RU2172743C2 - Immunofylline-specific ligands as antiasthmatic and immuno-depressant agents and method of their synthesis, pharmaceutically ready form, medicinal agent and method of its preparing - Google Patents
Immunofylline-specific ligands as antiasthmatic and immuno-depressant agents and method of their synthesis, pharmaceutically ready form, medicinal agent and method of its preparingInfo
- Publication number
- RU2172743C2 RU2172743C2 RU98121505A RU98121505A RU2172743C2 RU 2172743 C2 RU2172743 C2 RU 2172743C2 RU 98121505 A RU98121505 A RU 98121505A RU 98121505 A RU98121505 A RU 98121505A RU 2172743 C2 RU2172743 C2 RU 2172743C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- indolin
- carboxylic acid
- boc
- immunophilin
- amide
- Prior art date
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 27
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 239000000924 antiasthmatic agent Substances 0.000 title claims abstract 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title abstract description 22
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 title abstract description 22
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title abstract 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 55
- -1 amino acid methyl ester Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 23
- QNRXNRGSOJZINA-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydro-1H-indole-2-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C(=O)O)CC2=C1 QNRXNRGSOJZINA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 125000004435 hydrogen atoms Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 6
- SRJOCJYGOFTFLH-UHFFFAOYSA-N Isonipecotic acid Chemical compound OC(=O)C1CCNCC1 SRJOCJYGOFTFLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960005190 Phenylalanine Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 230000001088 anti-asthma Effects 0.000 claims abstract 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 34
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 17
- QONNUMLEACJFME-UHFFFAOYSA-N 1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]-2,3-dihydroindole-2-carboxylic acid Chemical group C1=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C(C(O)=O)CC2=C1 QONNUMLEACJFME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- NPKFSFOKMNZVKQ-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]-2,3-dihydroindole-2-carbonyl]-2,3-dihydroindole-2-carboxylic acid Chemical group OC(=O)C1CC2=CC=CC=C2N1C(=O)C1N(C(=O)OC(C)(C)C)C2=CC=CC=C2C1 NPKFSFOKMNZVKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 102000000521 Immunophilins Human genes 0.000 claims description 9
- 108010016648 Immunophilins Proteins 0.000 claims description 9
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 9
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- LISKJKUMLVQGKE-UHFFFAOYSA-N 1-morpholin-4-yl-2-piperazin-1-ylethanone Chemical compound C1COCCN1C(=O)CN1CCNCC1 LISKJKUMLVQGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 6
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- 230000001861 immunosuppresant Effects 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 150000004702 methyl esters Chemical group 0.000 claims description 4
- SMQDFSGCPOVAFS-UHFFFAOYSA-N 1-(2,3-dihydro-1H-indole-2-carbonyl)-2,3-dihydroindole-2-carboxylic acid Chemical group C1C2=CC=CC=C2NC1C(=O)N1C2=CC=CC=C2CC1C(=O)O SMQDFSGCPOVAFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 3
- 239000008298 dragée Substances 0.000 claims description 3
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 3
- WNICGTIQUHHISW-SSDOTTSWSA-N (2S)-2,6-diamino-2-(difluoromethyl)hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@](N)(C(F)F)C(O)=O WNICGTIQUHHISW-SSDOTTSWSA-N 0.000 claims description 2
- 229940054051 antipsychotic Indole derivatives Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 claims description 2
- 230000000947 anti-immunosuppressive Effects 0.000 claims 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 230000003530 immunodepressant Effects 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 56
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 55
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 42
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 30
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 28
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 25
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 19
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 19
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N (3S,6S,9S,12R,15S,18S,21S,24S,30S,33S)-30-ethyl-33-[(E,1R,2R)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,17 Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 17
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 16
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 16
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 15
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 15
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 15
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 13
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 12
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 12
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 12
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N acetic acid ethyl ester Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ABFPKTQEQNICFT-UHFFFAOYSA-M 2-chloro-1-methylpyridin-1-ium;iodide Chemical compound [I-].C[N+]1=CC=CC=C1Cl ABFPKTQEQNICFT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 102000004631 Calcineurin Human genes 0.000 description 8
- 108010042955 Calcineurin Proteins 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M NaHCO3 Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 8
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 7
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 102000009658 Peptidylprolyl Isomerase Human genes 0.000 description 6
- 108010020062 Peptidylprolyl Isomerase Proteins 0.000 description 6
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 6
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N Thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 6
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Inorganic materials [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 102100010818 PPIB Human genes 0.000 description 5
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N Sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 5
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 5
- 108010048032 cyclophilin B Proteins 0.000 description 5
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 108010027179 Tacrolimus Binding Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000018679 Tacrolimus Binding Proteins Human genes 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- URORFKDEPJFPOV-UHFFFAOYSA-N methyl 2,3-dihydro-1H-indole-2-carboxylate Chemical compound C1=CC=C2NC(C(=O)OC)CC2=C1 URORFKDEPJFPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 4
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 4
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 4
- 229920000333 poly(propyleneimine) Polymers 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- CXJOONIFSVSFAD-UHFFFAOYSA-N 2-(4-methoxyphenyl)acetyl chloride Chemical compound COC1=CC=C(CC(Cl)=O)C=C1 CXJOONIFSVSFAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000006673 Asthma Diseases 0.000 description 3
- 108010068682 Cyclophilins Proteins 0.000 description 3
- 102000001493 Cyclophilins Human genes 0.000 description 3
- 229960001967 Tacrolimus Drugs 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000005794 allergic hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atoms Chemical group C* 0.000 description 3
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 3
- 150000002168 ethanoic acid esters Chemical class 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive Effects 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JWOHBPPVVDQMKB-UHFFFAOYSA-N 1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC(C(O)=O)CC1 JWOHBPPVVDQMKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVVRCYWZTJLJSG-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminophenol Substances CN(C)C1=CC=C(O)C=C1 JVVRCYWZTJLJSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Carbodicyclohexylimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 229960003444 IMMUNOSUPPRESSANTS Drugs 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 108091008153 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000000172 allergic Effects 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 125000006367 bivalent amino carbonyl group Chemical group [H]N([*:1])C([*:2])=O 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- KJUGUADJHNHALS-UHFFFAOYSA-O hydron;2H-tetrazole Chemical class C1=NN=[NH+]N1 KJUGUADJHNHALS-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- NDAQWGPQYJORIH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-[2-(4-methoxyphenyl)acetyl]-2,3-dihydroindole-2-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1CC2=CC=CC=C2N1C(=O)CC1=CC=C(OC)C=C1 NDAQWGPQYJORIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- NUKYPUAOHBNCPY-UHFFFAOYSA-N 4-Aminopyridine Chemical compound NC1=CC=NC=C1 NUKYPUAOHBNCPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SGJUVSMZKNTFDH-UHFFFAOYSA-N 4-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]piperidine-1-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C1CCN(C(O)=O)CC1 SGJUVSMZKNTFDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003816 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003855 Cell Nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229940064701 Corticosteroid nasal preparations for topical use Drugs 0.000 description 1
- 229960001334 Corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 241001044073 Cypa Species 0.000 description 1
- 102100014139 FKBP1A Human genes 0.000 description 1
- 102100001877 FKBP6 Human genes 0.000 description 1
- 108060002918 FKBP6 Proteins 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- 210000000138 Mast Cells Anatomy 0.000 description 1
- COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N MeOH methanol Chemical compound OC.OC COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethyl-2H-pyridin-1-amine Chemical compound CN(C)N1CC=CC=C1 OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYPVIGFXLQOLAG-UHFFFAOYSA-N N1CCC(CC1)NC(=O)C1N(C2=CC=CC=C2C1)C(=O)OC(C)(C)C Chemical compound N1CCC(CC1)NC(=O)C1N(C2=CC=CC=C2C1)C(=O)OC(C)(C)C GYPVIGFXLQOLAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 101700009772 PPIC Proteins 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N TFA trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010006877 Tacrolimus Binding Protein 1A Proteins 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 150000008043 acidic salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007697 cis-trans-isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-UHFFFAOYSA-N cyclosporine A Chemical compound CCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004979 fampridine Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N iso-propanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 1
- 239000005445 natural product Substances 0.000 description 1
- 230000021616 negative regulation of cell division Effects 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- KNPFVVAFJYMJGO-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-(2-methoxycarbonyl-2,3-dihydroindole-1-carbonyl)-2,3-dihydroindole-1-carboxylate Chemical compound C1C2=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C1C(=O)N1C2=CC=CC=C2CC1C(=O)OC KNPFVVAFJYMJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940083878 topical for treatment of hemorrhoids and anal fissures Corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 102000003995 transcription factors Human genes 0.000 description 1
- 108090000464 transcription factors Proteins 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cells Anatomy 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к новым иммунофилин-специфическим лигандам формулы I:
Группы R1, R2, R3, R4, X, Y, A, B и D имеют следующие значения:
R1 - остаток метилового эфира аминокислоты, выбранной из ∈-NH2-лизина, ∈-Z-NH-лизина, фенилаланина,
R2 - водород,
R3 - бутилоксикарбонил, карбоксибензил, остаток 4-пиперидинкарбоновой кислоты, 2-индолинкарбоновой кислоты,
R4 - водород,
A - ароматическая группировка; B-D = -CH=C-; X = O, Y = C.The invention relates to new immunophilin-specific ligands of the formula I:
The groups R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , X, Y, A, B and D have the following meanings:
R 1 is a methyl ester residue of an amino acid selected from ∈-NH 2 -lysine, ∈-Z-NH-lysine, phenylalanine,
R 2 is hydrogen,
R 3 - butyloxycarbonyl, carboxybenzyl, residue of 4-piperidinecarboxylic acid, 2-indolinecarboxylic acid,
R 4 is hydrogen,
A is an aromatic group; BD = -CH = C-; X = O, Y = C.
Дальнейшее относится к изобретению физиологически совместимых солей соединений формулы I, способов получения соединений формулы I и их фармацевтическому применению. Further relates to the invention of physiologically compatible salts of compounds of formula I, methods for producing compounds of formula I and their pharmaceutical use.
Циклоспорин A (CsA) и FK 506 - природные соединения, выделенные из грибов, обладающие иммунодепрессантными свойствами, ингибируют Ca+2-зависимый путь передачи сигнала в некоторых типах клеток. В Т-клетках оба препарата ингибируют транскрипцию ряда генов, включая ген интерлейкина-2 (IL-2), который обычно активируется путем стимуляции Т-клеточных рецепторов (TCR). FK-506 и CsA связываются с высоким сродством с растворимыми рецепторными белками (G.Fischer et al., Nature 337, 476-478, 1989; M.W.Harding et al., Nature 341, 755-760, 1989). FK-506-рецептор носит название FKBP, CsA-рецептор называется циклофилин (Cyp). Оба белка катализируют изомеризацию цис- и транс-ротамеров амидной связи в пептидах, и в литературе часто описываются под названием иммунофилины.Cyclosporin A (CsA) and FK 506, natural compounds isolated from fungi that have immunosuppressive properties, inhibit the Ca + 2- dependent signal transduction pathway in some cell types. In T cells, both drugs inhibit the transcription of a number of genes, including the interleukin-2 gene (IL-2), which is usually activated by stimulating T cell receptors (TCR). FK-506 and CsA bind with high affinity to soluble receptor proteins (G. Fischer et al., Nature 337, 476-478, 1989; MWHarding et al., Nature 341, 755-760, 1989). The FK-506 receptor is called FKBP, the CsA receptor is called cyclophilin (Cyp). Both proteins catalyze the isomerization of cis and trans rotamers of the amide bond in peptides, and are often described in the literature as immunophilins.
Лиганд-рецепторные комплексы, CsA-Cyp и, соответственно, FK 506-FKBP, связывают кальцинейрин (CN) и тем самым ингибируют его фосфатазную активность. Известно, что внутриклеточной мишенью для CN является цитоплазматический фосфорилированный компонент фактора транскрипции NF-AT, который при отсутствии в клеточном ядре активного CN не дефосфорилируется и вследствие этого не может образовать активный транскрипционный комплекс на IL-2-промоторе (M. K.Rosen, S.L.Schreiber, Angew.Chem. 104 (1992), 413-430; G.Ficher, Angew. Chem.106 (1994), 1479-1501). Ligand-receptor complexes, CsA-Cyp and, accordingly, FK 506-FKBP, bind calcineurin (CN) and thereby inhibit its phosphatase activity. It is known that the intracellular target for CN is the cytoplasmic phosphorylated component of NF-AT transcription factor, which in the absence of active CN in the cell nucleus does not dephosphorylate and therefore cannot form an active transcriptional complex on the IL-2 promoter (MKRosen, SLSchreiber, Angew Chem. 104 (1992), 413-430; G. Ficher, Angew. Chem. 106 (1994), 1479-1501).
В основе аллергического заболевания, такого как астма, лежит воспалительная реакция, вызванная Т-клетками и соответствующими медиаторами. В качестве средства для лечения многих аллергических заболеваний все еще используются кортикостероиды. CsA и FK 506 также оказались эффективным терапевтическим средством в случае бронхиальной астмы и связанных с ней воспалительных реакций, правда только в опытах на животных и на стадии клинических испытаний. В опытах на животных была показана блокада различных цитокинов, таких как IL-2, IL-4 и IL-5, вызывающих развитие воспалительной реакции, индуцированной аллергией. An allergic disease such as asthma is based on an inflammatory reaction caused by T cells and associated mediators. Corticosteroids are still used as a treatment for many allergic diseases. CsA and FK 506 also proved to be an effective therapeutic agent in the case of bronchial asthma and the associated inflammatory reactions, although only in animal experiments and at the stage of clinical trials. In animal experiments, a blockade of various cytokines, such as IL-2, IL-4, and IL-5, was shown to cause the development of an inflammatory reaction induced by allergy.
Несмотря на множество попыток, до настоящего времени не удалось найти новых ингибиторов иммунофилинов, превосходящих по активности CsA, FK 506 и рапамицин или, соответственно, их производные, синтезированные или выделенные из природных источников. Однако высокие ингибиторные свойства CsA, FK 506 и рапамицина в значительной степени обесцениваются из-за наличия у них разнообразного побочного действия, в особенности из-за действия на почки и нейротоксичности. В основе этого явления лежит неспецифичность взаимодействия иммунофилин-специфичных лигандов со специфическими клеточными белками. Вследствие этого, терапевтическое применение этих иммунодепрессантов носит ограниченный характер. Кроме того, из-за недостаточно высокой селективности, представляется проблематичным применение этих препаратов именно в случае долговременной терапии. Despite many attempts, to date, no new immunophilin inhibitors have been found that are superior in activity to CsA, FK 506 and rapamycin, or their derivatives, synthesized or isolated from natural sources, respectively. However, the high inhibitory properties of CsA, FK 506 and rapamycin are significantly depreciated due to the presence of a variety of side effects, especially due to the effect on the kidneys and neurotoxicity. This phenomenon is based on the non-specificity of the interaction of immunophilin-specific ligands with specific cellular proteins. As a result, the therapeutic use of these immunosuppressants is limited. In addition, due to the insufficiently high selectivity, it seems problematic to use these drugs in the case of long-term therapy.
