RU2186388C2 - Способ количественного определения рнк вируса гепатита с в сыворотке крови - Google Patents
Способ количественного определения рнк вируса гепатита с в сыворотке крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2186388C2 RU2186388C2 RU2000118422A RU2000118422A RU2186388C2 RU 2186388 C2 RU2186388 C2 RU 2186388C2 RU 2000118422 A RU2000118422 A RU 2000118422A RU 2000118422 A RU2000118422 A RU 2000118422A RU 2186388 C2 RU2186388 C2 RU 2186388C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- hepatitis
- standard
- blood serum
- rna
- Prior art date
Links
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title abstract 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 claims description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 claims description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 claims description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 11
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100169883 Arabidopsis thaliana DCL1 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- KBDIEUYACKKLIJ-UHFFFAOYSA-N 2-isocyanatoguanidine Chemical compound NC(=N)NN=C=O KBDIEUYACKKLIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к методам определения количества вирусных геномов, присутствующих в образце крови. Разработан количественный стандарт для оценки количества геномов вируса гепатита С в образце сыворотки крови больных. Разработан способ количественной оценки РНК вируса гепатита С в сыворотке крови с использованием в качестве внутреннего стандарта ретровирусного вектора, содержащего модифицированную последовательность вируса гепатита С, используемую для амплификации в ПЦР, и селективный маркер. Предлагаемый ретровирусный стандарт получают из культуры пакующих клеток, просто собирая среду культивирования, в которой росли клетки. Технический результат: наличие в векторе гена устойчивости к пуромицину позволяет определять титр вирусных частиц стандарта в экспериментах по инфицированию клеточных культур. Получаемые вирусные частицы стандарта не патогенны для человека и животных. 1 ил.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к методам определения количества вирусных геномов, присутствующих в образце крови. Нами разработан количественный стандарт для оценки количества геномов гепатита С в образце сыворотки крови больных.
Сегодня для количественной оценки содержания вирусных нуклеиновых кислот применяется конкурентный ПЦР с использованием стандарта. Внутренний стандарт ДНК или РНК амплидифицируется с теми же праймерами, что и ДНК- или РНК-мишень, но включает или делецию, или вставку, так что продукты, полученные при амплификации стандарта и мишени, отличаются. Изменяющиеся известные количества внутреннего стандарта добавляются к равным аликвотам образца, содержащим неизвестные количества мишени. Внутренний стандарт и мишень конкурируют в равной мере за связывание с праймерами и амплификацию в ПЦР. Эффективность аппликации в данном случае будет одинаковой для двух матриц. Равные количества продуктов будут амплифицированы в том случае, когда начальные концентрации матриц равны. Отношение наработанных в процессе ПЦР продуктов может быть определено экспериментально и эквивалентная точка может быть вычислена.
Самая удачная на наш взгляд модификация способа измерения количества вирусных нуклеиновых кислот с использованием в качестве внутреннего стандарта мутантных вирусов описана авторами Natarajan; Venkatachala, Germantown, MD Salzman; Norman P, Potomas, MD. Patent US 77661.
Способ, предложенный Natarajan; Venkatachala, Germantown, MD Salzman; Norman P, Potomas, MD.
Авторами предложен способ измерения вирусных нуклеиновых кислот в любом образце с использованием в качестве внутреннего контроля инфекционного мутантного вируса, который имеет последовательность-метку в районе генома, используемом для амплификации. Разведения этого вируса добавляются к равным аликвотам образца для измерения. Нуклеиновые кислоты выделяются, амплифицируются и определяются количественно. Этот способ позволяет избежать ошибок, возникающих при выделении нуклеиновых кислот.
В предлагаемом нами изобретении в отличие от прототипа внутренний стандарт сконструирован на основе ретровирусного вектора, в который клонирован модифицированный участок генома вируса гепатита С, используемый для амплификации, что дает нам следующие преимущества: наличие в векторе гена устойчивости к пуромицину позволяет определять титр вирусных частиц стандарта в экспериментах по инфицированию клеточных культур; препарат дефектного вируса, не способного к репликации, получают из культуры пакующих клеток, просто собирая среду культивирования, в которой росли клетки; получаемые вирусные частицы стандарта не патогенны для человека и животных.
Описание предлагаемого способа количественного определения РНК вируса гепатита С в сыворотках крови больных.
Конструирование внутреннего стандарта.
