with cells without adding the drug ("O" point), P is the concentration of p24 on the 4th day of cultivation of HIV-1 in cells without the addition of the drug (virus control).
Терапевтический индекс, или индекс селективности (IS), определяют как отношение концентрации препарата, токсичной для 50% клеток (CD50), к концентрации, на 50% подавляющей прирост вирусного антигена (ID50):
IS=CD50/ID50
Таким образом показано, что исследуемый препарат обладает способностью ингибировать репродукцию вируса иммунодефицита 1 типа в культуре клеток МТ-4, не оказывая токсического действия на клетки, причем противовирусная активность его превышает активность d4T. Это говорит о перспективности предлагаемого соединения для создания новых лекарственных форм, используемых в терапии СПИДа.The therapeutic index, or selectivity index (IS), is defined as the ratio of the concentration of the drug, toxic to 50% of the cells (CD 50 ), to the concentration, 50% inhibiting the growth of viral antigen (ID 50 ):
IS = CD 50 / ID 50
Thus, it was shown that the studied drug has the ability to inhibit the reproduction of
Список литературы:
1. G.J.Veal, S.Agrawal. R.A. Byrn. Synergistic inhibition of HIV-1 by an antisense oligonucleotide and nucleoside analog reverse transcriptase inhibitors. Antiviral Research 1988, 38, 63-73.List of references:
1. GJVeal, S. Agrawal. RA Byrn. Synergistic inhibition of HIV-1 by an antisense oligonucleotide and nucleoside analog reverse transcriptase inhibitors. Antiviral Research 1988, 38, 63-73.
2. H. Mitsuya, K. J. Weinhold, P.A.Furman, M.N.St.Clair, S. Nusinoff-Lehrman. , R. C. Gallo, D.Bolognesi, D.W.Barry, S. Broder. 3'-Azido-3'-deoxythymidine; an antiviral agent that inhibits the inefectivity and cytopathetic effect of human T-lymphotropic virus type III/lymphoadenopathy-associated virus in vitro. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1985, 82, 7096-7100. 2. H. Mitsuya, K. J. Weinhold, P. A. Furman, M.N. St. Clair, S. Nusinoff-Lehrman. , R. C. Gallo, D. Bolognesi, D.W. Barry, S. Broder. 3'-Azido-3'-deoxythymidine; an antiviral agent that inhibits the inefectivity and cytopathetic effect of human T-lymphotropic virus type III / lymphoadenopathy-associated virus in vitro. Proc. Nat. Acad Sci. USA 1985, 82, 7096-7100.
3. V. M.Cardona, A.I.Ayi, A.M.Aubertin, R.Guedj. Synthesis and anti-HIV activity of some novel arylphosphate and H-phosphonate derivatives of 3'-azido-2', 3'-dideoxythymidine and 2', 3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine. Antiviral Res 1999, 42(3), 189-196. 3. V. M. Cardona, A.I. Ayy, A.M. Aubertin, R. Guedj. Synthesis and anti-HIV activity of some novel arylphosphate and H-phosphonate derivatives of 3'-azido-2 ', 3'-dideoxythymidine and 2', 3'-didehydro-2 ', 3'-dideoxythymidine. Antiviral Res 1999, 42 (3), 189-196.
4. P.Herdewijn, J.Balzarini, M. A.Baba, E.De Clercq et al. 3'-Substituted 2',3'-dideoxynucleoside analogues as potential anti-HIV (HTLV/LAV) agents. J. Med. Chem. 1987, 30, 1270-1278. 4. P. Herdewijn, J. Balzarini, M. A. Baba, E. De Clercq et al. 3'-Substituted 2 ', 3'-dideoxynucleoside analogues as potential anti-HIV (HTLV / LAV) agents. J. Med. Chem. 1987, 30, 1270-1278.