Целью изобретения является поиск новых соединений с ценными фармакологическими свойствами и их получение с помощью направленного синтеза. The aim of the invention is the search for new compounds with valuable pharmacological properties and their preparation using directed synthesis.
Согласно формуле изобретения соединения по формуле I представляют совершенно новый класс соединений, способных с исключительно высокой специфичностью связываться с иммунофилинами и в высшей степени эффективно ингибировать IL-2-пролиферацию. Соединения этого класса и их фармацевтически приемлемые соли обладают высоким сродством к иммунофилинам, таким как CypA, CypB, CypC и FKBP12. According to the claims, the compounds of formula I represent a completely new class of compounds capable of binding to immunophilins with extremely high specificity and to inhibit IL-2 proliferation extremely highly. Compounds of this class and their pharmaceutically acceptable salts have a high affinity for immunophilins, such as CypA, CypB, CypC and FKBP12.
Те соединения по формуле I, которые содержат асимметрический атом углерода и поэтому, как правило, образуют рацематы, можно с помощью известных методов, например, в виде солей с оптически активной кислотой, разделить на оптически активные изомеры. Однако вполне возможно использовать на первой стадии синтеза оптически активные исходные соединения, причем в этом случае в качестве конечных продуктов будут получены соответствующие оптически активные диастереоизомерные соединения. Those compounds of formula I that contain an asymmetric carbon atom and therefore, as a rule, form racemates, can be separated into optically active isomers using known methods, for example, in the form of salts with an optically active acid. However, it is quite possible to use optically active starting compounds in the first stage of synthesis, and in this case, the corresponding optically active diastereoisomeric compounds will be obtained as final products.
Изобретение включает также соединения по формуле I, содержащие асимметрический атом углерода, S-формы, R-формы, смеси S- и R-форм, а также в случае присутствия в молекуле нескольких асимметрических атомов углерода, диастереоизомерные формы. The invention also includes compounds of formula I containing an asymmetric carbon atom, S-form, R-form, a mixture of S- and R-forms, as well as in the case of the presence of several asymmetric carbon atoms in the molecule, diastereoisomeric forms.
В зависимости от условий синтеза и исходных веществ соединения по формуле I могут быть получены в свободной форме или в форме солей. Полученные соли с помощью известных методов, например, действием кислот, щелочей, или с помощью ионообменников могут быть переведены в свободные основания или, соответственно, в свободные кислоты. Depending on the synthesis conditions and starting materials, the compounds of formula I can be obtained in free form or in the form of salts. The salts obtained by using known methods, for example, by the action of acids, alkalis, or using ion exchangers can be converted into free bases or, respectively, into free acids.
Соединения по формуле I в свободной форме с помощью неорганических или органических кислот или оснований могут быть переведены в соответствующие физиологически совместимые кислые соли. The compounds of formula I in free form can be converted into the corresponding physiologically compatible acidic salts with inorganic or organic acids or bases.
Соединения биологически активны, как в форме свободных оснований, так и в форме солей. Соединения по формуле I как в свободной форме, так и в форме соли могут поставляться с физиологически совместными солями и основаниями. Применение может быть пероральным, парэнтеральным, внутривенным, подкожным или путем ингаляции. The compounds are biologically active, both in the form of free bases and in the form of salts. The compounds of formula I, both in free form and in salt form, may be supplied with physiologically compatible salts and bases. The use may be oral, parenteral, intravenous, subcutaneous or by inhalation.
Далее изобретение относится к фармацевтическим готовым формам с включением, по крайней мере, одного соединения по формуле I или их солей с физиологически совместимыми неорганическими или органическими кислотами и/или основаниями, и в данном случае фармацевтически приемлемых носителей и вспомогательных веществ. The invention further relates to pharmaceutical formulations comprising at least one compound of formula I or their salts with physiologically compatible inorganic or organic acids and / or bases, and in this case pharmaceutically acceptable carriers and excipients.
Возможны любые готовые формы препаратов, например, таблетки или драже, капсулы, растворы, соответственно, ампулы, суппозитории, пластыри, или формы для введения путем ингаляции. Any formulations are possible, for example tablets or dragees, capsules, solutions, respectively, ampoules, suppositories, patches, or administration forms by inhalation.
Дозировка вышеупомянутых фармацевтически готовых форм зависит от состояния пациентов и от формы применения. Суточная действующая доза составляет 0,01-100 мг на кг веса тела. The dosage of the aforementioned pharmaceutically prepared forms depends on the condition of the patients and on the form of use. The daily effective dose is 0.01-100 mg per kg of body weight.
Приготовить соединения по формуле I можно, например, методом твердофазного синтеза по Б.Меррифильду, предпочтительно, на нерастворимых полимерах, как например, на набухающем в органическом растворителе полистироле в форме сферических гранул (например, сополимере полистирола и 1% дивинилбензола), по стандартным методикам получения пептидов методом твердофазного синтеза. The compounds of formula I can be prepared, for example, by B. Merrifield solid-phase synthesis, preferably on insoluble polymers, such as spherical granule-swellable polystyrene in an organic solvent (for example, a copolymer of polystyrene and 1% divinylbenzene), according to standard methods method of producing peptides by solid-phase synthesis.
Соединения общей формулы I синтезируют таким образом, что сначала закрывают защитными группами функциональные группировки (α-амино-, ∈-амино- или α-карбоксильную группу), а затем подходящим образом модифицируют свободную третью функциональную группу. В данном случае можно также, если это дает лучший результат, на первой стадии ввести промежуточную защитную группу, которую после второй стадии заменить на необходимую функциональную группу. Подходящие защитные группы и способы их введения известны. Примеры защитных групп приведены в литературе: "Principles of Peptide Synthesis", Springer Verlag 1984; "Solid Phase Peptide Synthesis" J.M.Stewart and J.D.Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984; G.Barany and R.B.Merrifield "The Peptides", Ch. 1, S.1-285, 1979, Academic Press Inc. Compounds of the general formula I are synthesized in such a way that the functional groups (α-amino, ∈-amino or α-carboxyl group) are closed with protective groups, and then the free third functional group is suitably modified. In this case, it is also possible, if this gives the best result, to introduce an intermediate protective group in the first stage, which after the second stage can be replaced with the necessary functional group. Suitable protecting groups and methods for their administration are known. Examples of protective groups are given in the literature: "Principles of Peptide Synthesis", Springer Verlag 1984; "Solid Phase Peptide Synthesis" J.M. Stewart and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984; G. Barany and R. B. Merrifield "The Peptides", Ch. 1, S.1-285, 1979, Academic Press Inc.
Ступенчатый синтез ведут, например, таким образом, что сначала C-концевую аминокислоту с защищенной α-аминогруппой ковалентно связывают с нерастворимой матрицей, отщепляют защитную группу, по свободной аминогруппе присоединяют карбоксильную группу следующей аминокислоты, также защищенной по аминогруппе. Таким образом к синтезируемому пептиду присоединяют одну аминокислоту за другой в необходимой последовательности, отщепляют имеющиеся дополнительные функциональные и защитные группы, и после присоединения последней аминокислоты исследуют эффективность связывания иммобилизованного лиганда с рецептором (Cyp или FKBP). Ступенчатая конденсация представляет из себя обычный пептидный синтез из соответствующих защищенных аминокислот. Синтез можно также проводить на автоматическом пептидном синтезаторе, например, типа Labortec SP 650 (Бахем, Швейцария), с использованием имеющихся в продаже защищенных аминокислот. Stepwise synthesis is carried out, for example, in such a way that, at first, the C-terminal amino acid with a protected α-amino group is covalently linked to an insoluble matrix, the protective group is cleaved, the carboxyl group of the next amino acid, also protected by the amino group, is attached to the free amino group. Thus, one amino acid after another is attached to the synthesized peptide in the required sequence, the existing additional functional and protective groups are cleaved, and after the addition of the last amino acid, the efficiency of immobilized ligand binding to the receptor (Cyp or FKBP) is examined. Step condensation is the usual peptide synthesis from the corresponding protected amino acids. The synthesis can also be carried out on an automatic peptide synthesizer, for example, such as Labortec SP 650 (Bachem, Switzerland), using commercially available protected amino acids.
В качестве примеров соединений по формуле I приводятся следующие:
Пример 1: N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2-(R,S)карбоновая кислота-[S-(N-∈-Boc]-лизинметиловый эфир]-амид
Пример 2: N-[1-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-[S-(∈-NH2)-лизинметиловый эфир]-амид
Пример 3: N-[1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбонил]-индолин-2-(R,S)- карбоновая кислота-[S-(N-∈-Boc)-лизинметиловый эфир]-амид
Пример 4: N-[индoлин-2-(R,S)-кapбoнил]-индoлин-2-(R,S)-карбоновая кислота-[S-(∈--NH2)-лизинметиловый эфир]-амид
Пример 5: N-[1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбонил]-индолин-2-(R,S)- карбоновая кислота-(S-(N-∈-Z)-лизинметиловый эфир)-амид
Пример 6: 1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-(S-(N-∈-Z)-лизинметиловый эфир)-амид
Пример 7: 1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-(8-фенилаланинметиловый эфир)-амид
Пример 8: Метиловый эфир N-[N'-(4-метоксифенилацетил)-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновой кислоты (как предварительная стадия для получения амидов с общей формулой I)
Пример 9: Метиловый эфир N-(4-метоксифенилацетил)-индолин-2-(R,S)-карбоновой кислоты (как предварительная стадия для получения амидов с общей формулой I)
Пример 10: N-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-4-пиперидил-амид
Пример 11: N-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-[пиперазиноуксусная кислота-морфолид]-амид
Пример 12: N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R,S)- карбоновая кислота-[пиперазиноуксусная кислота-морфолид]-амид
Пример 13: N-[N'-(4-метоксифенилацетил)-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Z)-лизинметиловый эфир]-амид
В соответствии с настоящим изобретением соединения по формуле могут быть также синтезированы по схеме.As examples of compounds of formula I, the following are given:
Example 1: N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) carboxylic acid- [S- (N-∈-Boc] lysine methyl ester] -amide
Example 2: N- [1-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (∈-NH 2 ) -lysinmethyl ether] -amide
Example 3: N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) - carboxylic acid- [S- (N-∈-Boc) -lysinmethyl ether] -amide
Example 4: N- [indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (∈ - NH 2 ) -lysinmethyl ether] -amide
Example 5: N- [1-Boc-indoline-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) - carboxylic acid- (S- (N-∈-Z) -lysine methyl ether) -amide
Example 6: 1-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- (S- (N-∈-Z) -lysinmethyl ether) -amide
Example 7: 1-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- (8-phenylalanine methyl ether) -amide
Example 8: N- [N '- (4-methoxyphenylacetyl) -piperidyl-4-carbonyl] indoline-2- (R, S) -carboxylic acid methyl ester (as a preliminary step for the preparation of amides with the general formula I)
Example 9: N- (4-methoxyphenylacetyl) -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid methyl ester (as a preliminary step for the preparation of amides with the general formula I)
Example 10: N-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid-4-piperidyl amide
Example 11: N-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [piperazinoacetic acid-morpholide] -amide
Example 12: N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] indoline-2- (R, S) - carboxylic acid- [piperazinoacetic acid-morpholide] -amide
Example 13: N- [N '- (4-methoxyphenylacetyl) -piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Z) -lysine methyl ester] - amide
In accordance with the present invention, compounds of the formula can also be synthesized according to the scheme.
Согласно изобретению соединения по формуле I, у которых R1, R2, R3, R4, A, B, D, X и Y имеют указанные значения, синтезируются таким образом, что производные индола формулы II, где R4, A, B, D, X и Y имеют указанные значения, взаимодействуют со спиртами III с углеводородной цепью C1-C12 с образованием сложных индольных эфиров IV, у которых R4, A, B, D, X и Y имеют указанные значения; эфиры IV вводят в реакцию с соединениями Y, у которых R3, X и Y имеют указанные значения, в результате которой образуются соединения VI, у которых R3, R4, A, B, D, X и Y имеют указанные значения; наконец, соединения VI подвергаются омылению с образованием соединений VII, где R3, R4 A, B, D, X и Y имеют указанные значения, а затем соединения VII взаимодействуют с соединениями VIII, где R1 и R2 имеют указанные значения, с образованием целевого продукта I.According to the invention, compounds of formula I in which R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , A, B, D, X and Y have the indicated meanings are synthesized in such a way that indole derivatives of formula II, where R 4 , A, B, D, X and Y have the indicated meanings, react with alcohols III with a C 1 -C 12 hydrocarbon chain to form indole esters IV, in which R 4 , A, B, D, X and Y have the indicated meanings; esters IV are reacted with compounds Y in which R 3 , X and Y have the indicated meanings, as a result of which compounds VI are formed in which R 3 , R 4 , A, B, D, X and Y have the indicated meanings; finally, compounds VI undergo saponification with the formation of compounds VII, where R 3 , R 4 A, B, D, X and Y have the indicated meanings, and then compounds VII react with compounds VIII, where R 1 and R 2 have the indicated meanings, with the formation of the target product I.
Физиологически совместимые соли соединений по формуле I получают известным способом по реакции с неорганическими или органическими кислотами, например, с соляной, бромистоводородной, фосфорной, серной, уксусной, винной, лимонной, фумаровой, малеиновой, молочной или эмбоновой кислотами, с неорганическими или неорганическими основаниями. Physiologically compatible salts of the compounds of formula I are prepared in a known manner by reaction with inorganic or organic acids, for example, with hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, sulfuric, acetic, tartaric, citric, fumaric, maleic, lactic or embonic acids, with inorganic or inorganic bases.
Фармацевтические готовые формы содержат, по крайней мере, одно соединение общей формулы I или его соль с физиологически совместимыми неорганическими или органическими кислотами или основаниями и, в данном случае, фармацевтически приемлемые наполнители и вспомогательные вещества. Pharmaceutical formulations contain at least one compound of general formula I or a salt thereof with physiologically compatible inorganic or organic acids or bases, and, in this case, pharmaceutically acceptable excipients and excipients.
Соединения по формуле I могут применяться как в свободной форме, так и в форме солей с физиологически совместимыми кислотами или основаниями, перорально, парэнтерально, внутривенно, подкожно или путем ингаляции. The compounds of formula I can be used both in free form and in the form of salts with physiologically compatible acids or bases, orally, parenterally, intravenously, subcutaneously or by inhalation.
Возможны любые готовые формы препаратов, например, таблетки или драже, капсулы, растворы и/или ампулы, суппозитории, пластыри, или для введения путем ингаляции. Any formulations are possible, for example tablets or dragees, capsules, solutions and / or ampoules, suppositories, patches, or for administration by inhalation.
Дозировка вышеупомянутых фармацевтических готовых форм зависит от состояния пациентов и от формы применения. Суточная действующая доза составляет 0,01-100 мг на 1 кг веса тела. The dosage of the aforementioned pharmaceutical formulations depends on the condition of the patients and on the form of use. The daily effective dose is 0.01-100 mg per 1 kg of body weight.
