RU2159108C2

RU2159108C2 - Inhalation composition

Info

Publication number: RU2159108C2
Application number: RU96102841A
Authority: RU
Inventors: Йеран Эрик БЕКСТРЕМ Челль; Магнус Олоф ДАЛЬБЕКК Карл; Эдман Петер; Шарлотта Биргит ЙОХАНССОН Анн
Original assignee: Астра Актиеболаг
Priority date: 1993-06-24
Filing date: 1994-06-23
Publication date: 2000-11-20
Also published as: ZA944378B; LT3445B; LTIP1977A; LT3649B; ZA944379B; LTIP1976A; SE9302198D0

Abstract

FIELD: respiratory alleviation preparations. SUBSTANCE: composition in the form of dry powder contains pharmaceutically-active polypeptide associated with surfactant-type promoter. The latter increases absorption of polypeptide in lower respiratory pathways. Its amount represents more than 10% of the total weight of polypeptide and promoter. At least 50% of powder consists of particles with diameter lesser than or equal to 10 mcm, or agglomerates of these particles. Inhaled composition provides system transportation of therapeutically-active peptides and proteins into lungs and absorption of drugs. EFFECT: enhanced treatment efficiency. 31 cl, 3 dwg, 1 tbl, 4 ex

Description

Настоящее изобретение относится к способам и композициям для доставки лекарственно полезных пептидов и белков. The present invention relates to methods and compositions for the delivery of medicinally useful peptides and proteins.

Предпосылки к созданию изобретения. Background to the invention.

Хотя появление генной инженерии привело к быстрому расширению списка лекарственных средств на основе пептидов, однако, основным препятствием терапии на основе пептидов является значительно затруденная реализация всего потенциала этой области: в общем, лекарственные средства на основе пептидов нельзя вводить в эффективных дозах перорально, поскольку они быстро разрушаются под действием ферментов в желудочно-кишечном тракте до того, как они могут достигать кровотока. Если интересующий полипептид нельзя изменить, чтобы сделать его относительно устойчивым к таким ферментам, единственным практическим способом доставки лекарственного средства, вероятно, является парентеральный путь, например, внутривенная, внутримышечная и подкожная инъекция. Введение другими парентеральными путями (например, абсорбцией через носовые, щечные или ректальные оболочки или через легкие) оказалось менее успешным. Although the advent of genetic engineering has led to the rapid expansion of the list of peptide-based drugs, however, the main obstacle to peptide-based therapy is the significantly difficult realization of the full potential of this area: in general, peptide-based drugs cannot be administered orally in effective doses, since they are fast are destroyed by enzymes in the gastrointestinal tract before they can reach the bloodstream. If the polypeptide of interest cannot be changed to make it relatively resistant to such enzymes, the only practical way to deliver the drug is probably the parenteral route, for example, intravenous, intramuscular and subcutaneous injection. Administration by other parenteral routes (e.g., absorption through the nasal, buccal or rectal membranes or through the lungs) has been less successful.

Краткое изложение существа изобретения
Было найдено, что, когда пептид или белок ( в дальнейшем собирательно именуемые как полипептиды) сочетают с подходящим усилителем абсорбции и вводят в легкие в форме порошка с подходящим размером частиц, он легко входит в малый круг кровообращения путем абсорбции через слой эпителиальных клеток в нижних дыхательных путях. Это удобно выполняется ингаляцией порошка из устройства-ингалятора, которое отпускает точную дозу порошкообразной комбинации полипептид/усилитель с размером частиц, который увеличивает до максимума отложение в нижних дыхательных путях в отличие от полости рта и горла. (С целью облегчения упоминания полипептид и усилитель в дальнейшем собирательно именуются как "активные соединения". Для выполнения этой предпочтительной доставки в легкие по возможности больше активных соединений должно состоять из частиц, имеющих диаметр менее, чем приблизительно 10 мкм (например, между 0,01-10 мкм, идеально между 1-6 мкм). В предпочтительных вариантах по меньшей мере 50% (предпочтительно по меньшей мере 60%, более предпочтительно по меньшей мере 70%, еще более предпочтительно по меньшей мере 80% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 90%) от общей массы активных соединений, которые находятся в устройстве-ингаляторе, состоит из частиц с желаемым пределом размеров диаметров.Summary of the invention
It was found that when a peptide or protein (hereinafter collectively referred to as polypeptides) is combined with a suitable absorption enhancer and injected into the lungs in the form of a powder with a suitable particle size, it easily enters the pulmonary circulation by absorption through the layer of epithelial cells in the lower respiratory ways. This is conveniently accomplished by inhalation of the powder from the inhaler device, which dispenses the exact dose of the powdery polypeptide / enhancer combination with a particle size that maximizes deposition in the lower respiratory tract as opposed to the oral cavity and throat. (In order to facilitate reference, the polypeptide and enhancer are collectively referred to as “active compounds.” To accomplish this preferred delivery to the lungs, as many active compounds as possible should consist of particles having a diameter of less than about 10 microns (for example, between 0.01 -10 μm, ideally between 1-6 μm.) In preferred embodiments, at least 50% (preferably at least 60%, more preferably at least 70%, even more preferably at least 80% and most preferably at least at least 90%) of the total mass of active compounds that are in the inhaler device consists of particles with the desired diameter limit.

Изобретение, таким образом, включает фармацевтическую композицию, содержащую смесь активных соединений: (А) фармацевтически активного полипептида и (В) соединения-усилителя, которое усиливает системную абсорбцию полипептида в нижней дыхательной системе (предпочтительно легких) пациента, причем смесь находится в форме пригодного для ингаляции сухого порошка, в котором по меньшей мере 50% общей массы активных соединений (А) и (В) состоит из первоначальных частиц, имеющих диаметр менее чем или равный около 10 микронам. Первоначальные частицы могут быть упакованы как таковые или могут быть превращены в агломераты, которые затем, в основном, дезагломерируются до введения в дыхательные пути пациента. Композиция может, конечно, содержать, если требуется, другие компоненты, включая другие фармацевтически активные агенты, другие усилители и фармацевтически приемлемые наполнители, например, разбавители или носители. Следовательно, терапевтический препарат настоящего изобретения может содержать только эти активные соединения или он может содержать другие вещества, например, фармацевтически приемлемый носитель. Этот носитель может преимущественно состоять из частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 микрон, так что по меньшей мере 50% полученного в результате порошка в целом состоит из возможно агломерированных первоначальных частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 микрон; альтернативно носитель может в основном состоять из гораздо больших частиц ("грубых частиц"), так что "готовую к употреблению смесь" можно образовать из активных соединений и этого носителя. В упорядоченной смеси, альтернативно известной как взаимодействующая или адгезивная смесь, мельчайшие частицы лекарственного средства (в настоящем изобретении активные соединения) довольно равномерно распределены на поверхности грубых частиц наполнителя (в настоящем изобретении фармацевтически приемлемого носителя). В таком случае активные соединения предпочтительно не находятся в форме агломератов до образования готовой к употреблению смеси. Грубые частицы могут иметь диаметр больше 20 микрон, например больше 60 микрон. Выше этих низших пределов диаметр грубых частиц не имеет критического значения, поэтому при желании можно применять крупные частицы разного размера в соответствии с практическими требованиями конкретной готовой препаративной формы. Не требуется, чтобы грубые частицы в назначенной смеси были одинакового размера, но они могут иметь сходный размер в пределах размера назначенной смеси с предпочтительным диаметром, равным 60-800 микрон. The invention thus includes a pharmaceutical composition comprising a mixture of the active compounds: (A) a pharmaceutically active polypeptide and (B) an enhancer compound that enhances the systemic absorption of the polypeptide in the patient's lower respiratory system (preferably lungs), the mixture being in the form suitable for inhalation of a dry powder, in which at least 50% of the total mass of active compounds (A) and (B) consists of initial particles having a diameter of less than or equal to about 10 microns. The initial particles can be packaged as such or can be converted into agglomerates, which then are mainly deagglomerated before being introduced into the patient's airways. The composition may, of course, contain, if desired, other components, including other pharmaceutically active agents, other enhancers and pharmaceutically acceptable excipients, for example, diluents or carriers. Therefore, the therapeutic preparation of the present invention may contain only these active compounds or it may contain other substances, for example, a pharmaceutically acceptable carrier. This support may advantageously consist of particles having a diameter of less than about 10 microns, so that at least 50% of the resulting powder as a whole consists of possibly agglomerated initial particles having a diameter of less than about 10 microns; alternatively, the carrier may mainly consist of much larger particles ("coarse particles"), so that a "ready-to-use mixture" can be formed from the active compounds and this carrier. In an ordered mixture, alternatively known as an interacting or adhesive mixture, the smallest drug particles (active compounds in the present invention) are fairly evenly distributed on the surface of the coarse filler particles (in the present invention, a pharmaceutically acceptable carrier). In this case, the active compounds are preferably not in the form of agglomerates until a ready-to-use mixture is formed. Coarse particles may have a diameter greater than 20 microns, for example greater than 60 microns. Above these lower limits, the diameter of the coarse particles is not critical, therefore, if desired, large particles of different sizes can be used in accordance with the practical requirements of a particular finished formulation. The coarse particles in the assigned mixture are not required to be the same size, but they can have a similar size within the size of the assigned mixture with a preferred diameter of 60-800 microns.

