RU2064303C1

RU2064303C1 - Method of preparing inactivated vaccine against cattle plague

Info

Publication number: RU2064303C1
Application number: RU94008968A
Authority: RU
Inventors: В.И. Жестерев; В.В. Башаев; Т.Ф. Горшкова; И.Ф. Вишняков; Г.М. Карпов; А.А. Коломыцев; С.В. Миколайчук
Original assignee: Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии
Priority date: 1994-03-18
Filing date: 1994-03-18
Publication date: 1996-07-27

Abstract

FIELD: veterinary virology. SUBSTANCE: vaccine strain "ЛТ" of cattle plague virus is grown on saiga kidney cell transplanted line in roller culture and inactivated with copper sulfate at final concentration 0.1-0.2% at 36-38 C for 22-26 hr. Inactivated vaccine is tested under laboratory and industrial conditions. Vaccine is harmless and nonreactogenic at its administration to rabbits, piglets, yaks and cattle and shows high antigenic and immunogenic properties. After two-fold vaccination (at 10-14 days interval) preparation causes formation of humoral immunity and resistance to infection with virulent strain of cattle plague in cattle. EFFECT: high effectiveness of vaccine. 1 tbl

Description

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к способу приготовления инактивированной культуральной вакцины для профилактики чумы крупного рогатого скота (КРС). The invention relates to veterinary virology, and in particular to a method for preparing an inactivated culture vaccine for the prevention of cattle plague (cattle).

Известен способ приготовления инактивированной вакцины из лимфоузлов и легких больных чумой КРГ телят, зараженных вирулентным вирусом чумы КРС (Базылев П. М. докт.дисс. М. 1955). В настоящее время инактивированные вакцины против чумы КРС отсутствуют (Сергеев В.А. в кн. "Вирусные вакцины", Киев, 1993). Для профилактики чумы КРС в нашей стране и за рубежом используют живые вирусвакцины. (А.с. N 194262 от 30.06.65 г.). Для получения вируса по известному способу используют первичнотрипсинизированную культуру клеток почки теленка (ПТ), выращенную на 0,5% гидролизате лактальбумина в матрасах вместимостью 1-1,5 дм³. Активность получаемого вируса составляет 10^5,0-10^6,25 ТЦД₅₀/см³. Затем вирус лиофилизируют со стабилизатором.A known method of preparing an inactivated vaccine from the lymph nodes and lungs of patients with plague of KRH calves infected with virulent plague virus of cattle (Bazylev P. M. doct. Diss. M. 1955). Currently, there are no inactivated vaccines against cattle plague (V. Sergeyev in the book "Viral vaccines", Kiev, 1993). For the prevention of cattle plague, live virus vaccines are used in our country and abroad. (A.S. N 194262 dated June 30, 65). To obtain the virus by a known method, a primary trypsinized calf kidney cell (PT) culture grown on 0.5% lactalbumin hydrolyzate in mattresses with a capacity of 1-1.5 dm ^{3 is used} . The activity of the resulting virus is 10 ^5.0 -10 ^6.25 TCD ₅₀ / cm ³ . Then the virus is lyophilized with a stabilizer.

Несмотря на очевидные преимущества живых вакцин, существуют определенные аспекты, когда применение инактивированной вакцины предпочтительнее: в благополучных по чуме КРС зонах первичного применения вакцины, необходимость вакцинации животных из групп повышенного риска (молодняк до 1 мес. возраста и стельные животные), вакцинация в экстремальных ситуациях (в период неблагополучия хозяйств по различным заболеваниям), в условиях высокогорья и резкого перепада температур. Это одно из важнейших звеньев любой программы по борьбе и искоренению инфекций. Despite the obvious advantages of live vaccines, there are certain aspects when the use of an inactivated vaccine is preferable: in cattle plague-free areas of primary use of the vaccine, the need for vaccination of animals from high-risk groups (young animals up to 1 month of age and pregnant animals), vaccination in extreme situations (during the period of non-functioning of farms for various diseases), in conditions of high mountains and a sharp temperature drop. This is one of the most important links in any infection control and eradication program.

Целью настоящего изобретения является приготовление экологически безопасной инактивированной культуральной вакцины против чумы КРС. The aim of the present invention is the preparation of environmentally friendly inactivated culture vaccine against cattle plague.

Указанная цель достигается тем, что используют вакцинный штамм ЛТ (а.с. 174765 от 15.07.65), выращенный в культуре перевиваемой линии клеток почки сайгаков (ПС), а в качестве инактиватора вируса сернокислую медь. This goal is achieved by using the vaccine strain LT (A.S. 174765 from 07.15.65), grown in a culture of transplantable saiga kidney cell line (PS), and copper sulfate as an inactivator of the virus.

