RU2181891C1 - Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro - Google Patents
Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2181891C1 RU2181891C1 RU2001115329/14A RU2001115329A RU2181891C1 RU 2181891 C1 RU2181891 C1 RU 2181891C1 RU 2001115329/14 A RU2001115329/14 A RU 2001115329/14A RU 2001115329 A RU2001115329 A RU 2001115329A RU 2181891 C1 RU2181891 C1 RU 2181891C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substances
- antimicrobial
- substance
- vitro
- test
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии. Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro заключается в использовании тест-объектов. При этом в качестве тест-объекта используют фермент глутатионредуктазу и один из антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазу, или глутатионпероксидазу, или каталазу, определяют скорость ферментативной реакции веществ на тест-объектах, при этом соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть меньше 1. Способ обладает высокой специфичностью и чувствительностью. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии.
Разработка современных эффективных экспресс-методов для скрининга веществ, обладающих противомикробной и противовирусной активностью, является актуальной в связи с необходимостью сокращения сроков исследования веществ, обладающих различной биологической активностью. Эта задача может быть решена путем разработки молекулярных тест-систем с использованием ферментов в качестве тест-объектов.
Противомикробную и противовирусную активность оценивают на различных моделях.
Так известно определение противовирусной активности испытуемого соединения методом скрининга по отношению к следующим тест-вирусам: а) РНК-содержащим КА 13 (Flores), KB 3 (Nancy), ECHO 11 (Upsala), ВВС (Indiana), б) ДНК-содержащему ВПГ-1 (патент РФ 2072865).
Известно определение противовирусной активности с использованием в качестве тест-объекта микроорганизмов, при этом определялась полная задержка роста микроорганизмов с добавлением исследуемого вещества по сравнению с контролем (без добавления исследуемого вещества) (патент РФ 2105564).
Известны стандартные микробиологические методы, позволяющие выявлять вещества, обладающие противомикробной активностью, с помощью тест-объекта, в качестве которого используется набор штаммов, и позволяющие выявлять вещества, обладающие противовирусной активностью с помощью тест-объекта, в качестве которого используются культуры клеток /Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармокологических веществ, Минздрав РФ, 2000г/. Данный метод выбран нами в качестве прототипа.
Недостатком этих способов выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, является большая трудоемкость и необходимость постоянного поддерживания клеточной популяции в условиях длительного перевиваемого культивирования и контроля за сохранностью и чистотой стандартных штаммов микроорганизмов, что значительно увеличивает экономические и временные затраты на первичный скрининг.
Цель данного изобретения - создание способа, обладающего высокой специфичностью и чувствительностью, хорошей воспроизводимостью, меньшей трудоемкостью, более высокой экономичностью, чем известные способы.
Поставленная цель достигается за счет использования в качестве тест-объектов фермента глутатионредуктазы и одного из антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы, или глутатионпероксидазы, или каталазы, определяют скорость ферментативной реакции веществ на тест-объектах, при этом соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть меньше 1.
Фермент глутатионредуктаза (далее ГР) катализирует восстановление дисульфида глутатиона (окисленного глутатиона) в глутатион (восстановленный глутатион) /Классификатор ферментов, М., 1995 год, 1.6.4.2./.
Фермент супероксиддисмутаза (далее СОД) катализирует реакцию дисмутации супероксидного аниона (02 -) /Классификатор ферментов, М., 1995 год, 1.15.11. /.
Фермент глутатионпероксидаза (далее ГП) катализирует окисление восстановленной формы глутатиона в присутствии гидропероксида (Н2O2) или липидного пероксида (LOOH) /Классификатор ферментов, М., 1995 год, 1.11.1.9./.
Фермент каталаза расщепляет перекись водорода и присутствует во всех животных и растительных клетках и органах /Классификатор ферментов, М., 1995 год, 1.11.1.6./.
Для доказательства специфичности заявляемого способа выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами in vitro, с применением заявляемых ферментов были изучены препараты:
- с установленной противомикробной и противовирусной активностью, принадлежащие к различным химическим классам;
- с неизвестной биологической активностью;
- вещества, относящиеся к другим фармакологическим группам и не обладающие искомыми свойствами.
- с установленной противомикробной и противовирусной активностью, принадлежащие к различным химическим классам;
- с неизвестной биологической активностью;
- вещества, относящиеся к другим фармакологическим группам и не обладающие искомыми свойствами.
Изученные вещества и их характеристика приведены в таблице 1 и 3.