Полипептид может быть любым лекарственно или диагностически пригодным пептидом или белком с размером от небольшого до среднего, т.е. с молекулярной массой (MW) до около 40 кДа, для которого желательна системная доставка. Для всех таких пептидов в общем пригодны и могут применяться механизмы повышенной полипептидной абсорбции в соответствии с настоящим изобретением, хотя степень, до которой повышается их адсорбция, может изменяться в соответствии с MW и физико-химическими свойствами полипептида и конкретным применяемым усилителем. Ожидается, что в настоящем изобретении будут наиболее пригодны полипептиды, имеющие молекулярную массу до 30 кДа, например полипептиды, имеющие молекулярную массу до 25 кДа или до 20 кДа, особенно до 15 кДа или до 10 кДа. Любой желаемый полипептид можно легко испытать для применения в настоящем изобретении с конкретным усилителем посредством анализов in vivo или in vitro, как здесь описано. The polypeptide may be any drug or diagnostically suitable peptide or protein with a size from small to medium, i.e. with a molecular weight (MW) of up to about 40 kDa, for which systemic delivery is desired. For all such peptides, mechanisms of increased polypeptide absorption in accordance with the present invention are generally suitable and can be applied, although the degree to which their adsorption is increased may vary in accordance with the MW and physicochemical properties of the polypeptide and the particular enhancer used. It is expected that the present invention will be most suitable polypeptides having a molecular weight of up to 30 kDa, for example polypeptides having a molecular weight of up to 25 kDa or up to 20 kDa, especially up to 15 kDa or up to 10 kDa. Any desired polypeptide can be easily tested for use in the present invention with a particular enhancer through in vivo or in vitro assays, as described herein.

Соединением-усилителем, применяемым в композициях настоящего изобретения, может быть любое соединение, которое усиливает абсорбцию полипептида через эпителий нижних дыхательных путей и в большой круг кровообращения. Термин "усиливает абсорбцию" обозначает, что количество полипептида, абсорбированного в большой круг кровообращения в присутствии усилителя, больше, чем в его отсутствие. Предпочтительно количество абсорбированного полипептида значительно выше (p < 0,05) в присутствии усилителя. Пригодность любого потенциального усилителя для применения в настоящем изобретении можно легко определить при помощи анализов in vivo или in vitro, как здесь описано. The enhancer compound used in the compositions of the present invention can be any compound that enhances the absorption of the polypeptide through the epithelium of the lower respiratory tract and into the pulmonary circulation. The term "enhances absorption" means that the amount of polypeptide absorbed into the pulmonary circulation in the presence of an enhancer is greater than in the absence thereof. Preferably, the amount of absorbed polypeptide is significantly higher (p <0.05) in the presence of an enhancer. The suitability of any potential enhancer for use in the present invention can be easily determined using in vivo or in vitro assays, as described herein.

Количество абсорбированного полипептида в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно составляет по меньшей мере 150% количества, абсорбированного в отсутствие усилителя. В предпочтительных вариантах абсорбция полипептида по меньшей мере удваивается, более предпочтительно утраивается и наиболее предпочтительно учетверяется в присутствии усилителя по сравнению с абсорбцией его в отсутствие усилителя. The amount of absorbed polypeptide in accordance with the present invention is preferably at least 150% of the amount absorbed in the absence of an enhancer. In preferred embodiments, the absorption of the polypeptide is at least doubled, more preferably tripled and most preferably quadrupled in the presence of an amplifier compared to absorption in the absence of an amplifier.

Усилитель предпочтительно является поверхностно-активным веществом, например солью жирной кислоты, солью желчной кислоты, производным соли желчной кислоты, алкилгликозидом, циклодекстрином или фосфолипидом. Усилитель может быть, например, солью натрия, калия или органического амина жирной кислоты, жирная кислота предпочтительно является каприновой кислотой или другой жирной кислотой с 10-14 атомами углерода. Предпочтительным усилителем является капрат натрия. Отношение полипептида к усилителю предпочтительно будет изменяться от 9:1 до 1:1. Хотя относительное содержание усилителя выше, чем 1: 1, должно, по-видимому, усиливать поглощение так же или лучше, чем более низкие относительные содержания, считают, что количество усилителя не должно быть выше, чем необходимо для достижения требуемого уровня усиления, поскольку избыток усилителя может вызывать нежелательные побочные действия, например местное раздражение. The enhancer is preferably a surfactant, for example a fatty acid salt, a bile salt, a derivative of a bile salt, an alkyl glycoside, cyclodextrin or phospholipid. The enhancer may be, for example, a sodium, potassium or organic amine salt of a fatty acid, the fatty acid is preferably capric acid or another fatty acid with 10-14 carbon atoms. A preferred enhancer is sodium caprate. The ratio of the polypeptide to the enhancer will preferably vary from 9: 1 to 1: 1. Although the relative content of the amplifier is higher than 1: 1, it should apparently enhance the absorption as well or better than the lower relative contents, it is believed that the amount of amplifier should not be higher than necessary to achieve the desired level of gain, since the excess amplifier may cause unwanted side effects, such as local irritation.

В пределах изобретения находится также способ системного введения фармацевтически активного полипептида путем назначения пациенту вдыхания фармацевтической композиции настоящего изобретения, в которой по меньшей мере 50% общей массы активных соединений в месте входа в дыхательные пути пациента состоит из частиц, имеющих диаметр менее чем или равный около 10 микронам. Это предпочтительно осуществляется при помощи устройства-ингалятора, из которого пациент вдыхает порошок. Когда порошкообразная композиция находится в форме агломератов первоначальных частиц, устройство предпочтительно имеет такую форму, которая индуцирует значительное дезагломерирование агломератов при ингаляции порошка пациентом из устройства, так что основная часть агломератов распадается на частицы, имеющие диаметр менее чем или равный около 10 микрон, до входа порошка в дыхательную систему пациента. Такое дезагломерирование должно происходить внутри устройства, оно обычно индуцируется воздушной турбулентностью, создаваемой в устройстве силой вдыхания. В упорядоченной смеси агломераты в общем предпочтительно не образуются. В случае упорядоченной смеси активные соединения должны высвобождаться из больших частиц, предпочтительно при ингаляции, или при помощи механических средств в устройстве-ингаляторе, или только под действием вдыхания, или при помощи других средств, причем активные соединения затем отлагаются в нижних дыхательных путях, а частицы носителя отлагаются в полости рта. Also within the scope of the invention is a method for systemically administering a pharmaceutically active polypeptide by administering to a patient an inhalation of a pharmaceutical composition of the present invention in which at least 50% of the total weight of the active compounds at the patient’s airway is composed of particles having a diameter of less than or equal to about 10 microns. This is preferably done using an inhaler device from which the patient inhales the powder. When the powder composition is in the form of agglomerates of the initial particles, the device preferably has a shape that induces significant agglomeration of the agglomerates when the patient inhales the powder from the device, so that most of the agglomerates break up into particles having a diameter of less than or equal to about 10 microns, before the powder enters into the patient’s respiratory system. Such de-agglomeration must occur inside the device, it is usually induced by air turbulence created by the inhalation force in the device. In an ordered mixture, agglomerates are generally preferably not formed. In the case of an ordered mixture, the active compounds should be released from large particles, preferably by inhalation, or by mechanical means in an inhaler device, or only by inhalation, or by other means, the active compounds then being deposited in the lower respiratory tract and the particles carrier deposited in the oral cavity.

Устройство-ингалятор предпочтительно является ингалятором с одной дозой сухого порошка, но может быть альтернативно ингалятором со многими дозами сухого порошка. The inhaler device is preferably a single dose dry powder inhaler, but may alternatively be a multi-dose dry powder inhaler.

Данное изобретение включает также способы изготовления фармацевтической композиции, пригодной для введения ингаляцией. По одному такому способу сначала приготовляют раствор, в котором растворены (а) фармацевтически активный полипептид и (в) соединение-усилитель, которое усиливает системную абсорбцию полипептида в нижних дыхательных путях пациента. Растворитель затем удаляют из раствора, получая сухой твердый остаток, содержащий полипептид и усилитель, и этот сухой твердый остаток тонко измельчают для получения порошка. Второй такой способ включает сухое смешивание (а) фармацевтически активного полипептида и (в) соединения-усилителя и тонкое измельчение полученной смеси. Однако, третий пригодный способ включает стадии получения первого тонко измельченного препарата, содержащего полипептид, и второго тонко измельченного препарата, содержащего соединение-усилитель, и смешивание вместе двух тонко измельченных препаратов. Когда нужно включить носитель, исключая случаи, когда желательно получить упорядоченную смесь, его можно добавить в раствор или в сухую смесь фармацевтически активного полипептида до тонкого измельчения или тонко измельченный носитель можно смешать с другими тонко измельченными компонентами. При получении упорядоченной смеси тонко измельченные полипептид и усилитель смешивают с подходящим носителем. The invention also includes methods of making a pharmaceutical composition suitable for administration by inhalation. In one such method, a solution is first prepared in which (a) a pharmaceutically active polypeptide and (c) an enhancer compound are dissolved that enhance the systemic absorption of the polypeptide in the patient's lower respiratory tract. The solvent is then removed from the solution to obtain a dry solid residue containing a polypeptide and an enhancer, and this dry solid residue is finely ground to obtain a powder. A second such method involves dry mixing (a) a pharmaceutically active polypeptide and (c) an enhancer compound, and finely grinding the resulting mixture. However, a third suitable method includes the steps of preparing a first finely divided preparation containing a polypeptide and a second finely divided preparation containing an enhancer compound, and mixing together two finely divided preparations. When you need to include the media, except when it is desirable to obtain an ordered mixture, it can be added to the solution or to a dry mixture of the pharmaceutically active polypeptide before fine grinding or the finely ground carrier can be mixed with other finely ground components. In preparing an ordered mixture, the finely divided polypeptide and enhancer are mixed with a suitable carrier.

Краткое описание рисунков
Фиг. 1 является графиком, иллюстрирующим влияние различных концентраций усилителя, в качестве которого применяют капрат натрия, на перенос соединения-маркера (маннита) через монослой культивированных эпителиальных клеток.Brief Description of Drawings
FIG. 1 is a graph illustrating the effect of various concentrations of an amplifier, which is used as sodium caprate, on the transfer of a marker compound (mannitol) through a monolayer of cultured epithelial cells.