Согласно изобретению соединения по формуле I обладают свойством связываться с иммунофилинами и ингибировать их изомеразную активность. Пролил-изомеразную активность определяют по общепринятой методике: G.Fischer, H. Bang, A.Schellenberger, Biochim.Biophys. Acta, 791, 87-97, 1984; D.H.Rich et al, J.Med.Chem. 38, 4164-4170, 1995. According to the invention, the compounds of formula I have the property of binding to immunophilins and inhibiting their isomerase activity. Prolyl isomerase activity is determined according to the generally accepted method: G. Fischer, H. Bang, A. Schellenberger, Biochim. Biophys. Acta, 791, 87-97, 1984; D. H. Rich et al, J. Med. Chem. 38, 4164-4170, 1995.
Кроме воздействия в каждом случае на пептидил-цис-транс-изомеразную активность иммунофилинов, эти соединения чрезвычайно специфическим образом ингибируют IL-2-пролиферацию у тучных клеток, макрофагов и у активированных Т-клеток. Соединения согласно формуле I могут, подобно циклоспорину A (Sandimmun, CsA), FK 506 и рапамицину (Tacrolimus), назначаться в качестве иммунодепрессантов (R.Y.Calne et al., Br.Med.J. 282, 934-936, 1981), для лечения аутоиммунных заболеваний (R.H.Wiener et al., Hepatology 7, 1025, Abst. 9, 1987; L.Fry, J.Autoimmun. 5, 213-240, 1992; G.J. Feutren J.Autoimmun. 5, 183-195, 1992; EP 610743), для лечения аллергических воспалительных реакций (P. Zabel et al, Lancet 343, 1984), лечения астмы (C.Bachert, Atemw. - Lungenkrkh. 20, 59, 1994), инсулин-зависимого диабета (Diabetes Mellitus) (C.R. Stiller, Science, 223, 1362-1367, 1984), сепсиса, а также применяться в сочетании с известными лигандами иммунофилинов, такими как CsA, FK 506 или рапамицином (M.J.Wyvratt, N.H.Sigal, Perspectives in Drug Discovery and Design, Immunosuppression, 2, 1, 1994; WO 92/21313, US 5330993). In addition to affecting the peptidyl-cis-trans-isomerase activity of immunophilins in each case, these compounds extremely specifically inhibit IL-2 proliferation in mast cells, macrophages and activated T cells. Compounds according to formula I can, like cyclosporin A (Sandimmun, CsA), FK 506 and rapamycin (Tacrolimus), be prescribed as immunosuppressants (RYCalne et al., Br.Med.J. 282, 934-936, 1981), for for treating autoimmune diseases (RHWiener et al.,
Сущность изобретения подтверждается следующими примерами. The invention is confirmed by the following examples.
Список использованных сокращений:
AcOEt - этилацетат
Boc -трет-бутилоксикарбонил
(Boc)2O- трет-бутилоксикарбонил-ангидрид
CN - кальцинейрин
CsA - циклоспорин A
Cyp - циклофилин
DMAP - N,N-диметиламинопиридин
EA - элементный анализ
ЕЕ - сложный эфир уксусной кислоты
FKBP - белок-рецептор препарата FK 506
HPLC - высокоэффективная жидкостная хроматография
i.OPV - в вакууме, создаваемом масляным насосом
Lsg. - раствор
MeOH - метанол
PPIase - пептидил-пролин-цис-транс-изомераза
i.RV - на роторном испарителе
i.V. - в вакууме
RT - комнатная температура
rac - рацемический
ent - энантио
TFA - трифторуксусная кислота
Z - бензилоксикарбонил
Пример 1
Синтез N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Boc]-лизинметиловый эфир]-амида
Стадия 1: (R,S)-индолин-2-карбоновая кислота, метиловый эфир, хлоргидрат
В трехгорлой колбе объемом 100 мл растворяют 5,3 г (32,5 ммоль) (R,S)-2-индолинкарбоновой кислоты в 70 мл абсолютного метанола и смешивают при комнатной температуре с 4,25 г (35,75 ммоль) тионилхлорида. Реакционную смесь желтого цвета нагревают с обратным холодильником в течение 5 ч и после охлаждения растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе (i.V. i. RV). После высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) (i. OPV) получают сырой продукт в виде твердого кристаллического материала, который промывают диэтиловым эфиром и отфильтровывают.List of abbreviations used:
AcOEt - Ethyl Acetate
Boc-tert-butyloxycarbonyl
(Boc) 2 O- tert-butyloxycarbonyl anhydride
CN - calcineurin
CsA - Cyclosporin A
Cyp - Cyclophilin
DMAP - N, N-dimethylaminopyridine
EA - Elemental Analysis
EE - Acetic Acid Ester
FKBP - FK 506 receptor protein
HPLC - High Performance Liquid Chromatography
i.OPV - in the vacuum created by the oil pump
Lsg. - solution
MeOH - Methanol
PPIase - peptidyl-proline-cis-trans-isomerase
i.RV - on a rotary evaporator
iV - in vacuum
RT - room temperature
rac - racemic
ent - enantio
TFA - trifluoroacetic acid
Z - benzyloxycarbonyl
Example 1
Synthesis of N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Boc] -lisinmethyl ether] -amide
Stage 1: (R, S) -indoline-2-carboxylic acid, methyl ether, hydrochloride
In a 100 ml three-necked flask, dissolve 5.3 g (32.5 mmol) of (R, S) -2-indoline carboxylic acid in 70 ml of absolute methanol and mix at room temperature with 4.25 g (35.75 mmol) of thionyl chloride. The yellow reaction mixture was refluxed for 5 hours and, after cooling, the solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator (iVi RV). After drying under high vacuum (using an oil pump) (i. OPV), the crude product is obtained in the form of a crystalline solid, which is washed with diethyl ether and filtered.
Выход: 5,4 г (78%)
Стадия 2: Boc-пиперидин-4-карбоновая кислота
B одногорлой колбе объемом 250 мл растворяют 7 г (54 ммоль) пиперидин-4-карбоновой кислоты в 50 мл диоксана и 40,5 мл 2 N NaOH и охлаждают до 0oC. Затем в течение 30 мин добавляют по каплям раствор 12,99 г (59,4 ммоль) (Boc)2O в 30 мл диоксана. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Выпадает белый осадок. Диоксан удаляют в вакууме на роторном испарителе и осадок обрабатывают насыщенным раствором KHSO4. Водную фазу экстрагируют два раза EE. Органическую фазу промывают один раз насыщенным раствором NaCl и высушивают над MgSO4. После удаления растворителей в вакууме на роторном испарителе получают 11,93 г (96%) порошка белого цвета.Yield: 5.4 g (78%)
Stage 2: Boc-piperidine-4-carboxylic acid
In a one-necked flask with a volume of 250 ml, 7 g (54 mmol) of piperidine-4-carboxylic acid are dissolved in 50 ml of dioxane and 40.5 ml of 2 N NaOH and cooled to 0 ° C. Then a solution of 12.99 is added dropwise over 30 minutes. g (59.4 mmol) (Boc) 2 O in 30 ml of dioxane. The reaction mixture was stirred at room temperature for 24 hours. A white precipitate formed. The dioxane is removed in vacuo on a rotary evaporator and the precipitate is treated with saturated KHSO 4 solution. The aqueous phase is extracted twice with EE. The organic phase is washed once with saturated NaCl and dried over MgSO 4 . After removing the solvents in vacuo on a rotary evaporator, 11.93 g (96%) of a white powder is obtained.
1H-ЯМР (ДМCO-d6, 270 MHz): 1,25-1,5 (m, 11, Boc, 2-Pip); 1,8 (m, 2 Pip); 2,4 (m, 1, H-C4); 2,8 (t, 2, H-C3, H-C5); 3,8 (d, 2, H-C2, H-C6); 12,25 (s, 1, COOH). 1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 1.25-1.5 (m, 11, Boc, 2-Pip); 1.8 (m, 2 Pip); 2.4 (m, 1, H-C4); 2.8 (t, 2, H-C3, H-C5); 3.8 (d, 2, H-C2, H-C6); 12.25 (s, 1, COOH).
Элементный анализ: рассчитано для C11H19N1O4 (229,1): C 57,62; H 8,29; N 6,11, найдено: C 57,89; H 8,36; N 5,86
Стадия 3: N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота, метиловый эфир
4,6 г (22 ммоль) хлоргидрата(R,S)-индолин-2-карбоновой кислоты и 7,4 г (32 ммоль) Boc-пиперидин-4-карбоновой кислоты растворяют в 50 мл CH2Cl2 и прикапывают в течение 30 мин при комнатной температуре к суспензии, содержащей 9,27 г (36 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридинийиодида и 8,06 мл (58 ммоль) триэтиламина в 40 мл CH2Cl2. Затем реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают 200 мл ЕЕ и органическую фазу промывают один раз водой, два раза водным полунасыщенным раствором KHSO4, два раза водным 2N NaOH и один раз водным насыщенным раствором NaCl. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 400 г кизельгеля с использованием в качестве элюента смеси CH2Cl2/MeOH, 95: 5. После удаления растворителя в вакууме на роторном испарителе и высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 4,61 г (54%) порошка светло-коричневого цвета.Elemental analysis: calculated for C 11 H 19 N 1 O 4 (229.1): C 57.62; H 8.29; N, 6.11; Found: C, 57.89; H 8.36; N 5.86
Stage 3: N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid, methyl ester
4.6 g (22 mmol) of (R, S) -indoline-2-carboxylic acid hydrochloride and 7.4 g (32 mmol) of Boc-piperidine-4-carboxylic acid were dissolved in 50 ml of CH 2 Cl 2 and added dropwise 30 min at room temperature to a suspension containing 9.27 g (36 mmol) of 2-chloro-1-methylpyridinium iodide and 8.06 ml (58 mmol) of triethylamine in 40 ml of CH 2 Cl 2 . The reaction mixture is then heated under reflux for 8 hours. The solvent is removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue is taken up in 200 ml of EA and the organic phase is washed once with water, twice with an aqueous semi-saturated solution of KHSO 4 , twice with aqueous 2N NaOH and once with aqueous saturated NaCl solution. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 400 g of silica gel using a 95: 5 mixture of CH 2 Cl 2 / MeOH as eluent. After removing the solvent in a rotary evaporator and drying in high vacuum (using oil pump) receive 4.61 g (54%) of a light brown powder.
Т. пл. 54-56oC
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,61
1H-ЯМР (ДМСО-d6 270 MHz): 1,35-1,85 (m, 15, Boc, 6 Pip); 2,7-2,8 (m, 2, H-C3, H-C5); 3,25 (m, 1, H-C3-lnd); 3,65 (m, 1, H-C3'-Ind); 3,8 (s, 3, COOCH3); 3,95 (m, 2, H-C6-Pip); 5,45 (d, 1, H-C2-Ind); 7,05 (m, 1, Ar); 7,1-7,3 (m, 2, Ar); 8,1 (d, 1, Ar).T. pl. 54-56 o C
TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.61
1 H-NMR (DMSO-d 6 270 MHz): 1.35-1.85 (m, 15, Boc, 6 Pip); 2.7-2.8 (m, 2, H-C3, H-C5); 3.25 (m, 1, H-C3-lnd); 3.65 (m, 1, H-C3'-Ind); 3.8 (s, 3, COOCH 3 ); 3.95 (m, 2, H-C6-Pip); 5.45 (d, 1, H-C2-Ind); 7.05 (m, 1, Ar); 7.1-7.3 (m, 2, Ar); 8.1 (d, 1, Ar).
Элементный анализ: рассчитано для C21H28N2O5 (388,47): C 64,92; H 7,27; N 7,21, найдено: C 65,20; H 7,49; N 7,38.Elemental analysis: calculated for C 21 H 28 N 2 O 5 (388.47): C 64.92; H 7.27; N, 7.21; Found: C, 65.20; H 7.49; N, 7.38.
Масс-спектрометрия: (ESI+): рассчитано 388,3, найдено 389,2
Стадия 4: N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота
B одногорлой колбе объемом 50 мл растворяют 3,3 г (8,51 ммоль) метилового эфира N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2- (R,S)-карбоновой кислоты в 25 мл MeOH, добавляют 2,14 г (51 ммоль) LiOH•H2O и перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Раствор подкисляют полунасыщенным водным раствором KHSO4 до pH 5 и два раза экстрагируют ЕЕ. Органическую фазу промывают один раз насыщенным раствором NaCl, высушивают над MgSO4 и растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе. После высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 3,09 г (97%) порошка светло-коричневого цвета.Mass spectrometry: (ESI +): calculated 388.3, found 389.2
Stage 4: N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] indoline-2- (R, S) -carboxylic acid
In a 50 ml single neck flask, 3.3 g (8.51 mmol) of N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] indoline-2- (R, S) -carboxylic acid methyl ester are dissolved in 25 ml of MeOH, 2.14 g (51 mmol) of LiOH • H 2 O are added and stirred at room temperature for 2.5 hours. The solution is acidified with a semi-saturated aqueous solution of KHSO 4 to
Т пл. 118-119oС
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,14
1H-ЯМР (DMCO-d6, 270 MHz): 1,35-1,85 (m, 15, Boc, 6 Pip); 2,7-2,85 (m, 2, H-C3, H-C5); 3,2 (m, 1, H-C3-Ind); 3,65 (m, 1, H-C3'-Ind); 3,95 (m, 2, H-C6-Pip); 5,45 (d, 1, H-C2-Ind); 7,05 (m, 1, Ar); 7,1-7,3 (m, 2, Ar); 8,1 (d, 1, Ar); 13,0-13,3 (s, 1, COOH).T pl. 118-119 o With
TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.14
1 H-NMR (DMCO-d 6 , 270 MHz): 1.35-1.85 (m, 15, Boc, 6 Pip); 2.7-2.85 (m, 2, H-C3, H-C5); 3.2 (m, 1, H-C3-Ind); 3.65 (m, 1, H-C3'-Ind); 3.95 (m, 2, H-C6-Pip); 5.45 (d, 1, H-C2-Ind); 7.05 (m, 1, Ar); 7.1-7.3 (m, 2, Ar); 8.1 (d, 1, Ar); 13.0-13.3 (s, 1, COOH).
Масс-спектрометрия: (ESI+): рассчитано 374,3; найдено 375,1. Mass spectrometry: (ESI +): calculated 374.3; found 375.1.
Стадия 5: N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Boc)-лизинметиловый эфир]-амид. Step 5: N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] indoline-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Boc) lysine methyl ester] -amide.
2 г (5,35 ммоль) N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2- (R,S)-карбоновой кислоты и 1,59 г (5,35 ммоль) хлоргидрата метилового эфира N-∈-Boc-лизина растворяют в 20 мл CH2Cl2 и прикапывают в течение 30 мин при комнатной температуре к суспензии, содержащей 2,81 г (11 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридинийиодида и 1,62 г (16 ммоль) триэтиламина в 30 мл CH2Cl2. Затем реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают 200 мл ЕЕ и органическую фазу промывают один раз водой, два раза полунасыщенным водным раствором KHSO4, два раза водным раствором 2N NaOH и один раз насыщенным водным раствором NaCl. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 400 г кизельгеля с использованием в качестве элюента CH2Cl2/MeOH, 95:5. После удаления растворителей в вакууме на роторном испарителе и высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 2,61 г (79%) порошка светло-коричневого цвета.2 g (5.35 mmol) of N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid and 1.59 g (5.35 mmol) of N- methyl ester hydrochloride ∈-Boc-lysine is dissolved in 20 ml of CH 2 Cl 2 and added dropwise for 30 minutes at room temperature to a suspension containing 2.81 g (11 mmol) of 2-chloro-1-methylpyridinium iodide and 1.62 g (16 mmol) triethylamine in 30 ml of CH 2 Cl 2 . The reaction mixture was then heated under reflux for 8 hours. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue was taken up in 200 ml of EA and the organic phase was washed once with water, twice with a half-saturated aqueous solution of KHSO 4 , twice with an aqueous solution of 2N NaOH and once saturated aqueous NaCl. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 400 g of silica gel using 95: 5 CH 2 Cl 2 / MeOH as eluent. After removing the solvents in a vacuum on a rotary evaporator and drying in high vacuum (using an oil pump), 2.61 g (79%) of a light brown powder is obtained.
