RU2175555C2

RU2175555C2 - Method of interferon virus-inductor preparing

Info

Publication number: RU2175555C2
Application number: RU2000102626/13A
Authority: RU
Inventors: Е.В. Бобкова; М.Н. Муллагулова
Original assignee: Государственное унитарное предприятие "Иммунопрепарат"
Priority date: 2000-02-03
Filing date: 2000-02-03
Publication date: 2001-11-10

Abstract

FIELD: biotechnological industry, virology. SUBSTANCE: invention relates to method of preparing virus-inductor for production of human leucocyte interferon. Method involves preparing virus-inductor of interferon by dilution of mother material (strain "H" of Newcastle disease virus GKV N 2348) with phosphate-saline buffer with addition of 10.0% of D(+)-lactose and its administration into allontoid cavity of chicken embryos in concentration 10⁶ cytoplasmic actvity/50/0.2 ml followed by incubation of chicken embryos and removal of virus-containing fluid. Method provides preparing interferon titers with activity 16000-18000 IU/ml as compared with 11000-14000 IU/ml in analog. EFFECT: improved method of preparing, increased activity of interferon. 1 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к области медицинской промышленности, в частности к получению вируса-индуктора для производства человеческого лейкоцитарного интерферона. The invention relates to the field of medical industry, in particular to the production of an inducer virus for the production of human leukocyte interferon.

В производстве человеческого лейкоцитарного интерферона предусматривается использование в качестве вируса-индуктора интерферона вакцинного штамма "Н" вируса болезни Ньюкастл (ВБН). Этот штамм используется во многих странах мира, выпускающих человеческий лейкоцитарный интерферон для медицинской и ветеринарной практики или в научных исследованиях. Это наиболее безопасный вирус-индуктор, обладающий индуцирующими свойствами при получении лейкоцитарного интерферона человека или животных. In the production of human leukocyte interferon, it is envisaged to use the vaccine strain "H" of the Newcastle disease virus (VBI) as an inducer virus of interferon. This strain is used in many countries around the world that produce human leukocyte interferon for medical and veterinary practice or in scientific research. This is the safest inducer virus with inducing properties in the production of human or animal leukocyte interferon.

Известен способ получения вируса-индуктора интерферона путем культивирования штамма "Н" вируса болезни Ньюкастл в 9-11 дневных куриных эмбрионах [1] . Заражающая доза вируса составляет 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл. Вирус-индуктор разводят в 0,1 М фосфатно-солевом буфере. Эта доза вводится в аллантоисную полость эмбриона шприцем с соблюдением условий стерильности. Затем эмбрионы инкубируют 48 ч при (32±0,5)^oC. После инкубации эмбрионы охлаждают при 4^oC и отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость, которая после необходимых контролей используется в качестве вируса-индуктора интерферона. Вируссодержащая жидкость должна отвечать следующим требованиям: быть бактериологически стерильной, иметь гемагглютинирующую активность (ГА) 256 единиц, инфекционный титр не ниже 10¹¹ ЦПД/50/мл. При использовании этого индуктора в производстве человеческого лейкоцитарного интерферона получают интерферон с противовирусной активностью 11 000 - 14 000 МЕ/мл.A known method of producing the virus-inducer of interferon by culturing strain "H" of the Newcastle disease virus in 9-11 day old chicken embryos [1]. The infectious dose of the virus is 10 ⁶ CPD / 50 / 0.2 ml. The inducer virus is diluted in 0.1 M phosphate-buffered saline. This dose is injected into the allantoic cavity of the embryo with a syringe subject to sterile conditions. Then the embryos are incubated for 48 hours at (32 ± 0.5) ^o C. After incubation, the embryos are cooled at 4 ^o C and the virus-containing allantoic fluid is aspirated, which, after necessary controls, is used as the interferon inducer virus. Virus-containing fluid must meet the following requirements: be bacteriologically sterile, have a hemagglutinating activity (GA) of 256 units, an infectious titer of at least 10 ¹¹ CPD / 50 / ml. Using this inducer in the production of human leukocyte interferon, interferon with an antiviral activity of 11,000 to 14,000 IU / ml is obtained.

Задача изобретения - повышение интерферониндуцирующей способности вирусного индуктора. The objective of the invention is to increase the interferon-inducing ability of a viral inducer.