Фиг. 2 является графиком, иллюстрирующим влияние различных концентраций усилителя, в качестве которого применяют капрат натрия, на перенос соединения-маркера (маннита) через монослой культивированных эпителиальных клеток в присутствии полипептида (массовое соотношение капрата натрия и полипептида 1:3). FIG. 2 is a graph illustrating the effect of various concentrations of an amplifier, which is used as sodium caprate, on the transfer of a marker compound (mannitol) through a monolayer of cultured epithelial cells in the presence of a polypeptide (mass ratio of sodium caprate and polypeptide is 1: 3).

Фиг. 3 является графиком концентрации полипептида плазмы как функции времени после ингаляции только полипептида, полипептида с капратом натрия при соотношении 90:10 и полипептида и капрата натрия при соотношении 75:25. FIG. 3 is a graph of plasma polypeptide concentration as a function of time after inhalation of only a polypeptide, a polypeptide with sodium caprate at a ratio of 90:10, and a polypeptide and sodium caprate at a ratio of 75:25.

Подробное описание
Некоторые предпочтительные варианты осуществления изобретения в общем описываются ниже.Detailed description
Some preferred embodiments of the invention are generally described below.

Полипептид
Полипептид предпочтительно является пептидным гормоном, за исключением инсулина, например, вазопрессином, аналогом вазопрессина, дезмопрессином, глюкагоном, кортикотропином (АСТН), гонадотропином (лютеинизирующий гормон или LHPH), кальцитонином, c-пептидом инсулина, паратироидным гормоном (PTH), гормоном роста человека (hGH), гормоном роста (HG), рилизинг-гормоном гормона роста (GHRH), окситоцином, рилизинг-гормоном кортикотропина (CRH), аналогом соматостатина, аналогом агониста гонадотропина (GhRHa), предсердным натриуретическим пептидом (hANP), рилизинг-гормоном тироксина (TRHrh), фолликулостимулирующим гормоном (FSH) и пролактином.Polypeptide
The polypeptide is preferably a peptide hormone, with the exception of insulin, for example, vasopressin, a vasopressin analog, desmopressin, glucagon, corticotropin (ACTH), gonadotropin (luteinizing hormone or LHPH), calcitonin, insulin c-peptide, human growth hormone P (TH) (PTH) (hGH), growth hormone (HG), growth hormone releasing hormone (GHRH), oxytocin, corticotropin releasing hormone (CRH), somatostatin analog, gonadotropin agonist analog (GhRHa), atrial natriuretic peptide (hANP), releasing thyroxine hormone (TRHrh), follicle-stimulating hormone (FSH) and prolactin.

Другие возможные полипептиды включают факторы роста, интерлейкины, полипептидные вакцины, ферменты, эндорфины, гликопротеины, липопротеины и полипептиды, включенные в систему свертывания крови, которые системно оказывают фармакологическое действие. Предполагается, что большинство (если не все) полипептидов с размером от малого до среднего, относительно высокой растворимостью в воде и изоэлектрической точкой между приблизительно pH3 и pH8 можно эффективно доставить способами изобретения. Other possible polypeptides include growth factors, interleukins, polypeptide vaccines, enzymes, endorphins, glycoproteins, lipoproteins and polypeptides included in the blood coagulation system, which systemically have a pharmacological effect. It is contemplated that most (if not all) polypeptides with small to medium size, relatively high solubility in water and an isoelectric point between approximately pH3 and pH8 can be effectively delivered by the methods of the invention.

Усилитель
Применение усилителя абсорбции имеет критическое значение, поскольку полипептид сам (один) плохо абсорбируется через легкие. Применяемый усилитель может быть любым из числа соединений, которые действуют, усиливая абсорбцию через слой эпителиальных клеток, выстилающий нижние дыхательные пути, и в соседнюю легочную сосудистую сеть. Усилитель может выполнять это действие любым из нескольких возможных механизмов. Эти механизмы предусматривают:
(1) Усиление парацеллюлярной проницаемости полипептида путем индуцирования структурных изменений в месте плотного соединения эпителиальных клеток.Amplifier
The use of an absorption enhancer is critical because the polypeptide itself (alone) is poorly absorbed through the lungs. The enhancer used may be any of a number of compounds that act to enhance absorption through the epithelial cell layer lining the lower respiratory tract and into the adjacent pulmonary vasculature. An amplifier can perform this action by any of several possible mechanisms. These mechanisms include:
(1) Strengthening the paracellular permeability of the polypeptide by inducing structural changes at the site of tight connection of epithelial cells.

(2) Усиление парацеллюлярной проницаемости полипептида путем взаимодействия с белковыми или липидными компонентами мембраны или экстракции их и посредством этого нарушения мембранной целостности. (2) Strengthening the paracellular permeability of the polypeptide by interacting with or extracting the protein or lipid components of the membrane and thereby violating the membrane integrity.

(3) Взаимодействие между усилителем и полипептидом, которое повышает растворимость полипептида в водном растворе. Это можно осуществить путем предупреждения образования агрегатов инсулина (димеров, тримеров, гексамеров) или растворением молекул полипептида в мицеллах усилителя. (3) An interaction between an enhancer and a polypeptide that increases the solubility of the polypeptide in an aqueous solution. This can be done by preventing the formation of insulin aggregates (dimers, trimers, hexamers) or by dissolving the polypeptide molecules in the amplifier micelles.

(4) Снижение вязкости или растворение слизистого барьера, выстилающего альвеолы и проходы легких, в результате чего эпителиальная поверхность становится способной к непосредственной абсорбции полипептида. (4) Decrease in viscosity or dissolution of the mucous barrier lining the alveoli and lung passages, as a result of which the epithelial surface becomes capable of direct absorption of the polypeptide.

Усилители могут функционировать только по одному из изложенных выше механизмов или по двум или более. Усилитель, действующий по нескольким механизмам, более подходит для промотирования эффективной абсорбции полипептида, чем усилитель, который использует только один или два механизма. Amplifiers can operate only on one of the above mechanisms or on two or more. An amplifier acting on several mechanisms is more suitable for promoting effective absorption of a polypeptide than an amplifier that uses only one or two mechanisms.

Поверхностно-активные вещества являются, например, классом усилителей, которые, как полагают, действуют посредством всех указанных выше механизмов. Поверхностно-активные вещества являются амфифильными молекулами, имеющими как липофильную, так и гидрофильную часть, с изменяющимся балансом между этими двумя характеристиками. Если молекула очень липофильная, низкая растворимость вещества в воде может ограничить его пригодность. Однако, если гидрофильная часть подавляюще доминирует, то поверхностно-активные свойства молекулы могут быть минимальными. Следовательно, чтобы быть эффективным, поверхностно-активное вещество должно обеспечивать подходящий баланс между достаточной растворимостью и достаточной поверхностной активностью. Surfactants are, for example, a class of enhancers that are believed to act through all of the above mechanisms. Surfactants are amphiphilic molecules having both a lipophilic and a hydrophilic moiety, with a varying balance between these two characteristics. If the molecule is very lipophilic, the low solubility of the substance in water may limit its suitability. However, if the hydrophilic part is overwhelmingly dominant, then the surface-active properties of the molecule can be minimal. Therefore, in order to be effective, the surfactant must provide a suitable balance between sufficient solubility and sufficient surface activity.

Другим свойством поверхностно-активного вещества, которое может быть важным, является общий заряд поверхностно-активного вещества при значении pH в легких (приблизительно 7,4). При pH 7,4 некоторые полипептиды имеют отрицательный общий заряд. Это может привести к электростатическому отталкиванию между молекулами, которое, в свою очередь, может предотвращать агрегирование и тем самым повышать растворимость. Если поверхностно-активное вещество также заряжено отрицательно, оно может взаимодействовать с полипептидом, например, путем гидрофобного взаимодействия, и может иметь место дополнительное отталкивание среди полипептидных молекул. В таком случае анионогенное поверхностно-активное вещество будет обладать дополнительным преимуществом (по сравнению с поверхностно-активными веществами, имеющими нейтральный или общий положительный заряд) в усилении абсорбции, способствуя стабилизации полипептида в мономерном состоянии. Another property of the surfactant that may be important is the total charge of the surfactant at a pH in the lungs (approximately 7.4). At pH 7.4, some polypeptides have a negative total charge. This can lead to electrostatic repulsion between molecules, which, in turn, can prevent aggregation and thereby increase solubility. If the surfactant is also negatively charged, it can interact with the polypeptide, for example, by hydrophobic interaction, and there may be additional repulsion among the polypeptide molecules. In this case, the anionic surfactant will have an additional advantage (compared with surfactants having a neutral or general positive charge) in enhancing absorption, helping to stabilize the polypeptide in the monomeric state.

Ряд различных соединений, потенциально пригодных в качестве усилителей в способах изобретения, испытывали на крысах, как описано в приведенном ниже примере 2. Другие вещества с известными свойствами по усилению абсорбции или с физическими характеристиками, которые делают их вероятными кандидатами для применения в способе настоящего изобретения, могут легко испытываться специалистом обычной квалификации анализом in vivo или альтернативно анализом in vitro, описанным в примере 1. A number of different compounds potentially useful as enhancers in the methods of the invention were tested in rats as described in Example 2 below. Other substances with known absorption enhancing properties or with physical characteristics that make them likely candidates for use in the method of the present invention, can be easily tested by a person of ordinary skill in the in vivo assay or alternatively the in vitro assay described in Example 1.

Возможно, что комбинация двух или более веществ-усилителей также дает удовлетворительные результаты. Считается, что применение такой комбинации в способе настоящего изобретения находится в пределах изобретения. It is possible that a combination of two or more enhancing substances also gives satisfactory results. It is believed that the use of such a combination in the method of the present invention is within the scope of the invention.

