RU2182495C1 - Viral vaccine against classic hog cholera - Google Patents
Viral vaccine against classic hog cholera Download PDFInfo
- Publication number
- RU2182495C1 RU2182495C1 RU2001112033A RU2001112033A RU2182495C1 RU 2182495 C1 RU2182495 C1 RU 2182495C1 RU 2001112033 A RU2001112033 A RU 2001112033A RU 2001112033 A RU2001112033 A RU 2001112033A RU 2182495 C1 RU2182495 C1 RU 2182495C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- strain
- vaccine
- sinlac
- csf
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении средств для специфической профилактики классической чумы свиней (КЧС). The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology and can be used in the manufacture of agents for the specific prophylaxis of classical swine fever (CSF).
КЧС - тяжелое, часто смертельное, заразное вирусное заболевание свиней, характеризующееся многообразием клинических форм и проявлений, а именно лихорадкой, поражением кровеносной и кроветворной систем (явления геморрагической септицемии), крупозным воспалением легких и крупозно-дифтеритическим воспалением кишечника. Возбудителем заболевания является вирус, принадлежащий к роду Pestivirus семейства Flaviviridae. CoES is a severe, often fatal, infectious viral disease of pigs, characterized by a variety of clinical forms and manifestations, namely fever, damage to the circulatory and hematopoietic systems (hemorrhagic septicemia), lobar pneumonia and lobar-diphtheria inflammation of the intestines. The causative agent of the disease is a virus belonging to the genus Pestivirus of the family Flaviviridae.
В настоящее время КЧС по актуальности занимает одно из первых мест в инфекционной патологии свиней и считается для стран с интенсивной системой свиноводства одной из экономически важных болезней, а в ветеринарно-санитарном плане - одной из наиболее трудно ликвидируемых эпизоотий. At present, CoES is one of the first in the infectious diseases of pigs and is considered one of the economically important diseases for countries with an intensive pig breeding system, and in the veterinary-sanitary plan it is one of the most difficultly eliminated epizootics.
КЧС длительное время регистрируется в России. За прошедшие годы наблюдалось несколько периодов активизации эпизоотического процесса этой болезни с последующим снижением ее интенсивности. Наблюдается широкое географическое распространение болезни. КЧС регистрируется практически во всех экономических регионах страны (от Калининграда до Дальнего Востока и от Архангельской области до Краснодарского края). Хотя пути передачи и распространения инфекции хорошо известны, практический опыт показывает, что осуществить комплекс защиты страны и хозяйств от заноса возбудителя КЧС, а тем более ликвидировать возникшую эпизоотию чрезвычайно трудно. CoES for a long time registered in Russia. Over the years, there have been several periods of activation of the epizootic process of this disease with a subsequent decrease in its intensity. There is a wide geographical spread of the disease. CoES is registered in almost all economic regions of the country (from Kaliningrad to the Far East and from the Arkhangelsk region to the Krasnodar Territory). Although the transmission and spread of infection are well known, practical experience shows that it is extremely difficult to implement a complex of protection for the country and households against the introduction of the pathogen of CoES, and even more so to eliminate the epizootic that has arisen.
Для специфической профилактики свиней применяют живые лапинизированные или культуральные вакцины из аттенуированных штаммов вируса КЧС. For specific prophylaxis of pigs, live lapinized or culture vaccines from attenuated CSF virus strains are used.
Известна вирусвакцина против КЧС, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "Гудзон" Flavivirus suis "Hudson" вируса КЧС, репродуцированный в организме кролика, и защитную среду, взятые в эффективном количестве (1, 2). A virus-vaccine against CSF is known, containing virus-containing material from the attenuated Hudson strain Flavivirus suis "Hudson" of the CSF virus reproduced in the rabbit body, and a protective medium taken in an effective amount (1, 2).
Известна вирусвакцина против КЧС, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "ГМ-94" вируса КЧС, репродуцированный в организме кролика, и защитную среду, взятые в эффективном количестве (3). Known virus vaccine against CSF, containing virus-containing material from the attenuated strain "GM-94" of CSF virus, reproduced in the rabbit body, and a protective medium taken in an effective amount (3).
Известна вирусвакцина против КЧС, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "ЛК-ВНИИВВиМ" вируса КЧС, репродуцированный в первичной культуре клеток тестикул ягнят, и защитную среду, взятые в эффективном количестве (4). Known virus vaccine against CSF, containing virus-containing material from an attenuated strain of LK-VNIIIVViM of the CSF virus, reproduced in the primary cell culture of testicles of lambs, and a protective medium taken in an effective amount (4).
Известна вирусвакцина против КЧС, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "ЛК-К" вируса КЧС, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток РК-15, и защитную среду, взятые в эффективном количестве (5). Known virus vaccine against CSF, containing virus-containing material from the attenuated strain "LK-K" of the CSF virus, reproduced in transplantable cell culture PK-15, and a protective medium taken in an effective amount (5).
Известна вирусвакцина против КЧС, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "КС" вируса КЧС, репродуцированный в чувствительной биологической системе, и защитную среду, взятые в эффективном количестве (6). Known virus vaccine against CSF, containing virus-containing material from an attenuated strain "CS" of the CSF virus, reproduced in a sensitive biological system, and a protective environment, taken in an effective amount (6).
Общими недостатками известных препаратов являются повышенная реактогенность для привитых животных или низкая иммуногенная активность. Common disadvantages of known drugs are increased reactogenicity for vaccinated animals or low immunogenic activity.
В основе многих вакцин против КЧС лежит китайский аттенуированный лапинизированный штамм вируса КЧС. Он нашел широкое применение в мировой практике вакцинации свиней против КЧС (7). The basis of many vaccines against CSF is the Chinese attenuated lapinized strain of the virus CoES. It has found wide application in the world practice of vaccinating pigs against CSF (7).
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вирусвакцина против КЧС, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "Chinese" вируса КЧС, репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 3,0-3,5 lg БОЕ50/см3, и защитную среду, взятые в эффективном количестве.The closest to the invention according to the set of essential features is a vaccine against CSF, containing virus-containing material from an attenuated strain of "Chinese" virus of CSF, reproduced in the rabbit body with biological activity of 3.0-3.5 lg PFU 50 / cm 3 and a protective environment, taken in effective amounts.
Штамм "Chinese" вируса КЧС имеет следующие характеристики:
- обладает слабой реактогенностью для свиней всех возрастов, включая новорожденных поросят и супоросных свиноматок;
- не передается неиммунным животным при совместном их содержании с иммунными и не реверсирует при пассировании на свиньях (6-12 пассажей);
- не персистирует у привитых свиней, а после экспериментального заражения последних вирулентный вирус не выделяется из организма вакцинированных животных;
- хорошо размножается (до 3,0-3,5 lg БОЕ50/см3) только в тканях кролика при введении вируса животному или в тканевых культурах клеток почки эмбриона кролика (8).The strain "Chinese" of the virus CoES has the following characteristics:
- has a weak reactogenicity for pigs of all ages, including newborn piglets and pregnant sows;
- it is not transmitted to non-immune animals when kept together with immune animals and does not reverse when passivated in pigs (6-12 passages);
- does not persist in vaccinated pigs, and after experimental infection of the latter, the virulent virus does not stand out from the body of vaccinated animals;
- multiplies well (up to 3.0-3.5 lg PFU 50 / cm 3 ) only in rabbit tissues with the introduction of the virus to an animal or in tissue cultures of kidney cells of a rabbit embryo (8).
Существенным недостатком вирусвакцины-прототипа является ее низкая антигенная и иммуногенная активность по причине низкого уровня накопления вируса в тканях кролика. A significant disadvantage of the prototype virus vaccine is its low antigenic and immunogenic activity due to the low level of virus accumulation in rabbit tissues.
В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вирусвакцины на основе нового производственного аттенуированного штамма вируса КЧС, обладающего широким антигенным спектром действия, высокой биологической и иммуногенной активностью и обеспечивающего изготовление эффективной вирусвакцины для надежной защиты животных от вируса, циркулирующего на территории Российской Федерации. The objective of the present invention was to develop a virus vaccine based on a new production attenuated strain of the CSF virus, which has a wide antigenic spectrum of action, high biological and immunogenic activity, and ensures the production of an effective virus vaccine to reliably protect animals from the virus circulating in the Russian Federation.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в повышении антигенной и иммуногенной активности вирусвакцины. The technical result from the use of the invention is to increase the antigenic and immunogenic activity of the virus vaccine.