Т. пл. 83-84oС
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,48
ИК-спектрометрия (FT-IR) (KBr): 3365 сл.(N-H): 2976 сл. (C-H); 1744 ср. (C= O); 1684 с. (CONH); 1540 сл. (C-O); 1407 ср. (C-H); 1170 с. (C-O); 755 ср. (C=C).T. pl. 83-84 o With
TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.48
IR Spectrometry (FT-IR) (KBr): 3365 sp. (NH): 2976 sp. (CH); 1744 cf. (C = O); 1684 p. (CONH); 1540 cl. (CO); 1407 cf. (CH); 1170 s. (CO); 755 cf. (C = C).
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 1,25-1,9 (m, 28, 18 Boc+3 CH2-Lys+4 Pip); 2,7-3,05 (m, 5, ∈-CH2-Lys + H-C3-lnd + 2 Pip); 3,55-3,7 (m, 3, COOMe); 3,9-4,1 (m, 2, Pip); 4,15-4,3 (m, 1, H-C3-Ind); 5,15 (m, 1, H-C2-Ind); 6,8 (m, 1, Ar-Ind); 7,0 (m, 1, Ar-Ind); 7,1-7,3 (m, 2, Ar-Ind+ α-NHCO); 8,1 (d, 1, Ar-Ind); 8,7-8,9 (dd, 1, NHCO-Boc). 1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 1.25-1.9 (m, 28, 18 Boc + 3 CH 2 -Lys + 4 Pip); 2.7-3.05 (m, 5, ∈-CH 2 -Lys + H-C3-lnd + 2 Pip); 3.55-3.7 (m, 3, COOMe); 3.9-4.1 (m, 2, Pip); 4.15-4.3 (m, 1, H-C3-Ind); 5.15 (m, 1, H-C2-Ind); 6.8 (m, 1, Ar-Ind); 7.0 (m, 1, Ar-Ind); 7.1-7.3 (m, 2, Ar-Ind + α-NHCO); 8.1 (d, 1, Ar-Ind); 8.7-8.9 (dd, 1, NHCO-Boc).
Масс-спектрометрия: (ESI+): рассчитано 616,4, найдено 617,5. Mass spectrometry: (ESI +): calculated 616.4, found 617.5.
ВЭЖХ: два пика с временами удерживания 24,25 и 24,63 мин. HPLC: two peaks with retention times of 24.25 and 24.63 min.
Элементный анализ: рассчитано для C32H48N4O8 (616,4): C 62,34; H 7,47; N 9,09, найдено: C 62,08; H 7,67; N 8,86.Elemental analysis: calculated for C 32 H 48 N 4 O 8 (616.4): C 62.34; H 7.47; N, 9.09; Found: C, 62.08; H 7.67; N, 8.86.
Пример 2
Синтез N-[1-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота- [S-(∈-NH2-лизинметиловый эфир]-амида
В одногорлой колбе объемом 25 мл растворяют 500 мг (0,812 ммоль) N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Boc)-лизинметиловый эфир]-амида в 2,8 мл CH2Cl2. К полученному раствору добавляют 15 эквивалентов (0,0122 моль, 0,93 мл) трифторуксусной кислоты и перемешивают 2 ч при комнатной температуре. К раствору добавляют 10 мл диэтилового эфира, при этом выпадает белый осадок, который отфильтровывают и промывают 6 раз диэтиловым эфиром. После высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 513 мг (98%) порошка белого цвета.Example 2
Synthesis of N- [1-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (∈-NH 2 -lysine methyl ester] -amide
500 mg (0.812 mmol) of N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Boc) are dissolved in a 25 ml single-necked flask. lysine methyl ester] amide in 2.8 ml of CH 2 Cl 2 . To the resulting solution was added 15 equivalents (0.0122 mol, 0.93 ml) of trifluoroacetic acid and stirred for 2 hours at room temperature. 10 ml of diethyl ether was added to the solution, and a white precipitate formed which was filtered off and washed 6 times with diethyl ether. After drying in high vacuum (using an oil pump), 513 mg (98%) of white powder is obtained.
Т. пл.: 164-165oС
ТСХ (обратно-фазная): CH3CN/H2O, 1:1, 1% ТФУ, Rf = 0,61.Mp: 164-165 o C
TLC (reverse phase): CH 3 CN / H 2 O, 1: 1, 1% TFA, R f = 0.61.
ИК-спектрометрия (KBr): 3435 сл. (N-H); 3049 сл. (C-H); 1740 сл. (C=O); 1676 c. (CONH); 1420 ср. (C-H); 1205 ср., 1135 с. (C-O). IR spectrometry (KBr): 3435 sl. (N-H); 3049 S. (C-H); 1740 cl. (C = O); 1676 c. (CONH); 1420 cf. (C-H); 1205 sr., 1135 s. (C-O).
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 1,2-2,05 (m, 10, 3CH2, -Lys + 4Pip); 2,7-3,15 (m, 5, ∈-CH2 - Lys + H-C3-Ind + 2Pip); 3,55-3,7 (m, 3, COOMe); 4,1 - 4,25 (m, 1, C3-Ind); 5,15 (d, 1, H-C2-lnd); 6,95 (m, 1, Ar-Ind); 7,1-7,3 (m, 2, Ar-Ind); 7,7-7,85 (s, 3, NH3 +); 8,1 (d, 1, Ar-Ind); 8,7-8,9 (m, 2, NH2 +). 1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 1.2-2.05 (m, 10, 3CH 2 , -Lys + 4Pip); 2.7-3.15 (m, 5, ∈-CH 2 - Lys + H-C3-Ind + 2Pip); 3.55-3.7 (m, 3, COOMe); 4.1-4.25 (m, 1, C3-Ind); 5.15 (d, 1, H-C2-lnd); 6.95 (m, 1, Ar-Ind); 7.1-7.3 (m, 2, Ar-Ind); 7.7-7.85 (s, 3, NH 3 + ); 8.1 (d, 1, Ar-Ind); 8.7-8.9 (m, 2, NH 2 + ).
Масс-спектрометрия: (ESI+): рассчитано 418,2, найдено 417,3 и 209,1 для m/2. Mass spectrometry: (ESI +): calculated 418.2, found 417.3 and 209.1 for m / 2.
ВЭЖХ: 2 пика с временами удерживания 11,54 и 12,65 мин. HPLC: 2 peaks with retention times of 11.54 and 12.65 min.
Пример 3
Синтез N-[1-Boc-индолин-2-(R, S)-карбонил] -индолин-2-(R,S)- карбоновая кислота-[S-(N-∈--Boc)-лизинметиловый эфир]-амида
Стадия 1: Boc-(R,S)-индолин-2-карбоновая кислота
B одногорлой колбе объемом 250 мл растворяют 5 г (30,8 ммоль) (R,S)-индолин-2-карбоновой кислоты в 30 мл диоксана и 23 мл 2N NaOH и охлаждают до 0oC. К полученному раствору добавляют по каплям в течение 30 мин раствор 7,39 г (33,9 моль) (Boc)2O в 20 мл диоксана и перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Выпадает белый осадок. Диоксан удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают насыщенным раствором KHSO4 и экстрагируют два раза ЕЕ. Органическую фазу промывают один раз насыщенным раствором NaCl и высушивают над MgSO4. После удаления растворителя в вакууме на роторном испарителе и высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 7,76 г (96%) порошка коричневого цвета.Example 3
Synthesis of N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) - carboxylic acid- [S- (N-∈ - Boc) -lysinmethyl ether] - amide
Stage 1: Boc- (R, S) -indolin-2-carboxylic acid
In a 250 ml one-necked flask, dissolve 5 g (30.8 mmol) of (R, S) -indolin-2-carboxylic acid in 30 ml of dioxane and 23 ml of 2N NaOH and cool to 0 ° C. To the resulting solution was added dropwise to within 30 minutes a solution of 7.39 g (33.9 mol) (Boc) 2 O in 20 ml of dioxane was stirred at room temperature for 24 hours. A white precipitate formed. The dioxane is removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue is treated with a saturated solution of KHSO 4 and extracted twice with EE. The organic phase is washed once with saturated NaCl and dried over MgSO 4 . After removal of the solvent in a vacuum on a rotary evaporator and drying in high vacuum (using an oil pump), 7.76 g (96%) of a brown powder is obtained.
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 + 1% NEt3 Rf = 0,91
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 1,4-1,7 (s, 9, Boc); 3,1 (m, 1, H-C3); 3,5 (m, 1, H-C3'); 4,9 (m, 1, H-C2); 7,0 (m, 1, Ar); 7,1-7,3 (m, 2, Ar); 7,5-7,9 (m, 1, Ar); 11,5 (m, 1, COOH).TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 + 1% NEt 3 R f = 0.91
1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 1.4-1.7 (s, 9, Boc); 3.1 (m, 1, H-C3); 3.5 (m, 1, H-C3 '); 4.9 (m, 1, H-C2); 7.0 (m, 1, Ar); 7.1-7.3 (m, 2, Ar); 7.5-7.9 (m, 1, Ar); 11.5 (m, 1, COOH).
Элементный анализ: рассчитано для C14H17N1O4 (263,2) C 63,88; H 6,46; N 5,32, найдено: C 64,05; H 6,53; N 5,41.Elemental analysis: calculated for C 14 H 17 N 1 O 4 (263.2) C 63.88; H 6.46; N, 5.32; Found: C, 64.05; H 6.53; N, 5.41.
Стадия 2: Метиловый эфир N-[Boc-индолин-2-(R,S)-карбонил]-индолин-2-(R, S-карбоновой кислоты
5 г (0,023 моль) хлоргидрата метилового эфира (R,S)-индолин-2-карбоновой кислоты и 12,11 г (46 ммоль) Boc-индолин-2(R,S)-карбоновой кислоты растворяют в 40 мл CH2Cl2 и полученный раствор добавляют по каплям в течение 30 мин при комнатной температуре к суспензии, содержащей 12,92 г (51 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридинийиодида и 10,23 мл (74 ммоль) триэтиламина в 40 мл CH2Cl2. Затем реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток обрабатывают 200 мл ЕЕ, органическую фазу промывают один раз водой, два раза полунасыщенным водным раствором KHSO4, два раза водным 2N NaOH и один раз насыщенным водным раствором NaCl. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 400 г кизельгеля с использованием в качестве элюента CH2Cl2/MeOH, 95:5. После удаления растворителей в вакууме на роторном испарителе и высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 5,01 г (51%) порошка темно-коричневого цвета.Stage 2: N- [Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S-carboxylic acid methyl ester
5 g (0.023 mol) of (R, S) -indoline-2-carboxylic acid methyl ester hydrochloride and 12.11 g (46 mmol) of Boc-indoline-2 (R, S) -carboxylic acid are dissolved in 40 ml of CH 2 Cl 2 and the resulting solution was added dropwise over 30 minutes at room temperature to a suspension containing 12.92 g (51 mmol) of 2-chloro-1-methylpyridinium iodide and 10.23 ml (74 mmol) of triethylamine in 40 ml of CH 2 Cl 2 . Then the reaction mixture was heated under reflux for 8 hours. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was treated with 200 ml of EA, the organic phase was washed once with water, twice with half-saturated aqueous KHSO 4 solution, twice with aqueous 2N NaOH and once saturated aqueous solution of NaCl. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 400 g of silica gel using 95: 5 CH 2 Cl 2 / MeOH as eluent. Removing the solvents in vacuo on a rotary evaporator and drying under high vacuum (using an oil pump) gives 5.01 g (51%) of a dark brown powder.
Т. пл.: 86oC
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,67 и 0,7
ИК-спектрометрия: (KBr): 3448 сл. (N-Н); 2976 сл. (C-Н); 1751 с., 1707 c. (C = O); 1680 c.(CONH): 1485 c. (C-H): 1168 cp. (C-O): 1020 cp. (C-O); 752 c. (C=C).Mp: 86 o C
TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.67 and 0.7
IR Spectrometry: (KBr): 3448 CFU (N-H); 2976 pp. (C-H); 1751 p., 1707 p. (C = O); 1680 c. (CONH): 1485 c. (CH): 1168 cp. (CO): 1020 cp. (CO); 752 c. (C = C).
Масс-спектрометрия: (ESI+) рассчитано 422,4, найдено 423,3. Mass spectrometry: (ESI +) calculated 422.4, found 423.3.
Элементный анализ: рассчитано для C24H26N2O5 (422,4): C 68,25; H 6,16; N 6,64, найдено: C 67,96; H 6,17; N 6,4.Elemental analysis: calculated for C 24 H 26 N 2 O 5 (422.4): C 68.25; H 6.16; N, 6.64; Found: C, 67.96; H 6.17; N, 6.4.
Стадия 3: N-[1-Вос-индолин-2-(R,S)-карбонил]-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота
В одногорлой колбе объемом 50 мл растворяют 2,84 г (6,77 ммоль) метилового эфира N-[1-Вос-индолин-2-(R,S)-карбонил]-индолин-2-(R,S)-карбоновой кислоты в 20 мл MeOH. К полученному раствору добавляют 1,71 г (41 ммоль) LiOH•H2O и перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Затем раствор подкисляют полунасыщенным раствором KHSO4 pH 5 и экстрагируют два раза ЕЕ. Органическую фазу промывают один раз насыщенным раствором NaCl, высушивают над MgSO4 и удаляют растворитель в вакууме на роторном испарителе. После высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 2,71 г (98%) порошка темно-коричневого цвета.Stage 3: N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid
2.84 g (6.77 mmol) of N- [1-Boc-indoline-2- (R, S) -carbonyl] -indoline-2- (R, S) -carboxylic methyl ester is dissolved in a 50 ml one-necked flask. acid in 20 ml of MeOH. To the resulting solution was added 1.71 g (41 mmol) of LiOH • H 2 O and stirred at room temperature for 2.5 hours. Then, the solution was acidified with a semi-saturated KHSO 4 pH 5 solution and extracted twice with EE. The organic phase is washed once with a saturated NaCl solution, dried over MgSO 4 and the solvent is removed in vacuo on a rotary evaporator. After drying under high vacuum (using an oil pump), 2.71 g (98%) of a dark brown powder is obtained.
Т. пл.: 118-119oC
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,14
Масс-спектрометрия: (ESI+) рассчитано 408,2, найдено 409,3.Mp: 118-119 o C
TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.14
Mass spectrometry: (ESI +) calculated 408.2, found 409.3.