Для приготовления антигенсодержащего сырья вируса чумы КРС используют 3±1 суточную культуру клеток ПС, выращенную в сосудах вместимостью 3 дм³ и полезной площадью 1000 см². Для выращивания культуры клеток применяют среду Игла с 10 сыворотки КРС, вируса с 5 сыворотки КРС. Круговой монослой культуры клеток заражают вакцинным штаммом ЛТ вируса чумы КРС в дозе 0,1-1,0 ТЦД₅₀. На клетку и выращивание вируса проводят в роллерном аппарате при скорости вращения сосудов 10-12 об/час, при температуре 36-38^oС в течение 3-4 суток. При развитии характерных для вируса цитопатических изменений и поражении 80-90 клеток, содержимое сосудов встряхивают для отделения клеток от стекла и сливают в общую стерильную емкость. Биологическая активность вируса в суспензии составляет 10^7,5-10^8,0 ТЦД₅₀/см³.For the preparation of antigen-containing raw materials of the cattle plague virus, a 3 ± 1 daily culture of PS cells grown in vessels with a capacity of 3 dm ³ and a useful area of 1000 cm ^{2 is used} . For growing cell culture, the medium is used. Needle with 10 cattle serum, virus with 5 cattle serum. A circular monolayer of cell culture is infected with a vaccine strain LT of cattle plague virus at a dose of 0.1-1.0 TCD ₅₀ . On the cell and the cultivation of the virus is carried out in a roller apparatus at a vessel rotation speed of 10-12 r / h, at a temperature of 36-38 ^o C for 3-4 days. With the development of virus-specific cytopathic changes and the defeat of 80-90 cells, the contents of the vessels are shaken to separate the cells from the glass and poured into a common sterile container. The biological activity of the virus in suspension is 10 ^7.5 -10 ^8.0 TCD ₅₀ / cm ³ .

Для инактивации вируса в вируссодержащую суспензию при перемешивании добавляют раствор сернокислой меди до конечной концентрации 0,1-0,2 и выдерживают при температуре 36-38^oС в течение 22-26 час.To inactivate the virus, a solution of copper sulfate is added to the virus-containing suspension with stirring to a final concentration of 0.1-0.2 and kept at a temperature of 36-38 ^o C for 22-26 hours.

К инактивированной суспензии вируса добавляют стерильный адъювант - масляно-ланолиновую смесь или гидроокись алюминия с глицерином по общепринятой методике. A sterile adjuvant, an oil-lanolin mixture or aluminum hydroxide with glycerin, is added to an inactivated suspension of the virus according to the standard method.

Инактивированная вакцина против чумы КРС, приготовленная согласно описанному способу, проверена в лабораторных и производственных условиях. Inactivated cattle plague vaccine prepared according to the described method, tested in laboratory and industrial conditions.

Вакцина безвредна и не реактогенна при введении подкожно для кроликов, подсвинков, яков и крупного рогатого скота в возрасте от 2 мес. до 2 лет (табл.). The vaccine is harmless and not reactogenic when administered subcutaneously for rabbits, gilts, yaks and cattle from the age of 2 months. up to 2 years (tab.).

Накопление вируснейтрализующих антител (ВН) в сыворотках крови вакцинированных животных после двукратной прививки составляет: у кроликов - 1:4 1: 256, у подсвинков 1:16 1:256, у крупного рогатого скота 2-4 мес. возраста 1:64 1:128, до 2-х лет 1:4 1-32, старше 2-х лет 1:4 1:32. The accumulation of virus-neutralizing antibodies (VL) in the blood serum of vaccinated animals after two vaccinations is: in rabbits - 1: 4 1: 256, in gilts 1:16 1: 256, in cattle 2-4 months. ages 1:64 1: 128, up to 2 years 1: 4 1-32, older than 2 years 1: 4 1:32.

При однократном введении якам титр антител составил 1:4-1:10. Накопление антител в титре не ниже 1:8 (критерий устойчивости животных к контрольному заражению) отмечено у 80 животных. With a single administration to yaks, the antibody titer was 1: 4-1: 10. The accumulation of antibodies in the titer of at least 1: 8 (criterion for the resistance of animals to control infection) was observed in 80 animals.

Титр антител у животных через 8 мес. после вакцинации составляет 1:8-1: 16. Крупный рогатый скот, вакцинированный двукратно с интервалом 14 суток, устойчив к заражению 10000 ЛД₅₀ вирулентного вируса.Antibody titer in animals after 8 months. after vaccination is 1: 8-1: 16. Cattle vaccinated twice with an interval of 14 days is resistant to infection of 10,000 LD _{50 of the} virulent virus.

Claims

A method of preparing an inactivated vaccine against plague of cattle, comprising obtaining a virus-containing material and its inactivation, characterized in that a vaccine strain with an activity of 107.5 108.0 TCD ₅₀ / cm ³ LT of cattle plague virus grown in roller culture of the transplanted saiga kidney cell line, inactivation is carried out with copper sulfate in a final concentration of 0.1 0.2% at 36 38 ° C for 22 to 26 hours, after which an adjuvant is added.