RU2181890C1 - Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro - Google Patents
Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2181890C1 RU2181890C1 RU2001115328A RU2001115328A RU2181890C1 RU 2181890 C1 RU2181890 C1 RU 2181890C1 RU 2001115328 A RU2001115328 A RU 2001115328A RU 2001115328 A RU2001115328 A RU 2001115328A RU 2181890 C1 RU2181890 C1 RU 2181890C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substance
- substances
- vitro
- enzymatic reaction
- rate
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии. При этом в качестве тест-объектов используют ферменты глутатионредуктазу или супероксиддисмутазу и глутатионпероксидазу или катализу, определяют скорости ферментативной реакции веществ на тест-объектах, при этом соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте глутатионредуктазе или супероксиддисмутазе после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть больше 1, а соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте каталазе или глутатионпероксидазе после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть меньше 1. Изобретение позволяет определять вещества с высокой точностью. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в частности, в фармакологии.
Разработка современных эффективных экспресс-методов для скрининга веществ, обладающих адаптогенной активностью, является актуальной в связи с необходимостью сокращения сроков исследования веществ, обладающих различной биологической активностью. Эта задача может быть решена путем разработки молекулярных тест-систем с использованием ферментов в качестве тест-объектов.
Адаптогенную активность оценивают на различных моделях с использованием в качестве тест-объекта подопытных животных, в частности крыс и мышей.
Известен способ выявления веществ, обладающих адаптогенной активностью, заключающийся в определении физической работоспособности животных (патент РФ 2135198). Опыты проводили на белых беспородных крысах, одной группе которых вводили внутрижелудочно в эксперементально-терапевтической дозе исследуемое вещество, а другой группе препарат сравнения, один раз в день в течение 10 суток. Влияние вещества на выносливость животных определяли по длительности бега в третбане до полного утомления.
Известен способ выявления веществ, обладающих адаптогенной активностью, заключающийся в определении иммунного статуса (патент РФ 2108108). Исследования проводили на мышах линии BDF1 и BALB/c. Известно, что защита организма от вредного воздействия окружающей среды во многом зависит от состояния иммунной системы, базирующейся на клеточном и гуморальном уровнях. Влияние изучаемого средства на иммунный статус оценивали по изменению активности НК-клеток и пролиферативной активности спленоцитов, стимулированных in vitro митогеном, а также по пролиферативной и цитолитической активности Т-киллеров в смешенной культуре лимфоцитов.
Наиболее близким способом к заявляемому относится известный физиологический метод определения адаптогенной активности с использованием в качестве тест-объекта мышей или крыс. Метод заключается в определении физической работоспособности, выносливости, устойчивости к экстремальным температурам, к гипоксии [Razbun W.B., Bovis M.G.., Holle Sahau A.M. Curr. Eye Res., 1986. V.5 - P.195-199].
Недостатком известных способов выявления веществ, обладающих адаптогенной активностью, является большая трудоемкость и необходимость использования большого количества лабораторных животных, длительность эксперемента, что значительно увеличивает экономические и временные затраты на первичный скрининг.
Цель данного изобретения - создание способа, обладающего высокой специфичностью и чувствительностью, хорошей воспроизводимостью, меньшей трудоемкостью, более высокой экономичностью, чем известные способы.
Поставленная цель достигается за счет использования в качестве тест-объектов ферментов глутатионредуктазы или супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы или каталазы, определения скорости ферментативной реакции веществ на тест-объектах, при этом соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте глутатионредуктазе или супероксиддисмутазе после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть больше 1, а соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте каталазе или глутатионпероксидазе после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть меньше 1.
Фермент глутатионредуктаза (далее ГР) катализирует восстановление дисульфида глутатиона (окисленного глутатиона) в глутатион (восстановленный глутатион) [Классификатор ферментов. М., 1995 г., 1.6.4.2.].
Фермент супероксиддисмутаза (далее СОД) катализирует реакцию дисмутации супероксидного аниона (О2) [Классификатор ферментов. М., 1995 г., 1.15.11.].
Фермент глутатионпероксидаза (далее ГП) катализирует окисление восстановленной формы глутатиона в присутствии гидропероксида (Н2О2) или липидного пероксида (LOOH) [Классификатор ферментов. М.,1995 г., 1.11.1.9.].