Стадия 4: N-[1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбонил]-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Boc)-лизин-метиловый эфир]-амид
2 г (4,9 ммоль) N-[1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбонил]-индолин-2- (R,S)-карбоновой кислоты и 1,45 г (4,9 ммоль) хлоргидрата метилового эфира N-∈-Boc-S-лизина растворяют в 20 мл CH2Cl2 и прикапывают при комнатной температуре в течение 30 мин к суспензии, содержащей 2,51 г (9,8 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридинийиодида и 2,04 мл (14,7 ммоль) триэтиламина в 30 мл CH2Cl2. Затем нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают 200 мл ЕЕ и органическую фазу промывают один раз водой, два раза полунасыщенным водным раствором KHSO4, два раза водным раствором 2N NaOH и один раз водным насыщенным раствором NaCl. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 400 г кизельгеля с использованием в качестве элюента CH2Cl2/MeOH, 95:5. После удаления растворителя в вакууме на роторном испарителе и высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 2,21 г (69%) порошка коричневого цвета.Stage 4: N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Boc) -lysine-methyl ether] -amide
2 g (4.9 mmol) of N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid and 1.45 g (4.9 mmol) ) N-∈-Boc-S-lysine methyl ester hydrochloride is dissolved in 20 ml of CH 2 Cl 2 and added dropwise at room temperature for 30 minutes to a suspension containing 2.51 g (9.8 mmol) of 2-chloro-1- methylpyridinium iodide and 2.04 ml (14.7 mmol) of triethylamine in 30 ml of CH 2 Cl 2 . Then it is heated under reflux for 8 hours. The solvent is removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue is treated with 200 ml of EE and the organic phase is washed once with water, twice with a half-saturated aqueous solution of KHSO 4 , two times with an aqueous solution of 2N NaOH and once with saturated aqueous NaCl solution. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 400 g of silica gel using 95: 5 CH 2 Cl 2 / MeOH as eluent. After removing the solvent in a vacuum on a rotary evaporator and drying in high vacuum (using an oil pump), 2.21 g (69%) of brown powder are obtained.
Т.пл.: 78-80oC
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,51
ИК-спектрометрия: (KBr) 3504 сл. (N-H); 2975 сл. (C-H); 1749 с., 1690 c. (CONH, C=O); 1490 c.(C-H); 1407 cp. (C-H); 1170 c. (C-O); 757 ср. (C-C).Mp: 78-80 o C
TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.51
IR Spectrometry: (KBr) 3504 sl. (NH); 2975 words (CH); 1749 p., 1690 p. (CONH, C = O); 1490 c. (CH); 1407 cp. (CH); 1170 c. (CO); 757 cf. (CC).
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 1,2-1,8 (m, 24, 18 Boc, 3 CH2-Lys); 2,8-3,0 (m, 3, ∈-CH2-Lys, H-C3-Ind); 3,0-3,2 (m, 1, H-C3-Ind); 3,4-3,5 (m, 1, H-C3-Ind); 3,5-3,7 (m, 3, COOMe); 4,2-4,3 (m, 1, H-C3-Ind); 4,7-4,9 (m, 1, H-C2-Ind); 5,0-5,5 (m, 1, H-C2-Ind); 6,7-6,8 (m, 1, Ar-Ind); 6,85-7,3 (m, 6, Ar-Ind); 7,7-8,9 (m, 3, NHCO, Ar-Ind, α-NHCO). 1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 1.2-1.8 (m, 24, 18 Boc, 3 CH 2 -Lys); 2.8-3.0 (m, 3, ∈-CH 2 -Lys, H-C3-Ind); 3.0-3.2 (m, 1, H-C3-Ind); 3.4-3.5 (m, 1, H-C3-Ind); 3.5-3.7 (m, 3, COOMe); 4.2-4.3 (m, 1, H-C3-Ind); 4.7-4.9 (m, 1, H-C2-Ind); 5.0-5.5 (m, 1, H-C2-Ind); 6.7-6.8 (m, 1, Ar-Ind); 6.85-7.3 (m, 6, Ar-Ind); 7.7-8.9 (m, 3, NHCO, Ar-Ind, α-NHCO).
Масс-спектрометрия: (ESI+) рассчитано 650,2, найдено 651,4. Mass spectrometry: (ESI +) calculated 650.2, found 651.4.
ВЭЖХ: 4 пика с временами удерживания 24,82 мин, 29,9 мин, 30,3 мин, 31,2 мин. HPLC: 4 peaks with retention times of 24.82 minutes, 29.9 minutes, 30.3 minutes, 31.2 minutes.
Пример 4
Синтез N-[индолин-2-(R, S)-карбонил] -индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-[S-(∈-NH2)-лизинметиловый эфир]-амида
В одногорлой колбе объемом 25 мл растворяют 500 мг (0,812 ммоль) N-[1-Boc-индолин-2-(R, S)-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Boc)-лизинметиловый эфир] -амида в 2,8 мл CH2Cl2. К полученному раствору добавляют 15 эквивалентов (0,0122 моль, 0,93 мл) трифторуксусной кислоты и перемешивают два часа при комнатной температуре. К раствору добавляют 10 мл диэтилового эфира, выпадает белый осадок, который отфильтровывают и промывают 6 раз диэтиловым эфиром. После высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 513 мг (98%) порошка белого цвета.Example 4
Synthesis of N- [Indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (∈-NH 2 ) -lysinmethyl ether] -amide
500 mg (0.812 mmol) of N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- ( N-∈-Boc) lysine methyl ester] -amide in 2.8 ml of CH 2 Cl 2 . To the resulting solution, 15 equivalents (0.0122 mol, 0.93 ml) of trifluoroacetic acid were added and stirred for two hours at room temperature. 10 ml of diethyl ether was added to the solution, a white precipitate formed, which was filtered off and washed 6 times with diethyl ether. After drying in high vacuum (using an oil pump), 513 mg (98%) of white powder is obtained.
Т. пл.: 164-165oC
ТСХ (обращенно-фазовая): CH3CN/H2О, 1:1, 1% ТФУ, Rf = 0,61
ИК-спектроскопия: (KBr) 3435 сл. (N-H); 3049 сл. (C-H); 1740 сл. (C=O); 1676 c. (CONH); 1420 ср. (C-H); 1205 ср., 1135 с. (C-O).Mp: 164-165 o C
TLC (reverse phase): CH 3 CN / H 2 O, 1: 1, 1% TFA, R f = 0.61
IR spectroscopy: (KBr) 3435 sl. (NH); 3049 S. (CH); 1740 cl. (C = O); 1676 c. (CONH); 1420 cf. (CH); 1205 sr., 1135 s. (CO).
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 1,2-2,05 (m, 10, 3 CH2-Lys + 4 Pip); 2,7-3,15 (m, 5, ∈-CH2-Lys + H-C3-Ind + 2 Pip); 3,55-3,7 (m, 3, COOMe); 4,1-4,25 (m, 1, C3-Ind); 5,15 (d, 1, H-C2-Ind); 6,95 (m, 1,Ar-Ind); 7,1-7,3 (m, 2, Ar-Ind); 7,7-7,85 (s, 3, NH3 +); 8,1 (d, 1, Ar-Ind); 8,7-8,9 (m, 2, NH3 +). 1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 1.2-2.05 (m, 10, 3 CH 2 -Lys + 4 Pip); 2.7-3.15 (m, 5, ∈-CH 2 -Lys + H-C3-Ind + 2 Pip); 3.55-3.7 (m, 3, COOMe); 4.1-4.25 (m, 1, C3-Ind); 5.15 (d, 1, H-C2-Ind); 6.95 (m, 1, Ar-Ind); 7.1-7.3 (m, 2, Ar-Ind); 7.7-7.85 (s, 3, NH 3 + ); 8.1 (d, 1, Ar-Ind); 8.7-8.9 (m, 2, NH 3 + ).
Масс-спектрометрия: (ESI+) рассчитано 418,2, найдено 417,3 и 209,1 для m/2. Mass spectrometry: (ESI +) calculated 418.2, found 417.3 and 209.1 for m / 2.
ВЭЖХ: 2 пика с временами удерживания 11,54 мин и 12,65 мин. HPLC: 2 peaks with retention times of 11.54 minutes and 12.65 minutes.
Пример 5
Синтез N-[1-Boc-индолин-2-(R, S)-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-(S-(N-∈-Z)-лизинметиловый эфир)-амида
2,5 г (6,13 ммоль) N-[1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбонил]-индолин-2-(R,S)-карбоновой кислоты и 2,03 г (6,13 ммоль) хлоргидрата метилового эфира N-∈-Z-лизина растворяют в 20 мл CH2Cl2 и добавляют при комнатной температуре в течение 30 мин к суспензии, содержащей 2,35 г (9,2 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридинийиодида и 2,13 мл (15 ммоль) триэтиламина в 30 мл CH2Cl2. Затем смесь кипятят с обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают 200 мл ЕЕ и органическую фазу промывают один раз водой, два раза полунасыщенным раствором KHSO4, два раза раствором 2N NaOH и один раз насыщенным раствором NaCl. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 400 г кизельгеля с использованием в качестве элюента CH2Cl2/MeOH, 95:5. После удаления растворителя в вакууме на роторном испарителе и высушивании в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 2,57 г (61%) порошка коричневого цвета.Example 5
Synthesis of N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- (S- (N-∈-Z) -lysinemethyl ether) -amide
2.5 g (6.13 mmol) of N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid and 2.03 g (6, 13 mmol) of N-∈-Z-lysine methyl ester hydrochloride is dissolved in 20 ml of CH 2 Cl 2 and added at room temperature over 30 minutes to a suspension containing 2.35 g (9.2 mmol) of 2-chloro-1- methylpyridinium iodide and 2.13 ml (15 mmol) of triethylamine in 30 ml of CH 2 Cl 2 . The mixture was then refluxed for 8 hours. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue was treated with 200 ml of EE and the organic phase was washed once with water, twice with half-saturated KHSO 4 solution, twice with 2N NaOH solution and once with saturated NaCl solution. . The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 400 g of silica gel using 95: 5 CH 2 Cl 2 / MeOH as eluent. After removing the solvent in a vacuum on a rotary evaporator and drying in high vacuum (using an oil pump), 2.57 g (61%) of brown powder is obtained.
Т.пл.: 68oС
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,48.Mp: 68 o C
TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.48.
ИК-спектрометрия: (KBr) 3329 сл. (N-H); 2935 сл. (C-H); 1701 с. (C=O); 1485 с. (C-H); 1260 ср. (C-O); 1149 ср., 1020 ср. (C-O); 753 ср. (C=C). IR spectrometry: (KBr) 3329 cl. (N-H); 2935 S. (C-H); 1701 p. (C = O); 1485 s (C-H); 1260 cf. (C-O); 1149 cf., 1020 cf. (C-O); 753 cf. (C = C).
Масс-спектрометрия: (ESI+) рассчитано 684,5, найдено 685,4
Элементный анализ: (рассчитано для C38H44N4O8 (684,5): C 66,67; H 6,43; N 8,19, найдено: C 64,15; H 6,5; N 7,88.Mass spectrometry: (ESI +) calculated 684.5, found 685.4
Elemental analysis: (calculated for C 38 H 44 N 4 O 8 (684.5): C 66.67; H 6.43; N 8.19, found: C 64.15; H 6.5;
Пример 6
Синтез 1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-(S-(N-∈-Z)- лизинметиловый эфир)-амида
6,36 г (0,0242 моль) 1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновой кислоты и 8,0 г (24,2 ммоль) хлоргидрата метилового эфира N-∈-Z-лизина растворяют в 70 мл CH2Cl2 и прикапывают в течение 30 мин при комнатной температуре к суспензии, содержащей 9,27 г (36,3 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридинийиодида и 8,41 мл (60,4 ммоль) триэтиламина в 60 мл CH2Cl2. Затем реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают 200 мл ЕЕ и органическую фазу промывают один раз водой, два раза полунасыщенным водным раствором KHSO4, два раза водным раствором 2N NaOH и один раз насыщенным водным раствором NaCl. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 400 г кизельгеля с использованием в качестве элюента CH2Cl2/MeOH, 95: 5. После удаления растворителей в вакууме на роторном испарителе и высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 10,91 г (84%) порошка светло-коричневого цвета.Example 6
Synthesis of 1-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- (S- (N-∈-Z) - lysine methyl ether) -amide
6.36 g (0.0242 mol) of 1-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid and 8.0 g (24.2 mmol) of N-∈-Z-lysine methyl ester hydrochloride are dissolved in 70 ml of CH 2 Cl 2 and added dropwise for 30 min at room temperature to a suspension containing 9.27 g (36.3 mmol) of 2-chloro-1-methylpyridinium iodide and 8.41 ml (60.4 mmol) of triethylamine in 60 ml CH 2 Cl 2 . The reaction mixture was then heated under reflux for 8 hours. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue was taken up in 200 ml of EA and the organic phase was washed once with water, twice with a half-saturated aqueous solution of KHSO 4 , twice with an aqueous solution of 2N NaOH and once saturated aqueous NaCl. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 400 g of silica gel using 95: 5 CH 2 Cl 2 / MeOH as eluent. After removing the solvents in a rotary evaporator and drying in high vacuum (using oil pump) receive 10.91 g (84%) of a light brown powder.
ТСХ: CH2Cl2/MeOH 95:5, Rf = 0,74
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 1,3-1,75 (m, 15, 9 Boc + 6 CH2 - Lys); 2,8-3,0 (m, 3, CH2 - Lys + H-C3-Ind); 3,4-3,55 (m, 1, H-C3'-Ind); 3,65 (s, 3, COОCH3), 4,2 (m, 1, Hα-C-Lys); 4,8 (m, 1, H-C2-Ind); 5,0 (s, 2, CH2-Z); 6,85 (m, 1, Ar-Ind); 7,15 (t, 2, Ar-Ind); 7,2-7,4 (m, 5, Ph-Z); 7,7 (m, 1, NHCO); 8,4 (m, 1, Ar-Ind).TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH 95: 5, R f = 0.74
1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 1.3-1.75 (m, 15, 9 Boc + 6 CH 2 - Lys); 2.8-3.0 (m, 3, CH 2 - Lys + H-C3-Ind); 3.4-3.55 (m, 1, H-C3'-Ind); 3.65 (s, 3, COOCH 3 ); 4.2 (m, 1, Hα-C-Lys); 4.8 (m, 1, H-C2-Ind); 5.0 (s, 2, CH 2 -Z); 6.85 (m, 1, Ar-Ind); 7.15 (t, 2, Ar-Ind); 7.2-7.4 (m, 5, Ph-Z); 7.7 (m, 1, NHCO); 8.4 (m, 1, Ar-Ind).
Элементный анализ: рассчитано для C29H37N3O7 (539,4): C 64,56; H 6,86; N 7,79, найдено: C 64,61; H 7,06; N 7,67.Elemental analysis: calculated for C 29 H 37 N 3 O 7 (539.4): C 64.56; H 6.86; N, 7.79; Found: C, 64.61; H 7.06; N, 7.67.
Масс-спектрометрия: (ESI+) рассчитано: 539,4, найдено: 540,3. Mass spectrometry: (ESI +) calculated: 539.4, found: 540.3.
