RU2155599C1 - Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part - Google Patents
Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part Download PDFInfo
- Publication number
- RU2155599C1 RU2155599C1 RU99106350A RU99106350A RU2155599C1 RU 2155599 C1 RU2155599 C1 RU 2155599C1 RU 99106350 A RU99106350 A RU 99106350A RU 99106350 A RU99106350 A RU 99106350A RU 2155599 C1 RU2155599 C1 RU 2155599C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mixture
- ecdysteroids
- ecdysone
- plant
- isolation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к способам выделения биологически активных растительных веществ фармацевтической промышленности и технической энтомологии, а именно к технологии получения индивидуальных экдистероидов из их смеси. The invention relates to methods for the isolation of biologically active plant substances of the pharmaceutical industry and technical entomology, in particular to a technology for producing individual ecdysteroids from a mixture thereof.
Смесь экдистероидов из надземной части Serratula coronata состоит из 20-гидроксиэкдизона (75%), инокостерона (11%), экдизона (5%), а также макистеронов А и С, аюгостерона С, дакрихайнанстерона, присутствующих в следовых количествах (Володин В.В., Лукша В.Г., Дайнан Л. и др. "Инокостерон и макистерон А из Serratula coronata L.// Физиология растений.- 1998.- Т.45.- N 3.- С. 378-382; Volodin V.V., Alexeeva L.I., Kolegova N.A. "Further ecdysteroids of Serratula coronata L.// Biochemical systemat. and ecology.- 1998.- V.26.- issue 4.- P. 459-461). The mixture of ecdysteroids from the aerial part of Serratula coronata consists of 20-hydroxyecdysone (75%), inocosterone (11%), ecdysone (5%), as well as macisterones A and C, augosterone C, dacrychainansterone, which are present in trace amounts (Volodin B.V. ., Luksha V.G., Dainan L. et al. "Inocosterone and Macisterone A from Serratula coronata L. // Plant Physiology .- 1998.- V. 45.- N 3.- S. 378-382; Volodin VV , Alexeeva LI, Kolegova NA "Further ecdysteroids of Serratula coronata L. // Biochemical systemat. And ecology.- 1998.- V.26.- issue 4.- P. 459-461).
Известен способ выделения экдизона из смеси экдистероидов, полученных из растений рода Serratula coronata, который осуществляется путем нанесения смеси экдистероидов на хроматографическую колонку с оксидом алюминия с последующим элюированием смесью органических растворителей, выпаркой и перекристаллизацией (a.с. CCCP 1146050. Способ получения β-экдизона из растения рода Serratula// А.М. Гродзинский, Ю.Д.Холодова, И.Ф.Митунин и др.). A known method of isolating ecdysone from a mixture of ecdysteroids obtained from plants of the genus Serratula coronata, which is carried out by applying a mixture of ecdysteroids to a chromatographic column with aluminum oxide, followed by elution with a mixture of organic solvents, evaporation and recrystallization (a.c. CCCP 1146050. Method for producing β-ecdysone from a plant of the genus Serratula // A.M. Grodzinsky, Yu.D. Kholodova, I.F. Mitunin, etc.).
Недостатками данного способа являются низкая производительность процесса, обусловленная использованием больших объемов растворителей и длительностью процесса. The disadvantages of this method are the low productivity of the process due to the use of large volumes of solvents and the duration of the process.
Известен также способ получения 20-гидроксиэкдизона и экдизона из смеси экдистероидов, принятый за прототип. Способ основан на непрерывном элюировании водного раствора смеси экдистероидов через гидрофобный сорбент до выравнивания концентрации экдизона в растворе на выходе и в исходном растворе (Alekseeva L. , Volodin V., Luksha V. "A convenient method for ecdysteroids concentration// XIII-th Ecdysone Workshop.- Jena.- July 27-31, 1998: Programme and abstracts.- P. 16). There is also a method of producing 20-hydroxyecdysone and ecdysone from a mixture of ecdysteroids, adopted as a prototype. The method is based on continuous elution of an aqueous solution of a mixture of ecdysteroids through a hydrophobic sorbent until the concentration of ecdysone in the solution at the outlet and in the initial solution is equalized (Alekseeva L., Volodin V., Luksha V. "A convenient method for ecdysteroids concentration // XIII-th Ecdysone Workshop .- Jena.- July 27-31, 1998: Program and abstracts.- P. 16).
Недостатком данного способа является длительность процесса вследствие малой растворимости 20-гидроксиэкдизона в воде. The disadvantage of this method is the length of the process due to the low solubility of 20-hydroxyecdysone in water.
Задачей предлагаемого изобретения является повышение производительности процесса, снижение производительности и энергоемкости процесса. The objective of the invention is to increase the productivity of the process, reducing productivity and energy consumption of the process.