Фермент каталаза расщепляет перекись водорода и присутствует во всех животных и растительных клетках и органах [Классификатор ферментов. M., 1995 г., 1.11.1.6.].
Для доказательства специфичности заявляемого способа выявления веществ, обладающих адаптогенной активностью, in vitro, с применением заявляемых ферментов были изучены вещества:
- с установленной адаптогенной активностью, принадлежащие к различным химическим классам;
- с неизвестной биологической активностью;
- вещества, относящиеся к другим фармакологическим группам и не обладающие искомыми свойствами.
- с установленной адаптогенной активностью, принадлежащие к различным химическим классам;
- с неизвестной биологической активностью;
- вещества, относящиеся к другим фармакологическим группам и не обладающие искомыми свойствами.
Изученные вещества и их характеристика приведены в таблицах 1 и 3.
Изучали влияние веществ, указанных в таблице 1 на скорость реакций, катализируемых ферментами ГР, СОД, ГП, и КАТ in vitro. Скорости реакций, катализируемых заявляемыми ферментами, определяли спектрофотометрически известными методами. Скорость ГП и ГР реакций определяли по убыли НАДФН (никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный ) при длине волны 340 нм. Скорость СОД-реакции определяли в присутствии тетразолия нитросинего и феназинметасульфата по приросту НАДН (никотинамидадениндинуклеотид восстановленный) при длине волны 540 нм. Скорость КАТ-реакции определяли по убыли субстрата (Н2О2), которую измеряли в виде комплекса с молибдатом аммония по поглощению при длине волны 410 нм. Измеряли скорость ферментативной реакции без добавления изучаемого вещества (контроль) и после добавления изучаемого вещества (опыт). Полученные результаты представлены в таблице 2. В таблице 2 приводятся средние арифметические значения из 2-3-х параллельных определений и стандартные отклонения среднего результата (М±m). В примерах приведены результаты, полученные при оптимальных концентрациях вещества в пробе. Из представленных примеров видно, что вещества с адаптогенной активностью активизируют ферменты ГР, СОД и угнетают ферменты ГП, КАТ.
Из представленных примеров видно, что вещества, обладающие адаптогенной активностью, при непосредственном взаимодействии с ферментами повышают скорость глутатионредуктазной и супероксиддисмутазной реакций, снижая при этом скорость каталазной и глутатионпероксидазной реакций ( 1-7). Вещества, не обладающие адаптогенными свойствами, влияют на эти скорости иным способом. Например, активируют оба фермента ( 10), ингибируют оба фермента ( 8, 9).
Способ выявления веществ, обладающих адаптогенной активностью, на заявляемых четырех ферментах позволяет добиться высокой степени точности при определении искомой активности.
Claims (1)
- Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro, заключающийся в использовании тест-объектов, отличающийся тем, что в качестве тест-объекта используют ферменты глутатионредуктазу или супероксиддисмутазу и каталазу или глутатионпероксидазу, определяют скорость ферментативной реакции веществ на тест-объектах, при этом соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте глутатионредуктазе и супероксиддисмутазе после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть больше 1, а соотношение скорости ферментативной реакции на тест-объекте каталазе и глутатионпероксидазе после добавления вещества и скорости ферментативной реакции до добавления вещества должно быть меньше 1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001115328A RU2181890C1 (ru) | 2001-06-06 | 2001-06-06 | Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001115328A RU2181890C1 (ru) | 2001-06-06 | 2001-06-06 | Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2181890C1 true RU2181890C1 (ru) | 2002-04-27 |
Family
ID=20250380
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001115328A RU2181890C1 (ru) | 2001-06-06 | 2001-06-06 | Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2181890C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2455650C2 (ru) * | 2010-06-18 | 2012-07-10 | Карен Маисович Саканян | Способ определения фармакологической активности гомеопатического лекарственного средства |
| WO2014147487A2 (en) | 2013-03-18 | 2014-09-25 | Oleg Iliich Epshtein | Method for determining degree of modified potency of bipathic medicament |