Для решения поставленной задачи в способе получения вируса-индуктора интерферона маточный материал (штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл ГКВ N 2348) разводят фосфатно-солевым буфером с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы, вводят в аллантоисную полость куриных эмбрионов в концентрации 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл, с последующим инкубированием и отбором вируссодержащей жидкости.To solve the problem, in the method for producing the interferon inducer virus, the uterine material (strain H) of the Newcastle disease virus GKB N 2348) is diluted with phosphate-buffered saline with the addition of 10.0% D (+) - lactose, introduced into the allantoic cavity of chicken embryos concentration of 10 ⁶ JRC / 50 / 0.2 ml, followed by incubation and selection of virus-containing fluid.

Отличительным признаком предлагаемого способа является добавление Д(+)-лактозы в фосфатно-солевой буфер при разведении маточного штамма, что обеспечивает получение более высоких титров интерферона с активностью 16 000 - 18 000 МЕ/мл против 11 000 - 14 000 МЕ/мл у прототипа (cм. таблицу). A distinctive feature of the proposed method is the addition of D (+) - lactose in phosphate-buffered saline during the dilution of the uterine strain, which provides higher titers of interferon with an activity of 16,000 - 18,000 IU / ml versus 11,000 - 14,000 IU / ml in the prototype (see table).

Пример 1. Штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл (ГКВ N 2348) использовали в качестве маточного штамма. Для получения производственного штамма в аллантоисную полость 9-10 дневного куриного эмбриона вводят с соблюдением условий стерильности в концентрации 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл исходной суспензии маточного штамма, разведенного в фосфатно-солевом буфере, с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы. Инкубируют в течение 48 ч при температуре (32±0,5)^oC. После инкубации эмбрионы охлаждают в течение 18-20 ч при 4^oC, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Титр интерферона α -типа, полученный с данным индуктором, составляет 16 000 МЕ/мл.Example 1. The strain "N" of the virus of Newcastle disease (HBV No. 2348) was used as a uterine strain. To obtain a production strain, a 9-10 day old chicken embryo is introduced into the allantoic cavity under sterile conditions at a concentration of 10 ⁶ CPD / 50 / 0.2 ml of the initial suspension of the mother strain, diluted in phosphate-buffered saline, with the addition of 10.0% D ( +) - lactose. Incubated for 48 hours at a temperature of (32 ± 0.5) ^o C. After incubation, the embryos are cooled for 18-20 hours at 4 ^o C, the virus-containing allantoic fluid is suctioned off. The α-type interferon titer obtained with this inducer is 16,000 IU / ml.

Пример 2. Штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл (ГКВ N 2348) использовали в качестве маточного штамма. Для получения производственного штамма в аллантоисную полость 9-10 дневного куриного эмбриона вводят с соблюдением условий стерильности в концентрации 10⁶ ЦПД/50/0,2 мл исходной суспензии маточного штамма, разведенного в фосфатно-солевом буфере, с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы. Инкубируют в течение 48 ч при температуре (32±0,5)^oC. После инкубации эмбрионы охлаждают в течение 18-20 ч при 4^oC, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Титр интерферона α-типа, полученный с данным индуктором, составляет 18 000 МЕ/мл.Example 2. The strain "N" of the virus of Newcastle disease (HBV No. 2348) was used as a uterine strain. To obtain a production strain, a 9-10 day old chicken embryo is introduced into the allantoic cavity under sterile conditions at a concentration of 10 ⁶ CPD / 50 / 0.2 ml of the initial suspension of the mother strain, diluted in phosphate-buffered saline, with the addition of 10.0% D ( +) - lactose. Incubated for 48 hours at a temperature of (32 ± 0.5) ^o C. After incubation, the embryos are cooled for 18-20 hours at 4 ^o C, the virus-containing allantoic fluid is suctioned off. The α-type interferon titer obtained with this inducer is 18,000 IU / ml.

Источники информации
1.Патент РФ N 2140284, кл. А 61 К 38/21, публ. 27.10.99.Sources of information
1. RF patent N 2140284, cl. A 61 K 38/21, publ. 10.27.99.

Claims

A method of producing an interferon inducer virus, comprising administering Newcastle disease virus, strain H, STB 2348 in phosphate-buffered saline into the allantoic cavity of chicken embryos, followed by their incubation and selection of virus-containing fluid, characterized in that they use phosphate-saline buffer with the addition of 10% D (+) - lactose.