Указанный технический результат достигнут созданием вирусвакцины против КЧС, охарактеризованной следующей совокупностью признаков:
1) вирусвакцина против КЧС;
2) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС;
3) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС, репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 4,5-5,0 lg ИД50/2 см3;
4) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС взят в эффективном количестве;
5) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС взят в количестве 60-80 мас.%;
6) защитная среда;
7) защитная среда содержит 50% раствор сахарозы, 10% раствор желатина и 20% раствор гидролизата лактальбумина (ГЛА), взятые в соотношении 1:0,5:2,5 соответственно;
8) защитная среда взята в эффективном количестве;
9) защитная среда взята в количестве 20-40 мас.%;
10) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС и защитная среда взяты в эффективном соотношении;
11) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК", репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 4,5-5,0 lg ИД50/см3, и защитная среда взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащий материал - 60-80
Защитная среда - До 100
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:
1) вирусвакцина против КЧС;
2) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС;
3) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС взят в эффективном количестве;
4) защитная среда;
5) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС и защитная среда взяты в эффективном соотношении.The specified technical result was achieved by the creation of a virus vaccine against CSF, characterized by the following set of features:
1) virus vaccine against CSF;
2) virus-containing material from the attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus;
3) the virus-containing material from the attenuated strain "SINLAK" virus CSF, rabbit reproduced in the body with the
4) virus-containing material from the attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus is taken in an effective amount;
5) virus-containing material from attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus is taken in an amount of 60-80 wt.%;
6) protective environment;
7) the protective medium contains 50% sucrose solution, 10% gelatin solution and 20% lactalbumin hydrolyzate solution (GLA), taken in a ratio of 1: 0.5: 2.5, respectively;
8) the protective environment is taken in an effective amount;
9) the protective environment is taken in an amount of 20-40 wt.%;
10) virus-containing material from the attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus and the protective medium are taken in an effective ratio;
11) virus-containing material from the attenuated SINLAC strain reproduced in the rabbit body with biological activity of 4.5-5.0 lg ID 50 / cm 3 and the protective medium are taken in the ratio, wt.%:
Virus-containing material - 60-80
Protective environment - Up to 100
The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1) virus vaccine against CSF;
2) virus-containing material from the attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus;
3) the virus-containing material from the attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus is taken in an effective amount;
4) protective environment;
5) virus-containing material from the attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus and the protective medium are taken in an effective ratio.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС, репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 4,5-5,0 lg ИД50/2 см3;
2) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС взят в количестве 60-80 мас.%;
3) защитная среда содержит 50% раствор сахарозы, 10% раствор желатина и 20% раствор ГЛА, взятые в соотношении 1:0,5:2,5 соответственно;
4) защитная среда взята в количестве 20-40 мас.%;
5) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС, репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 4,5-5,0 lg ИД50/2 см3, и защитная среда взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащий материал - 60-80
Защитная среда - До 100
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1) вирусвакцина против КЧС;
2) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма вируса КЧС;
3) защитная среда.The present invention is also characterized by other features expressing specific forms of execution or special conditions for its use:
1) the virus-containing material from the attenuated strain "SINLAK" virus CSF, rabbit reproduced in the body with the
2) virus-containing material from the attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus is taken in an amount of 60-80 wt.%;
3) the protective medium contains 50% sucrose solution, 10% gelatin solution and 20% GLA solution, taken in a ratio of 1: 0.5: 2.5, respectively;
4) the protective environment is taken in an amount of 20-40 wt.%;
5) The virus-containing material from the attenuated strain "SINLAK" CSF virus reproduced in the body with the biological activity of the
Virus-containing material - 60-80
Protective environment - Up to 100
The signs of the invention, characterizing the proposed vaccine and coinciding with the signs of the prototype, including the generic concept, reflecting the purpose, are:
1) virus vaccine against CSF;
2) virus-containing material from an attenuated strain of the CSF virus;
3) protective environment.
По сравнению с вирусвакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вирусвакцины является то, что она содержит эффективное количество вируссодержащего материала из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС. Compared with the prototype virus vaccine, an essential distinguishing feature of the proposed virus vaccine is that it contains an effective amount of virus-containing material from the attenuated strain SINLAC of the CSF virus.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1) вируссодержащий материал из штамма "СИНЛАК" вируса классической чумы свиней репродуцирован в организме кролика с биологической активностью 4,5-5,0 lg ИД50/см3;
2) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС взят в количестве 60-80 мас.%;
3) защитная среда в эффективном количестве;
4) защитная среда содержит 50% раствор сахарозы, 10% раствор желатина и 20% раствор ГЛА, взятые в соотношении 1:0,5:2,5 соответственно;
5) защитная среда взята в количестве 20-40 мас.%;
6) вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "СИНЛАК" вируса КЧС, репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 4,5-5,0 lg ИД50/2 см3, и защитная среда взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащий материал - 60-80
Защитная среда - До 100
Предлагаемая вирусвакцина обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью и обеспечивает защиту против вируса КЧС, циркулирующего на территории Российской Федерации.The present invention is also characterized by other distinctive features that express specific forms of execution or special conditions for its use:
1) virus-containing material from the SINLAC strain of classical swine fever virus is reproduced in the rabbit body with biological activity of 4.5-5.0 lg ID 50 / cm 3 ;
2) virus-containing material from the attenuated strain "SINLAC" of the CSF virus is taken in an amount of 60-80 wt.%;
3) a protective environment in an effective amount;
4) the protective medium contains 50% sucrose solution, 10% gelatin solution and 20% GLA solution, taken in a ratio of 1: 0.5: 2.5, respectively;
5) the protective environment is taken in an amount of 20-40 wt.%;
6) The virus-containing material from the attenuated strain "SINLAK" CSF virus reproduced in the body with the biological activity of the
Virus-containing material - 60-80
Protective environment - Up to 100
The proposed virus vaccine has high antigenic and immunogenic activity and provides protection against CSF virus circulating in the Russian Federation.
Достижение технического результата от использования предлагаемой вирусвакцины объясняется тем, что при ее изготовлении использован новый штамм "СИНЛАК" вируса КЧС. Штамм "СИНЛАК" получен путем проведения перемежающихся пассажей лапинизированного вируса КЧС штамма "Chinese" на культуре клеток РК-13, гибридах A4 х С2 и взрослых кроликах. Штамм "СИНЛАК" стабильно вызывает заболевание кроликов с ярко выраженной гипертермией и является авирулентным для свиней.The achievement of the technical result from the use of the proposed virus vaccine is explained by the fact that in its manufacture a new strain of SINLAC of the CoES virus was used. The SINLAC strain was obtained by intermittent passages of the lapinized CoES virus of the Chinese strain on PK-13 cell culture, A 4 x C 2 hybrids and adult rabbits. Strain "SINLAC" stably causes disease in rabbits with pronounced hyperthermia and is avirulent for pigs.
Полученный штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства Российской Федерации (ВГНКИ) 5 октября 1999 года под регистрационным наименованием "СИНЛАК"-ДЕП. The resulting strain was deposited in the Microorganism Collection of the All-Russian Research Institute for Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation (VGNKI) on October 5, 1999 under the registration name "SINLAK" -DEP.
По сравнению со штаммом "Chinese" штамм "СИНЛАК" обладает более высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью. Экспериментально подтверждена высокая иммунологическая активность вирусвакцины из штамма "СИНЛАК". Результаты широких производственных испытаний вирусвакцины из штамма "СИНЛАК" в зонах профилактической вакцинации, а также в очагах инфекции дают основания для подтверждения достаточно выраженной эффективности указанного препарата. Compared with the Chinese strain, the SINLAC strain has a higher biological, antigenic and immunogenic activity. The high immunological activity of the virus vaccine from the SINLAC strain has been experimentally confirmed. The results of extensive production tests of the SINLAC virus vaccine in the areas of prophylactic vaccination, as well as in the foci of infection, give reason to confirm the sufficiently pronounced effectiveness of this drug.
Сущность изобретения пояснена на графических материалах:
на фиг.1 представлена аминокислотная последовательность региона основных антигенных доменов гликопротеина Е2 (gр55) вируса КЧС штамма "СИНЛАК";
на фиг. 2 - дендрограмма, отражающая родственные связи между различными штаммами вируса КЧС на основе структурной гомологии их геномов.The invention is illustrated in the graphic materials:
figure 1 presents the amino acid sequence of the region of the main antigenic domains of the glycoprotein E2 (gp55) virus of the CoES strain SINLAC;
in FIG. 2 is a dendrogram reflecting the kinship between different strains of the CSF virus based on the structural homology of their genomes.
Штамм "СИНЛАК" вируса КЧС характеризуется следующими признаками и свойствами. The strain "SINLAC" virus CoES is characterized by the following features and properties.
