RU2182369C2 - Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии - Google Patents
Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2182369C2 RU2182369C2 RU2000111616A RU2000111616A RU2182369C2 RU 2182369 C2 RU2182369 C2 RU 2182369C2 RU 2000111616 A RU2000111616 A RU 2000111616A RU 2000111616 A RU2000111616 A RU 2000111616A RU 2182369 C2 RU2182369 C2 RU 2182369C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- modeling
- proliferative vitreoretinopathy
- mononuclear cells
- day
- cellular elements
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области экспериментальной медицины, конкретно к способам моделирования пролиферативной витреоретинопатии. Способ обеспечивает повышение точности воспроизводимости и сокращение времени получения модели. Вводят в стекловидное тело взвесь клеточных элементов в физиологическом растворе с последующим периодическим гистологическим исследованием серийных срезов глазного яблока, при этом в качестве клеточных элементов используют мононуклеары крови и для контроля проводят непрямую офтальмоскопию и гистологические исследования на 1-, 3-, 5-, 7-, 14-, 21-й день и по развитию массивных витреоретинальных мембран судят о получении модели. 10 ил.
Description
Изобретение относится к области экспериментальной медицины, конкретно к способам моделирования пролиферативной витреоретинопатии.
Известны способы моделирования данного патологического процесса, заключающиеся во введении в стекловидное тело различных видов клеток [2-7] и последующем гистологическом исследовании, подтверждающем развитие заболевания. Серийные срезы окрашивают гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону.
Однако данные методы имеют следующие недостатки:
- в качестве ведущего патогенетического фактора используются клетки (фибробласты, активированные макрофаги), изначально играющие важную роль в процессах пролиферации и обеспечивающие морфогенетическую функцию соединительной ткани;
- длительность эксперимента - до 6 месяцев и более.
- в качестве ведущего патогенетического фактора используются клетки (фибробласты, активированные макрофаги), изначально играющие важную роль в процессах пролиферации и обеспечивающие морфогенетическую функцию соединительной ткани;
- длительность эксперимента - до 6 месяцев и более.
Наиболее близким по технической сущности является способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии, заключающийся в введении в стекловидное тело взвеси активированных тромбоцитов с последующим гистологическим исследованием через 2 недели, 1, 3, 12 месяцев [1]. Однако данный способ является недостаточно точным, т.к.:
- в ходе эксперимента не проводилась непрямая офтальмоскопия;
- получение описанной модели зависит от дозы введенных активированных тромбоцитов.
- в ходе эксперимента не проводилась непрямая офтальмоскопия;
- получение описанной модели зависит от дозы введенных активированных тромбоцитов.
Следовательно, страдают воспроизводимость и точность способа моделирования пролиферативной витреоретинопатии. Процесс создания модели также отличается длительностью - 12 месяцев.
Новый технический результат, повышающий точность и воспроизводимость способа моделирования, сокращающий время получения модели, достигают применением нового способа моделирования пролиферативной витреоретинопатии, заключающегося во введении в стекловидное тело взвеси клеточных элементов в физиологическом растворе и последующем периодическом гистологическом исследовании серийных срезов глазного яблока, причем в качестве клеточных элементов используют мононуклеары крови, а для контроля проводят непрямую офтальмоскопию и гистологические исследования на 1-, 3-, 5-, 7-, 14- и 21-й день и по развитию массивных витреоретинальных мембран судят о получении модели.
Способ осуществляют следующим образом. Мононуклеары крови выделяют с помощью градиента фиколл-гипак. Кровь, полученную от животного, разбавляют в 2 раза физиологическим раствором. Полученную суспензию наслаивают на 3 мл смеси фиколла-гипака. Пробы центрифугируют в течение 15 мин при 800 g (2000 об/мин). После центрифугирования интерфазный слой, содержащий мононуклеары и располагающийся между плазмой и градиентом, забирают пастеровской пипеткой. Добавляют 1 мл физиологического раствора и полученную суспензия вновь центрифугируют в течение 7 мин при 400 g (15500 об/мин) для отмывания полученных мононуклеаров (схема разделения мононуклеаров представлена на фиг. 1). Чистота мононуклеаров, полученных на градиенте фиколл-гипак, составляет до 96%.
