RU2179580C1 - Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature - Google Patents
Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature Download PDFInfo
- Publication number
- RU2179580C1 RU2179580C1 RU2000128453/13A RU2000128453A RU2179580C1 RU 2179580 C1 RU2179580 C1 RU 2179580C1 RU 2000128453/13 A RU2000128453/13 A RU 2000128453/13A RU 2000128453 A RU2000128453 A RU 2000128453A RU 2179580 C1 RU2179580 C1 RU 2179580C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gram
- protozoa
- blue
- positive
- trichomonas
- Prior art date
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 241000224526 Trichomonas Species 0.000 title claims description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 8
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims description 4
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 claims 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 abstract description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 abstract 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]aniline;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=CC1=C(C=1C=CC(N)=CC=1)C1=CC=C(N)C=C1 AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241001502500 Trichomonadida Species 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 210000001653 corpus striatum Anatomy 0.000 description 1
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000014670 detection of bacterium Effects 0.000 description 1
- 230000019469 detection of protozoan Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960001235 gentian violet Drugs 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 208000000143 urethritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для дифференцировки грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также простейших рода Trichomonas в процессе лабораторной диагностики вызываемых ими заболеваний. The invention relates to medicine, namely to medical microbiology, and can be used to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria, as well as protozoa of the genus Trichomonas in the laboratory diagnosis of diseases caused by them.
Прототипом предлагаемого изобретения является способ дифференцировки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов путем окрашивания по методу Грама (генциановый фиолетовый 1-2 мин, через полоску фильтровальной бумаги, раствор Люголя 1-2 мин, обесцвечивание препарата этиловым спиртом в течение 30-60 с, промывание водой и докрашивание водным фуксином 1-2 мин). [Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. Под ред. Л.Б. Борисова. М. 1979. С. 32.] Указанный способ наиболее широко применяется для сужения круга поиска предполагаемого возбудителя путем дифференцирования бактерий по различию в цвете после окрашивания (грамположительные - синие, грамотрицательные - красные). При этом необходимо отметить частую невозможность дифференцирования бактерии по цвету при непосредственном окрашивании клинического материала, поскольку в нем всегда присутствуют бактерии, находящиеся на разных стадиях роста. Эти различия определяют различия в химическом составе клеточной стенки и невозможность дифференцировки грамположительных и грамотрицательных по цвету. The prototype of the invention is a method for differentiating gram-positive and gram-negative microorganisms by staining according to the Gram method (gentian violet 1-2 minutes, through a strip of filter paper, Lugol's solution 1-2 minutes, decolorizing the preparation with ethyl alcohol for 30-60 s, washing with water and staining water fuchsin 1-2 min). [Guide to laboratory studies in microbiology. Ed. L.B. Borisov. M. 1979. S. 32.] The specified method is most widely used to narrow the search for the alleged pathogen by differentiating bacteria by color difference after staining (gram-positive - blue, gram-negative - red). It should be noted that it is often impossible to differentiate bacteria by color when directly staining clinical material, since bacteria that are at different stages of growth are always present in it. These differences determine the differences in the chemical composition of the cell wall and the inability to differentiate gram-positive and gram-negative in color.