Пример 7
Синтез 1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-(3-фенилаланинметиловый эфир)-амида
Стадия 1: Хлоргидрат метилового эфира S-фенилаланина
B одногорлую колбу объемом 100 мл прикапывают 5,3 мл (72,6 ммоль) тионилхлорида в течение 30 мин при комнатной температуре к суспензии, содержащей 8,0 г (48,4 ммоль) S-фенилаланина в 50 мл MeOH. Затем смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 ч. Метанол и избыточный тионилхлорид отгоняют сначала на водоструйном насосе, а затем на роторном испарителе. Остаток растворяют в 50 мл MeOH и смешивают с 800 мл диэтилового эфира. Выпадает белый осадок, который отфильтровывают.Example 7
Synthesis of 1-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- (3-phenylalanine methyl ether) -amide
Stage 1: S-phenylalanine methyl ester hydrochloride
5.3 ml (72.6 mmol) of thionyl chloride are added dropwise to a suspension containing 8.0 g (48.4 mmol) of S-phenylalanine in 50 ml of MeOH in a 100 ml one-necked flask. The mixture is then heated under reflux for 3 hours. Methanol and excess thionyl chloride are distilled off first on a water-jet pump and then on a rotary evaporator. The residue was dissolved in 50 ml of MeOH and mixed with 800 ml of diethyl ether. A white precipitate formed which was filtered off.
Получают 7,93 г (75%) порошка белого цвета. 7.93 g (75%) of a white powder is obtained.
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 3,0-3,2 (m, 2, CH2); 3,65 (s, 3, COOMe); 4,35 (m, 1, Hα-C); 7,2-7,4 (m, 5, Ph); 8,5-8,7 (m, 3, NH3 +). 1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 3.0-3.2 (m, 2, CH 2 ); 3.65 (s, 3, COOMe); 4.35 (m, 1, Hα-C); 7.2-7.4 (m, 5, Ph); 8.5-8.7 (m, 3, NH 3 + ).
Стадия 2: N-[1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбонил]-(S-фенилаланинметиловый эфир)-амид
3,5 г (16,2 ммоль) хлоргидрата метилового эфира S-фенилаланина и 4,27 г (0,0162 ммоль) 1-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновой кислоты растворяют в 70 мл CH2Cl2 и прикапывают в течение 30 мин при комнатной температуре к суспензии, содержащей 6,21 г (24,3 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридинийиодида и 5,32 мл (40,5 ммоль) триэтиламина в 60 мл CH2Cl2. Затем реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают 200 мл ЕЕ и органическую фазу промывают один раз водой, два раза полунасыщенным водным раствором KHSO4, два раза водным раствором 2N NaOH и один раз насыщенным водным раствором NaCl. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 400 г кизельгеля с использованием в качестве элюента CH2Cl2/MeOH, 95:5. После удаления растворителей в вакууме на роторном испарителе и высушивания в высоком вакууме (с использованием масляного насоса) получают 7,71 г (62%) порошка светло-желтого цвета.Stage 2: N- [1-Boc-indolin-2- (R, S) -carbonyl] - (S-phenylalanine methyl ether) -amide
3.5 g (16.2 mmol) of S-phenylalanine methyl ester hydrochloride and 4.27 g (0.0162 mmol) of 1-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid are dissolved in 70 ml of CH 2 Cl 2 and added dropwise for 30 minutes at room temperature to a suspension containing 6.21 g (24.3 mmol) of 2-chloro-1-methylpyridinium iodide and 5.32 ml (40.5 mmol) of triethylamine in 60 ml of CH 2 Cl 2 . The reaction mixture was then heated under reflux for 8 hours. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue was taken up in 200 ml of EA and the organic phase was washed once with water, twice with a half-saturated aqueous solution of KHSO 4 , twice with an aqueous solution of 2N NaOH and once saturated aqueous NaCl. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 400 g of silica gel using 95: 5 CH 2 Cl 2 / MeOH as eluent. After removing the solvents in a vacuum on a rotary evaporator and drying in high vacuum (using an oil pump), 7.71 g (62%) of a light yellow powder is obtained.
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,87
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 1,2-1,5 (m, 9, Boc); 2,3-2,45 (m, 0,5, H-C3-Ind); 2,8-3,5 (m, 3,5, C3-Ind + CH2); 3,65 (d, 3, COOMe); 4,4-4,65 (m, 1, C2-Ind); 4,8 (m, 1, Hα-C); 6,8-7,3 (m, 8,5 Ph + 3 Ar-Ind); 7,7 (m, 1, Ar-Ind); 8,55 (m, 1, NH).TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.87
1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 1.2-1.5 (m, 9, Boc); 2.3-2.45 (m, 0.5, H-C3-Ind); 2.8-3.5 (m, 3.5, C3-Ind + CH 2 ); 3.65 (d, 3, COOMe); 4.4-4.65 (m, 1, C2-Ind); 4.8 (m, 1, Hα-C); 6.8-7.3 (m, 8.5 Ph + 3 Ar-Ind); 7.7 (m, 1, Ar-Ind); 8.55 (m, 1, NH).
Элементный анализ: рассчитано для C24H28N2O5 (424,3) C 67,92; H 6,6; N 6,6? найдено: C 67,94; H 6,79; N 6,59.Elemental analysis: calculated for C 24 H 28 N 2 O 5 (424.3) C 67.92; H 6.6; N 6.6? Found: C, 67.94; H 6.79; N, 6.59.
Масс-спектрометрия: (ESI+): рассчитано 424,4, найдено 425,2. Mass spectrometry: (ESI +): calculated 424.4, found 425.2.
Пример 8
Синтез метилового эфира N-[N'-(4-метоксифенилацетил)-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновой кислоты (это соединение может быть использовано в качестве исходного для получения амидов с общей формулой I)
1,2 г (3,0 ммоль) метилового эфира N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2-(R, S)-карбоновой кислоты растворяют в 30 мл CH2Cl2 при комнатной температуре, смешивают с 1,14 г (10 ммоль) ТФУ и перемешивают в течение 24 ч. Реакционную смесь упаривают в вакууме на роторном испарителе, обрабатывают 100 мл ЕЕ и промывают 3 раза насыщенным водным раствором NaHCO3 и 1 раз насыщенным водным раствором NaCl. Органическую фазу сушат над MgSO4 и растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе. Остаток растворяют в 30 мл CH2Cl2, смешивают с 1,01 г (10 ммоль) триэтиламина и 366 мг (3,0 ммоль) 4-диметиламинопиридина, охлаждают до 0oC и смешивают с раствором 606 мг (3,3 ммоль) 4-метоксифенилацетилхлорида в 10 мл CH2Cl2. После перемешивания в течение 24 ч реакционную смесь упаривают на роторном испарителе, обрабатывают 100 мл эфира уксусной кислоты и промывают два раза раствором 1 н. HCl, два раза насыщенным водным раствором NaHCO3 и один раз насыщенным водным раствором NaCl. Затем растворители отгоняют в вакууме на роторном испарителе и остаток хроматографируют на 80 г Flashgel (кизельгеля Flash) с использованием в качестве элюента н-гексан/AcOEt. Соответствующие фракции собирают и упаривают на роторном испарителе с последующим высушиванием в высоком вакууме (с использованием масляного насоса). Получают 1,1 г продукта в виде пены белого цвета.Example 8
Synthesis of N- [N '- (4-methoxyphenylacetyl) -piperidyl-4-carbonyl] indoline-2- (R, S) -carboxylic acid methyl ester (this compound can be used as a starting material for the preparation of amides with the general formula I )
1.2 g (3.0 mmol) of N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] indoline-2- (R, S) -carboxylic acid methyl ester was dissolved in 30 ml of CH 2 Cl 2 at room temperature, mixed with 1.14 g (10 mmol) of TFA and stirred for 24 hours. The reaction mixture was evaporated in vacuo on a rotary evaporator, treated with 100 ml of EA and washed 3 times with saturated aqueous NaHCO 3 solution and 1 time with saturated aqueous NaCl solution. The organic phase is dried over MgSO 4 and the solvent is removed in vacuo on a rotary evaporator. The residue was dissolved in 30 ml of CH 2 Cl 2 , mixed with 1.01 g (10 mmol) of triethylamine and 366 mg (3.0 mmol) of 4-dimethylaminopyridine, cooled to 0 ° C. and mixed with a solution of 606 mg (3.3 mmol) ) 4-methoxyphenylacetyl chloride in 10 ml of CH 2 Cl 2 . After stirring for 24 hours, the reaction mixture was evaporated on a rotary evaporator, treated with 100 ml of acetic acid ester and washed twice with 1N solution. HCl, twice with a saturated aqueous solution of NaHCO 3 and once with a saturated aqueous solution of NaCl. Then, the solvents were removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was chromatographed over 80 g of Flashgel (Flash silica gel) using n-hexane / AcOEt as eluent. The appropriate fractions are collected and evaporated on a rotary evaporator, followed by drying in high vacuum (using an oil pump). 1.1 g of product are obtained in the form of a white foam.
ТСХ: AcOEt, Rf = 0,22
1H-ЯМР (ДМСО-d6 270 MHz): 1,35-1,85 (m, 13, Boc, 4 Pip); 2,7-2,8 (m, 4, H-C(3), H-C(5)); 3,25 (m, 1, H-C(3)-Ind); 3,65 (m, 1, H-C(3')-Ind); 3,8 (s, 3, COОCH3); 3,95 (m, 1, H-C(4)-Pip); 5,45 (d, 1, H-C(2)-Ind); 7,05 (m, 1, Ar); 7,1-7,3 (m, 2, Ar); 8,1 (d, 1, Ar).TLC: AcOEt, R f = 0.22
1 H-NMR (DMSO-d 6 270 MHz): 1.35-1.85 (m, 13, Boc, 4 Pip); 2.7-2.8 (m, 4, HC (3), HC (5)); 3.25 (m, 1, HC (3) -Ind); 3.65 (m, 1, HC (3 ') - Ind); 3.8 (s, 3, COCH 3 ); 3.95 (m, 1, HC (4) -Pip); 5.45 (d, 1, HC (2) -Ind); 7.05 (m, 1, Ar); 7.1-7.3 (m, 2, Ar); 8.1 (d, 1, Ar).
Элементный анализ: рассчитано для C25H28N2O5 (436,51): C 68,70; H 6,47; N 6,42, найдено: C 69,97; H 6,98; N 5,27.Elemental analysis: calculated for C 25 H 28 N 2 O 5 (436.51): C 68.70; H 6.47; N, 6.42. Found: C, 69.97; H 6.98; N, 5.27.
Пример 9
Синтез метилового эфира N-(4-метоксифенилацетил)-индолин-2-(R,S)-карбоновой кислоты (это соединение может быть использовано в качестве исходного для получения амидов общей формулы I)
B одногорлую колбу объемом 100 мл с перегородкой помещают 1 г хлоргидрата метилового эфира (R,S)-индолин-2-карбоновой кислоты и 1,14 г (9,36 ммоль) DMAP в 25 мл сухого CH2Cl2. Затем с помощью шприца прикаgывают 1,04 г (856 мкл) 4-метоксифенилацетилхлорида при 0oC в течение 30 мин. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 150 г кизельгеля Flash (CH2Cl2/MeOH, 9:1). После удаления растворителей в вакууме на роторном испарителе получают 830 мг (59%) порошка светло-серого цвета.Example 9
Synthesis of N- (4-methoxyphenylacetyl) -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid methyl ester (this compound can be used as a starting material for the preparation of amides of the general formula I)
Into a 100 ml single neck flask with a septum, 1 g of (R, S) -indolin-2-carboxylic acid methyl ester hydrochloride and 1.14 g (9.36 mmol) of DMAP are placed in 25 ml of dry CH 2 Cl 2 . Then, 1.04 g (856 μl) of 4-methoxyphenylacetyl chloride were added with a syringe at 0 ° C for 30 minutes. The mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 150 g Flash flash gel (CH 2 Cl 2 / MeOH, 9: 1). After removing the solvents in a vacuum on a rotary evaporator, 830 mg (59%) of a light gray powder is obtained.
ТСХ: CH2Cl2; Rf = 0,31
1H-ЯМР (ДМСО-d6, 270 MHz): 3,15-3,3 (m, 1, H-C(3)-Ind); 3,5-3,7 (m, 3, CH2 + H-C(3')-Ind); 5,0 (m, 1, H-C(2)-Ind); 6,85 (m, 2, Ar-Ind); 7,0 (m, 1, Ar-Ind); 7,1-7,3 (m, 4, Phenyl); 8,25 (d, 1, Ar-Ind).TLC: CH 2 Cl 2 ; R f = 0.31
1 H-NMR (DMSO-d 6 , 270 MHz): 3.15-3.3 (m, 1, HC (3) -Ind); 3.5-3.7 (m, 3, CH 2 + HC (3 ') - Ind); 5.0 (m, 1, HC (2) -Ind); 6.85 (m, 2, Ar-Ind); 7.0 (m, 1, Ar-Ind); 7.1-7.3 (m, 4, Phenyl); 8.25 (d, 1, Ar-Ind).
Элементный анализ: рассчитано для C19H19N1O4 (325,3); C 70,15; H 5,85; N 4,31, найдено: C 70,34; H 5,78; N 4,22.Elemental analysis: calculated for C 19 H 19 N 1 O 4 (325.3); C 70.15; H 5.85; N, 4.31; Found: C, 70.34; H 5.78; N, 4.22.
Масс-спектрометрия: (ESI+) рассчитано 325,3, найдено 326,1. Mass spectrometry: (ESI +) calculated 325.3, found 326.1.
Пример 10
Синтез N-Boc-индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-4-пиридил-амида
B одногорлую колбу объемом 100 мл помещают 2,63 г (10,0 ммоль) 1-Boc-(R, S)-индолин-2-карбоновой кислоты, 1,13 г (12,0 ммоль) 4-аминопиридина, 1,47 г (12,0 ммоль) 4-диметиламинопиридина в 30 мл CH2Cl2 при 0oC и смешивают с раствором 2,48 г (12,0 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 5 мл CH2Cl2. Через 48 ч реакционную смесь фильтруют через целит, растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают 100 мл эфира уксусной кислоты. Промывают 2 раза 10% водным раствором HCl, 2 раза насыщенным водным раствором NaHCO3 и 1 раз насыщенным водным раствором NaCl. После отгонки растворителей в вакууме на роторном испарителе остаток подвергают очистке путем хроматографии на 50 г кизельгеля Flash с использованием в качестве элюента н-гексан/AcOEt. После удаления растворителей в вакууме на роторном испарителе остаток кристаллизуют из AcOEt/эфир и получают 2,4 г продукта.Example 10
Synthesis of N-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid-4-pyridyl amide
2.63 g (10.0 mmol) of 1-Boc- (R, S) -indoline-2-carboxylic acid, 1.13 g (12.0 mmol) of 4-aminopyridine, 1, are placed in a 100 ml single necked flask. 47 g (12.0 mmol) of 4-dimethylaminopyridine in 30 ml of CH 2 Cl 2 at 0 ° C and mixed with a solution of 2.48 g (12.0 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide in 5 ml of CH 2 Cl 2 . After 48 hours, the reaction mixture was filtered through celite, the solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue was treated with 100 ml of acetic acid ester. Wash 2 times with a 10% aqueous solution of HCl, 2 times with a saturated aqueous solution of NaHCO 3 and 1 time with a saturated aqueous solution of NaCl. After distillation of the solvents in vacuo on a rotary evaporator, the residue was purified by chromatography on 50 g of Flash silica gel using n-hexane / AcOEt as eluent. After removing the solvents in vacuo on a rotary evaporator, the residue was crystallized from AcOEt / ether to give 2.4 g of product.