В ретровирусный вектор hBabe в сайт EcoRl вставлена последовательность, содержащая модифицированный фрагмент кДНК вируса гепатита С (1100 н.п.), используемый для амплификации в ПЦР с теми же праймерами, что и исходный фрагмент вируса гепатита С. Модифицированный фрагмент кДНК вируса гепатита С имеет вставку 628 н.п. в положении 340 н.р.(Крnl). Полученная конструкция (ДНК-матрица) была трансфектирована в мышиную пакующую линию PG 13 методом электропорации. Клеточная линия PG 13 культивировалась в среде DMEM с 10% FBS. После селекции на среде, содержащей 4 мкг/мл пуромицина, проводилось клонирование методом лимитирующих разведений и отобран клон. Культуральная сред этого клона, содержащая упакованную в вирусные частицы РНК-матрицу, была собрана, разлита по аликвотам, заморожена при -70oС и использовалась для проведения реакции обратной транскрипции и ПЦР.
Праймеры.
Для проведения обратной транскрипции и ПЦР использовали праймеры (2):
SU1 5'(GTG CTT GCG AGT GC 3'
ASU1 5'(AGG GGTR TCG ATG AC 3'
SU2 5'(GGA GGT CTC GTA GAC CGT G 3'
AS1b 5'(GAG CCA TCC TGC CCA CCC CA 3'
AS2a 5'CCA AGA GGG ACG GGA FCC TC 3'
AS1a 5'(GGG ATA GGC TGA CGT CTA CC 3'
AS3a 5'(ACC GTT CAG AAG TTT TAC GC 3'
(G/A)=R
Выделение РНК
Сыворотки крови, содержащей вирус гепатита С, хранятся при -70oС. Аликвоты (25 мкл) серийных разведений супернатанта были добавлены к 25 мкл сыворотки крови и лизированы 450 мкл раствора 5,5 М гуанидин изоциоцианат, 0,3 М натрий ацетат, об/об фенол, насыщенный 0,1 М Трис. РН 6,5Б транспортная РНК, 25 мкг/мл. РНК высаживалась добавлением равного объема изопропанола. После центрифугирования осадок отмывали 70% этанолом и растворяли в 25 мкл деионизованной воды.
SU1 5'(GTG CTT GCG AGT GC 3'
ASU1 5'(AGG GGTR TCG ATG AC 3'
SU2 5'(GGA GGT CTC GTA GAC CGT G 3'
AS1b 5'(GAG CCA TCC TGC CCA CCC CA 3'
AS2a 5'CCA AGA GGG ACG GGA FCC TC 3'
AS1a 5'(GGG ATA GGC TGA CGT CTA CC 3'
AS3a 5'(ACC GTT CAG AAG TTT TAC GC 3'
(G/A)=R
Выделение РНК
Сыворотки крови, содержащей вирус гепатита С, хранятся при -70oС. Аликвоты (25 мкл) серийных разведений супернатанта были добавлены к 25 мкл сыворотки крови и лизированы 450 мкл раствора 5,5 М гуанидин изоциоцианат, 0,3 М натрий ацетат, об/об фенол, насыщенный 0,1 М Трис. РН 6,5Б транспортная РНК, 25 мкг/мл. РНК высаживалась добавлением равного объема изопропанола. После центрифугирования осадок отмывали 70% этанолом и растворяли в 25 мкл деионизованной воды.
Обратная транскрипция
Собирают рабочую смесь и инкубируют 1 час при 42oС.
Собирают рабочую смесь и инкубируют 1 час при 42oС.
5 мкл раствора РНК
5 мкл 5•RT буфер (250 mMTris, pH 8.3, 375 mM KCl, 15 mM MgCl2)
2,5 мкл 2 mM dNTR
2,5 мкл 1 мкМ праймер ASU1
2,5 мкл 50 mM DTT
5 ед. RNAsе ингибитор
10 ед. М-МLV обратная транскриптаза
деионизованная вода до 25 мкл.
5 мкл 5•RT буфер (250 mMTris, pH 8.3, 375 mM KCl, 15 mM MgCl2)
2,5 мкл 2 mM dNTR
2,5 мкл 1 мкМ праймер ASU1
2,5 мкл 50 mM DTT
5 ед. RNAsе ингибитор
10 ед. М-МLV обратная транскриптаза
деионизованная вода до 25 мкл.
ПЦР.
Готовят рабочую смесь для поставки двухэтапной полимеразной цепной реакции.
1 этап.