После эфирного наркоза каждому животному выполняют интравитреальные инъекции: через плоскую часть цилиарного тела в один глаз вводят 0,05 мл физиологического раствора, содержащего мононуклеары из расчета 2700/мм3, во второй глаз для контроля вводят 0,05 мл физиологического раствора.
Способ апробирован на 20 крысах породы Wistar весом 200-250 г.
Обзор экспериментального материала. В ходе эксперимента проводили непрямую офтальмоскопию на 1-, 3-, 5-, 7-, 14- и 21-й день после инъекции в условиях медикаментозного мидриаза (инсталляции S.Tropicamidi). В глазах с введенными мононуклеарами выявлены следующие изменения. На 3-й день после инъекции у всех животных в центральных отделах стекловидного тела отмечены локальные малоподвижные помутнения серовато-белого цвета, сетчатка не изменена. На 5-7-й дни офтальмоскопия затруднена из-за ограниченных фиксированных помутнений в стекловидном теле. На 14-й день у 2 животных отмечено помутнение задних отделов хрусталика, препятствующее офтальмоскопии; в глазах остальных животных грубое фиксированное помутнение в преретинальных и центральных отделах стекловидного тела, что затрудняло оценку состояния сетчатки. На 21-й день у всех животных рефлекс с глазного дна отсутствовал из-за развития катаракты. В контрольных глазах с инъекцией физиологического раствора изменений не выявлено.
В ходе эксперимента после каждой офтальмоскопии за исключением 1-го дня умерщвляли по 4 животных и выполняли энуклеацию. При подготовке материала для гистологических исследований макроскопически, начиная с 14-го дня, появились признаки субатрофии экспериментальных глаз (у 3 животных передне-задний размер составил 5-6 мм, в норме 7-8 мм). На 21-й день во всех экспериментальных глазах субатрофия (передне-задний размер около 4 мм). Весь полученный материал зафиксирован для световой и электронной микроскопии по стандартным методикам. Серийные срезы для световой микроскопии окрашены гематоксилин-эозином по Браше и по Ван-Гизону. Полутонкие срезы для электронной микроскопии окрашены толуидиновым синим.
В ходе гистологического исследования на 3-й день после введения мононуклеаров наблюдали скопления макрофагов в стекловидном теле (см. фиг.2 - полутонкий срез для электронной микроскопии. Здесь и на фиг. 3, 4 окраска толуидиновым синим. х1200). На 7-й день после инъекции - позади хрусталика скопления макрофагов и фибробластоподобных клеток (см. фиг.3), преретинально - обширные скопления фибробластов и клеток мононуклеарного ряда, окруженные коллагеновыми фибриллами (см. фиг.4). Эти морфологические изменения формировали преретинальную мембрану, которая к 14-му дню превращалась в довольно мощное образование в результате слияния отдельных, изолированных преретинальных мембран (см. фиг.5 - световая микроскопия. Окраска гематоксилин-эозином. х600).
Отмечено формирование эпиретинальных мембран с деструкцией внутренних слоев сетчатки (см. фиг.6 - световая микроскопия. Окраска по Браше. х600), локальная тракционная отслойка сетчатки (см. фиг.7 - световая микроскопия. Окраска по Браше. х600). На 21-й день были обнаружены грубые изменения в виде массивных интравитреальных мембран (см. фиг.8 - световая микроскопия. Окраска гематоксилинэозином. х600), а также развитие преретинальной и интраретинальной фиброзной ткани с полной утратой структуры сетчатки (см. фиг.9 - световая микроскопия. Окраска гематоксилин-эозином. х600; см. фиг.10 - световая микроскопия. Окраска по Ван-Гизону. х600). В контрольных глазах с инъекцией физиологического раствора изменений не выявлено.