5. R.F.Schinazi, R.M.Lloyd, JR., C.S.Ramanathan and E.W.Taylor. Antiviral Drug Resistance Mutation in Human Immunodeficiency Virus T-type 1 Reverse Transcriptase Occur in Specific RNA Structural Regions. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1994, 38(2), 268-274. 5. R.F.Schinazi, R.M. Lloyd, JR., C.S. Ramanathan and E.W. Taylor. Antiviral Drug Resistance Mutation in Human Immunodeficiency Virus T-
6. V. I.Avramis, R.Kwock, M.M.Solorzano, and E.Gomperts. Evidense of In Vitro Development of Drug Resistanse to Azidothymidine in T-Lymphocytic Leukemia Cell Lines (Jurkat E6-1/AZT-100) and in Pediatric Patients with HIV-1 Infection. Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes 1993, 6, 1287-1296. 6. V. I. Avramis, R. Kwock, M. M. Solorzano, and E. Gomperts. Evidense of In Vitro Development of Drug Resistanse to Azidothymidine in T-Lymphocytic Leukemia Cell Lines (Jurkat E6-1 / AZT-100) and in Pediatric Patients with HIV-1 Infection. Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes 1993, 6, 1287-1296.
7. F. P. Svinarchuk, D.A.Konevetz, O.A.Pliasunova, A.G.Pokrovsky, V.V. Vlasov. Inhibition of HIV proliferation in MT-4 cells by antisense oligonucleotide conjugated to lipophilic groups. Biochimie 1993, 75, 49-54. 7. F. P. Svinarchuk, D.A. Konevetz, O.A. Pliasunova, A.G. Pokrovsky, V.V. Vlasov. Inhibition of HIV proliferation in MT-4 cells by antisense oligonucleotide conjugated to lipophilic groups. Biochimie 1993, 75, 49-54.
8. A.G. Pokrovskii, O.A.Pliasunova, V.M.Blinov, V.V.Vlasov, F.P. Svinarchuk, T.V.Abramova, V.V.Gorn and D.A. Konevetz. Inhibition of Human Immunodeficiency Virus by Sense and Antisense Oligodeoxynucleotides. Molecular Biology 1993, 27(5), N 1, 641-644. 8. A.G. Pokrovskii, O.A. Pliasunova, V.M. Blinov, V.V. Vlasov, F.P. Svinarchuk, T.V. Abramova, V.V. Gorn and D.A. Konevetz. Inhibition of Human Immunodeficiency Virus by Sense and Antisense Oligodeoxynucleotides. Molecular Biology 1993, 27 (5),
9. Патент РФ 2144956, кл. С 12 N 7/04, опубл. 27.01.2000 г. БИ 3. 9. RF patent 2144956, cl. C 12 N 7/04, publ. 01/27/2000, BI 3.
10. Иммуноферментный анализ // под ред. Т-Т. Нго, Г. Ленхоффа. - М: Мир, - 1988. 10. Enzyme-linked immunosorbent assay // Ed. TT. Ngo, G. Lenhoff. - M: World, - 1988.
Claims (1)
ингибитор репродукции вируса иммунодефицита человека.2 ', 3'-Didehydro-2', 3'-dideoxythymidine-5 '[(ethoxycarbonyl) (ethyl) phosphonate] having the formula
human immunodeficiency virus reproduction inhibitor.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000125255A RU2188203C2 (en) | 2000-10-05 | 2000-10-05 | 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine-5'-[(ethoxy-carbonyl)(ethyl)phosphonate] as inhibitor of reproduction of human immunodeficiency virus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000125255A RU2188203C2 (en) | 2000-10-05 | 2000-10-05 | 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine-5'-[(ethoxy-carbonyl)(ethyl)phosphonate] as inhibitor of reproduction of human immunodeficiency virus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2188203C2 true RU2188203C2 (en) | 2002-08-27 |
| RU2000125255A RU2000125255A (en) | 2003-07-10 |
Family
ID=20240702
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000125255A RU2188203C2 (en) | 2000-10-05 | 2000-10-05 | 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine-5'-[(ethoxy-carbonyl)(ethyl)phosphonate] as inhibitor of reproduction of human immunodeficiency virus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2188203C2 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004111071A1 (en) * | 2003-06-16 | 2004-12-23 | Gosudarstvenny Nauchny Tsentr Virusologii I Biotekhnologii 'vektor' | 5'-aminocarbonyl-phosphonates d4t inhibitors for reproducing human immunodeficiency virus |