Происхождение
Штамм "СИНЛАК" вируса КЧС получен во ВНИИ защиты животных в 1995 г. перемежающимися пассажами лапинизированного вируса КЧС штамма "Chinese" на культуре клеток РК-13, гибридах А4 х C2 и взрослых кроликах. Полученный штамм стабильно вызывает заболевание кроликов с ярко выраженной гипертермией. Титр вируса в крови зараженных животных в период максимального повышения температуры тела достигает 4,5-5,0 lg ИД50/2 мл. Вакцинный штамм "СИНЛАК" вируса КЧС прошел 20 пассажей на культуре клеток РК-13, 25 пассажей на гибридной культуре клеток А4 х С2 и 17 пассажей на взрослых кроликах.Origin
The SINLAC strain of the CoES virus was obtained at the All-Russian Research Institute for the Protection of Animals in 1995 with intermittent passages of the lapinized CoES virus of the Chinese strain on PK-13 cell culture, A 4 x C 2 hybrids and adult rabbits. The resulting strain stably causes rabbit disease with pronounced hyperthermia. The virus titer in the blood of infected animals in the period of maximum increase in body temperature reaches 4,5-5,0 lg ID 50/2 ml. The SINLAC vaccine strain of the CSF virus passed 20 passages in a PK-13 cell culture, 25 passages in a hybrid cell culture of A 4 x C 2 cells and 17 passages in adult rabbits.
Таксономическая характеристика
Штамм "СИНЛАК" вируса КЧС относится к семейству Flaviviridae, роду Pestivirus. Криптограмма - код таксономических параметров вируса КЧС - имеет вид: R/1; 4/? ; S/S; V/0, что выражает следующие его характеристики: однонитевая линейная РНК с молекулярной массой 4 х 10 дальтон, % содержания РНК в вирионе не установлен (?), вирион и нуклеокапсид сферической формы (S), естественным хозяином являются свиньи (V-позвоночные), распространяется без переносчиков.Taxonomic characteristic
The SINLAC strain of the CoES virus belongs to the Flaviviridae family, the genus Pestivirus. Cryptogram - code of taxonomic parameters of the CoES virus - has the form: R / 1; 4/? ; S / S; V / 0, which expresses its following characteristics: single-stranded linear RNA with a molecular weight of 4 x 10 daltons,% RNA content in the virion has not been established (?), Virion and spherical nucleocapsid (S), pigs (V-vertebrates) are the natural host distributed without carriers.
Морфологические и физические признаки
При электронно-микроскопическом исследовании штамм "СИНЛАК" представлен типичными для флавивирусов отдельными вирионами сферической или округлой формы, диаметром 40-44 нм. На ультратонких срезах величина нуклеокапсида определена в 34-38 нм, а толщина липопротеиновой оболочки 3 нм. Коэффициент седиментации равен 104±18 по Сведбергу, плавучая плотность 1,16-1,20 г/см3.Morphological and physical features
During electron microscopic examination, the SINLAC strain is represented by typical spherical or round virions typical for flaviviruses, with a diameter of 40-44 nm. In ultrathin sections, the nucleocapsid value was determined to be 34-38 nm, and the thickness of the lipoprotein membrane was 3 nm. The sedimentation coefficient is 104 ± 18 according to Swedberg, the floating density of 1.16-1.20 g / cm 3 .
Антигенные свойства
При парентеральном введении в организм свиньи и кролика штамм "СИНЛАК" вызывает образование вируснейтрализующих антител в титре 1:16-1:64.Antigenic properties
When injected into the body of a pig and a rabbit, the SINLAC strain causes the formation of virus-neutralizing antibodies in a titer of 1: 16-1: 64.
Для определения антигенных свойств использовали методы полимеразной цепной реакции (ПЦР) и нуклеотидного секвенирования. Результаты исследований представлены на фиг.1 и 2. Методом ПЦР выявлена только геномная РНК вируса КЧС. В результате проведенного нуклеотидного секвенирования по 5' концу определено, что штамм "СИНЛАК" относится к группе "Chinese" и легко идентифицируется от существующих вакцинных штаммов вируса КЧС (см. фиг.2). Процент нуклеотидной гомологии со штаммом "Chinese" составляет 99,26. Специфичность сыворотки, полученной на штамм "СИНЛАК" вируса КЧС, определяли с вирусом вирулентного штамма "Ши-Мынь" в реакции нейтрализации флюоресцирующих микробляшек (РНФМБ) на гибридных клетках А4 х С2. Результаты исследований в РН показали специфичность штамма "СИНЛАК".To determine the antigenic properties used methods of polymerase chain reaction (PCR) and nucleotide sequencing. The research results are presented in figures 1 and 2. Only PCR virus genomic RNA was detected by PCR. As a result of nucleotide sequencing at the 5 'end, it was determined that the SINLAC strain belongs to the Chinese group and is easily identified from existing vaccine strains of the CSF virus (see figure 2). The percentage of nucleotide homology with the strain "Chinese" is 99.26. The specificity of the serum obtained for the SINLAC strain of the CSF virus was determined with the Shi-Myn virus of the virulent strain in the neutralization reaction of fluorescent micro-plaques (RNMF) on A 4 x C 2 hybrid cells. The results of studies in the pH showed the specificity of the strain SINLAC.
Биотехнологические характеристики
Штамм "СИНЛАК" вируса КЧС проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность. Штамм предназначен для использования в качестве сырья при изготовлении вирусвакцины против КЧС. Штамм "СИНЛАК" вируса КЧС хорошо размножается в организме кроликов. На внутривенное введение вируса наиболее четко реагируют взрослые кролики массой 2,0-2,5 кг. У таких кроликов повышение температуры отмечается через 26-30 часов после заражения и держится до 72-96 часов. Наибольший титр вируса в крови 5,0 lg ИД50/2 см3 отмечается через 44-50 часов после введения материала. Для выращивания штамма "СИНЛАК" испытаны культуры клеток СПЭВ, VIRO, ВНК-21, РК-15 и другие перевиваемые клетки. Наибольшее накопление вируса отмечено на культуре РК-13 (до 5,0 lg ТЦД50/см3) и гибридах А4 х C2 (5,5 lg ТЦД50/см3). Оптимальными условиями для выращивания штамма "СИНЛАК" явились 3-суточные перевиваемые культуры клеток РК-13 и гибриды А4 х С2 с внесением в поддерживающую среду 5-10% фетальной сыворотки КРС.Biotechnological characteristics
The strain "SINLAC" of the virus CoES shows high biological, antigenic and immunogenic activity. The strain is intended for use as a raw material in the manufacture of a virus vaccine against CoES. The strain "SINLAC" of the virus CoES well multiplies in the body of rabbits. Adult rabbits weighing 2.0-2.5 kg react most clearly to intravenous administration of the virus. In such rabbits, an increase in temperature is observed 26-30 hours after infection and lasts up to 72-96 hours. The highest titer of the virus in the
Штамм "СИНЛАК" сохраняет свои исходные характеристики при последовательном пассировании в чувствительных биологических системах в течение 9-10 пассажей (срок наблюдения). The strain "SINLAC" retains its original characteristics during sequential passage in sensitive biological systems for 9-10 passages (observation period).
Хемо- и генотаксономическая характеристика
Штамм "СИНЛАК" вируса КЧС является РНК-содержащим вирусом с мол. массой 4 х 106 Д. Процент содержания РНК в вирионе не установлен. Вирусный геном представляет собой однонитевую плюс-РНК, состоящую из 12284 нуклеотидов с единственной длинной открытой рамкой считывания, соответствующей полипротеину длиной в 3898 аминокислотных остатков. В составе генома вируса КЧС гены располагаются от Т-конца к С- концу в следующей последовательности: др44/48-др33-др55.Chemo- and genotaxonomic characterization
The strain "SINLAC" virus CoES is an RNA-containing virus with a pier. weighing 4 x 10 6 D. The percentage of RNA in the virion has not been established. The viral genome is a single-stranded plus-RNA consisting of 12,284 nucleotides with a single long open reading frame corresponding to a polyprotein with a length of 3898 amino acid residues. In the composition of the genome of the CoES virus, the genes are located from the T-end to the C-end in the following sequence: dr44 / 48-dr33-dr55.
Данные о структурных белках штамма "СИНЛАК" получены путем проведения исследований методом электрофореза и ПААГ. Очищенные в градиенте вирионы содержат 3 основных вида вирусспецифических белков с мол. массой 54-55К, 45-47К и 35-37К. Два наиболее крупных по размеру полипептида представляют собой гликопротеины, расположенные на поверхности вириона. Вирусное происхождение этих полипептидов подтверждено методом радиоиммунной преципитации. Штамм "СИНЛАК" имеет полипептиды Еl(gр55), Е2(др46) и С(р36). Полипептид др55 содержит основные иммунореактивные доминанты, участвующие в нейтрализации инфекционности вируса КЧС. Data on the structural proteins of the SINLAC strain were obtained by electrophoresis and PAGE studies. Purified in a gradient virions contain 3 main types of virus-specific proteins with mol. weighing 54-55K, 45-47K and 35-37K. The two largest polypeptides are glycoproteins located on the surface of the virion. The viral origin of these polypeptides is confirmed by radioimmune precipitation. The strain "SINLAC" has the polypeptides El (gp55), E2 (dr46) and C (p36). The dr55 polypeptide contains the main immunoreactive dominants involved in neutralizing the infection of the CoES virus.