Таким образом, офтальмоскопические и гистологические исследования в ходе эксперимента показали развитие преретинального швартообразования, являющегося основным признаком пролиферативной витреоретинопатии. Следовательно, предлагаемый способ моделирования является не только подтверждением участия мононуклеаров крови в патогенезе данного патологического процесса, но и позволяет создать более точную и высоко воспроизводимую модель пролиферативной витреоретинопатии и за более короткий срок - 21 день.
Источники информации
1. Хорошилова-Маслова И.П., Бабижаев М.А., Киселева О.А., Илатовская Л. В. Пептид клеточной адгезии в профилактике посттравматической пролиферативной витреоретинопатии (экспериментально-морфологическое исследование) // Вестн. офтальмол. 1997. 4. С. 27-31,
2. Algvere PV; Hallnas K; Dafgard E; Hoog A. Panretinal photocoagulation aggravates experimental proliferative vitreoretinopathy. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 1990; 228(5): p. 461-6
3. Chandler DB; Quansah FA, Hida T; Machemer R. A refined experimental model for proliferative vitreoretinopathy. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 1986; 224(1): p. 86-91.
1. Хорошилова-Маслова И.П., Бабижаев М.А., Киселева О.А., Илатовская Л. В. Пептид клеточной адгезии в профилактике посттравматической пролиферативной витреоретинопатии (экспериментально-морфологическое исследование) // Вестн. офтальмол. 1997. 4. С. 27-31,
2. Algvere PV; Hallnas K; Dafgard E; Hoog A. Panretinal photocoagulation aggravates experimental proliferative vitreoretinopathy. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 1990; 228(5): p. 461-6
3. Chandler DB; Quansah FA, Hida T; Machemer R. A refined experimental model for proliferative vitreoretinopathy. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 1986; 224(1): p. 86-91.
4. de Juan E Jr; Dickson J; Hatchell DL. Interaction of retinal glial cells with collagen matrices: implications for pathogenesis of cell-mediated vitreous traction. // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 1989; 227(5): p. 494-8.
5. Forrester JV; Stott DI; Hercus KM. Naturally occurring antibodies to bovine and human retinal S antigen: a comparison between uveitis patients and healthy volunteers. // Br. J Ophthalmol, 1989, Feb; 73(2): p. l55-9.
6. Hitchins CA; Grierson I., Hiscott PS. The effects of injections of cultured fibroblasts into the rabbit vitreous. // Graefes Arch Clin. Exp. Ophthalmol, 1985, 223 (5): p. 237-49.
7. Hui YN; Goodnight R; Sorgente N; Ryan SJ. Fibrovascular proliferation and retinal detachment after intravitreal injection of activated macrophages in the rabbit eye. // Am. J. Ophthalmol, 1989, Aug. 15, 108(2): p. l76-84.