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5; Rf = 0,19
1H-ЯМР (CDCl3, 270 MHz): 1,58 (s, 9H, Boc); 3,43-3,54 (m, 2H, H-C(3)-Ind); 5,0 (m, 1, H-C2-Ind); 7,02 (m, 1H, H-C(7)-Ind); 7,17-7,26 (m, 3H, H-C(6), H-C(5), H-C(4)-Ind); 7,45 (q, 2H, H-C(3), H-C(5)-Py); 7,57 (NH); 8,47 (q, 2H, H-C(2), H-C(6)-Py).TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5; R f = 0.19
1 H-NMR (CDCl 3 , 270 MHz): 1.58 (s, 9H, Boc); 3.43-3.54 (m, 2H, HC (3) -Ind); 5.0 (m, 1, H-C2-Ind); 7.02 (m, 1H, HC (7) -Ind); 7.17-7.26 (m, 3H, HC (6), HC (5), HC (4) -Ind); 7.45 (q, 2H, HC (3), HC (5) -Py); 7.57 (NH); 8.47 (q, 2H, HC (2), HC (6) -Py).
Элементный анализ: рассчитано для C19H21N3O3 (339,40): C 67,84; H 6,29; N 12,49, найдено: C 67,75; H 6,33; N 12,53.Elemental analysis: calculated for C 19 H 21 N 3 O 3 (339.40): C 67.84; H 6.29; N, 12.49; Found: C, 67.75; H 6.33; N, 12.53.
Пример 11
Синтез N-Boc-индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-[пиперазиноуксусная кислота-морфолид]-амида
B одногорлую колбу объемом 100 мл помещают 2,63 г (10,0 ммоль) 1-Boc-(R, S)-индолин-2-карбоновой кислоты, 2,56 г (12,0 ммоль) морфолида пиперазиноуксусной кислоты, 1,47 г (12,0 ммоль) 4-диметиламинопиридина в 30 мл CH2Cl2 при 0oC и смешивают с раствором 2,48 г (12,0 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 5 мл CH2Cl2. Через 48 ч реакционную смесь фильтруют через целит, растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе, остаток обрабатывают 100 мл ЕЕ. Промывают 2 раза 10% водным раствором HCl, 2 раза насыщенным водным раствором NaHCO3 и 1 раз насыщенным водным раствором NaCl. После отгонки растворителей в вакууме на роторном испарителе остаток подвергают очистке путем хроматографии на 50 г кизельгеля Flash с использованием в качестве элюента н-гексан/AcOEt. После удаления растворителей в вакууме на роторном
испарителе остаток кристаллизуют из AcOEt/эфир и получают 2,4 г продукта.Example 11
Synthesis of N-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [piperazinoacetic acid-morpholide] -amide
2.63 g (10.0 mmol) of 1-Boc- (R, S) -indolin-2-carboxylic acid, 2.56 g (12.0 mmol) of piperazinoacetic acid morpholide are placed in a 100 ml single-necked flask, 1, 47 g (12.0 mmol) of 4-dimethylaminopyridine in 30 ml of CH 2 Cl 2 at 0 ° C and mixed with a solution of 2.48 g (12.0 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide in 5 ml of CH 2 Cl 2 . After 48 hours, the reaction mixture was filtered through celite, the solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator, the residue was treated with 100 ml of EA. Wash 2 times with a 10% aqueous solution of HCl, 2 times with a saturated aqueous solution of NaHCO 3 and 1 time with a saturated aqueous solution of NaCl. After distillation of the solvents in vacuo on a rotary evaporator, the residue was purified by chromatography on 50 g of Flash silica gel using n-hexane / AcOEt as eluent. After removal of solvents in a rotary vacuum
evaporator, the residue is crystallized from AcOEt / ether and 2.4 g of product are obtained.
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5; Rf = 0,19
1H-ЯМР (CDCl3, 270 MHz): 1,48-1,58 (d, 9H, Boc); 3,21 (s, 2H, H-C(2'')); 3,42-3,69 (m, 16H); 5,1 (br, 2H, H-C(3)-Ind); 6,48 (q, 1H,); 6,90 (q, 1H); 7,14 (m, 1H); 8,22 (q, 1H).TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5; R f = 0.19
1 H-NMR (CDCl 3 , 270 MHz): 1.48-1.58 (d, 9H, Boc); 3.21 (s, 2H, HC (2``)); 3.42-3.69 (m, 16H); 5.1 (br, 2H, HC (3) -Ind); 6.48 (q, 1H,); 6.90 (q, 1H); 7.14 (m, 1H); 8.22 (q, 1H).
Элементный анализ: рассчитано для C24H34N4O5 (458,56): C 62,86; H 7,47; N 12,21, найдено: C 63,21; H 7,48; N 13,61.Elemental analysis: calculated for C 24 H 34 N 4 O 5 (458.56): C 62.86; H 7.47; N, 12.21; Found: C, 63.21; H 7.48; N, 13.61.
Пример 12
Синтез N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-[пиперазиноуксусная кислота-морфолид]-амида
458,56 мг (1,0 ммоль) 1-Boc-индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-[пиперазиноуксусная кислота морфолид]-амида растворяют при комнатной температуре в 20 мл CH2Cl2, смешивают с 1,14 г (10 ммоль) ТФУ и перемешивают в течение 24 ч. Реакционную смесь упаривают на роторном испарителе, обрабатывают 10 мл ЕЕ и промывают два раза насыщенным водным раствором NaHCO3 и один раз насыщенным водным раствором NaCl. Органическую фазу высушивают над MgSO4 и растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе. Остаток растворяют в 10 мл CH2Cl2, смешивают с 505 мг (5 ммоль) триэтиламина, 320,7 мг (1,4 ммоль) 4-Boc-пиперидинкарбоновой кислоты и 357,7 мг (1,4 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридиний гидрохлорида. Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 8 ч, затем упаривают в вакууме на роторном испарителе и обрабатывают 100 мл эфира уксусной кислоты. Промывают два раза водой, один раз 10% водным раствором HCl, два раза насыщенным водным раствором NaHCO3 и один раз насыщенным водным раствором NaCl, сушат над MgSO4. После отгонки растворителей в вакууме на роторном испарителе остаток кристаллизуют из смеси эфир уксусной кислоты/изопропанол.Example 12
Synthesis of N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [piperazinoacetic acid-morpholide] -amide
458.56 mg (1.0 mmol) of 1-Boc-indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [piperazinoacetic acid morpholide] -amide is dissolved at room temperature in 20 ml of CH 2 Cl 2 , mixed with 1, 14 g (10 mmol) of TFA and stirred for 24 hours. The reaction mixture was evaporated on a rotary evaporator, treated with 10 ml of EE and washed twice with a saturated aqueous solution of NaHCO 3 and once with a saturated aqueous solution of NaCl. The organic phase is dried over MgSO 4 and the solvent is removed in vacuo on a rotary evaporator. The residue was dissolved in 10 ml of CH 2 Cl 2 , mixed with 505 mg (5 mmol) of triethylamine, 320.7 mg (1.4 mmol) of 4-Boc-piperidinecarboxylic acid and 357.7 mg (1.4 mmol) of 2-chlorine -1-methylpyridinium hydrochloride. The resulting mixture was refluxed for 8 hours, then evaporated in vacuo on a rotary evaporator and treated with 100 ml of acetic acid ester. It is washed twice with water, once with a 10% aqueous solution of HCl, twice with a saturated aqueous solution of NaHCO 3 and once with a saturated aqueous solution of NaCl, dried over MgSO 4 . After the solvents were distilled off in vacuo on a rotary evaporator, the residue was crystallized from acetic acid / isopropanol mixture.
Элементный анализ: рассчитано для C25H28N2O5 (557,70): C 62,46; H 7,77; N 12,56, найдено: C 61,56; H 7,62; N 11,96.Elemental analysis: calculated for C 25 H 28 N 2 O 5 (557.70): C 62.46; H 7.77; N, 12.56; Found: C, 61.56; H 7.62; N, 11.96.
Пример 13
Синтез N-[N'-(4-метоксифенилацетил)-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Z)-лизинметиловый эфир]-амида
Стадия 1: N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил] -индолин-2-(R, S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Z)-лизинметиловый эфир]-амид
3,74 г (10 ммоль) N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2- (R,S)-карбоновой кислоты и 3,31 г (10 ммоль) хлоргидрата метилового эфира N-∈--Z-лизина растворяют в 20 мл CH2Cl2 и прикапывают при комнатной температуре в течение 30 мин к суспензии, содержащей 5,11 г (20 ммоль) 2-хлор-1-метилпиридиний иодида и 4,04 г (40 ммоль) триэтиламина в 30 мл CH2Cl2. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 8 ч, затем растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе. Остаток обрабатывают 200 мл ЕЕ и органическую фазу промывают один раз водой, два раза полунасыщенным водным раствором KHSO4, два раза водным раствором 2N NaOH, один раз насыщенным водным раствором NaCl. После высушивания над MgSO4 растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе и остаток подвергают очистке путем хроматографии на 400 г кизельгеля с использованием в качестве элюента CH2Cl2/MeOH, 95:5. Соответствующие фракции собирают, упаривают в вакууме на роторном испарителе. После высушивания в высоком вакууме с использованием масляного насоса получают 4,2 г порошка светло-коричневого цвета.Example 13
Synthesis of N- [N '- (4-methoxyphenylacetyl) -piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Z) -lysine methyl] amide
Stage 1: N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Z) -lysinemethyl ester] -amide
3.74 g (10 mmol) of N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid and 3.31 g (10 mmol) of methyl ester N-∈- -Z-lysine is dissolved in 20 ml of CH 2 Cl 2 and added dropwise at room temperature for 30 minutes to a suspension containing 5.11 g (20 mmol) of 2-chloro-1-methylpyridinium iodide and 4.04 g (40 mmol) triethylamine in 30 ml of CH 2 Cl 2 . The reaction mixture was refluxed for 8 hours, then the solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator. The residue is treated with 200 ml of EA and the organic phase is washed once with water, twice with a half-saturated aqueous solution of KHSO 4 , twice with an aqueous solution of 2N NaOH, once with a saturated aqueous solution of NaCl. After drying over MgSO 4, the solvent was removed in vacuo on a rotary evaporator and the residue was purified by chromatography on 400 g of silica gel using 95: 5 CH 2 Cl 2 / MeOH as eluent. The appropriate fractions are collected, evaporated in vacuo on a rotary evaporator. After drying in high vacuum using an oil pump, 4.2 g of a light brown powder are obtained.
ТСХ: CH2Cl2/MeOH, 95:5 Rf = 0,41
Элементный анализ: рассчитано для C32H48N4O8 (650,78): C 64,60; H 7,13; N 8,61, найдено: C 64,73; H 7,01; N 8,64.TLC: CH 2 Cl 2 / MeOH, 95: 5 R f = 0.41
Elemental analysis: calculated for C 32 H 48 N 4 O 8 (650.78): C 64.60; H 7.13; N, 8.61; Found: C, 64.73; H 7.01; N, 8.64.
Стадия 2: N-[N'-(4-метоксифенилацетил)-пиперидил-4-карбонил]- индолин-2-(R,S)-карбоновая кислота-[S-(N-∈-Z)-лизинметиловый эфир]-амид
3,25 г (5,0 ммоль) N-[1-Boc-пиперидил-4-карбонил]-индолин-2- (R,S)-карбоновая киcлoтa-[S-(N-∈-Z)-лизинметилoвый эфир]-амида растворяют при комнатной температуре в 50 мл CH2Cl2, смешивают с 2,28 г (20 ммоль) ТФУ и перемешивают в течение 4 ч. Реакционную смесь упаривают в вакууме на роторном испарителе и обрабатывают 100 мл ЕЕ, затем промывают три раза насыщенным водным раствором NaHCO3 один раз насыщенным водным раствором NaCl. Органическую фазу высушивают над MgSO4 и растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе. Остаток растворяют в 30 мл CH2Cl2, смешивают с 1,01 г (10 ммоль) триэтиламина и 366 мг (3,0 ммоль) 4-диметиламинопиридина, затем смесь охлаждают до 0oC и добавляют раствор 1,01 г (5,5 ммоль) 4-метоксифенилацетилхлорида в 10 мл CH2Cl2. После 24 ч перемешивания реакционную смесь упаривают в вакууме на роторном испарителе, обрабатывают 100 мл ЕЕ и промывают два раза водным раствором 1N HCl, два раза насыщенным водным раствором NaHCO3 и один раз насыщенным водным раствором NaCl. После отгонки растворителя в вакууме на роторном испарителе остаток подвергают очистке путем хроматографии на 80 г кизельгеля Flash с использованием в качестве элюента н-гексан/AcOEt. Соответствующие фракции собирают, упаривают на роторном испарителе, высушивают в высоком вакууме с использованием масляного насоса и получают продукт в виде пены белого цвета.Stage 2: N- [N '- (4-methoxyphenylacetyl) -piperidyl-4-carbonyl] - indoline-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Z) -lysine methyl ester] - amide
3.25 g (5.0 mmol) of N- [1-Boc-piperidyl-4-carbonyl] -indolin-2- (R, S) -carboxylic acid- [S- (N-∈-Z) -lysine methyl ester ] -amide is dissolved at room temperature in 50 ml of CH 2 Cl 2 , mixed with 2.28 g (20 mmol) of TFA and stirred for 4 hours. The reaction mixture is evaporated in vacuo on a rotary evaporator and treated with 100 ml of EE, then washed with three times with a saturated aqueous solution of NaHCO 3 once a saturated aqueous solution of NaCl. The organic phase is dried over MgSO 4 and the solvent is removed in vacuo on a rotary evaporator. The residue was dissolved in 30 ml of CH 2 Cl 2 , mixed with 1.01 g (10 mmol) of triethylamine and 366 mg (3.0 mmol) of 4-dimethylaminopyridine, then the mixture was cooled to 0 ° C. and a solution of 1.01 g (5 5 mmol) of 4-methoxyphenylacetyl chloride in 10 ml of CH 2 Cl 2 . After 24 hours of stirring, the reaction mixture was evaporated in vacuo on a rotary evaporator, treated with 100 ml of EA and washed twice with aqueous 1N HCl, twice with saturated aqueous NaHCO 3 and once with saturated aqueous NaCl. After distilling off the solvent in vacuo on a rotary evaporator, the residue is purified by chromatography on 80 g of Flash silica gel using n-hexane / AcOEt as eluent. The appropriate fractions are collected, evaporated on a rotary evaporator, dried in high vacuum using an oil pump and the product is obtained in the form of a white foam.
Элементный анализ: рассчитано для C39H46N4O8•H2O (716,84): C 65,35; H 6,75; N 7,82, найдено: C 65,47; H 6,89; N 7,81.Elemental analysis: calculated for C 39 H 46 N 4 O 8 • H 2 O (716.84): C 65.35; H 6.75; N, 7.82; Found: C, 65.47; H 6.89; N, 7.81.