Биологическая активность
Биологическую активность штамма "СИНЛАК" определяли титрованием на кроликах массой 2,0-2,5 кг. Готовили 10-кратные разведения вируса от 10-3-10-5. Суспензию каждого разведения, начиная с наибольшего, вводили внутривенно в объеме 2 см3 4 кроликам. В качестве контроля использовали 2 кроликов, которым вводили фосфатный буферный раствор в таком же объеме. Учет результатов титрования проводили в течение 7 суток по наличию гипертермии. Биологическая активность вируссодержащей суспензии составила 4,67 lg ИД50/2 см3.Biological activity
The biological activity of the SINLAC strain was determined by titration on rabbits weighing 2.0-2.5 kg. Prepared 10-fold dilutions of the virus from 10 -3 -10 -5 . A suspension of each breeding, starting with the largest, was administered intravenously in a volume of 2
Иммуногенные свойства
Штамм "СИНЛАК" вируса КЧС при парентеральном введении взрослым кроликам и свиньям стимулирует образование напряженного иммунитета и устойчивость свиней к заболеванию при заражении вирусом КЧС штамма "Ши-Мынь". В опытах на поросятах установлено, что на 10-14-й день после внутримышечного введения суспензии вируса у них при исследовании в РНФМБ появляются антитела в титре 1: 16 с последующим увеличением к 21 дню до 1:32-1:64. При контрольном заражении через 21 день после иммунизации вирулентным штаммом "Ши-Мынь" в дозе 104,5 ЛД50 привитые поросята не заболели. У контрольных животных повышение температуры тела наступило на 3-й день после заражения, а на 5-9-е сутки они пали.Immunogenic properties
The SINLAC strain of the CoES virus, when administered parentally to adult rabbits and pigs, stimulates the formation of intense immunity and the resistance of pigs to disease when infected with the CoES virus of the Shi-Myn strain. In experiments on pigs, it was found that on the 10-14th day after intramuscular injection of a suspension of the virus, they, when tested in RSLMBs, have antibodies in a titer of 1: 16, with a subsequent increase to 21: 1: 32-1: 64. During the challenge, 21 days after immunization with the virulent Shi-Myn strain at a dose of 10 4.5 LD 50, the vaccinated pigs did not become ill. In control animals, an increase in body temperature occurred on the 3rd day after infection, and on the 5th-9th day they fell.
Реактогенные свойства
После инъекции штамма "СИНЛАК" вируса КЧС поросятам в дозе 100-1000 ИД50 у 20-25% привитых животных отмечается повышение температуры тела до 40,1-40,7oС, которая удерживается в течение 1-3 суток без угнетения общего состояния. Средний привес животных (за месяц) после инъекции им штамма снижается (в сравнении с контролем) всего на 0,6-1,2 кг.Reactogenic properties
After injection of the SINLAC strain of the CoES virus to piglets at a dose of 100-1000 ID 50 in 20-25% of vaccinated animals, an increase in body temperature to 40.1-40.7 o C is observed, which is maintained for 1-3 days without inhibiting the general condition . The average weight gain of animals (per month) after injection of the strain decreases (in comparison with the control) by only 0.6-1.2 kg.
Стабильность
Приобретенные свойства (отсутствие реверсии и ослабленная реактогенность) штамм "СИНЛАК" вируса КЧС сохраняет в течение 9-10 последовательных пассажей на свиньях.Stability
The acquired properties (lack of reversion and reduced reactogenicity) of the SINLAC strain of the CSF virus retain for 9-10 consecutive passages in pigs.
Сохраняемость
Штамм "СИНЛАК" вируса КЧС хорошо хранится при -70oС в нативном или лиофилизированном виде во флаконах под герметично закрытыми пробками и металлическими колпачками. Титр вируса за 12 месяцев хранения практически не снижался, а иммуногенная активность не изменялась. Однако хранение нативного вируса в течение одного месяца при +4oС существенно снижает его инфекционную активность.Persistence
The strain "SINLAC" of the CoES virus is well stored at -70 o C in native or lyophilized form in vials under tightly sealed plugs and metal caps. The virus titer for 12 months of storage practically did not decrease, and the immunogenic activity did not change. However, storage of the native virus for one month at + 4 o C significantly reduces its infectious activity.
Дополнительные сведения о штамме
Вакцинный штамм "СИНЛАК" не обладает контагиозностью. При введении серонегативным подсвинкам не вызывает признаков болезни животных КЧС.Additional strain information
SINLAC vaccine strain is not contagious. When administered with seronegative gilts, it does not cause signs of animal disease CoES.
Свободен от вирусных, бактериальных и микоплазменных контаминантов. Free of viral, bacterial and mycoplasma contaminants.
По безопасности и иммуногенности штамм "СИНЛАК" полностью отвечает требованиям О.I.E. (МЭБ). For safety and immunogenicity, the SINLAC strain fully meets the requirements of O.I.E. (OIE).
Комиссионные испытания подтвердили полное соответствие штамма "СИНЛАК" предъявляемым требованиям и явились основанием для его депонирования в Коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов под регистрационным наименованием "СИНЛАК"-ДЕП. Commission tests confirmed the full compliance of the SINLAC strain with the requirements and were the basis for its deposit in the Collection of microorganisms of VGNKI veterinary drugs under the registration name SINLAC-DEPT.
На основании полученных сведений можно утверждать, что штамм "СИНЛАК" вируса КЧС по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса КЧС. Based on the information obtained, it can be argued that the SINLAC strain of the CSF virus in terms of antigenic and immunological spectra is an original, taxonomically new, previously unknown variant of the CSF virus.
Для снижения эпизоотической опасности КЧС необходима своевременная вакцинопрофилактика животных предлагаемой вакциной на основе штамма "СИНЛАК" в угрожаемых и неблагополучных по данному заболеванию хозяйствах. To reduce the epizootic danger of CSF, timely vaccination of animals with the proposed vaccine based on the SINLAC strain is necessary in farms that are threatened and unsuccessful for this disease.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам предлагаемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вирусвакцины, изложенных в независимом пункте формулы изобретения. The analysis of the prior art by the applicant, including a search by patent and scientific and technical sources of information, and the identification of sources containing information about analogues of the invention, allowed to establish that the applicant did not find sources characterized by signs that are identical (identical) to all the essential features of the invention. The definition from the list of identified analogues of the prototype, as the closest in the totality of the characteristics of the analogue, made it possible to establish a set of significant distinctive features of the proposed virus vaccine relative to the applicant’s perceived technical result, set forth in the independent claim.
Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности "новизна". Therefore, the claimed invention meets the condition of patentability "novelty."
Для проверки соответствия предлагаемого решения условию патентоспособности "изобретательский уровень" проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания изобретения к данной заявке (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований для достижения технического результата. To verify the conformity of the proposed solution to the patentability condition "inventive step", an additional search for known solutions was carried out to identify features included in the distinctive part of the independent claim. The search results showed that the proposed solution does not follow for the specialist explicitly from the prior art set forth in the corresponding section of the description of the invention to this application (no solutions having features matching the distinctive features of the proposed invention were identified), and the effect of the essential The features of the proposed invention transformations to achieve a technical result.
Следовательно, предлагаемая вирусвакцина соответствует условию патентоспособности "изобретательский уровень". Therefore, the proposed virus vaccine meets the condition of patentability "inventive step".