2,5 мкл 10•буфер (100 mMTris, pH 8.3, 50 mM KCl, 20 mM MgCl2, 40% формамид
2,5 мкл 2 mM dNTR
2,5 мкл 1 мкМ праймер SU1, ASU1
5 ед. TAQ полимераза
деионизованная вода до 25 мкл.
2,5 мкл 2 mM dNTR
2,5 мкл 1 мкМ праймер SU1, ASU1
5 ед. TAQ полимераза
деионизованная вода до 25 мкл.
1 этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме:
94oС - 30 с
42oС - 60 с
72oС - 45 с
25 циклов
2 этап.
94oС - 30 с
42oС - 60 с
72oС - 45 с
25 циклов
2 этап.
2,5 мкл 10•буфер (100 mMTris, pH 8.3, 50 mM KCl, 20 mM MgCl2, 40% формамид
2,5 мкл 2 mM dNTR
2,5 мкл 1 мкМ праймер SU2, AS1a, AS1b, AS2a, AS3a
5 ед. TAQ полимераза
деионизованная вода до 25 мкл.
2,5 мкл 2 mM dNTR
2,5 мкл 1 мкМ праймер SU2, AS1a, AS1b, AS2a, AS3a
5 ед. TAQ полимераза
деионизованная вода до 25 мкл.
2 этап реакции амплификации проводят в программируемом термостате при следующем температурном режиме:
94oС - 30 с
58oС - 60 с
72oС - 45 с
25 циклов
Анализ ПЦР-продуктов проводился с помощью электрофореза в агарозном геле, содержащем бромистый этидий.
94oС - 30 с
58oС - 60 с
72oС - 45 с
25 циклов
Анализ ПЦР-продуктов проводился с помощью электрофореза в агарозном геле, содержащем бромистый этидий.
Определение титра вирусных частиц.
К преимуществам предлагаемого внутреннего стандарта относится возможность оценки титра вирусных частиц в супернатанте по количеству колоний, выросших после инфицирования клеточной культуры на селективной среде, так как ретровирусный вектор рBabe обеспечивает трансформированным клеткам устойчивость к пуромицину.
Ретровирусный препарат получают из культуры пакующих клеток просто собирая среду культивирования, в которой росли клетки. Клеточные обломки удаляют центрифугированием. Инфицированные клетки высвобождают вирусные частицы наиболее активно в экспоненциальной фазе роста. Максимальное содержание вируса в среде достигается на стадии, непосредственно предшествующей формированию слитного монослоя. Когда монослой сформировался на 80-90%, клетки помещают в свежую среду и инкубируют еще 12-24 часа, после чего собирают вирус.
Инфицирование клеток-мишеней.
1. Клетки высеваются в количестве 400000 на : см-чашки за один день до инфицирования. Количество чашей определяется числом предполагаемых разведений вирусного препарата.
2. Из чашек удаляется культуральная среда и заливается 2 мл свежей среды, содержащей определенное количество вируса и 8 мкг/мл полибрена.
3. Чашка помещается в инкубатор на 2 часа.
4. Из чашек удаляется среда, содержащая полибрен, и наливается 5 мл свежей среды. Клетки оставляются при 37oС до рассева на 24 часа.
5. Клетки помещаются в среду, содержащую пуромицин.
6. После 7-10 дней селекции подсчитывают количество пуромицинустойчивых колоний, возникших в результате инфекции. Титр препарата определяют как количество колониеобразующих единиц в 1 мл вирусной суспензии.
Получаемый этим методом титр вирусных частиц в супернананте соответствовал 1000000/мл.
Пример определения количества РНК вируса гепатита С в сыворотке больного приведен на чертеже.
Продукты амплификации фрагмента РНК вируса гепатита С и внутреннего стандарта имеют размеры 315 н.п. и 943 н.п. соответственно. Дорожка 2: количества продуктов амплификации двух матриц равны (см. чертеж). Исходя из этого, количество РНК вируса гепатита С в сыворотке данного больного равно 20000 копий/мл.
Список литературы
1. Natarajan; Venkatachala, Germantown, MD Salzman, Norman P.Potomas, MD.
1. Natarajan; Venkatachala, Germantown, MD Salzman, Norman P.Potomas, MD.
Internflly controlled virion nucleic acid amplification reaction for quantitation of virion nucleic acid. US Patent US 6077661 (2000).
2. Судариков А. Б. , Огрель О.Д., Способ выявления вируса гепатита С в сыворотке крови человека. Патент РФ 2150505 (2000).