| WO2006015261A3 (en) * | 2004-07-27 | 2006-11-16 | Gilead Sciences Inc | Nucleoside phosphonate conjugates as anti hiv agents |
| WO2007014352A3 (en) * | 2005-07-27 | 2007-03-29 | Gilead Sciences Inc | Antiviral phosphonate conjugates for inhibition of hiv |
| US8658617B2 (en) | 2008-07-08 | 2014-02-25 | Gilead Sciences, Inc. | Salts of HIV inhibitor compounds |
| AU2011218664B2 (en) * | 2004-07-27 | 2014-08-21 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
| US8871785B2 (en) | 2003-04-25 | 2014-10-28 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral phosphonate analogs |
| US10851125B2 (en) | 2017-08-01 | 2020-12-01 | Gilead Sciences, Inc. | Crystalline forms of ethyl ((S)-((((2R,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-yl)-4-fluoro-2,5-dihydrofuran-2-yl)oxy)methyl)(phenoxy)phosphoryl(-L-alaninate |
-
2000
- 2000-10-05 RU RU2000125255A patent/RU2188203C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| P.Herdewijn и др. "3'-Substituted 2',3'-dideoxynucleosise analogues as potential anti-HIV agents", J.Med.Chem., 1987, 30, p.1270-1278. V.M.Cardona и др. "Synthesis and anti-HIV activity of some novel arylphosphate and H-phosphonate derivaties of 3'-azido-2',3'-dideoxythymidine and 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine", Antiviral Res, 1999, 42(3), p.189-196. * |
Cited By (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9139604B2 (en) | 2003-04-25 | 2015-09-22 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral phosphonate analogs |
| US8871785B2 (en) | 2003-04-25 | 2014-10-28 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral phosphonate analogs |
| WO2004111071A1 (en) * | 2003-06-16 | 2004-12-23 | Gosudarstvenny Nauchny Tsentr Virusologii I Biotekhnologii 'vektor' | 5'-aminocarbonyl-phosphonates d4t inhibitors for reproducing human immunodeficiency virus |
| EA019559B1 (en) * | 2004-07-27 | 2014-04-30 | Джилид Сайэнс, Инк. | Antiviral compounds, in particular that inhibitis hiv, pharmaceutical composition based thereon and method for inhibiting using same |
| NO20161612A1 (en) * | 2004-07-27 | 2007-04-26 | Gilead Sciences Inc | Phosphonate analogues for HIV inhibitor compounds |
| US7871991B2 (en) | 2004-07-27 | 2011-01-18 | Gilead Sciences, Inc. | Phosphonate analogs of HIV inhibitor compounds |
| AU2005267800B2 (en) * | 2004-07-27 | 2012-05-24 | Gilead Sciences, Inc. | Nucleoside phosphonate conjugates as anti HIV agents |
| US8318701B2 (en) | 2004-07-27 | 2012-11-27 | Gilead Sciences, Inc. | Phosphonate analogs of HIV inhibitor compounds |
| US8329926B2 (en) | 2004-07-27 | 2012-12-11 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
| AP2629A (en) * | 2004-07-27 | 2013-03-28 | Gilead Sciences Inc | Nucleoside phosphonate conjugates as anti HIV agents |
| US9579332B2 (en) | 2004-07-27 | 2017-02-28 | Gilead Sciences, Inc. | Phosphonate analogs of HIV inhibitor compounds |
| US8697861B2 (en) | 2004-07-27 | 2014-04-15 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
| US9457035B2 (en) | 2004-07-27 | 2016-10-04 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
| AU2011218664B2 (en) * | 2004-07-27 | 2014-08-21 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
| WO2006015261A3 (en) * | 2004-07-27 | 2006-11-16 | Gilead Sciences Inc | Nucleoside phosphonate conjugates as anti hiv agents |
| NO342571B1 (en) * | 2004-07-27 | 2018-06-18 | Gilead Sciences Inc | Phosphonate analogues for HIV inhibitor compositions |
| WO2007014352A3 (en) * | 2005-07-27 | 2007-03-29 | Gilead Sciences Inc | Antiviral phosphonate conjugates for inhibition of hiv |