Протозоологическое изучение простейших предполагает использование нативных методов и окрашенных препаратов. При этом методы окраски, используемые при микроскопии простейших, только сложные (окраска по Романовскому-Гимзе, окраска по Романовскому-Гимзе в модификации Филипсона, окраска по Лейшману и другие) [Медицинские лабораторные технологии и диагностика: справочник под ред. проф. А.И. Карпищенко С.-Пб,: Изд. "Интермедика", 1998, с. 277-78] . Использование визуализации простейших, например окраска по Романовскому-Гимзе, нередко обусловливает искажение результата, поскольку требует только свежеприготовленных реактивов, не подлежащих хранению, и соблюдения очень жестких требований к рН растворов. Кроме того, для выявления и бактерий и простейших на практике используется разные методы, что удлиняет промежуток времени до конечного результата, повышает стоимость исследований и их ресурсозатратность. В этой связи для одномоментного выявления простейших и бактерий, а также дифференцирования последних на грамположительные и грамотрицательные предложен способ, описанный ниже. Protozoological study of protozoa involves the use of native methods and stained preparations. At the same time, the staining methods used in microscopy of protozoa are only complex (staining according to Romanovsky-Giemsa, staining according to Romanovsky-Giemsa in the modification of Philipson, staining according to Leishman and others) [Medical laboratory technologies and diagnostics: reference book, ed. prof. A.I. Karpishchenko S.-Pb., Publ. "Intermedica", 1998, p. 277-78]. The use of visualization of protozoa, for example Romanovsky-Giemsa staining, often leads to a distortion of the result, since it requires only freshly prepared reagents that cannot be stored, and very strict requirements for pH of the solutions are observed. In addition, different methods are used in practice to identify both bacteria and protozoa, which lengthens the period of time to the final result, increases the cost of research and their resource consumption. In this regard, for the simultaneous detection of protozoa and bacteria, as well as differentiation of the latter into gram-positive and gram-negative, a method is described below.
Технический результат - повышение информативности и диагностической ценности, сокращение времени исследования и стоимости за счет одномоментной дифференцировки грамположительных и грамотрицательных бактерий и простейших. The technical result is an increase in information content and diagnostic value, a reduction in research time and cost due to the simultaneous differentiation of gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa.
Технический результат достигается благодаря применению нового способа окраски микроскопических препаратов с использованием красителя - щелочного раствора метиленового синего Леффлера в прописи М.О. Биргера [Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. / Под ред. М.О. Биргера. -3 изд. перераб. и доп. - М.: Медицина, 1982. - С. 22]. The technical result is achieved through the use of a new method of staining microscopic preparations using a dye - an alkaline solution of Leffler's methylene blue in the recipe M.O. Birgera [Handbook of Microbiological and Virological Research Methods. / Ed. M.O. Birger. -3 ed. reslave. and add. - M .: Medicine, 1982. - S. 22].
1. Дистиллированная вода - 100 мл
10 %-ный раствор КОН - 2 капли
Насыщенный (7%-ный) раствор метиленового синего - 30 мл
или
2. Метиленовый синий - 3 г
1%-ный раствор КОН - 1 мл
95%-ный спирт - 20 мл
Дистиллированная вода - 100 мл
Способ дифференцировки осуществляется следующим образом: исследуемый материал фиксируют ацетоном, затем наносят насыщенный щелочной раствор метиленового синего. Окрашивание препарата проводят в течение 20-25 мин в эксикаторе, при температуре 37oС. В результате проведенных нами опытов мы убедились, что только щадящая фиксация мазка и такое продолжительное инкубирование в условиях термостата обеспечивает максимально эффективную картину его окрашивания. Грамположительные микроорганизмы при этом окрашиваются в серо-голубой цвет, а грамотрицательные - в иссиня-черный. Простейшие окрашиваются в голубой цвет, с иссиня-черными ядрами и четко видным контуром.1. Distilled water - 100 ml
10% KOH solution - 2 drops
Saturated (7%) methylene blue solution - 30 ml
or
2. Methylene blue - 3 g
1% KOH solution - 1 ml
95% alcohol - 20 ml
Distilled Water - 100 ml
The differentiation method is as follows: the test material is fixed with acetone, then a saturated alkaline solution of methylene blue is applied. Staining of the drug is carried out for 20-25 minutes in a desiccator, at a temperature of 37 o C. As a result of our experiments, we were convinced that only sparing fixation of the smear and such prolonged incubation under the conditions of the thermostat provides the most effective picture of its staining. Gram-positive microorganisms are stained in blue-gray color, and gram-negative - in blue-black. Protozoa are painted blue, with blue-black nuclei and a clearly visible contour.