Изобретение иллюстрируется следующими примерами, которые не ограничивают объем изобретения. The invention is illustrated by the following examples, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1. Example 1
Штамм "СИНЛАК" используют для изготовления лапинизированной вирусвакцины против КЧС. Для этого кроликам массой 2,5-3,0 кг внутривенно вводят суспензию штамма "СИНЛАК" в дозе 100 ИД50 в объеме 2,0 см3. У животных ежедневно измеряют температуру тела. Кроликов, реагирующих через 42-52 часа повышением температуры до 40,5-41,8oС, обескровливают тотально. От каждого животного кровь отбирают в отдельный стерильный флакон, содержащий 1000 ЕД гепарина. Затем кровь сливают в одну емкость, перемешивают, отбирают пробу в объеме 10 см3 для контроля титра вируса, охлаждают до температуры 4-8oС и, соблюдая стерильные условия, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин для освобождения от оболочек деструктированных эритроцитов и возможных сгустков. Надосадочную жидкость собирают в бутыль и добавляют антибиотики в эффективном количестве. Полученный вируссодержащий материал объединяют со средой высушивания в соотношении, необходимом для получения вакцины с заданной иммуногенной активностью. В качестве ингредиентов защитной среды используют широко применяемые для этих целей вещества: сахарозу, желатин и гидролизат лактальбумина. Для приготовления защитной среды берут 50% раствор сахарозы, 10% раствор желатина и 20% раствор гидролизата лактальбумина и их соединяют в соотношении 1:0,5:2,5 соответственно. Смесь антигена и защитной среды тщательно перемешивают, при необходимости доводят рН смеси до 7,2-7,4, разливают в стерильные флаконы (ампулы) по 2-4 см3 и подвергают лиофильному высушиванию. По окончании сушки флаконы с вакциной закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, обеспечивающими герметичность флаконов. Готовый биопрепарат представляет собой сухую аморфную массу красно-коричневого цвета, легко растворимую при добавлении физраствора в течение 1-2 мин.Strain "SINLAC" is used for the manufacture of lapinized virus vaccines against CSF. For this, rabbits weighing 2.5-3.0 kg are injected intravenously with a suspension of SINLAC strain at a dose of 100 ID 50 in a volume of 2.0 cm 3 . In animals, body temperature is measured daily. Rabbits reacting after 42-52 hours by raising the temperature to 40.5-41.8 o C, bleed totally. From each animal, blood is collected in a separate sterile vial containing 1000 PIECES of heparin. Then the blood is poured into a single container, mixed, a sample is taken in a volume of 10 cm 3 to control the titer of the virus, cooled to a temperature of 4-8 o C and, subject to sterile conditions, centrifuged at 3000 rpm for 20 min to release degraded shells red blood cells and possible clots. The supernatant is collected in a bottle and antibiotics are added in an effective amount. The resulting virus-containing material is combined with the drying medium in the ratio necessary to obtain a vaccine with a given immunogenic activity. As the ingredients of the protective environment, substances widely used for these purposes are used: sucrose, gelatin, and lactalbumin hydrolyzate. To prepare a protective medium, a 50% sucrose solution, a 10% gelatin solution and a 20% lactalbumin hydrolyzate solution are taken and combined in a ratio of 1: 0.5: 2.5, respectively. The mixture of antigen and protective environment is thoroughly mixed, if necessary, the pH of the mixture is adjusted to 7.2-7.4, poured into sterile vials (ampoules) of 2-4 cm 3 and subjected to freeze drying. At the end of the drying, the vaccine bottles are closed with rubber stoppers and rolled around with aluminum caps, which ensure the tightness of the bottles. The finished biological product is a dry amorphous mass of red-brown color, easily soluble by adding saline for 1-2 minutes.
Вакцину применяют с профилактической целью, а также вынужденно в угрожаемых и неблагополучных по КЧС хозяйствах. Свиней иммунизируют вакциной в объеме 2 см3, содержащей 100 ИД50 для кроликов.The vaccine is used for prophylactic purposes, as well as forcibly threatened and dysfunctional in emergency situations. Pigs are immunized with a 2 cm 3 vaccine containing 100 ID 50 for rabbits.
Полученная вакцина против КЧС имеет оптимальный компонентный состав, мас.% (см. таблицу в конце описания). The resulting vaccine against CoES has the optimal component composition, wt.% (See table at the end of the description).
Содержание вируссодержащего материала в диапазоне 70-80 мас.% представляет собой эффективное количество антигена в предлагаемой вакцине. The content of virus-containing material in the range of 70-80 wt.% Represents an effective amount of antigen in the proposed vaccine.
Пример 2. Example 2
Проведены испытания вирусвакцины против КЧС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из штамма "СИНЛАК", репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 4,5 lg ИД50/2 см3 - 60
Защитная среда - До 100
Полученная вакцина подвергнута контролю на стерильность, безвредность, биологическую и иммуногенную активность.Tests of a virus vaccine against CSF made as described in example 1, and containing, wt.%:
Virus-containing material from a strain of "SINLAK" reproduced in the body with the biological activity of the
Protective environment - Up to 100
The resulting vaccine was subjected to control on sterility, safety, biological and immunogenic activity.
Проверка стерильности
Контролю вакцины на отсутствие бактериального и грибкового загрязнения подвергают среднюю пробу вакцины из пяти флаконов. Испытание проводят в соответствии с ГОСТ 28085-89. Вакцина признана стерильной.Sterility check
The vaccine for the absence of bacterial and fungal contamination is subjected to an average vaccine sample of five vials. The test is carried out in accordance with GOST 28085-89. The vaccine is recognized as sterile.
Проверка безвредности вакцины
Испытание безвредности проводят на двух поросятах 3-4-месячного возраста массой 30-35 кг, полученных из благополучного по чуме хозяйства и не подвергавшихся ранее вакцинации против этой инфекции.Vaccine Safety Check
The test of harmlessness is carried out on two pigs of 3-4 months of age weighing 30-35 kg, obtained from a plague-free farm and not previously vaccinated against this infection.
Среднюю пробу готовят из 10 флаконов вакцины. В последующем из средней пробы цельную вакцину в объеме 2 см3 (десятикратная прививная доза) вводят свиньям внутримышечно. Перед введением вакцины и в течение последующих 7 дней у животных измеряют температуру тела. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 14 дней.The average sample is prepared from 10 bottles of vaccine. Subsequently, from an average sample, a whole vaccine in a volume of 2 cm 3 (ten-fold inoculated dose) is administered to pigs intramuscularly. Before administration of the vaccine and over the next 7 days, the animals are measured body temperature. Observation of the clinical condition of the animals is carried out for 14 days.
За этот период у животных не выявляют отклонений от нормы. Вакцина признается безвредной. During this period, the animals do not reveal deviations from the norm. The vaccine is recognized as harmless.
Проверка биологической активности на кроликах
Для определения биологической активности используют взрослых кроликов массой 2,0-2,5 кг. Из средней пробы, приготовленной смешиванием дегидратированного содержимого 10 флаконов вакцины, готовят разведения на физрастворе от 10-2 до 10-5.Testing biological activity in rabbits
To determine the biological activity, adult rabbits weighing 2.0-2.5 kg are used. From an average sample prepared by mixing the dehydrated contents of 10 vials of the vaccine, dilutions in saline from 10 -2 to 10 -5 are prepared.
Каждое разведение, начиная с наибольшего, вводят кроликам внутривенно в объеме 2 см3 из расчета 4 головы на каждое разведение. Контролем служат 2 кролика, которым вводят физраствор в том же объеме. У всех животных ежедневно трехкратно измеряют температуру тела. По количеству кроликов с гипертермией рассчитывают титр вируса в вакцине, величина которого и выражает биологическую активность вакцины. Она составляет 4,5 lg ИД50/2 см3.Each breeding, starting with the largest, is administered to rabbits intravenously in a volume of 2 cm 3 at the rate of 4 heads for each breeding. The control is 2 rabbits, which are injected with saline in the same volume. In all animals, body temperature is measured three times daily. By the number of rabbits with hyperthermia, the titer of the virus in the vaccine is calculated, the value of which expresses the biological activity of the vaccine. It is 4,5 lg ID 50/2 cm 3.
Проверка иммуногенной активности на свиньях
Для контроля иммуногенной активности вакцины используют 14 поросят в возрасте 3-4 месяцев массой 30-45 кг. Из средней пробы, приготовленной смешиванием регидратированного содержимого 10 флаконов вакцины, готовят на физрастворе разведения с 10-2 до 10-4, которые в объеме 2 см3 вводят свиньям внутримышечно из расчета 4 головы на каждое разведение. Два невакцинированных поросенка служат контролем и содержатся в отдельном боксе. У всех животных перед вакцинацией и перед заражением исследуют сыворотки крови на содержание вируснейтрализующих антител. Наблюдение за животными ведут в течение 14 дней с ежедневным изменением температуры тела в первые 7 суток. На 14-й день всех привитых и группу контрольных животных заражают вирусом КЧС штамма "Ши-Мынь" путем его внутримышечного введения в объеме 1 см3, содержащего 104 ЛД100. За зараженными животными ведут наблюдение в течение 15 дней с ежедневной термометрией. Установлено, что все привитые животные после контрольного заражения не проявили отклонений от нормы и оставались здоровыми весь период наблюдения. Активность сывороток крови у них в рН составила от 5,23 до 6,0 лог2 (1:36-1:64), в то время как перед вакцинацией составила меньше 1:2.Testing immunogenic activity in pigs
To control the immunogenic activity of the vaccine, 14 piglets aged 3-4 months weighing 30-45 kg are used. From an average sample prepared by mixing the rehydrated contents of 10 vials of the vaccine, they are prepared in saline dilutions from 10 -2 to 10 -4 , which are injected into pigs intramuscularly at a rate of 2 cm 3 at the rate of 4 heads for each dilution. Two unvaccinated piglets serve as a control and are kept in a separate box. In all animals, before vaccination and before infection, blood serum is examined for the content of virus-neutralizing antibodies. Observation of animals is carried out for 14 days with a daily change in body temperature in the first 7 days. On the 14th day, all vaccinated and a group of control animals were infected with the CoES virus of the Shi-Myn strain by intramuscular injection in a volume of 1 cm 3 containing 10 4 LD 100 . Infected animals are monitored for 15 days with daily thermometry. It was established that all vaccinated animals after control infection showed no deviations from the norm and remained healthy throughout the observation period. Their blood serum activity in pH ranged from 5.23 to 6.0 log 2 (1: 36-1: 64), while before vaccination it was less than 1: 2.