Усилитель, пригодный для способов настоящего изобретения, может объединять эффективное усиление абсорбции полипептида с (1) отсутствием токсичности при применяемых концентрациях и (2) хорошими порошковыми свойствами, т. е. отсутствием клейкой или восковидной консистенции в твердом состоянии. Токсичность данного вещества можно проверить стандартными способами, такими как МТТ-испытание, например, как описано в Int. J.Pharm., 65 (1990), 249-259. Порошковые свойства данного вещества можно выяснить из опубликованных данных для этого вещества или эмпирически. An amplifier suitable for the methods of the present invention can combine effective enhancement of the absorption of the polypeptide with (1) the absence of toxicity at the applied concentrations and (2) good powder properties, i.e., the absence of a sticky or waxy solid state. The toxicity of this substance can be checked by standard methods, such as the MTT test, for example, as described in Int. J. Pharm., 65 (1990), 249-259. The powder properties of a given substance can be determined from published data for this substance or empirically.

Одним очень перспективным типом усилителя является соль жирной кислоты. Найдено, что натриевая соль насыщенных жирных кислот с углеродной цепью из 10 (т. е. капрат натрия), 12 (лаурат натрия) и 14 (миристат натрия) атомов хорошо пригодна для способа изобретения. Найдено также, что соли калия и лизина каприновой кислоты эффективны в способе настоящего изобретения. Если углеродная цепь состоит из менее чем 10 атомов, поверхностная активность поверхностно-активного вещества может быть слишком низкой и, если углеродная цепь состоит более чем из 14 атомов, пониженная растворимость соли жирной кислоты в воде ограничивает ее пригодность. One very promising type of enhancer is a fatty acid salt. It was found that the sodium salt of saturated fatty acids with a carbon chain of 10 (i.e., sodium caprate), 12 (sodium laurate) and 14 (sodium myristate) atoms is well suited for the method of the invention. It has also been found that potassium and lysine salts of capric acid are effective in the method of the present invention. If the carbon chain consists of less than 10 atoms, the surface activity of the surfactant may be too low, and if the carbon chain consists of more than 14 atoms, the reduced solubility of the fatty acid salt in water limits its suitability.

Наиболее предпочтительным в настоящем изобретении веществом, которое усиливает абсорбцию полипептида в нижних дыхательных путях, является капрат натрия. The most preferred substance in the present invention that enhances the absorption of the polypeptide in the lower respiratory tract is sodium caprate.

Различные противоионы могут изменять растворимость соли насыщенной жирной кислоты в воде, так что усилитель, углеродная цепь которого содержит не 10-14 атомов, может оказаться даже более предпочтительным, чем усилители, конкретно указанные выше. Соли ненасыщенных жирных кислот можно также применять в настоящем изобретении, поскольку они более растворимы в воде, чем соли насыщенных жирных кислот, и могут иметь более длинную углеродную цепь, чем последние, и в то же время поддерживают растворимость, необходимую для удачного усилителя абсорбции полипептида. Various counterions can alter the solubility of a saturated fatty acid salt in water, so that an amplifier whose carbon chain does not contain 10-14 atoms may be even more preferable than the amplifiers specifically mentioned above. Salts of unsaturated fatty acids can also be used in the present invention, since they are more soluble in water than salts of saturated fatty acids and can have a longer carbon chain than the latter, while at the same time maintaining the solubility necessary for a successful absorption enhancer of the polypeptide.

Все из испытанных солей желчных кислот и производных солей желчных кислот (натриевые соли урсодезоксихолата, таурохолата, гликохолата и тауродигидрофузидата) эффективно усиливают абсорбцию полипептида в легких. All of the tested bile salts and derivatives of bile salts (sodium salts of ursodeoxycholate, taurocholate, glycocholate and taurodihydrofusidate) effectively enhance the absorption of the polypeptide in the lungs.

В качестве усилителей испытывали также фосфолипиды. Было найдено, что одноцепочечный фосфолипид (лизофосфатидилхолин) является эффективным усилителем, тогда как двухцепочечные фосфолипиды (диоктаноилфосфатидилхолин и дидеканоилфосфатидилхолин) не являются активными усилителями. Это можно объяснить тем фактом, что двухцепочечные фосфолипиды значительно менее растворимы в воде, чем их одноцепочечные аналоги; однако, разумно предположить, что двухцепочечные фосфолипиды с более короткой цепью, имеющие большую растворимость в воде, чем их аналоги с более длинной цепью, можно применять в настоящем изобретении в качестве усилителей, так что можно применять как одноцепочечные, так и двухцепочечные фосфолипиды. Phospholipids were also tested as enhancers. It was found that single-chain phospholipid (lysophosphatidylcholine) is an effective enhancer, while double-chain phospholipids (dioctanoylphosphatidylcholine and didecanoylphosphatidylcholine) are not active enhancers. This can be explained by the fact that double-stranded phospholipids are much less soluble in water than their single-stranded analogues; however, it is reasonable to assume that shorter chain double-chain phospholipids having greater solubility in water than their longer-chain analogs can be used as enhancers in the present invention, so that both single-chain and double-chain phospholipids can be used.

Один гликозид, октилглюкопиранозид, испытывали в настоящем изобретении в качестве усилителя. Было найдено, что он обладает некоторой способностью усиливать абсорбцию. Следует также предположить, что другие алкилгликозиды, например тиоглюкопиранозиды и мальтопиранозиды, обладают способностью усиливать абсорбцию в способах настоящего изобретения. One glycoside, octyl glucopyranoside, was tested as an enhancer in the present invention. It was found that it has some ability to enhance absorption. It should also be assumed that other alkyl glycosides, for example thioglucopyranosides and maltopyranosides, have the ability to enhance absorption in the methods of the present invention.

Циклодекстрины и их производные эффективно усиливают назальную абсорбцию и аналогично могут функционировать в легких. Испытывали диметил-β-циклодекстрин и нашли, что он обладает усиливающим абсорбцию действием. Cyclodextrins and their derivatives effectively enhance nasal absorption and can likewise function in the lungs. Dimethyl-β-cyclodextrin was tested and found to have an absorption enhancing effect.

Другими потенциально пригодными поверхностно-активными веществами являются салицилат натрия, 5-метоксисалицилат натрия и встречающиеся в природе поверхностно-активные вещества, например соли глицирризиновой кислоты, сапонингликозиды и ацилкарнитины. Other potentially suitable surfactants are sodium salicylate, sodium 5-methoxysalicylate and naturally occurring surfactants, for example, glycyrrhizic acid salts, saponinglycosides and acyl carnitines.

Для ионных усилителей (например, описанных выше анионогенных поверхностно-активных веществ) может быть важна природа противоиона. Конкретный выбранный противоион может влиять на порошковые свойства, растворимость, стабильность, гигроскопичность и локальную/системную токсичность усилителя или любой готовой препаративной формы, содержащей этот усилитель. Он может также влиять на стабильность и/или растворимость полипептида, с которым его комбинируют. В общем, предполагается, что одновалентные металлические катионы, например, натрия, калия, лития и цезия должны быть пригодны в качестве противоионов для анионогенных усилителей. Аммиак и органические амины образуют другой класс катионов, которые, как ожидается, пригодны для применения с анионогенными усилителями, имеющими остаток карбоновой кислоты. Примеры таких органических аминов включают этаноламин, диэтаноламин, триэтаноланин, 2-амино-2-метилэтиламин, бетаины, этилендиамин, N,N-дибензилэтилентетраамин, аргинин, гексаметилентетраамин, гистидин, N-метилпиперидин, лизин, пиперазин, спермидин, спермин и три(гидроксиметил)аминометан. For ion enhancers (for example, the anionic surfactants described above), the nature of the counterion may be important. The particular counterion selected can affect the powder properties, solubility, stability, hygroscopicity and local / systemic toxicity of the amplifier or any formulation containing this amplifier. It may also affect the stability and / or solubility of the polypeptide with which it is combined. In general, it is contemplated that monovalent metal cations, for example, sodium, potassium, lithium, and cesium, should be suitable as counterions for anionic amplifiers. Ammonia and organic amines form another class of cations, which are expected to be suitable for use with anionic enhancers having a carboxylic acid residue. Examples of such organic amines include ethanolamine, diethanolamine, triethanolanine, 2-amino-2-methylethylamine, betaines, ethylenediamine, N, N-dibenzylethylenetetraamine, arginine, hexamethylenetetraamine, histidine, N-methylpiperidine, lysine, piperazine, hydropermin and spermine ) aminomethane.

Поскольку эффективное усиление абсорбции полипептида в легких наблюдали для ряда испытанных усилителей, предполагается, что можно найти много больше веществ, которые функционируют таким же образом. Микросферы крахмала эффективно усиливают биологическую доступность полипептида, доставленного через носовые оболочки. Их испытывали в качестве усилителя в способах настоящего изобретения. Хотя они оказались мало пригодными для доставки полипептида через легочный путь в животной модели, применяемой в изобретении, считается, что это было в основном обусловлено техническими трудностями, преодоление которых может привести к успешной доставке полипептида через легочный путь. Since effective enhancement of the absorption of the polypeptide in the lungs has been observed for a number of tested enhancers, it is contemplated that many more substances that function in the same way can be found. Starch microspheres effectively enhance the bioavailability of the polypeptide delivered through the nasal membranes. They were tested as an amplifier in the methods of the present invention. Although they proved to be of little use for the delivery of the polypeptide via the pulmonary route in the animal model used in the invention, it is believed that this was mainly due to technical difficulties, the overcoming of which can lead to the successful delivery of the polypeptide via the pulmonary route.