Несомненным преимуществом данного способа окраски является доступность и простота приготовления реактивов и процесс окраски, скорость проведения исследования и основное - возможность обнаружения в одном препарате и бактерий и простейших, что значительно ускорят лабораторную диагностику вызываемых ими заболеваний. The undoubted advantage of this method of staining is the availability and ease of preparation of reagents and the staining process, the speed of the study and the main thing is the possibility of detecting bacteria and protozoa in one preparation, which will significantly accelerate the laboratory diagnosis of the diseases they cause.
Пример 1. На фиксированный ацетоном мазок из смеси музейных культур стафилококка и кишечной палочки наносили краситель (щелочной раствор метиленового синего Леффлера) и окрашивали в эксикаторе в течение 20 мин при 37oС. В результате проведенного опыта были обнаружены четко прокрашенные в иссиня-черный цвет палочки и кокки серо-голубой окраски, образующие неравномерные скопления.Example 1. A dye (a mixture of museum cultures of staphylococcus and E. coli) was coated with an acetone smear (alkaline solution of Leffler methylene blue) and stained in a desiccator for 20 min at 37 o C. As a result of the experiment, a clear blue-black color was found sticks and cocci gray-blue color, forming uneven clusters.
Пример 2. Материалом для исследования явилось отделяемое слизистой оболочки мочеиспускательного канала больного с подозрением на трихомонадный уретрит. Отделяемое фиксировали ацетоном, окрашивали предложенным нами способом. При микроскопии мазка обнаружены четко прокрашенные в иссиня-черный цвет палочки и кокковая флора серо-голубой окраски, а также сплошь в поле зрения полиморфно-ядерные нейтрофилы и крупные, слегка вытянутые микроорганизмы с треугольным или чечевицеобразным ядром. Размеры их превосходили поперечник лейкоцитов приблизительно в 2 раза. Цитоплазма была прокрашена в серо-голубой цвет, а ядра - в иссиня-черный. По совокупности морфологических признаков указанные микроорганизмы были отнесены к трихомонадам. Example 2. The material for the study was detachable mucous membrane of the urethra of the patient with suspected trichomonas urethritis. The detachable was fixed with acetone, stained with our proposed method. Microscopy of the smear revealed clearly bluish-black colored rods and cocci flora of a gray-blue color, as well as completely polymorphic nuclear neutrophils and large, slightly elongated microorganisms with a triangular or lenticular nucleus. Their sizes exceeded the diameter of leukocytes by about 2 times. The cytoplasm was stained in gray-blue, and the nucleus in bluish-black. According to the totality of morphological characters, these microorganisms were assigned to trichomonads.
Проведенные исследования свидетельствуют, что предложенный нами способ окраски микроорганизмов и простейших является эффективным удобным и экономичным методом микроскопической дифференцировки микроорганизмов, необходимой в процессе лабораторной диагностики. Our studies indicate that our proposed method for staining microorganisms and protozoa is an effective convenient and economical method for microscopic differentiation of microorganisms, which is necessary in the process of laboratory diagnostics.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000128453/13A RU2179580C1 (en) | 2000-11-14 | 2000-11-14 | Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000128453/13A RU2179580C1 (en) | 2000-11-14 | 2000-11-14 | Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2179580C1 true RU2179580C1 (en) | 2002-02-20 |
Family
ID=20242106
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000128453/13A RU2179580C1 (en) | 2000-11-14 | 2000-11-14 | Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2179580C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2289813C2 (en) * | 2004-11-09 | 2006-12-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Method for detecting trichomonas forms |
| RU2647474C1 (en) * | 2017-04-18 | 2018-03-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of coloring and differentiation of microorganisms |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4525453A (en) * | 1982-10-26 | 1985-06-25 | Eastman Kodak Company | Process for rapidly differentiating between gram-negative and gram-positive microorganisms |