У контрольных животных подъем температуры тела отмечен на 5-7-й день. В последующем они отказались от корма, мало двигались. Летальный исход наступил на 11-13-й день после заражения. При патанатомическом исследовании установлены характерные для чумы изменения в коже, селезенке, лимфоузлах, кровоизлияния в сердце, почках, толстом отделе кишечника. In control animals, a rise in body temperature was noted on the 5-7th day. Subsequently, they refused to feed, moved little. The lethal outcome occurred on the 11-13th day after infection. Patanatomical studies revealed changes in the skin, spleen, lymph nodes, hemorrhages in the heart, kidneys, and large intestine that are characteristic of the plague.
Таким образом, сухая лапинизированная вирусвакцина против КЧС из штамма "СИНЛАК" стерильна, безвредна, ареактогенна. Биологическая активность вакцины на кроликах составляет 4,5 lg ИД50/2 см3. Вакцина обладает выраженной иммуногенностью для свиней, т.к. стимулирует выработку вируснейтрализующих антител через 14 дней после прививки в титрах от 5,23 до 6,0 лог2 и обеспечивает защиту от контрольного заражения привитых животных. Иммуногенная активность вакцины на свиньях составила 4,5 lg ИД50/2 см3.Thus, the dry lapinized virus vaccine against CSF from the SINLAC strain is sterile, harmless, areactogenic. The biological activity of the vaccine in rabbits is 4,5 lg ID 50/2 cm 3. The vaccine has a pronounced immunogenicity for pigs, as It stimulates the production of virus-neutralizing antibodies 14 days after vaccination in titers from 5.23 to 6.0 log 2 and provides protection against control infection of vaccinated animals. The immunogenic activity of a vaccine in pigs was 4,5 lg ID 50/2 cm 3.
Пример 3. Example 3
Проведены испытания вирусвакцины против КЧС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из штамма "СИНЛАК", репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 4,5 lg ИД50/2 см3 - 70
Защитная среда - До 100
Полученная вирусвакцина проверена на иммуногенную активность на серонегативных подсвинках массой 16-25 кг, ранее не подвергавшихся вакцинации против КЧС. Для этого содержимое 10 флаконов препарата регидратировали добавлением 2 см3 физраствора в каждый и смешивали в одной емкости. Для вакцинации свиней из исходной смеси готовили десятикратные разведения с конечной концентрацией 1000, 100, 10 и 1 ИД50/2 см3 для кроликов, что соответственно составляет 10; 1; 0,1 и 0,01 прививных доз для свиней. Каждое разведение вводили 3 подсвинкам в объеме 2 см3 внутримышечно за ухом. Перед вакцинацией и в течение 14 дней после вакцинации и 14 дней после заражения у животных ежедневно измеряли температуру тела и вели наблюдение за общим состоянием. Контрольные подсвинки в количестве 4 голов содержались весь период эксперимента в одном боксе с иммунизированными животными. У животных до вакцинации и перед заражением получали пробы крови для исследования вируснейтрализующей активности сыворотки в РНФМБ. Через 21 день всех привитых и 2 контрольных животных заражали вирусом КЧС штамма "Ши-Мынь". Исходную вируссодержащую суспензию после размораживания и центрифугирования смешивали с фосфатно-буферным раствором (ФБР) в соотношении 1:30 и вводили животным в объеме 1 см3 внутримышечно с внутренней стороны бедра. Наблюдение вели в течение 14 дней.Tests of a virus vaccine against CSF made as described in example 1, and containing, wt.%:
Virus-containing material from a strain of "SINLAK" reproduced in the body with the biological activity of the
Protective environment - Up to 100
The resulting virus vaccine was tested for immunogenic activity on seronegative gilts weighing 16-25 kg, not previously vaccinated against CSF. For this, the contents of 10 vials of the drug were rehydrated by adding 2 cm 3 of saline solution to each and mixed in one container. For the vaccination of pigs from the initial mixture was prepared by ten-fold dilution with a final concentration of 1000, 100, 10 and 1 ID 50/2 cm 3 to rabbits, that is respectively 10; 1; 0.1 and 0.01 vaccination doses for pigs. Each dilution was injected with 3 gilts in a volume of 2 cm 3 intramuscularly behind the ear. Before vaccination and for 14 days after vaccination and 14 days after infection in animals, body temperature was measured daily and the general condition was monitored. Control gilts in the amount of 4 goals contained the entire period of the experiment in one box with immunized animals. In animals, prior to vaccination and before infection, blood samples were obtained to study the virus-neutralizing activity of serum in the RSMB. After 21 days, all vaccinated and 2 control animals were infected with the CoES virus of the Shi-Myn strain. The initial virus-containing suspension after thawing and centrifugation was mixed with phosphate-buffered saline (PBS) in a ratio of 1:30 and was administered to animals in a volume of 1 cm 3 intramuscularly from the inside of the thigh. Observation was conducted for 14 days.
При титровании вакцины на кроликах из исходной смеси содержимого 10 флаконов готовили десятикратные разведения до 10-5, которые вводили внутривенно в объеме 2 см3. Перед вакцинацией у животных измеряли температуру тела, а в процессе наблюдения в течение 7 дней измерение проводили ежедневно трехкратно.When titrating the vaccine in rabbits, ten-fold dilutions of up to 10 -5 were prepared from the initial mixture of the contents of 10 vials, which were administered intravenously in a volume of 2 cm 3 . Before vaccination, animals measured body temperature, and during the observation process for 7 days, the measurement was carried out three times daily.
В результате проведенных исследований установлено, что вирус КЧС штамма "СИНЛАК" и вакцина, изготовленная из этого вируссодержащего материала, не контагиозны. Интактные поросята при содержании в течение 21 дня в одном боксе с привитыми не проявили признаков заболевания КЧС и в сыворотке крови этих животных не выявлено нейтрализующих антител к вирусу КЧС. Вакцина, а следовательно, и штамм "СИНЛАК", из которого изготовлен препарат, обладают выраженной биологической (титр вируса на кроликах 4,5 lg ИД50/2 см3) и иммуногенной активностью. У поросят, иммунизированных вакциной с содержанием 10; 1; 0,1 и 0,01 прививной дозы для свиней, титры вируснейтрализующих антител через 21 день после вакцинации составили от 5,25 до 6,33 лог2, а животные были устойчивы к экспериментальному заражению вирусом КЧС штамма "Ши-Мынь".As a result of the studies, it was found that the SES virus of the SINLAC strain and the vaccine made from this virus-containing material are not contagious. The intact piglets, when kept for 21 days in the same vaccinated box, showed no signs of CSF disease and no neutralizing antibodies to the CSF virus were detected in the blood serum of these animals. Vaccine, and consequently strain "SINLAK" from which the drug is made, have pronounced biological (virus titer in
Пример 4. Example 4
Проведены испытания вирусвакцины против КЧС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из штамма "СИНЛАК", репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 5,0 lg ИД50/2 см3 - 80
Защитная среда - До 100
Эффективность полученной вирусвакцины проверена по отношению к эпизоотическому изоляту вируса КЧС "Молдова-98", вызвавшему заболевание свиней в Молдове. Эпизоотический изолят, поступивший во ВНИИ защиты животных, постановкой биопробы на свиньях, а также методом ПЦР и нуклеотидным секвенированием части генома диагностировали как вирус КЧС. Одновременно дополнительному исследованию в ПЦР и нуклеотидном секвенировании были подвергнуты вируссодержащий материал из штамма "СИНЛАК" и вакцина, из которого она была изготовлена. В настоящем эксперименте была использована 10% суспензия селезенки, лимфоцитов и крови поросят, зараженных эпизоотическим вирусом КЧС "Молдова-98", прошедшим 2 пассажа на свиньях. Проверку эффективности вирусвакцины против КЧС из штамма "СИНЛАК" осуществили так, как описано в примере 2.Tests of a virus vaccine against CSF made as described in example 1, and containing, wt.%:
Virus-containing material from a strain of "SINLAK" reproduced in the body with the biological activity of the
Protective environment - Up to 100
The effectiveness of the obtained virus vaccine was tested in relation to the epizootic isolate of the CSF virus "Moldova-98", which caused the disease of pigs in Moldova. The epizootic isolate received at the All-Russian Research Institute for Animal Welfare, staging a bioassay in pigs, as well as PCR and nucleotide sequencing of a part of the genome was diagnosed as CSF virus. At the same time, virus-containing material from the SINLAC strain and the vaccine from which it was made were subjected to additional research in PCR and nucleotide sequencing. In this experiment, we used a 10% suspension of spleen, lymphocytes and blood of piglets infected with epizootic CSF virus "Moldova-98", which passed 2 passages in pigs. The effectiveness of the virus vaccine against CSF from the strain "SINLAC" was carried out as described in example 2.