Хелатообразующие средства являются классом усилителей, которые, как полагают, действуют путем связывания ионов кальция. Поскольку ионы кальция помогают поддерживать расстояние между клетками и дополнительно снижают растворимость полипептидов, связывание этих ионов должно по теории как повышать растворимость полипептидов, так и повышать парацеллюлярную проницаемость полипептидов. Хотя испытывали одно хелатообразующее средство, натриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA), которая, как было найдено, неэффективна в усилении абсорбции инсулина в испытуемой крысиной модели, другие связывающие ионы кальция хелатообразующие агенты могут оказаться более пригодными. Chelating agents are a class of enhancers that are believed to act by binding calcium ions. Since calcium ions help maintain the distance between cells and further reduce the solubility of polypeptides, the binding of these ions should theoretically both increase the solubility of the polypeptides and increase the paracellular permeability of the polypeptides. Although one chelating agent was tested, the ethylenediaminetetraacetic acid sodium salt (EDTA), which was found to be ineffective in enhancing insulin absorption in the rat model tested, other calcium ion binding chelating agents may be more suitable.

Соотношение полипептида и усилителя
Относительные соотношения полипептида и усилителя можно при желании изменять. Для обеспечения эффективной абсорбции вдыхаемого полипептида должно присутствовать достаточное количество усилителя, однако, количество усилителя следует поддерживать по возможности низким, чтобы минимизировать риск отрицательного действия, вызванного усилителем. Хотя следует испытывать каждую конкретную комбинацию полипептид/усилитель, чтобы определить оптимальные соотношения компонентов комбинации, ожидается, что для достижения приемлемой абсорбции полипептида содержание усилителя должно быть более 10% смеси полипептид/усилитель. Для большинства типов усилителей содержание усилителя должно быть более чем 15% или более чем 20%, предпочтительно между 25% и 50%. Предпочтительное соотношение для каждой комбинации полипептид/усилитель (или полипептид/усилитель/разбавитель) может быть легко определено специалистом обычной квалификации в области фармакологии стандартными методиками, основанными на таких критериях, как эффективная, совместная доставка оптимальной дозы, минимизация побочных действий и приемлемая скорость абсорбции.The ratio of polypeptide and amplifier
The relative ratios of the polypeptide and the enhancer can be changed if desired. To ensure effective absorption of the respirable polypeptide, a sufficient amount of the enhancer must be present, however, the amount of the enhancer should be kept as low as possible to minimize the risk of an adverse effect caused by the enhancer. Although each particular polypeptide / enhancer combination should be tested to determine the optimal ratio of the components of the combination, it is expected that the content of the enhancer should be more than 10% of the polypeptide / enhancer mixture to achieve acceptable absorption of the polypeptide. For most types of amplifiers, the content of the amplifier should be more than 15% or more than 20%, preferably between 25% and 50%. The preferred ratio for each polypeptide / enhancer (or polypeptide / enhancer / diluent) combination can be easily determined by a person of ordinary skill in the field of pharmacology using standard techniques based on criteria such as effective, joint delivery of the optimal dose, minimization of side effects and an acceptable rate of absorption.

Для действия препарата не требуются дополнительные компоненты, но при желании их можно ввести. Например, количество порошка, которое составляет однократную дозу данной комбинации полипептид/поверхностно-активное вещество, можно увеличить (например, для применения в устройстве-ингаляторе, которое по конструкции требует большего объема порошка на дозу) путем разбавления порошка фармацевтически приемлемыми разбавителями. Для облегчения обработки или улучшения порошковых свойств или стабильности препарата в него можно включать другие добавки. Можно добавлять корригент (вкусовое вещество), чтобы количество порошка, которое неизбежно оседает в полости рта и горле, служило бы для получения пациентом указания о том (положительной обратной связи), что доза из устройства-ингалятора доставлена. Любая такая добавка должна обладать следующими свойствами: (a) она стабильна и не оказывает неблагоприятного действия на стабильность полипептида и усилителя, (b) она не препятствует абсорбции полипептида, (c) она имеет хорошие порошковые свойства, как этот термин понимается в фармации, (d) она не гигроскопична и (e) она при применяемых концентрациях не обладает отрицательным действием в дыхательных путях. Пригодные типы таких добавок включают моно-, ди- и полисахариды, спирты ряда сахаров и другие полиолы, например лактозу, глюкозу, рафинозу, мелезитозу, лактит, мальтит, трегалозу, сахарозу, маннит и крахмал. Так как восстанавливающие сахара, например лактоза и глюкоза, имеют тенденцию образовывать комплексы с белками, невосстанавливающие сахара, например рафиноза, мелезитоза, лактит, мальтит, трегалоза, сахароза, маннит и крахмал, могут быть предпочтительными добавками для применения в настоящем изобретении. Такие добавки во всех случаях могут составлять от 0% (т.е. без добавки) до почти 100% от всего препарата. For the action of the drug, additional components are not required, but you can enter them if you wish. For example, the amount of powder that makes up a single dose of a given polypeptide / surfactant combination can be increased (for example, for use in an inhaler device that by design requires a larger volume of powder per dose) by diluting the powder with pharmaceutically acceptable diluents. To facilitate processing or improve the powder properties or stability of the drug, other additives may be included. Corrigent (flavoring agent) can be added so that the amount of powder that inevitably settles in the oral cavity and throat serves to provide the patient with an indication (positive feedback) that the dose from the inhaler device has been delivered. Any such additive should have the following properties: (a) it is stable and does not adversely affect the stability of the polypeptide and enhancer, (b) it does not interfere with the absorption of the polypeptide, (c) it has good powder properties, as the term is understood in pharmacy, ( d) it is not hygroscopic and (e) it does not have a negative effect in the respiratory tract at the concentrations used. Suitable types of such additives include mono-, di- and polysaccharides, a number of sugar alcohols and other polyols, for example lactose, glucose, raffinose, melesitose, lactitol, maltitol, trehalose, sucrose, mannitol and starch. Since reducing sugars, such as lactose and glucose, tend to form complexes with proteins, non-reducing sugars, such as raffinose, melesitose, lactitol, maltitol, trehalose, sucrose, mannitol and starch, may be preferred additives for use in the present invention. Such additives in all cases can range from 0% (i.e., without additives) to almost 100% of the total preparation.

В предпочтительном варианте изобретение предлагает терапевтический препарат фармацевтически активного полипептида и вещества, которое усиливает абсорбцию этого полипептида в нижних дыхательных путях. Этот препарат имеет форму сухого порошка, пригодного для ингаляции. По меньшей мере 50 мас.% этого порошка состоит из (a) частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 микрон, или (b) агломератов этих частиц. В другом предпочтительном варианте изобретение предлагает терапевтический препарат, содержащий фармацевтически активный полипептид, вещество, которое усиливает абсорбцию полипептида в нижних дыхательных путях, и фармацевтически применяемый носитель. Препарат имеет форму сухого порошка, пригодного для ингаляции. По меньшей мере 50 мас. % этого порошка состоит из (a) частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 микрон, или (b) агломератов этих частиц. В следующем предпочтительном варианте изобретение предлагает терапевтический препарат, содержащий активные соединения: (A) фармацевтически активный полипептид и (B) вещество, которое усиливает абсорбцию этого полипептида в нижних дыхательных путях, причем по меньшей мере 50% общей массы активных соединений (A) и (B) состоит из частиц, имеющих диаметр менее чем около 10 микрон, и фармацевтически приемлемый носитель. Препарат имеет форму сухого порошка, пригодного для ингаляции. Упорядоченную смесь можно получить из активных соединений и фармацевтически приемлемого носителя
Описанный порошкообразный препарат можно изготовить несколькими путями, применяя обычные методики. Во многих случаях очищенный полипептид можно получить из коммерческих источников. И наоборот, интересующий полипептид можно очистить из природного источника с применением стандартных биохимических методик или можно получить экспрессией прокариотических или эукариотических клеток, генетически сконструированных таким образом, чтобы они содержали нуклеотидную последовательность, которая кодирует данный полипептид и имеет соединенные с ней подходящие последовательности контроля экспрессии (в том числе трансгенного животного, способного к экспрессии желаемого пептида или белка, например, в его молоке). Такие способы стандартны в данной области (смотри, например, Sambrook et. al., Molekular Cloning: A Laboratory Manual: Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989). Пептиды (т. е. полипептиды, имеющие 30 или менее аминокислотных остатков) можно легко синтезировать известными химическими способами.In a preferred embodiment, the invention provides a therapeutic preparation of a pharmaceutically active polypeptide and a substance that enhances the absorption of the polypeptide in the lower respiratory tract. This medication is in the form of a dry powder suitable for inhalation. At least 50 wt.% Of this powder consists of (a) particles having a diameter of less than about 10 microns, or (b) agglomerates of these particles. In another preferred embodiment, the invention provides a therapeutic preparation comprising a pharmaceutically active polypeptide, a substance that enhances the absorption of the polypeptide in the lower respiratory tract, and a pharmaceutically acceptable carrier. The preparation is in the form of a dry powder suitable for inhalation. At least 50 wt. % of this powder consists of (a) particles having a diameter of less than about 10 microns, or (b) agglomerates of these particles. In a further preferred embodiment, the invention provides a therapeutic preparation containing the active compounds: (A) a pharmaceutically active polypeptide and (B) a substance that enhances the absorption of this polypeptide in the lower respiratory tract, with at least 50% of the total weight of the active compounds (A) and ( B) consists of particles having a diameter of less than about 10 microns and a pharmaceutically acceptable carrier. The preparation is in the form of a dry powder suitable for inhalation. An ordered mixture can be obtained from the active compounds and a pharmaceutically acceptable carrier
The described powdery preparation can be made in several ways using conventional techniques. In many cases, the purified polypeptide can be obtained from commercial sources. Conversely, a polypeptide of interest can be purified from a natural source using standard biochemical techniques or can be obtained by expression of prokaryotic or eukaryotic cells genetically engineered to contain a nucleotide sequence that encodes a given polypeptide and has suitable expression control sequences connected to it (in including a transgenic animal capable of expressing the desired peptide or protein, for example, in its milk). Such methods are standard in the art (see, for example, Sambrook et. Al., Molekular Cloning: A Laboratory Manual: Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989). Peptides (i.e., polypeptides having 30 or less amino acid residues) can be easily synthesized by known chemical methods.