Изучали влияние веществ, указанных в таблице 1, на скорость реакций, катализируемых ферментами ГР, СОД, ГП и КАТ in vitro. Скорости реакций, катализируемых заявляемыми ферментами, определяли спектрофотометрически известными методами. Скорость ГП и ГР реакций определяли по убыли НАДФН (никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный) при длине волны 340 нм. Скорость СОД-реакции определяли в присутствии тетразолия нитросинего и фенозинмета сульфата по приросту НАДН (никотинамидадениндинуклеотид восстановленный) при длине волны 540 нм. Скорость КАТ-реакции определяли по убыли субстрата (H2O2), которую измеряли в виде комплекса с молибдатом аммония по поглощению при длине волны 410 нм. Измеряли скорость ферментативной реакции без добавления изучаемого вещества (контроль) и после добавления изучаемого вещества (опыт). Полученные результаты представлены в таблице 2. В таблице 2 приводятся средние арифметические значения из 2-3-х параллельных определений и стандартные отклонения среднего результата (М±m). В примерах приведены результаты, полученные при оптимальных концентрациях вещества в пробе. Из представленных примеров видно, что вещества с противомикробными и противовирусными свойствами угнетают ферменты ГР, СОД, ГП, КАТ. Вещества, не обладающие противомикробными и противовирусными свойствами, не угнетают заявляемые ферменты.
Выводы: Заявляемый способ выявления веществ, обладающих противомикробной и противовирусной активностью, подтвердил наличие у объектов 1-7 известной противомикробной и противовирусной активности. У изучаемого объекта 8 и 9 была определена заявляемым способом противомикробная и противовирусная активность. У объекта 10, обладающего другими фармакологическими свойствами, не обнаружена противомикробная и противовирусная активности.
Claims (1)
- Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro, заключающийся в использовании тест-объектов, отличающийся тем, что в качестве тест-объекта используют фермент глутатионредуктазу и один из антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазу, или глутатионпероксидазу, или каталазу, определяют скорость ферментативной реакции веществ на тест-объектах, при этом соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть меньше 1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001115329/14A RU2181891C1 (ru) | 2001-06-06 | 2001-06-06 | Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001115329/14A RU2181891C1 (ru) | 2001-06-06 | 2001-06-06 | Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2181891C1 true RU2181891C1 (ru) | 2002-04-27 |
Family
ID=20250381
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001115329/14A RU2181891C1 (ru) | 2001-06-06 | 2001-06-06 | Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2181891C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2687264C1 (ru) * | 2018-08-02 | 2019-05-13 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва" | Способ определения типа противомикробного действия соединения, обладающего антимикробной активностью |
-
2001
- 2001-06-06 RU RU2001115329/14A patent/RU2181891C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2687264C1 (ru) * | 2018-08-02 | 2019-05-13 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва" | Способ определения типа противомикробного действия соединения, обладающего антимикробной активностью |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sagisaka | The occurrence of peroxide in a perennial plant, Populus gelrica | |
| Angelova et al. | Oxidative stress response of filamentous fungi induced by hydrogen peroxide and paraquat | |
| Buchanan et al. | Thioredoxin and enzyme regulation | |
| Emri et al. | Glutathione metabolism and protection against oxidative stress caused by peroxides in Penicillium chrysogenum | |
| Godber et al. | A new route to peroxynitrite: a role for xanthine oxidoreductase | |
| Mackler | Studies of DPNH oxidase: properties of a soluble DPNH dehydrogenase | |
| Weiss et al. | Sensitive fluorometric assays for glutathione peroxidase and reductase | |
| Galiazzo et al. | Glutathione peroxidase in yeast. Presence of the enzyme and induction by oxidative conditions | |
| Götz et al. | Oxygen utilization by Lactobacillus plantarum: II. Superoxide and superoxide dismutation | |
| RU2181891C1 (ru) | Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro | |
| Hirrlinger et al. | Application and modulation of a permanent hydrogen peroxide-induced oxidative stress to cultured astroglial cells | |
| Botti et al. | Transient decrease of liver cytosolic glutathione S-transferase activities in rats given 1, 2-dibromoethane or CCl4 | |
| White | Differential synthesis of five primary electron transport dehydrogenases in Hemophilus parainfluenzae. | |
| Ramos et al. | Photoproduction of ammonia from nitrate by Anacystis nidulans cells | |
| Miyake et al. | Coproporphyrinogenase in a respiration-deficient mutant of yeast lacking all cytochromes and accumulating coproporphyrin | |
| Bandeiras et al. | The respiratory chain of the thermophilic archaeon Sulfolobus metallicus: studies on the type-II NADH dehydrogenase | |
| Allen et al. | Involvement of Glutathione in the Differentiation of the Slime Mold Physarum polycephalum: (cellular differentiation/Physarum/oxy‐free radicals/superoxide dismutase/glutathione) | |
| RU2181890C1 (ru) | Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro | |
| Bayraktar | Magnetic field effect on yeast Saccharomyces cereviisiiae activity at grape must fermentation | |
| Kono et al. | Alterations in superoxide dismutase and catalase in Fusarium oxysporum during starvation-induced differentiation | |
| Yildirim et al. | Diphenolases from Anoxybacillus kestanbolensis strains K1 and K4 T | |
| RU2181892C1 (ru) | Способ выявления веществ, обладающих антиоксидантными свойствами, in vitro | |
| Krumova et al. | Cold‐active catalase from the psychrotolerant fungus Penicillium griseofulvum | |
| Kong et al. | Glycerol oxidation and triose reduction by pyridine nucleotide-linked enzymes in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe | |
| Tsai et al. | Multifunctionality of lipoamide dehydrogenase: activities of chemically trapped monomeric and dimeric enzymes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20060511 |
|
| QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20060511 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160607 |