| WO2014155206A2 (en) | 2013-03-18 | 2014-10-02 | Oleg Iliich Epshtein | Method for determining degree of modified potency of a medicament |
-
2001
- 2001-06-06 RU RU2001115328A patent/RU2181890C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Razbun W.B. et al, Curr. Eye Res, 1986, v.5, р.195-199. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2455650C2 (ru) * | 2010-06-18 | 2012-07-10 | Карен Маисович Саканян | Способ определения фармакологической активности гомеопатического лекарственного средства |
| WO2014147487A2 (en) | 2013-03-18 | 2014-09-25 | Oleg Iliich Epshtein | Method for determining degree of modified potency of bipathic medicament |
| WO2014155206A2 (en) | 2013-03-18 | 2014-10-02 | Oleg Iliich Epshtein | Method for determining degree of modified potency of a medicament |
| US9945868B2 (en) | 2013-03-18 | 2018-04-17 | Oleg Illich Epshtein | Method for determining degree of modified potency of bipathic medicament |
| US9945798B2 (en) | 2013-03-18 | 2018-04-17 | Oleg Illiich Epshtein | Method for determining degree of modified potency of a medicament |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dolin | The DPNH-oxidizing enzymes of Streptococcus faecalis. II. The enzymes utilizing oxygen, cytochrome c, peroxide and 2, 6-dichlorophenol-indophenol or ferricyanide as oxidants | |
| Mavelli et al. | Superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase in developing rat brain | |
| Godber et al. | A new route to peroxynitrite: a role for xanthine oxidoreductase | |
| Rigo et al. | Simultaneous determination of superoxide dismutase and catalase in biological materials by polarography | |
| Tözüm et al. | The effects of methyl viologen on Gloeocapsa sp. LB795 and their relationship to the inhibition of acetylene reduction (nitrogen fixation) by oxygen | |
| Stein et al. | Diphosphopyridine nucleotide specific isocitric dehydrogenase of mammalian mitochondria. I. On the roles of pyridine nucleotide transhydrogenase and the isocitric dehydrogenases in the respiration of mitochondria of normal and neoplastic tissues | |
| O'Malley et al. | Inhibition of erythrocyte acetylcholinesterase by peroxides | |
| Klemme | Studies on the mechanism of NAD-photoreduction by chromatophores of the facultative phototroph, Rhodopseudomonas capsulata | |
| Gillette | Reductive enzymes | |
| Xu et al. | Pyrroloquinoline quinone acts with flavin reductase to reduce ferryl myoglobin in vitro and protects isolated heart from reoxygenation injury | |
| Walsh et al. | Mechanisms of Active Transport in Isolated Bacterial Membrane Vesicles: X. INACTIVATION OF d-LACTATE DEHYDROGENASE AND d-LACTATE DEHYDROGENASE-COUPLED TRANSPORT IN ESCHERICHIA COLI MEMBRANE VESICLES BY AN ACETYLENIC SUBSTRATE | |
| Kimura et al. | Highly sensitive and reliable chemiluminescence method for the assay of superoxide dismutase in human erythrocytes | |
| RU2181890C1 (ru) | Способ выявления веществ, обладающих адаптогенными свойствами, in vitro | |
| Benzi et al. | Cerebral enzyme antioxidant system. Influence of aging and phosphatidylcholine | |
| Allen et al. | Involvement of Glutathione in the Differentiation of the Slime Mold Physarum polycephalum: (cellular differentiation/Physarum/oxy‐free radicals/superoxide dismutase/glutathione) | |
| Dey et al. | Leishmanial glycosomes contain superoxide dismutase | |
| Shvinka et al. | Production of superoxide radicals during bacterial respiration | |
| Stewart et al. | Pyridine nucleotides in normal and cataractous human lenses | |
| RU2181891C1 (ru) | Способ выявления веществ, обладающих противомикробными и противовирусными свойствами, in vitro | |
| Tsai et al. | Multifunctionality of lipoamide dehydrogenase: activities of chemically trapped monomeric and dimeric enzymes | |
| Aebi | Detection and fixation of radiation-produced peroxide by enzymes | |
| RU2181892C1 (ru) | Способ выявления веществ, обладающих антиоксидантными свойствами, in vitro | |
| Šišková et al. | The effects of hyperoxia, hypoxia, and ischemia/reperfusion on the activity of cytochrome oxidase from the rat retina | |
| Rockwell et al. | Effects of mitomycin C and porfiromycin on exponentially growing and plateau phase cultures | |
| Gale et al. | Phenotypic resistance to amphotericin B in Candida albicans: the role of reduction |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160607 |