Claims (1)
- Способ оценки количества РНК вируса гепатита С в сыворотке крови методом ПЦР с использованием внутреннего стандарта, отличающийся тем, что в качестве внутреннего стандарта использовали ретровирусные частицы, полученные на основе ретровирусного вектора рBabe, в сайт EcoRl которого вставили последовательность, содержащую модифицированный фрагмент кДНК вируса гепатита С (1100 н. п. ), имеющий вставку 628 н. п. в положении 340 н. п. (Крnl), после чего полученную ДНК-матрицу трансфектировали методом электропорации в мышиную пакующую линию PG13 и культивировали, затем в среде, содержащей пуромицин, отбирали клон, культивировали его, культуральную среду, содержащую РНК-матрицу, упакованную в вирусные частицы, собирали и использовали для вычисления титра вирусных частиц стандарта после инфицирования восприимчивых клеток-мишеней серийными разведениями вируса.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000118422A RU2186388C2 (ru) | 2000-07-13 | 2000-07-13 | Способ количественного определения рнк вируса гепатита с в сыворотке крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000118422A RU2186388C2 (ru) | 2000-07-13 | 2000-07-13 | Способ количественного определения рнк вируса гепатита с в сыворотке крови |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2186388C2 true RU2186388C2 (ru) | 2002-07-27 |
| RU2000118422A RU2000118422A (ru) | 2003-07-27 |
Family
ID=20237688
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000118422A RU2186388C2 (ru) | 2000-07-13 | 2000-07-13 | Способ количественного определения рнк вируса гепатита с в сыворотке крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2186388C2 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2511029C2 (ru) * | 2012-07-27 | 2014-04-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ Escherichia coli TG1(pRVMoscow3253G-L) ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ НАБОРА ПЦР-СТАНДАРТОВ И НАБОР ПЦР-СТАНДАРТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ШТАММА ВИРУСА БЕШЕНСТВА "Москва 3253" В РАБИЧЕСКОМ АНТИГЕНЕ |
| US11385143B2 (en) | 2015-08-10 | 2022-07-12 | Essenlix Corporation | Bio/chemical assay devices and methods for simplified steps, small samples, accelerated speed, and ease-of-use |
| US11543408B2 (en) | 2015-09-14 | 2023-01-03 | Essenlix Corporation | Device and system for analyzing a sample, particularly blood, as well as methods of using the same |
| RU2810819C2 (ru) * | 2015-09-14 | 2023-12-28 | Эссенликс Корп. | Устройство и система для анализа образца, в частности крови, а также способы их применения |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| WO1991014779A1 (fr) * | 1990-03-28 | 1991-10-03 | Mitsui Toatsu Chemicals, Incorporated | Diagnostic du virus de l'hepatite |
| RU2130967C1 (ru) * | 1997-10-07 | 1999-05-27 | Научно-исследовательский институт вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН | Штамм virus hepatitis c, д-1, для приготовления диагностических и профилактических препаратов |
| RU2134871C1 (ru) * | 1998-12-01 | 1999-08-20 | Федоров Николай Алексеевич | Способ подготовки биологического материала для пцр генамплификационной диагностики |
| RU2150505C1 (ru) * | 1998-04-16 | 2000-06-10 | Гематологический научный центр РАМН | Способ выявления вируса гепатита с в сыворотке крови человека |
| US6077661A (en) * | 1994-06-10 | 2000-06-20 | Georgetown University | Internally controlled virion nucleic acid amplification reaction for quantitation of virion and virion nucleic acid |
-
2000
- 2000-07-13 RU RU2000118422A patent/RU2186388C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| US4683202B1 (ru) * | 1985-03-28 | 1990-11-27 | Cetus Corp | |
| WO1991014779A1 (fr) * | 1990-03-28 | 1991-10-03 | Mitsui Toatsu Chemicals, Incorporated | Diagnostic du virus de l'hepatite |
| US6077661A (en) * | 1994-06-10 | 2000-06-20 | Georgetown University | Internally controlled virion nucleic acid amplification reaction for quantitation of virion and virion nucleic acid |
| RU2130967C1 (ru) * | 1997-10-07 | 1999-05-27 | Научно-исследовательский институт вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН | Штамм virus hepatitis c, д-1, для приготовления диагностических и профилактических препаратов |