В результате проведенных исследований установлено следующее. Вирусвакцина против КЧС из штамма "СИНЛАК" специфична, так как сыворотка крови привитых свиней нейтрализует в РНФМБ антиген вируса КЧС штамма "Ши-Мынь". Титр антител у иммунизированных животных составил от 5,17 до 5,75 лог2 и не зависел от прививной дозы.As a result of the studies established the following. The virus vaccine against CSF from the SINLAC strain is specific, since the blood serum of the vaccinated pigs neutralizes the antigen of the CSF virus of the Shi-Myn strain in RNMB. The antibody titer in immunized animals ranged from 5.17 to 5.75 log 2 and did not depend on the vaccination dose.
Вирусвакцина против КЧС из штамма "СИНЛАК" обладает достаточной иммуногенностью и против эпизоотического вируса, так как при введении подсвинкам 1 или 10 прививных доз в объеме 2 см3 стимулирует выработку специфических антител в титрах выше 5,0 лог2 и обеспечивает защиту животных от заболевания при экспериментальном заражении изолятом "Молдова-98".Virus vaccine against CSF from the SINLAC strain has sufficient immunogenicity against the epizootic virus as well, since administration of 1 or 10 vaccination doses in a volume of 2 cm 3 stimulates the production of specific antibodies in titers above 5.0 log 2 and protects the animals from disease experimental infection with isolate "Moldova-98".
Пример 5. Example 5
Проведены испытания вирусвакцины против КЧС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из штамма "СИНЛАК", репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 4,5 lg ИД50/2 см3 - 70
Защитная среда - До 100
Эффективность полученной вирусвакцины проверена на поголовье свиней в АО "Коммунар" Владимирской области. Все поголовье свиней в АО "Коммунар" подвергается иммунизации против вируса КЧС. Последний раз животных иммунизировали вирусвакциной против КЧС из штамма "ЛК-ВНИИВВиМ". Перед началом испытаний у животных различных возрастов была отобрана кровь с целью исследования уровня вируснейтрализующих антител к вирусу КЧС. Было установлено, что титр антител у основных свиноматок составлял 4,23-5,33 лог2 (М ± m = 4,75 ± 0,32), в группе откорма 3,83 ± 5,76 лог2 (4,92 ± 0,43), у подсосных поросят в возрасте 32-40 дней 2,83 ± 4,24 лог2 (3,61 ± 0,42).Tests of a virus vaccine against CSF made as described in example 1, and containing, wt.%:
Virus-containing material from a strain of "SINLAK" reproduced in the body with the biological activity of the
Protective environment - Up to 100
The effectiveness of the obtained virus vaccine was tested on the number of pigs in JSC Kommunar, Vladimir Region. All pigs in Kommunar JSC are immunized against CoES virus. The last time the animals were immunized with an anti-CSF virus vaccine from the strain LK-VNIIIVViM. Before testing in animals of various ages, blood was taken to study the level of virus-neutralizing antibodies to the virus of CoES. It was found that the antibody titer in the main sows was 4.23-5.33 log 2 (M ± m = 4.75 ± 0.32), in the feeding group 3.83 ± 5.76 log 2 (4.92 ± 0.43), in suckling piglets at the age of 32-40 days, 2.83 ± 4.24 log 2 (3.61 ± 0.42).
Вакцинации подвергнуто 74 свиноматки, 115 голов подсвинков в возрасте 35-40 дней. Животных вакцинировали по следующей схеме: свиноматок за 3-40 дней до случки, поросят в возрасте 35-40 дней с последующей ревакцинацией через 3-4 недели. Уровень вируснейтрализующих антител через 21 день после вакцинации составлял у свиноматок 5,76-7,17 лог2 (6,33 ± 0,52), у молодняка 5,0-6,55 лог2 (5,81 ± 0,28). Через 30 дней после ревакцинации титр вируснейтрализующих антител у молодняка составлял от 5,75 до 7,0 лог2 (6,35 ± 0,24).Vaccination was carried out on 74 sows, 115 heads of gilts at the age of 35-40 days. The animals were vaccinated according to the following scheme: sows 3–40 days before mating, piglets aged 35–40 days, followed by revaccination after 3-4 weeks. The level of virus-neutralizing antibodies 21 days after vaccination in sows was 5.76-7.17 log 2 (6.33 ± 0.52), in young animals 5.0-6.55 log 2 (5.81 ± 0.28) . 30 days after revaccination, the titer of neutralizing antibodies in young animals ranged from 5.75 to 7.0 log 2 (6.35 ± 0.24).
По истечении 60 дней после вакцинации уровень специфических антител у свиноматок к вирусу классической чумы составлял 7,5 - 8,23 лог2.After 60 days after vaccination, the level of specific antibodies in sows against the classic plague virus was 7.5 - 8.23 log 2 .
Таким образом, вирусвакцина против КЧС из штамма "СИНЛАК" вызывает формирование напряженного иммунитета у свиней различных возрастных групп. Thus, the virus vaccine against CSF from the SINLAC strain causes the formation of intense immunity in pigs of various age groups.
Уровень антител против вируса КЧС свидетельствует о высокоактивном препарате. В процессе проведения испытаний разработанного препарата не отмечено каких-либо отклонений у животных от нормального физиологического состояния. The level of antibodies against CoES virus indicates a highly active drug. During testing of the developed drug, no deviations in the animals from the normal physiological state were noted.
Пример 6. Example 6
Проведены испытания вирусвакцины против КЧС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из штамма "СИНЛАК", репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 5,0 lg ИД50/2 см3 - 60
Защитная среда - До 100
Эффективность полученной вирусвакцины проверена на поголовье свиней в неблагополучном по КЧС АО "Сызранское" Радищевского района Ульяновской области. В очаге заболевания однократными и десятикратными дозами вакцины были привиты 3840 голов свиней разновозрастных групп, в том числе поросята с 7-дневного возраста. Через 10 дней после применения вакцины заболевание в очаге прекратилось.Tests of a virus vaccine against CSF made as described in example 1, and containing, wt.%:
Virus-containing material from a strain of "SINLAK" reproduced in the body with the biological activity of the
Protective environment - Up to 100
The effectiveness of the obtained virus vaccine was tested on the number of pigs in the Syzranskoye joint-stock company, which is unfavorable for emergency situations in the Radishchevsky district of the Ulyanovsk region. In the outbreak, with single and ten-fold doses of the vaccine, 3,840 pigs of different age groups were vaccinated, including pigs from 7 days of age. 10 days after the vaccine was used, the disease in the outbreak stopped.
Карантин с хозяйства был снят. Применение вакцины в однократной и десятикратной дозах имело одинаково положительный результат. The quarantine was removed from the farm. The use of the vaccine in single and ten-fold doses had an equally positive result.