| US4639421A (en) * | 1984-10-01 | 1987-01-27 | Becton, Dickinson And Company | Fluorescent gram stain |
| SU1717635A1 (en) * | 1990-02-13 | 1992-03-07 | Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии | Method of preparation of a system for differentiating enterobacteria |
| RU2067997C1 (en) * | 1993-10-22 | 1996-10-20 | Гашимова Динара Тимербаевна | Nutrient medium for differentiation of bacterium genus morganella from other enterobacteria |
| RU2086653C1 (en) * | 1992-09-01 | 1997-08-10 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Indicator system of differential-diagnostic nutrient medium for intestinal and urological infection pathogens |
-
2000
- 2000-11-14 RU RU2000128453/13A patent/RU2179580C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4525453A (en) * | 1982-10-26 | 1985-06-25 | Eastman Kodak Company | Process for rapidly differentiating between gram-negative and gram-positive microorganisms |
| US4639421A (en) * | 1984-10-01 | 1987-01-27 | Becton, Dickinson And Company | Fluorescent gram stain |
| SU1717635A1 (en) * | 1990-02-13 | 1992-03-07 | Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии | Method of preparation of a system for differentiating enterobacteria |
| RU2086653C1 (en) * | 1992-09-01 | 1997-08-10 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Indicator system of differential-diagnostic nutrient medium for intestinal and urological infection pathogens |
| RU2067997C1 (en) * | 1993-10-22 | 1996-10-20 | Гашимова Динара Тимербаевна | Nutrient medium for differentiation of bacterium genus morganella from other enterobacteria |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. Под ред. Л.Б. Борисова. - М., 1979, с.32. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2289813C2 (en) * | 2004-11-09 | 2006-12-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Method for detecting trichomonas forms |
| RU2647474C1 (en) * | 2017-04-18 | 2018-03-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of coloring and differentiation of microorganisms |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Thomas et al. | Sensitivity of detecting Chlamydia trachomatis elementary bodies in smears by use of a fluorescein labelled monoclonal antibody: comparison with conventional chlamydial isolation. | |
| JP5237305B2 (en) | Detection and identification of microorganisms on permeable membranes | |
| DE2823916C2 (en) | ||
| Gunasekaran | Laboratory manual in microbiology | |
| US4094745A (en) | Method of staining microscopic organisms | |
| JPH04218392A (en) | Rapid measurement of number of live microorganism and measuring kit | |
| US5550032A (en) | Biological assay for microbial contamination | |
| US4639421A (en) | Fluorescent gram stain | |
| KR100264366B1 (en) | Process for detecting microorganisns | |
| CN104017889B (en) | Molecular beacon probe for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis and method for detecting Mycobacterium tuberculosis | |
| CN107167469B (en) | An indicator material for distinguishing Gram-positive bacteria from Gram-negative bacteria, its preparation method and application | |
| RU2179580C1 (en) | Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature | |
| CA1089339A (en) | Method of staining micro-organisms | |
| DE69737718T2 (en) | PROOF OF MICROORGANISMS | |
| CN101624634B (en) | Field fast high-sensitive detecting kit of monodon baculovirus and detecting method | |
| US3785929A (en) | Diagnostic composition for the detection of nitrite | |
| US3645853A (en) | Diagnostic composition and method for the detection of nitrate reduction | |
| CN112210584A (en) | Rapid lactic acid bacteria counting method | |
| US5827680A (en) | Three reagent gram staining method and kit | |
| US5759799A (en) | Marker for revealing contaminants and application method for performing an antibiogram carried out directly on a sample | |
| US5393661A (en) | Three reagent gram staining method and kit | |
| NO742267L (en) | ||
| RU2177507C1 (en) | Method of identification of mycobacteria | |
| Meseguer et al. | Acridine orange stain in the early detection of bacteria in blood cultures | |
| JPH11346759A (en) | Method for measuring the number of burned bacteria |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20041115 |