| RU2150505C1 (ru) * | 1998-04-16 | 2000-06-10 | Гематологический научный центр РАМН | Способ выявления вируса гепатита с в сыворотке крови человека |
| RU2134871C1 (ru) * | 1998-12-01 | 1999-08-20 | Федоров Николай Алексеевич | Способ подготовки биологического материала для пцр генамплификационной диагностики |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2511029C2 (ru) * | 2012-07-27 | 2014-04-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ Escherichia coli TG1(pRVMoscow3253G-L) ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ НАБОРА ПЦР-СТАНДАРТОВ И НАБОР ПЦР-СТАНДАРТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ШТАММА ВИРУСА БЕШЕНСТВА "Москва 3253" В РАБИЧЕСКОМ АНТИГЕНЕ |
| US11385143B2 (en) | 2015-08-10 | 2022-07-12 | Essenlix Corporation | Bio/chemical assay devices and methods for simplified steps, small samples, accelerated speed, and ease-of-use |
| US12044603B2 (en) | 2015-08-10 | 2024-07-23 | Essenlix Corporation | Rapid bio/chemical assay |
| US11543408B2 (en) | 2015-09-14 | 2023-01-03 | Essenlix Corporation | Device and system for analyzing a sample, particularly blood, as well as methods of using the same |
| RU2810819C2 (ru) * | 2015-09-14 | 2023-12-28 | Эссенликс Корп. | Устройство и система для анализа образца, в частности крови, а также способы их применения |
| US12276660B2 (en) | 2015-09-14 | 2025-04-15 | Essenlix Corporation | Device and system for analyzing a sample, particularly blood, as well as methods of using the same |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sykes et al. | Detection of feline calicivirus, feline herpesvirus 1 and Chlamydia psittaci mucosal swabs by multiplex RT-PCR/PCR | |
| Steele et al. | Reovirus 3 not detected by reverse transcriptase—mediated polymerase chain reaction analysis of preserved tissue from infants with cholestatic liver disease | |
| KR100386738B1 (ko) | 씨피45 에이치피아이브이-3 균주를 기재로 하는 생균 약독백신 및 상기 백신 내의 약독화를 확인하는 방법 | |
| Youil et al. | Comparative study of influenza virus replication in Vero and MDCK cell lines | |
| Brechtbuehl et al. | A rapid real-time quantitative polymerase chain reaction for hepatitis B virus | |
| Holland et al. | Evolution of multiple genome mutations during long-term persistent infection by vesicular stomatitis virus | |
| Secchiero et al. | Quantitative PCR for human herpesviruses 6 and 7 | |
| RAMOS et al. | Long-range RNA interactions between structural domains of the aphthovirus internal ribosome entry site (IRES) | |
| Lee et al. | Localisation of swine hepatitis E virus in experimentally infected pigs | |
| Jonassen et al. | Detection of all serotypes of human astrovirus by the polymerase chain reaction | |
| CN108342362A (zh) | 一种用于扩增重组犬腺病毒cav2的稳定细胞系mdck及其构建方法 | |
| Xu et al. | Isolation and characterization of vaccine-derived polioviruses, relevance for the global polio eradication initiative | |
| JP2000514666A (ja) | Ｒｎａおよびｄｎａの保存を目的とする培養ヒト細胞の凍結乾燥 | |
| US7582740B2 (en) | Methods and kits for detecting SARS-associated coronavirus | |
| CN114196786A (zh) | 禽腺病毒4型、8型双重荧光定量pcr快速检测试剂盒及方法 | |
| RU2186388C2 (ru) | Способ количественного определения рнк вируса гепатита с в сыворотке крови | |
| Myers et al. | An amino-terminal domain of the Sendai virus nucleocapsid protein is required for template function in viral RNA synthesis | |
| CN112852745B (zh) | Hdac3基因敲除的bhk-21细胞系及其构建方法和应用 | |
| CN113322282A (zh) | 稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1及其构建方法和应用 | |
| Xin-Qin et al. | Expression of IFN-λ1 from Congjiang pigs and its effect on anti-PRRSV proliferation | |
| JP5999817B2 (ja) | 外因性の内部陽性対照 | |
| Ryazantsev et al. | An efficient diagnostic method for the identification of potato viral pathogens | |
| KR101540717B1 (ko) | 에볼라 및 마버그 바이러스 검출용 프로브 및 프라이머 세트를 이용한 원 스텝 실시간 역전사 중합효소 연쇄반응 방법 | |
| ES2275699T3 (es) | Produccion de un papilomavirus humano(hpv) quimerico. | |
| CN115873988B (zh) | 一种用于筛选无mcrv种蟹的荧光定量rt-pcr检测试剂盒及检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100714 |