Усилители абсорбции, описанные выше, также обычно доступны из коммерческих источников или их можно получить при помощи опубликованных методик. В случае ионогенных усилителей противоион, ассоциированный с усилителем, можно заменить при желании на другой, применяя стандартные методики ионообмена. The absorption enhancers described above are also usually available from commercial sources or can be obtained using published techniques. In the case of ionogenic amplifiers, the counterion associated with the amplifier can be replaced, if desired, by another, using standard ion exchange techniques.

При получении описанного порошкообразного препарата порошок обычно необходимо в некоторой стадии способа тонко измельчить в подходящей мельнице, например струйной мельнице, чтобы получить первоначальные частицы с пределом размера частиц, подходящим для максимального отложения в нижнем дыхательном пути (т.е. менее 10 мкм). Например, можно провести сухое смешивание порошков полипептида и усилителя и затем вещества тонко измельчить вместе. Альтернативно вещества можно тонко измельчить по отдельности и затем смешать. Когда смешиваемые соединения имеют различные физические свойства, например твердость и хрупкость, устойчивость к тонкому измельчению их различается и для их измельчения в частицы пригодного размера могут требоваться различные давления. Следовательно, когда вещества тонко измельчают вместе, размер полученных частиц одного из компонентов может быть неудовлетворительным. В таком случае может быть выгодно различные компоненты тонко измельчить по отдельности и затем смешать их. Upon receipt of the described powdered preparation, the powder usually needs to be finely ground in a suitable mill, such as a jet mill, at some stage of the process to obtain initial particles with a particle size limit suitable for maximum deposition in the lower respiratory tract (i.e. less than 10 microns). For example, you can dry mix the powders of the polypeptide and the enhancer and then finely grind the substances together. Alternatively, the substances can be finely ground separately and then mixed. When the miscible compounds have different physical properties, for example hardness and brittleness, their resistance to fine grinding varies, and different pressures may be required to grind them into particles of suitable size. Therefore, when the substances are finely ground together, the size of the obtained particles of one of the components may be unsatisfactory. In this case, it may be advantageous to finely chop the various components individually and then mix them.

Можно также сначала растворить компоненты в подходящем растворителе, например воде, чтобы получить смешивание на молекулярном уровне. Эта методика позволяет также устанавливать требуемое значение pH, например, для улучшения абсорбции полипептида. Нужно принимать во внимание фармацевтически приемлемые пределы pH от 3,0 до 8,5 для ингаляционных продуктов, поскольку продукты с pH вне этих пределов могут индуцировать раздражение и сужение дыхательных путей. Для получения порошка растворитель следует удалить способом, который позволяет сохранить биологическую активность полипептида. Пригодные методы сушки включают вакуумное концентрирование, открытую сушку, распылительную сушку и сушку вымораживанием. Обычно следует избегать температур выше 40^oC в течение более чем нескольких минут, поскольку может иметь место некоторое разрушение некоторых полипептидов. После стадии сушки твердый материал можно, если необходимо, измельчить для получения крупного порошка и затем, если необходимо, тонко измельчить.You can also first dissolve the components in a suitable solvent, such as water, to obtain molecular mixing. This technique also allows you to set the desired pH, for example, to improve the absorption of the polypeptide. Pharmaceutically acceptable pH ranges of 3.0 to 8.5 for inhalation products should be considered, since products with a pH outside these limits can induce irritation and constriction of the airways. To obtain a powder, the solvent should be removed in a manner that allows the biological activity of the polypeptide to be maintained. Suitable drying methods include vacuum concentration, open drying, spray drying and freeze drying. Generally, temperatures above 40 ^° C. should be avoided for more than a few minutes, as some degradation of some polypeptides may occur. After the drying step, the solid material can, if necessary, be crushed to obtain a coarse powder and then, if necessary, finely crushed.

При желании тонко измельченный порошок можно обработать для улучшения реологических свойств, например, сухим гранулированием для образования сферических агломератов с лучшими эксплуатационными характеристиками до введения его в предназначенное для него устройство-ингалятор. В таком случае устройство должно иметь форму, обеспечивающую значительное дезагломерирование агломератов до выхода порошка из устройства, так что частицы, входящие в дыхательные пути пациента, в основном имеют размер, находящийся в пределах желаемого размера. В тех случаях, когда нужно получить упорядоченную смесь, активное соединение можно обработать, например, тонким измельчением для получения, если нужно, частиц с размером, находящимся в пределах конкретного размера частиц. Носитель также можно обработать, например, для получения частиц желаемого размера и желаемых поверхностных свойств, например конкретного отношения поверхности к массе, или достижения определенной прочности и обеспечения оптимальной силы адгезии в упорядоченной смеси. Такие физические требования для упорядоченной смеси хорошо известны, так же как и различные способы получения упорядоченной смеси, удовлетворяющей эти требования, их может легко определить специалист данной области в соответствии с конкретными деталями. If desired, the finely divided powder can be processed to improve rheological properties, for example, by dry granulation to form spherical agglomerates with better performance before introducing it into the inhaler device intended for it. In this case, the device should be in a form that allows significant agglomeration to agglomerate before the powder leaves the device, so that the particles entering the patient’s airways are generally of a size that is within the desired size. In those cases where you want to get an ordered mixture, the active compound can be processed, for example, by fine grinding to obtain, if necessary, particles with a size within the specific particle size. The carrier can also be processed, for example, to obtain particles of the desired size and desired surface properties, for example, a specific surface to mass ratio, or to achieve a certain strength and provide optimal adhesion in an ordered mixture. Such physical requirements for an ordered mixture are well known, as well as various methods for producing an ordered mixture that satisfies these requirements, they can easily be determined by a person skilled in the art in accordance with specific details.

Предпочтительное ингаляционное устройство должно иметь конструкционные характеристики, защищающие порошок от увлажнения и не допускающие риска случайных больших доз. Кроме того, желательно, чтобы устройство по возможности удовлетворяло как можно больше из следующих условий: защищало порошок от света; обеспечивало легко вдыхаемую фракцию и значительное отложение в легких при широком интервале объемной скорости потока, низкую девиацию дозы и вдыхаемой фракции, низкую ретенцию порошка в наконечнике - это особенно важно для многодозового ингалятора, где полипептид, сохраняющийся в наконечнике, может разрушаться и затем вдыхаться вместе с последующими дозами, низкую адсорбцию у поверхности ингалятора, гибкость в размере доз и низкую ингаляционную устойчивость. Предпочтителен ингалятор с однократной дозой, хотя можно также применять ингалятор с многократной дозой, например, приводимый в действие вдыханием ингалятор многоразового пользования, содержащий многократную дозу сухого порошка. Предпочтителен приводимый в действие вдыханием ингалятор одноразового пользования, содержащий однократную дозу сухого порошка. The preferred inhalation device should have structural characteristics that protect the powder from moisture and avoid the risk of accidental large doses. In addition, it is desirable that the device as much as possible satisfy as many of the following conditions as possible: protect the powder from light; provided an easily respirable fraction and significant deposition in the lungs over a wide range of volumetric flow rates, low dose and respiration fraction deviation, low powder retention in the tip — this is especially important for a multi-dose inhaler where the polypeptide stored in the tip can break down and then be inhaled with subsequent doses, low adsorption at the surface of the inhaler, flexibility in the amount of doses and low inhalation resistance. A single dose inhaler is preferred, although a multiple dose inhaler can also be used, for example, a multi-dose inhalable, inhalable inhaler containing a multiple dose of dry powder. A single-use inhaled, inhaled inhaler containing a single dose of dry powder is preferred.

Был получен и испытан в анализах in vivo описанный ниже ряд сухих порошкообразных готовых форм, содержащих полипептид и различные усилители. Описан также анализ in vitro, пригодный для испытания комбинаций полипептид/усилитель. The following dry powder formulations containing the polypeptide and various enhancers have been prepared and tested in vivo assays. An in vitro assay suitable for testing polypeptide / enhancer combinations is also described.

Пример 1: Способ определения in vivo пригодности конкретных полипептидов для настоящего изобретения
Стандартный анализ in vivo с применением эпителиальной клеточной линии CaCо-2 (доступна через American Type Culture Collection (ATCC), Bockville, MD, USA) разрабатывали для определения способности различных соединений-усилителей промотировать перенос маркеров через монослой эпителиальных клеток как модели эпителиального клеточного слоя, который функционирует в легких для отделения альвеол от легочного кровоснабжения.Example 1: Method for determining in vivo suitability of specific polypeptides for the present invention
A standard in vivo assay using the CaCO-2 epithelial cell line (available through the American Type Culture Collection (ATCC), Bockville, MD, USA) was developed to determine the ability of various enhancer compounds to promote marker transfer through a monolayer of epithelial cells as models of an epithelial cell layer, which functions in the lungs to separate the alveoli from the pulmonary blood supply.

В этом анализе усилитель и полипептид или другой маркер растворяют в водном растворе при различных отношениях и/или концентрациях и контактируют с апикальной стороной клеточного монослоя. После инкубирования в течение 60 мин при 37^oC и 95% RH (относительная влажность) определяли, например, с применением маркера, меченого радиоактивным изотопом, количество маркера на базолатеральной стороне клеток.In this assay, the enhancer and polypeptide or other marker are dissolved in an aqueous solution at various ratios and / or concentrations and are contacted with the apical side of the cell monolayer. After incubation for 60 min at 37 ^° C and 95% RH (relative humidity), for example, using a marker labeled with a radioactive isotope, the amount of marker on the basolateral side of the cells was determined.