Пример 7. Example 7
Проведены испытания вирусвакцины против КЧС, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из штамма "СИНЛАК", репродуцированный в организме кролика с биологической активностью 5,0 lg ИД50/2 см3 - 70
Защитная среда - До 100
Эффективность вирусвакцины против КЧС из штамма "СИНЛАК", изготовленной так, как описано в примере 1, проверена на поголовье свиней на благополучном по КЧС свинокомплексе совхоза "Горноуральский" Пригородного района Свердловской области. Вакцина использовалась для профилактической вакцинации. Было привито 70 000 голов свиней, в том числе 19 980 свиноматок основных и ремонтных, а также 50 020 голов молодняка. Для иммунизации свиней использовано вакцины в количестве 110 800 доз. После применения препарата осложнений у привитых животных не выявлено. Периодически исследовались сыворотки крови от вакцинированных животных в РНФМБ на напряженность иммунитета. Всего было исследовано 53 пробы. Титры антител были в пределах от 5,0 до 6,0 лог2, т.е. на достаточно высоком уровне. Хозяйство осталось благополучным по КЧС.Tests of a virus vaccine against CSF made as described in example 1, and containing, wt.%:
Virus-containing material from a strain of "SINLAK" reproduced in the body with the biological activity of the
Protective environment - Up to 100
The effectiveness of the virus vaccine against CSF from the SINLAC strain, made as described in Example 1, was tested on the number of pigs in a safe pig farm in the Gornouralsky state farm of the Suburban District of Sverdlovsk Region. The vaccine was used for preventive vaccination. 70,000 pigs were vaccinated, including 19,980 basic and maintenance sows, as well as 50,020 young animals. For immunization of pigs, vaccines in the amount of 110 800 doses were used. After using the drug, no complications were revealed in the vaccinated animals. Blood serum from vaccinated animals was studied periodically in the RSFMB for immunity. A total of 53 samples were examined. Antibody titers ranged from 5.0 to 6.0 log 2 , i.e. at a fairly high level. The farm remained prosperous according to CoES.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:
- вирусвакцина против КЧС на основе штамма "СИНЛАК", воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его использования с помощью приведенных в описании или известных до даты приоритета средств и методов;
- вирусвакцина против КЧС на основе штамма "СИНЛАК", полученная в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью и может обеспечить надежную защиту против вируса КЧС, циркулирующего на территории Российской Федерации.Thus, the above information indicates the fulfillment when using the invention of the following set of conditions:
- virus vaccine against CSF based on the SINLAC strain, embodying the invention, is intended for use in veterinary virology and biotechnology;
- for the proposed invention in the form described in the independent claim, the possibility of its use using the means and methods provided in the description or known prior to the priority date is confirmed;
- virus vaccine against CSF based on the SINLAC strain, obtained in accordance with the invention, has high antigenic and immunogenic activity and can provide reliable protection against CSF virus circulating in the Russian Federation.
Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость". Therefore, the present invention meets the condition of patentability "industrial applicability".
Источники информации
1. Hudson L. R. Peste porcine. L'adaptation du virus au papin et 'utilisation du virus adapte pour immuniser les porсs. Bull. Off. Epis., 1953, 40, 60-73.Sources of information
1. Hudson LR Peste porcine. L'adaptation du virus au papin et 'utilization du virus adapte pour immunizer les porсs. Bull. Off. Epis., 1953, 40, 60-73.
2. Лихачев Н.В. Достижения в области вирусных биопрепаратов и вакцин по дальнейшему их усовершенствованию. Труды ВГНКИ ветпрепаратов, 1972, 18, 22-29. 2. Likhachev N.V. Advances in the field of viral biological products and vaccines for their further improvement. Proceedings of VGNKI of veterinary preparations, 1972, 18, 22-29.
3. Патент РФ 2096454; МПК6 С 12 N 7/00, А 61 К 39/187; 20.11.97 г.3. RF patent 2096454; IPC 6 C 12 N 7/00, A 61 K 39/187; 11/20/97
4. Патент РФ 2064302, MПK6 A 61 K 39/187, 27.07.96 г.4. RF patent 2064302, MPK 6 A 61 K 39/187, July 27, 1996.
5. Патент РФ 2057805; MПK6 C 12 N 7/00, А 61 К 39/187; 10.04.96 г.5. RF patent 2057805; MPK 6 C 12 N 7/00, A 61 K 39/187; 04/10/96
6. Патент РФ 2129443; MПK6 A 61 K 39/187, C 12 N 7/00, 27.04.99 г.6. RF patent 2129443; MPK 6 A 61 K 39/187, C 12 N 7/00, 04/27/99
7. Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, "Урожай", 1993, 285-294. 7. Sergeev V.A. Viral vaccines, Kiev, "Harvest", 1993, 285-294.
8. Kojnok F. , Palatka Z et.al. Requirements of rabbit-adapted swine fever vaccine. Arch. Exp. Veterinarmed., 1980, 34(1), 67-72 (прототип). 8. Kojnok F., Palatka Z et.al. Requirements of rabbit-adapted swine fever vaccine. Arch. Exp. Veterinarmed., 1980, 34 (1), 67-72 (prototype).
Claims (7)
Вируссодержащий материал - 60-80
Защитная среда - До 1007. Virus vaccine according to any one of paragraphs. 1-6, characterized in that it comprises virus-containing material from a strain of "SINLAK" reproduced in the rabbit body with biological activity 4,5-5,0 lg ID 50/2 cm 3 and protective environment in the following ratio, wt. %:
Virus-containing material - 60-80
Protective environment - Up to 100
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001112033A RU2182495C1 (en) | 2001-05-03 | 2001-05-03 | Viral vaccine against classic hog cholera |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001112033A RU2182495C1 (en) | 2001-05-03 | 2001-05-03 | Viral vaccine against classic hog cholera |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2182495C1 true RU2182495C1 (en) | 2002-05-20 |
Family
ID=20249224
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001112033A RU2182495C1 (en) | 2001-05-03 | 2001-05-03 | Viral vaccine against classic hog cholera |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2182495C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007098717A2 (en) | 2006-02-28 | 2007-09-07 | Centro De Ingeniería Genética Y Biotecnología | Chimeric vaccine antigens against classical swine fever virus |
| CN108739638A (en) * | 2018-05-07 | 2018-11-06 | 派生特（福州）生物科技有限公司 | A kind of breeding method of swine fever spleen leaching seedling raw material rabbit strain |
-
2001
- 2001-05-03 RU RU2001112033A patent/RU2182495C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Arch. Exp. Veterinarmed, 1980, 34(1), 67-72. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007098717A2 (en) | 2006-02-28 | 2007-09-07 | Centro De Ingeniería Genética Y Biotecnología | Chimeric vaccine antigens against classical swine fever virus |
| CN108739638A (en) * | 2018-05-07 | 2018-11-06 | 派生特（福州）生物科技有限公司 | A kind of breeding method of swine fever spleen leaching seedling raw material rabbit strain |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0344872B1 (en) | Vaccine composition | |
| EP2271663B1 (en) | Novel avian astrovirus | |
| US10905758B2 (en) | Intranasal vector vaccine against porcine epidemic diarrhea | |
| BR112021008904A2 (en) | new porcine rotavirus | |
| Ramakrishnan et al. | Immune responses and protective efficacy of binary ethylenimine (BEI)-inactivated bluetongue virus vaccines in sheep | |
| CN111808826B (en) | Porcine type-A seneca virus SVA/CH-Fuj strain and application thereof | |
| RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
| RU2663004C2 (en) | Stabilised fmdv capsids | |
| CN1929859A (en) | Method of vaccination against testicular BVDV infection | |
| RU2182495C1 (en) | Viral vaccine against classic hog cholera | |
| RU2180237C1 (en) | Strain "sinlak" of virus pestis suum for vaccine preparation preparing | |
| CN116390753A (en) | Canine parvovirus | |
| JPH0710775A (en) | Canine corona virus vaccine originated from feline enteral corona virus | |
| TW201731526A (en) | Hybrid core feline vaccines | |
| RU2806164C1 (en) | Associated vaccine against canine distemper, parvovirus and coronavirus enteritis, adenovirus infection of dogs | |
| RU2722868C1 (en) | Antirabic inactivated emulsion culture vaccine for prophylactic immunization of domestic carnivores and farm animals | |
| RU2269361C2 (en) | Associated emulsion inactivated vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome (prrs) and porcine parvovirus infection (ppvi) | |
| RU2237713C2 (en) | Strain of virus pestis suum used for control of immunogenic and antigenic activity of vaccines and preparing biopreparations for specific prophylactic and diagnosis of classic pig plaque | |
| RU2395299C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, virus diarrhoea, rota-, coronavirus disease and leptospirosis | |
| RU2395297C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, virus diarrhoea and leptospirosis | |
| RU2348690C2 (en) | Amur strain no 1987 of asia-1 type murrain virus for antigenic and immunogenic performance control of vaccines and for production of medicines for diagnostics and specific prevention of asia-1 type murrain | |
| RU2242247C2 (en) | Marked virus-vaccine against aujeszky's disease | |
| EVSTIFEEV et al. | Development of A Vaccine Against Infectious Rhinotracheitis, Parainfluenza-3, Viral Diarrhoea And Chlamydia in Bovine Cattle. | |
| RU2216351C2 (en) | Inactivated emulsion vaccine against hen's hydropericarditis syndrome (hhps) | |
| RU2026081C1 (en) | Brucellosis vaccine for farm animals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100504 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20111127 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130504 |