Авторами было обнаружено, что соединения, синтезированные согласно примерам 1-7 и 10-13, являются в высшей степени эффективными модуляторами, связывающими иммунофилины, эти соединения, будучи иммобилизованными на носителе, могут быть использованы для связывания патогенного иммунофилина из жидкостей, особенно из физиологических жидкостей. The authors found that the compounds synthesized according to examples 1-7 and 10-13 are highly effective modulators that bind immunophilins, these compounds, being immobilized on a carrier, can be used to bind pathogenic immunophilin from liquids, especially from physiological liquids .
Для поиска лигандов общей формулы I, обладающих наибольшим сродством к Cyp B и, соответственно, FKBP рецепторам, иммобилизованные лиганды инкубируют с клеточным гомогенатом и проводят электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН) (ЭФ в ПААГ-ДСН) (см. чертеж). To search for ligands of the general formula I that have the highest affinity for Cyp B and, correspondingly, FKBP receptors, immobilized ligands are incubated with a cell homogenate and polyacrylamide gel electrophoresis is performed in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS) (see the drawing in SDS page-SDS) (see drawing )
Иммобилизованные на носителе лиганды обладают особенно высоким сродством к иммунофилинам, по специфичности связывания значительно превосходят CsA и, соответственно, FK 506. Высокое сродство иммобилизованных на носителе лигандов формулы I продемонстрировано методом ЭФ в ПААГ-ДСН (см. чертеж)
Пояснения к данным электрофореза в ПААГ-ДСН
а) Гомогенат клеток
b) Элюат гомогената клеток после инкубирования с иммобилизованными на носителе лигандами общей формулы I
с) Удаление циклофилина B с матрицы, описанной в п.b), с помощью ДСН при 25oC
d) SDS-контроль
e) Удаление циклофилина B с матрицы, описанной в п.b), с помощью ДСН при 95oC
f) Белки-маркеры с известной молекулярной массой (Sigma: 12 kDa, 18 kDa, 25 kDa, 45 kDa, 66 kDa)
g) Элюат гомогената клеток после инкубирования с иммобилизованным CsA
h) Удаление циклофилина B с CsA-матрицы, описанной в п.g), с помощью ДСН при 25oC
i) Удаление циклофилина B с CsA-матрицы, описанной в п.g), с помощью ДСН при 95oC
k) ДСH-контроль
Соединения согласно изобретению общей формулы I проявляют исключительно высокое сродство к иммунофилинам и ингибируют пептидил-пролил-цис-транс-изомеразу (PPI-активность). Для первичного скрининга указанных соединений (1 мкмоль/л) определяют ингибирование циклофилина B человека с использованием метода определения PPI-активности. Для определения PPI-активности используют общепринятую методику, описанную в литературе: G.Fischer, H. Bang, C.Mech, Biomed. Biochim. Acta, 43, 1101-1111; G.Fischer, H.Bang, A. Schellenberger, Biochim. Biophys. Acta, 791, 87-97, 1984; D.H. Rich et al., J.Med.Chem. 38, 4164-4170, 1995.Ligands immobilized on a carrier have a particularly high affinity for immunophilins, in binding specificity they are significantly superior to CsA and, accordingly, FK 506. The high affinity of ligands of formula I immobilized on a carrier is demonstrated by EP in SDS-PAGE (see drawing)
Explanation of electrophoresis data in SDS page-SDS
a) Homogenate cells
b) Eluate of the cell homogenate after incubation with ligands of the general formula I immobilized on a carrier
c) Removing cyclophilin B from the matrix described in b) using SDS at 25 ° C
d) SDS control
e) Removing cyclophilin B from the matrix described in b) using SDS at 95 o C
f) Marker proteins with known molecular weights (Sigma: 12 kDa, 18 kDa, 25 kDa, 45 kDa, 66 kDa)
g) Cell homogenate eluate after incubation with immobilized CsA
h) Removal of cyclophilin B from the CsA matrix described in g) using SDS at 25 ° C
i) Removing cyclophilin B from the CsA matrix described in g) using SDS at 95 ° C
k) DSH control
The compounds of the invention of general formula I exhibit an extremely high affinity for immunophilins and inhibit peptidyl-prolyl-cis-trans-isomerase (PPI activity). For primary screening of these compounds (1 μmol / L), inhibition of human cyclophilin B was determined using the PPI activity assay. To determine the PPI activity using the generally accepted methodology described in the literature: G. Fischer, H. Bang, C. Mech, Biomed. Biochim. Acta, 43, 1101-1111; G. Fischer, H. Bang, A. Schellenberger, Biochim. Biophys. Acta, 791, 87-97, 1984; DH Rich et al., J. Med. Chem. 38, 4164-4170, 1995.
Соединения согласно изобретению общей формулы I предварительно инкубируют с 10 нмоль Cyp B в течение 15 мин при 4oC. Ферментативную реакцию проводят при добавлении химотрипсина, буфера HEPES и пептида-субстрата Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-Nan. Затем оценивают изменение поглощения при 390 нм. Изменение поглощения является результатом двух частичных реакций: а) быстрый гидролиз химотрипсином транс-пептида; b) неферментативная цис-транс-изомеризация, катализируемая циклофилином. Величины PPI-активности соединений согласно изобретению общей формулы 1 приведены в табл. 1.The compounds of the invention of general formula I are pre-incubated with 10 nmol Cyp B for 15 minutes at 4 ° C. The enzymatic reaction is carried out by adding chymotrypsin, HEPES buffer and Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-Nan substrate peptide. Then assess the change in absorption at 390 nm. The change in absorption is the result of two partial reactions: a) rapid hydrolysis of the trans peptide by chymotrypsin; b) non-enzymatic cis-trans isomerization catalyzed by cyclophilin. The values of the PPI activity of the compounds according to the invention of
Известное иммунодепрессантное действие CsA, по-видимому, можно объяснить образованием надмолекулярного комплекса: CsA-CypB-кальцинейрин (Ca2+-зависимая фосфатаза). Для исследования взаимодействия CsA соединениями согласно изобретению общей формулы I в надмолекулярном комплексе CsA-CypB или CsA-CypВ-кальцинейрин соединения общей формулы I инкубируют с гомогенатом Т-клеток человека в присутствии 3H-CsA (100 нмоль). После гель-фильтрации на Суперозе 12 в полученных фракциях измеряют радиоактивность и сравнивают с необработанным контролем. Соответствующие величины замещения 3H-CsA соединениями согласно изобретению общей формулы I в надмолекулярном комплексе CypB-CsA или CypB-CsA-кальцинейрин приведены в табл. 2.The known immunosuppressive effect of CsA can apparently be explained by the formation of a supramolecular complex: CsA-CypB-calcineurin (Ca 2+ -dependent phosphatase). In order to study the interaction of CsA with the compounds of the invention of the general formula I in the supramolecular complex CsA-CypB or CsA-CypB-calcineurin, the compounds of the general formula I are incubated with a human T-cell homogenate in the presence of 3 H-CsA (100 nmol). After gel filtration on Superose 12, the radioactivity was measured in the obtained fractions and compared with the untreated control. The corresponding values of the substitution of 3 H-CsA with the compounds according to the invention of the general formula I in the supramolecular complex CypB-CsA or CypB-CsA-calcineurin are given in table. 2.
Метод определения пролиферации IL-2 основан на встраивании 3H-тимидина в стимулированные ОКТ-3 (анти-CD-3-антитела человека) Т-клетки. Метод заключается в следующем: в ячейку микропланшеты высевают 100000 Т-клеток в 150 мкл культуральной среды, стимулируют их добавлением ОКТ-3 (1 мкг/мл) и инкубируют с соответствующим одним соединением общей формулы I, предложенным в изобретении, в течение 45 ч. Затем в каждую ячейку пипеткой добавляют 10 мкл раствора 3H-тимидина (0,5 мкКи). Планшету инкубируют в атмосфере 5% CO2 в течение 6 ч при 37oC. После сбора клеток измеряют радиоактивность с использованием β-счетчика. Соответствующие величины ингибирования CD3-индуцированной пролифирации для соединений согласно изобретению общей формулы I приведены в табл. 3.The method for determining the proliferation of IL-2 is based on the incorporation of 3 H-thymidine into stimulated OCT-3 (anti-CD-3 human antibodies) T cells. The method consists in the following: 100,000 T cells in 150 μl of culture medium are seeded in a microplate cell, stimulated by the addition of OCT-3 (1 μg / ml) and incubated with the corresponding single compound of the general formula I proposed in the invention for 45 hours. Then, 10 μl of a solution of 3 H-thymidine (0.5 μCi) is added to each well with a pipette. The plate was incubated in an atmosphere of 5% CO 2 for 6 hours at 37 ° C. After collecting the cells, the radioactivity was measured using a β counter. The corresponding values of the inhibition of CD 3 -induced proliferation for compounds according to the invention of General formula I are given in table. 3.
В эксперименте на животных показано, что соединения согласно изобретению общей формулы I, аналогично CsA, FK 506 или рапамицину, блокируют цитокины такие, как IL-2, IL-4 и IL-5, которые вызывают аллергически индуцированные воспалительные процессы. In an animal experiment, it was shown that the compounds of the invention of general formula I, like CsA, FK 506 or rapamycin, block cytokines such as IL-2, IL-4 and IL-5, which cause allergic-induced inflammatory processes.
Для определения ингибирования деления клеток при обработке соединениями согласно изобретению общей формулы I 500000 опухолевых клеток человека культивируют в присутствии соединения общей формулы I согласно изобретению в течение 48 ч, затем клетки окрашивают 10 мкл раствора желтой соли тетразолия (МТТ) и продолжают инкубирование при 37oC в течение 4 ч в атмосфере CO2. Образующееся фиолетовое окрашивание измеряют фотометрически при 570 нм. Величину окрашивания после инкубирования измеряют фотометрически после добавления 100 мкл раствора SDS. Общую цитотоксичность соединений согласно изобретению общей формулы I определить не удалось.To determine the inhibition of cell division when treated with compounds of the invention of general formula I, 500,000 human tumor cells were cultured in the presence of a compound of general formula I according to the invention for 48 h, then the cells were stained with 10 μl of a solution of yellow tetrazolium salt (MTT) and incubation continued at 37 ° C for 4 hours in a CO 2 atmosphere. The resulting violet coloration is measured photometrically at 570 nm. The amount of staining after incubation is measured photometrically after adding 100 μl of SDS solution. The general cytotoxicity of the compounds according to the invention of general formula I was not determined.
Claims (19)
где R1 - остаток метилового эфира аминокислоты выбранной из ε-NH2-лизина, ε-Z-NH-лизина, фенилаланина, R2-водород, R3-бутилоксикарбонил, карбоксибензил, остаток 4-пиперидинкарбоновой кислоты, 2-индолинкарбоновой кислоты, R4-водород, A ароматическая группировка; B-D=-CH-C; X = O, Y = C.1. Immunophilin-specific ligands of the General formula I,
where R 1 is a methyl ester residue of an amino acid selected from ε-NH 2 lysine, ε-Z-NH-lysine, phenylalanine, R 2 is hydrogen, R 3 is butyloxycarbonyl, carboxybenzyl, the residue is 4-piperidinecarboxylic acid, 2-indoline carboxylic acid, R 4 is hydrogen, A is an aromatic group; BD = -CH-C; X = O, Y = C.
в которой R4, A, B, D, X и Y имеют указанные выше значения, этерифицируют спиртом III с длиной углеводородной цепи C1-C12
AlOH III
с образованием эфира IV, в котором R4, A, B, D, X и Y имеют указанные выше значения
индольный эфир IV вводят в реакцию с веществом V, в котором R3, X и Y имеют указанные значения
с образованием промежуточного продукта VI в котором R3, R4, A, B, D, X и Y имеют указанные значения
наконец, промежуточный продукт VI омыляют с образованием соединения VII, в котором R3, R4, A, B, D, X и Y имеют указанные значения
после чего соединение VII вводят в реакцию с веществом VIII, в котором R1 и R2 имеют указанные значения
и получают целевой продукт формулы I.19. The method of obtaining immunophilin-specific ligands of the General formula I according to claim 1, in which R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , X, Y, A, B and D have the meanings specified in claim 1, which consists in that the indole derivatives of formula II
in which R 4 , A, B, D, X and Y have the above meanings, are esterified with alcohol III with a hydrocarbon chain length of C 1 -C 12
Aloh III
with the formation of ether IV, in which R 4 , A, B, D, X and Y have the above meanings
indole ether IV is reacted with substance V, in which R 3 , X and Y have the indicated meanings
with the formation of intermediate product VI in which R 3 , R 4 , A, B, D, X and Y have the indicated meanings
finally, intermediate VI is saponified to form compound VII in which R 3 , R 4 , A, B, D, X and Y have the indicated meanings
after which compound VII is reacted with substance VIII, in which R 1 and R 2 have the indicated meanings
and get the target product of formula I.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19616509.1 | 1996-04-25 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU98121505A RU98121505A (en) | 2000-10-20 |
| RU2172743C2 true RU2172743C2 (en) | 2001-08-27 |
Family
ID=
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МАШКОВСКИЙ М.Д. Лекарственные препараты. - М.: Медицина, 1993, ч.1, с.309-311. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US12049521B2 (en) | Hybrid cyclic libraries and screens thereof | |
| US5710129A (en) | Inhibitors of SH2-mediated processes | |
| Martin et al. | 1, 2, 3-trisubstituted cyclopropanes as conformationally restricted peptide isosteres: application to the design and synthesis of novel renin inhibitors | |
| US5385918A (en) | Aminomethylene-peptides as immunosuppressants | |
| EP0517589B1 (en) | Tachykinin derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| CA2338524A1 (en) | Inhibitors of urokinase and blood vessel formation | |
| KR20070104314A (en) | Peptido-mimetic compounds containing rgd sequence useful as integrin inhibitors | |
| US6251932B1 (en) | Immunophilin ligands | |
| IL102646A (en) | Non-peptidic surrogates of the ldv sequence and pharmaceutical compositions comprising them | |
| EP1845104A1 (en) | Par-2 agonist | |
| JP2001517653A (en) | Specific immunophilin ligands as anti-asthmatic, anti-allergic, anti-rheumatic, immunosuppressive, anti-psoriatic, and neuroprotective drugs | |
| EP0833629A2 (en) | Aryl acrylic acid derivatives useful as protein tyrosine phosphatase inhibitors | |
| RU2172743C2 (en) | Immunofylline-specific ligands as antiasthmatic and immuno-depressant agents and method of their synthesis, pharmaceutically ready form, medicinal agent and method of its preparing | |
| US6258815B1 (en) | Specific immunophilin ligands as antiasthmatics and immunosuppressants | |
| MXPA98008546A (en) | Specific binders of immunophylin as antimatic, immunosupreso | |
| MXPA99012020A (en) | Specific immunophilin ligands useful as anti-asthmatic, anti-allergic, anti-rheumatic, immunosuppressive, antipsoriatic and neuroprotective agents | |
| AU3006401A (en) | Vla-4 integrin antagonists | |
| EP2678680A2 (en) | Small molecules for endothelial cell activation |