Для испытываемого усилителя, капрата натрия, количество маркера (маннит, молекулярная масса 360), которое появляется на базолатеральной стороне, зависит от концентрации применяемого усилителя, которая составляет по крайней мере вплоть до 16 мМ капрата натрия (фиг. 1). Это справедливо, даже если в смесь усилитель/маннит добавляют полипептид инсулин (массовое соотношение капрата натрия и инсулина 1:3) (фиг. 2). Найдено также, что эта концентрация капрата натрия (16 мМ) промотирует абсорбцию через клеточный монослой двух низкомолекулярных пептидов, инсулина (MW 5734) и вазопрессина (MW1208). Количество инсулина, которое прошло через монослой, в присутствии 16 мМ капрата натрия удваивалось по сравнению с количеством его в отсутствии любого усилителя, количество вазопрессина, которое абсорбировалось через монослой, повышалось в 10-15 раз по сравнению с количеством в отсутствии любого усилителя. For the test enhancer, sodium caprate, the amount of marker (mannitol, 360 molecular weight) that appears on the basolateral side depends on the concentration of the enhancer used, which is at least up to 16 mM sodium caprate (FIG. 1). This is true even if insulin polypeptide (mass ratio of sodium caprate and insulin 1: 3) is added to the enhancer / mannitol mixture (Fig. 2). It was also found that this concentration of sodium caprate (16 mM) promotes the absorption through the cell monolayer of two low molecular weight peptides, insulin (MW 5734) and vasopressin (MW1208). The amount of insulin that passed through the monolayer in the presence of 16 mM sodium caprate doubled compared to the amount in the absence of any enhancer; the amount of vasopressin that was absorbed through the monolayer increased 10-15 times compared to the amount in the absence of any enhancer.

Наоборот, никакого повышения в скорости переноса не наблюдали для более высокомолекулярных белков, например цитохрома C (MW12300), карбоновой ангидразы (MW30000) и альбумина (MW69000) в анализах с применением до 16 мМ капрата натрия. Ожидается, что при более высоких концентрациях капрата натрия проницаемость клеток должна повышаться, что позволит осуществить перенос более высокомолекулярных полипептидов; однако, возможная цитотоксичность капрата натрия может препятствовать применению значительно более высоких концентраций этого усилителя. Conversely, no increase in transfer rate was observed for higher molecular weight proteins, for example cytochrome C (MW12300), carboxylic anhydrase (MW30000) and albumin (MW69000) in assays using up to 16 mM sodium caprate. It is expected that at higher concentrations of sodium caprate, cell permeability should increase, which will allow the transfer of higher molecular weight polypeptides; however, the possible cytotoxicity of sodium caprate may impede the use of significantly higher concentrations of this enhancer.

Другие усилители могут позволять перенос более высокомолекулярных полипептидов; их также можно испытывать в этой (in vivo) модели эпителиальной клеточной проницаемости, которую можно применять в качестве средства для скрининга с целью быстрого испытания любой желаемой комбинации полипептид/усилитель, чтобы определить пригодность ее в способах настоящего изобретения. Other enhancers may allow the transfer of higher molecular weight polypeptides; they can also be tested in this (in vivo) model of epithelial cell permeability, which can be used as a screening tool to quickly test any desired polypeptide / enhancer combination to determine its suitability in the methods of the present invention.

Пример 2: Способ отбора усилителей, пригодных для настоящего изобретения. Example 2: A method for selecting amplifiers suitable for the present invention.

Каждое из соединений, указанных в таблице, испытывали на его способность усиливать поглощение полипептида (инсулина) в крысиной модели. Результаты по инсулину взяты в качестве критерия потенциала усилителя в усилении абсорбции других полипептидов. Each of the compounds shown in the table was tested for its ability to enhance the absorption of the polypeptide (insulin) in the rat model. The insulin results were taken as a criterion for the potential of the enhancer in enhancing the absorption of other polypeptides.

В различных испытаниях применяли различные формы инсулина: рекомбинантный человеческий, полусинтетический человеческий или бычий. Каждую готовую форму приготовляли, как указано выше, сушкой и обработкой раствора инсулин/усилитель или инсулин/усилитель/лактоза для получения вдыхаемого порошка. Порошок вводили крысам ингаляцией и содержание глюкозы в крови крыс затем контролировали для измерения поглощения инсулина. Эти величины сравнивали с соответствующими величинами, полученными у крыс, которые вдыхали готовые формы инсулина без усилителя. In various trials, various forms of insulin were used: recombinant human, semi-synthetic human or bovine. Each formulation was prepared, as described above, by drying and treating an insulin / enhancer or insulin / enhancer / lactose solution to produce an inhaled powder. The powder was administered to rats by inhalation, and the blood glucose of the rats was then monitored to measure insulin uptake. These values were compared with the corresponding values obtained in rats that inhaled the finished form of insulin without an amplifier.

Ту же самую модельную систему in vivo можно применять для испытания любого данного пептида или белка на пригодность в способах изобретения путем доставки тем же способом ингаляции готовой формы, содержащей желаемый пептид или белок в комбинации с усилителем, и количественного определения концентрации желаемого пептида или белка в большом круге кровообращения испытываемого животного (например, стандартными иммунологическими или биохимическими анализами, подходящими для данного пептида или белка). The same in vivo model system can be used to test any given peptide or protein for suitability in the methods of the invention by delivering the same form containing the desired peptide or protein in combination with an enhancer and quantifying the concentration of the desired peptide or protein in a large the blood circulation of the test animal (for example, standard immunological or biochemical analyzes suitable for the given peptide or protein).

Пример 3: Терапевтический препарат в соответствии с изобретением. Example 3: A therapeutic drug in accordance with the invention.

Гормон роста человека (hGH, MW 22 кДа, источник Humatrope из Lilly, 3 части) смешивали с капратом натрия (1 часть). Смесь измельчали в механической мельнице Retsch до получения частиц со средним диаметром 6,7 мкм. Human growth hormone (hGH, MW 22 kDa, Humatrope source from Lilly, 3 parts) was mixed with sodium caprate (1 part). The mixture was ground in a Retsch mechanical mill to obtain particles with an average diameter of 6.7 μm.

Полученный порошок вводили крысам внутритрахеально и поглощение hGH сравнивали с поглощением порошка, MMD 9,6 мкм, содержащего hGH и маннит в тех же соотношениях и полученного таким же образом, как указано выше. The resulting powder was administered to rats intratracheally and the absorption of hGH was compared with the absorption of powder, MMD 9.6 μm, containing hGH and mannitol in the same proportions and obtained in the same manner as described above.

Результаты указали на улучшение поглощения hGH в готовой форме, включающей капрат натрия, по сравнению с поглощением в случае готовой формы без усилителя. The results indicated an improvement in the absorption of hGH in the finished form, including sodium caprate, compared with the absorption in the case of the finished form without an amplifier.

Пример 4. Препарат, содержащий полипептид инсулин
Инсулин здесь применяли в качестве критерия для других пептидов в соответствии с настоящим изобретением.Example 4. A preparation containing an insulin polypeptide
Insulin is used here as a criterion for other peptides in accordance with the present invention.

Биосинтетический человеческий инсулин (53 г) подвергали тонкому измельчению в струйной мельнице Airfilco (товарный знак, Airfilco Process Plant Limited) со сжатым азотом (давление загрузки 7•10⁵ Па, давление в камере 5•10⁵ Па) до получения частиц со средним размером 2,4 мкм.Biosynthetic human insulin (53 g) was fine milled in an Airfilco jet mill (trademark, Airfilco Process Plant Limited) with compressed nitrogen (loading pressure 7 • 10 ⁵ Pa, chamber pressure 5 • 10 ⁵ Pa) to obtain particles with an average size 2.4 microns.

Капрат натрия (170 г) подвергали тонкому измельчению в струйной мельнице Airfilco (TM) со сжатым азотом (давление загрузки 5•10⁵ Па, давление в камере 3•10⁵ Па) для получения частиц со средним диаметром 1,6 мкм.Sodium caprate (170 g) was subjected to fine grinding in an Airfilco (TM) jet mill with compressed nitrogen (loading pressure 5 • 10 ⁵ Pa, chamber pressure 3 • 10 ⁵ Pa) to obtain particles with an average diameter of 1.6 μm.

Тонко измельченный биосинтетический инсулин (45 г) и капрат натрия (14,26 г) смешивали в сухом состоянии в соответствии со следующей методикой: половину инсулина добавляли в смешивающее устройство, содержащее цилиндр для смешивания объемом 4,4 л, разделенный ситом с отверстием 1 мм на два отделения, с металлическим кольцом в каждом отделении, помогающим смешиванию и перемешиванию. Добавляли капрат натрия и в заключении оставшееся количество инсулина. Цилиндр для смешивания закрывали, поворачивали на 180 градусов и устанавливали в моторизованный аппарат для встряхивания. Мотор включали и встряхивание продолжали приблизительно в течение двух минут, пока весь порошок не проходил через сито. Мотор выключали и цилиндр для смешивания поворачивали на 180 градусов, снова устанавливали в аппарат для встряхивания и встряхивали снова до тех пор, пока весь порошок не прошел через сито. Эту процедуру повторяли еще восемь раз при общем времени перемешивания приблизительно 20 минут. Finely ground biosynthetic insulin (45 g) and sodium caprate (14.26 g) were mixed in the dry state in accordance with the following procedure: half of the insulin was added to a mixing device containing a 4.4 liter mixing cylinder, separated by a sieve with a 1 mm hole into two compartments, with a metal ring in each compartment to aid mixing and mixing. Sodium caprate was added and, in conclusion, the remaining amount of insulin. The mixing cylinder was closed, rotated 180 degrees and installed in a motorized apparatus for shaking. The motor was turned on and shaking was continued for approximately two minutes until all the powder passed through a sieve. The motor was turned off and the mixing cylinder was rotated 180 degrees, reinserted into the shaker and shaken again until all the powder passed through the sieve. This procedure was repeated eight more times with a total stirring time of approximately 20 minutes.