Claims (1)
- Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии, заключающийся во введении в стекловидное тело взвеси клеточных элементов в физиологическом растворе и последующем периодическом гистологическом исследовании серийных срезов глазного яблока, отличающийся тем, что в качестве клеточных элементов используют мононуклеары крови и для контроля проводят непрямую офтальмоскопию и гистологические исследования на 1-, 3-, 5-, 7-, 14- и 21-й день и по развитию массивных витреоретинальных мембран судят о получении модели.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000111616A RU2182369C2 (ru) | 2000-05-10 | 2000-05-10 | Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000111616A RU2182369C2 (ru) | 2000-05-10 | 2000-05-10 | Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000111616A RU2000111616A (ru) | 2002-02-27 |
RU2182369C2 true RU2182369C2 (ru) | 2002-05-10 |
Family
ID=20234400
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000111616A RU2182369C2 (ru) | 2000-05-10 | 2000-05-10 | Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2182369C2 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2498415C1 (ru) * | 2012-07-24 | 2013-11-10 | Государственное бюджетное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней Академии наук Республики Башкортостан" | Способ моделирования диабетического макулярного отека |
RU2563368C1 (ru) * | 2014-05-13 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии у крыс |
RU2568368C1 (ru) * | 2014-10-22 | 2015-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии |
-
2000
- 2000-05-10 RU RU2000111616A patent/RU2182369C2/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ХОРОШИЛОВА-МАСЛОВА И.П. и др. Петид клеточной адгезии в профилактике постравматической пролиферативной витреоретинопатии (экспериментально-морфологическое исследование). Вестник офтальмологии. - 1997, № 4, с.27-31. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2498415C1 (ru) * | 2012-07-24 | 2013-11-10 | Государственное бюджетное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней Академии наук Республики Башкортостан" | Способ моделирования диабетического макулярного отека |
RU2563368C1 (ru) * | 2014-05-13 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии у крыс |
RU2568368C1 (ru) * | 2014-10-22 | 2015-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Guidry | Isolation and characterization of porcine Müller cells. Myofibroblastic dedifferentiation in culture. | |
Yeo et al. | Intravitreous fibronectin and platelet-derived growth factor: new model for traction retinal detachment | |
Aoki et al. | Transplantation of cells from eye-like structures differentiated from embryonic stem cells in vitro and in vivo regeneration of retinal ganglion-like cells | |
CN105267240A (zh) | 间充质干细胞来源的外泌体的用途 | |
Gao et al. | Structural changes in lenses of mice lacking the gap junction protein connexin43. | |
Nakagawa et al. | Evaluation of collagen gel and hyaluronic acid as vitreous substitutes | |
de Kater et al. | Patterns of aqueous humor outflow in glaucomatous and nonglaucomatous human eyes: a tracer study using cationized ferritin | |
Hui et al. | Glial epiretinal membranes and contraction: immunohistochemical and morphological studies | |
Hou et al. | Animal models of proliferative vitreoretinopathy and their use in pharmaceutical investigations | |
RU2182369C2 (ru) | Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии | |
JP2023550661A (ja) | ドライアイ治療用薬の調製におけるp55pik阻害剤の応用 | |
Saika et al. | Osteopontin: a component of matrix in capsular opacification and subcapsular cataract | |
Baudouin et al. | Class II histocompatibility antigen expression by cellular components of vitreous and subretinal fluid in proliferative vitreoretinopathy. | |
SCHÜTTE et al. | Connexin50, a gap junction protein of macroglia in the mammalian retina and visual pathway | |
Kanao et al. | Lymphangiogenesis promotes lens destruction and subsequent lens regeneration in the newt eyeball, and both processes can be accelerated by transplantation of dendritic cells | |
Weinreb et al. | In situ localization of cytoskeletal elements in the human trabecular meshwork and cornea. | |
Crispin et al. | Myo/Nog cells give rise to myofibroblasts during epiretinal membrane formation in a mouse model of proliferative vitreoretinopathy | |
CN113632765B (zh) | 视网膜新生血管疾病动物模型、构建方法及其应用 | |
Nagineni et al. | Human fetal lens epithelial cells in culture: an in vitro model for the study of crystallin expression and lens differentiation | |
de Juan et al. | Ultrastructural characteristics of proliferative tissue in retinopathy of prematurity | |
CN117643573B (zh) | 一种可递送药物至眼后节的纳米滴眼液及其制备方法和应用 | |
Matsushima et al. | Analysis of cytoskeletal proteins in posterior capsule opacification after implantation of acrylic and hydrogel intraocular lenses | |
US20160339043A1 (en) | Compositions and methods for reducing intraocular pressure | |
CASELLA et al. | Retinal pigment epithelial cells are heterogeneous in their expression of MHC-II after stimulation with interferon-γ | |
Unakar et al. | Ultrastructural changes associated with the induction and reversal of a chemically induced cataract |