| JP2009502964A (en) * | 2005-07-27 | 2009-01-29 | ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド | Antiviral phosphonate conjugates for inhibiting HIV |
| US8658617B2 (en) | 2008-07-08 | 2014-02-25 | Gilead Sciences, Inc. | Salts of HIV inhibitor compounds |
| US9381206B2 (en) | 2008-07-08 | 2016-07-05 | Gilead Sciences, Inc. | Salts of HIV inhibitor compounds |
| US9783568B2 (en) | 2008-07-08 | 2017-10-10 | Gilead Sciences, Inc. | Salts of HIV inhibitor compounds |
| US8951986B2 (en) | 2008-07-08 | 2015-02-10 | Gilead Sciences, Inc. | Salts of HIV inhibitor compounds |
| US10851125B2 (en) | 2017-08-01 | 2020-12-01 | Gilead Sciences, Inc. | Crystalline forms of ethyl ((S)-((((2R,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-yl)-4-fluoro-2,5-dihydrofuran-2-yl)oxy)methyl)(phenoxy)phosphoryl(-L-alaninate |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Coates et al. | The separated enantiomers of 2'-deoxy-3'-thiacytidine (BCH 189) both inhibit human immunodeficiency virus replication in vitro | |
| US4788181A (en) | 5-substituted-2',3'-dideoxycytidine compounds with anti-HTLV-III activity | |
| CA1336820C (en) | Fluorinated nucleosides and process for treating retrovirus infections therewith | |
| Kim et al. | Potential anti-AIDS drugs. 2', 3'-Dideoxycytidine analogs | |
| McGuigan et al. | Synthesis and anti-HIV activity of some haloalkyl phosphoramidate derivatives of 3′-azido-3′-deoxythymidine (AZT): potent activity of the trichloroethyl methoxyalaninyl compound | |
| CA2477795A1 (en) | Nucleoside 5'-monophosphate mimics and their prodrugs | |
| EP1589028A2 (en) | Modified oligonucleotides, their preparation and their use | |
| US4859768A (en) | Derivatives of 2', 5'-oligoadenylate and antiviral uses thereof | |
| McGuigan et al. | Kinase bypass: a new strategy for anti-HIV drug design | |
| Busso et al. | Nucleotide dimers suppress HIV expression in vitro | |
| RU2188203C2 (en) | 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine-5'-[(ethoxy-carbonyl)(ethyl)phosphonate] as inhibitor of reproduction of human immunodeficiency virus | |
| WO2003053989A1 (en) | Masked phosphate containing nucleoside derivatives and their use as antivirals | |
| US6281201B1 (en) | Base-modified derivatives of 2′,5′-oligoadenylate and antiviral uses thereof | |
| AU732120B2 (en) | Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis | |
| US5700785A (en) | 3'-deoxy or 3'-O-substituted-2',5'-oligoadenylates as antiviral agents | |
| KR0141684B1 (en) | Therapeutic Use of 2`, 5`-oligoadenylate Derivatives | |
| Kumar et al. | Synthesis and biological evaluation of some cyclic phosphoramidate nucleoside derivatives | |
| AU609099B2 (en) | Methods of treating acquired immune deficiency syndrome (AIDS) caused by human immunodeficiency virus (HIV) | |
| Routledge et al. | Synthesis, bioactivation and anti-HIV activity of 4-acyloxybenzyl bis (nucleosid-5′-yl) phosphates | |
| DE69529680T2 (en) | 2 ', 5'-PHOSPHORTHIOAT / PHOSPHODIESTER OLIGOADENYLATE AND THEIR ANTIVIRAL USE | |
| Gosselin et al. | 5′-Hydrogenphosphonates of anti-HIV nucleoside analogues revisited: controversial mode of action | |
| Rosowsky et al. | Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication by phosphonoformate esters of 3′-azido-3′-deoxythymidine | |
| US5153180A (en) | Fluorinated nucleosides and process for treating retrovirus infections therewith | |
| RU2183213C2 (en) | Modified nucleoside-5'-triphosphates as antiviral agents | |
| US4654326A (en) | Inhibition of plant viruses with oligonucleotides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20141006 |