Полученный таким образом препарат вводили 5 собакам ингаляцией при дозе 1 Е/кг. Уровень инсулина в плазме крови определяли в разные моменты времени после введения препарата. The preparation thus obtained was administered to 5 dogs by inhalation at a dose of 1 U / kg. Plasma insulin levels were determined at different points in time after drug administration.

Полученные результаты сравнивали с результатами уровня инсулина в плазме, полученными, когда биосинтетический инсулин, тонко измельченный, как указано выше, для получения частиц со средним диаметром 2,4 микрон вводили пяти собакам таким же образом и в таких же дозах и с результатами уровня инсулина, полученными, когда терапевтический препарат инсулина и капрата натрия в соотношении 90:10 вводили пять собакам таким же образом и в таких же дозах, как указано выше. В этом случае терапевтический препарат получали следующим образом. Человеческий полусинтетический инсулин гель-фильтровали для снижения содержания цинка от 0,52% до 0,01% относительно содержания инсулина. Инсулин (4,5 г) и капрат натрия (0,5 г) растворяли в воде (232 мл). Раствор перемешивали до осветления (прозрачности) и pH устанавливали 7,0. Раствор концентрировали выпариванием при 37^oC в течение периода около двух дней. Полученную твердую лепешку размалывали и просеивали через сито с размером отверстий 0,5 мм и образованный порошок тонко измельчали в струйной мельнице в частицы со средним диаметром 3,1 мкм.The obtained results were compared with the results of plasma insulin levels obtained when biosynthetic insulin, finely ground, as described above, was administered to five dogs in the same manner and in the same doses and with the results of insulin levels to obtain particles with an average diameter of 2.4 microns. obtained when the therapeutic preparation of insulin and sodium caprate in a ratio of 90:10 was administered to five dogs in the same manner and in the same doses as above. In this case, the therapeutic drug was prepared as follows. Human semisynthetic insulin gel-filtered to reduce the zinc content from 0.52% to 0.01% relative to the content of insulin. Insulin (4.5 g) and sodium caprate (0.5 g) were dissolved in water (232 ml). The solution was stirred until clarification (transparency) and the pH was adjusted to 7.0. The solution was concentrated by evaporation at 37 ^° C. for a period of about two days. The resulting solid cake was grinded and sieved through a sieve with a hole size of 0.5 mm and the formed powder was finely ground in a jet mill into particles with an average diameter of 3.1 μm.

Результаты этих сравнений представлены на фиг. 3. (p = 0,0147 для соотношений от 75:25 до 100:0). Результаты демонстрируют некоторое улучшение в биологической доступности инсулина в случае готовой формы с соотношением 90: 10 и драматическое улучшение в биологической доступности инсулина в случае препарата с соотношением 75:25, включающего капрат натрия, по сравнению с введением только инсулина. The results of these comparisons are presented in FIG. 3. (p = 0.0147 for ratios from 75:25 to 100: 0). The results show a slight improvement in the bioavailability of insulin in the case of a 90: 10 formulation, and a dramatic improvement in the bioavailability of insulin in the case of a 75:25 formulation comprising sodium caprate, compared to the administration of insulin alone.

Claims

1. A pharmaceutical composition suitable for administration by inhalation, comprising a pharmaceutically active polypeptide, characterized in that it contains in combination with a pharmaceutically active polypeptide an enhancer compound that enhances the absorption of the polypeptide in the patient's lower respiratory tract and is a surfactant taken in an amount of more than 10% of the total weight of the polypeptide and the enhancer compound, the above mixture being in the form of a dry powder, in which at least 50% of the total weight of the above The polypeptide and the enhancer compound consists of particles having a diameter less than or equal to 10 μm, or agglomerates of the above particles.

2. The composition according to claim 1, characterized in that it further comprises a pharmaceutically acceptable carrier, which contains particles having a diameter of less than 10 microns, and at least 50% of the obtained powder consists of particles having a diameter of less than 10 microns, or agglomerates of the above particles.

3. The composition according to claim 1, characterized in that it further comprises a pharmaceutically acceptable carrier, which consists of coarse particles having a diameter of more than 20 μm, while a ready-to-use mixture is formed between the polypeptide and the enhancer compound and the specified carrier.

4. The composition according to claim 1, characterized in that the polypeptide is a polypeptide hormone.

5. The composition according to claim 4, characterized in that the aforementioned hormone is vasopressin, an analog of vasopressin, desmopressin, glucagon, corticotropin (ACTH), gonadotropin (luteinizing hormone, or LTRH), calcitonin, insulin C-peptide, parathyroid hormone (PTH) , human growth hormone (hGH), growth hormone (HG), growth hormone releasing hormone (GHRH), oxytocin, corticotropin releasing hormone (CRP), somatostatin analogs, gonadotropin agonist analogues (GnRHa), atrial natriuretic peptide (hAN) releasing hormone thyroxine (TRHrh), follicle stimulating hormone (FSH), or prolactin.

6. The composition according to claim 1 or 2, characterized in that the polypeptide is a growth factor, interleukin, polypeptide vaccine, enzyme, endorphin, glycoprotein, lipoprotein or polypeptide, which can be included in the blood coagulation system and has a pharmacological effect.

7. The composition according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the above polypeptide has a molecular weight of less than 30 kDa.

8. The composition according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the above polypeptide has a molecular weight of less than 25 kDa.

9. The composition according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the above polypeptide has a molecular weight of less than 20 kDa.

10. The composition according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the above polypeptide has a molecular weight of less than 15 kDa.

11. The composition according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the above polypeptide has a molecular weight of less than 10 kDa.

12. The composition according to claim 1, characterized in that the surfactant is a salt of a fatty acid.

13. The composition according to claim 1, characterized in that the surfactant is a bile salt, a derivative of a bile acid salt, an alkyl glycoside, cyclodextrin or its derivative or phospholipid.

14. The composition according to claim 1, characterized in that the surfactant is a salt of bile acid.

15. The composition of claim 14, wherein the bile salt is the sodium salt of ursodeoxycholate, taurocholate, glycocholate or taurodihydrofusidate.

16. The composition according to p. 15, characterized in that the bile salt is sodium taurocholate.

17. The composition according to claim 1, characterized in that the surfactant is acylcarnitine.

18. The composition according to any one of paragraphs.2 to 17, characterized in that the pharmaceutically acceptable carrier is selected from mono-, di- and polysaccharides, alcohols of a number of sugars and other polyols.

19. The composition according to p. 18, characterized in that the carrier is a non-reducing sugar.

20. The composition according to p. 18, characterized in that the carrier is raffinose, melesitose, lactitol, maltitol, trehalose, sucrose, mannitol or starch.

21. The composition of claim 1, wherein the aforementioned enhancer compound is present in an amount of more than 15% of the total amount of the polypeptide and enhancer.

22. The composition according to item 21, wherein the aforementioned compound-enhancer is present in an amount of more than 20% of the total amount of the polypeptide and the enhancer.

23. The composition of claim 22, wherein the aforementioned enhancer compound is present in an amount of 25-50% of the total amount of the polypeptide and enhancer.

24. The composition according to any one of paragraphs.2 to 23, characterized in that it is in the inhaler device in the form of the above agglomerates, while the inhaler device helps to grind the above agglomerates to particles having a diameter less than or equal to 10 microns, when inhaling the above agglomerates from the named device.

25. The composition according to any one of claims 2 to 23, characterized in that it is in a single use inhaled inhalation device, and is a single dose of dry powder.

26. The composition according to any one of paragraphs.2 to 23, characterized in that it is in a multiple use inhalation device, driven by inhalation, and is a multiple dose of dry powder.

27. A method of administering a pharmaceutically active polypeptide, characterized in that it provides a composition in the form of a dry powder containing a mixture of active compounds, a pharmaceutically active polypeptide and an enhancer compound, which enhances the absorption of the polypeptide in the patient's lower respiratory tract and is a surfactant, taken in an amount of more than 10% of the total polypeptide and enhancer; and inhalation by the patient of the aforementioned composition; provided that the particle diameter of the active compounds at the entrance to the patient’s airway is less than or equal to 10 microns.

28. The method according to item 27, wherein the above composition is inhaled from an inhaler device containing a powder in the form of agglomerates of the above particles, the aforementioned agglomerates are mainly deagglomerated before entering the patient's respiratory tract.

29. A method of obtaining a pharmaceutical composition suitable for administration by inhalation, characterized in that it comprises obtaining a solution by dissolving a pharmaceutically active polypeptide and an enhancer compound that enhances the absorption of the polypeptide in the patient's lower respiratory tract and is a surfactant taken in an amount comprising more than 10% of the total polypeptide and enhancer; removing the solvent from the above solution to obtain a dry solid mass containing the polypeptide and the above compound-enhancer; and grinding the dry solid mass to obtain a powder containing at least 50% of the total mass of the above active compounds in the form of particles having a diameter less than or equal to 10 μm, or agglomerates of the above particles.

30. A method of obtaining a pharmaceutical composition suitable for administration by inhalation, characterized in that it comprises dry mixing a pharmaceutically active polypeptide and an enhancer compound, which enhances the absorption of the polypeptide in the patient's lower respiratory tract and is a surfactant taken in an amount of more than 10% of the total polypeptide and enhancer; and grinding the aforementioned mixture to obtain a powder containing at least 50% of the total mass of active compounds in the form of particles having a diameter less than or equal to 10 μm, or agglomerates of the above particles.

31. A method of obtaining a pharmaceutical composition suitable for administration by inhalation, characterized in that it includes obtaining a ground pharmaceutically active polypeptide, and then obtaining a ground compound-enhancer, which enhances the absorption of the polypeptide in the lower respiratory tract of the patient and is a surfactant taken in an amount of more than 10% of the total polypeptide and enhancer; and mixing them to obtain a powder containing at least 50% of the total mass of the above active compounds in the form of particles having a diameter less than or equal to 10 μm, or agglomerates of the above particles.