Отличительными существенными признаками изобретения является использование в качестве элюента для нанесения экдистероидов на сорбент водных растворов органических растворителей, что увеличивает растворимость экдистероидов не менее чем в 5 раз и, таким образом, приводит к значительному уменьшению объема пропускаемого через сорбент раствора, снижению длительности процесса, а следовательно, делает процесс менее трудоемким. Distinctive essential features of the invention is the use of aqueous solutions of organic solvents as an eluent for applying ecdysteroids to the sorbent, which increases the solubility of ecdysteroids by at least 5 times and, thus, leads to a significant decrease in the volume of solution passed through the sorbent, reducing the duration of the process, and therefore makes the process less time consuming.
Способ осуществляется следующим образом:
Смесь экдистероидов, полученная из надземной части растения рода Serratula coronata, растворяется в водно-органическом растворе (1-25%). Полученный раствор экдистероидов непрерывно пропускают через слой гидрофобного сорбента (по прототипу) до достижения предельной емкости по экдизону, имеющему большее сродство к поверхности сорбента, чем 20-гидроксиэкдизон, инокостерон и макистерон. Достижение предельной емкости по экдизону контролируется методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) или ВЭЖХ. Затем через слой сорбента элюируют 25-100%-ный водный раствор органических растворителей. В качестве органических растворителей используют метанол, этанол, изопропанол, н-бутанол, смесь этилацетата и метанола и др. Растворитель упаривают, а полученный таким образом концентрат, обогащенный экдизоном, очищают препаративной ВЭЖХ и перекристаллизацией.The method is as follows:
A mixture of ecdysteroids obtained from the aerial part of a plant of the genus Serratula coronata is dissolved in an aqueous-organic solution (1-25%). The resulting solution of ecdysteroids is continuously passed through a layer of hydrophobic sorbent (according to the prototype) until reaching the maximum capacity for ecdysone, which has a greater affinity for the surface of the sorbent than 20-hydroxyecdysone, inocosterone and macisterone. The achievement of the maximum capacity for ecdysone is controlled by thin layer chromatography (TLC) or HPLC. Then, a 25-100% aqueous solution of organic solvents is eluted through the sorbent layer. As organic solvents, methanol, ethanol, isopropanol, n-butanol, a mixture of ethyl acetate and methanol, etc. are used. The solvent is evaporated, and the concentrate enriched with ecdysone thus obtained is purified by preparative HPLC and recrystallization.
Предлагаемый способ обогащения экдистероидной смеси неосновными компонентами упрощает их дальнейшее выделение известными методами препаративной оф-ВЭЖХ. The proposed method of enrichment of the ecdysteroid mixture with minor components simplifies their further isolation by known methods of preparative of-HPLC.
Пример осуществления способа. An example implementation of the method.
В стеклянную колонку (50х100 мм) заливают суспензию 30 г сорбента Диасорб С-16/250 (АО "БиоХимМак", Россия) в 150 мл метанола. Колонку активируют 150-200 мл 20%-ного водного раствора метанола. 5 г смеси экдистероидов растворяют в 500 мл 20%-ного водного метанола и пропускают через слой активированного сорбента до обнаружения экдизона в элюате. Элюат собирают отдельными фракциями объемом по 20 мл. Контроль ведут методом ТСХ или ВЭЖХ. После обнаружения экдизона (фракция 33) через колонку пропускают по 70 мл 30, 40, 50, 60%-ного водного раствора метанола, а затем 50 мл метанола. Анализ фракций проводят методом ВЭЖХ. Фракции 15-21 содержат 20-гидроксиэкдизон; фракции 22-26 содержат смесь 20-гидроксиэкдизона и инокостeрона, обогащенную 20-гидроксиэкдизоном; фракции 27-32 - смесь 20-гидроксиэкдизона, инокостерона и макистерона А, обогащенную инокостeроном; фракции 33-39 - смесь 20-гидроксиэкдизона, инокостерона, макистерона А и экдизона, обогащенную инокостероном; фракции 40-46 - смесь экдистероидов, обогащенную экдизоном в 10 раз больше по сравнению с исходной смесью; фракция 47 - смесь макистерона С, аюгостерона С, дакрихайнанстерона. A suspension of 30 g of the sorbent Diasorb S-16/250 (JSC BioChemMak, Russia) in 150 ml of methanol is poured into a glass column (50x100 mm). The column is activated with 150-200 ml of a 20% aqueous methanol solution. 5 g of a mixture of ecdysteroids are dissolved in 500 ml of 20% aqueous methanol and passed through a layer of activated sorbent until ecdysone is detected in the eluate. The eluate is collected in separate fractions of 20 ml each. Control is carried out by TLC or HPLC. After detection of ecdysone (fraction 33), 70 ml of a 30, 40, 50, 60% aqueous methanol solution and then 50 ml of methanol are passed through the column. Fraction analysis was carried out by HPLC. Fractions 15-21 contain 20-hydroxyecdysone; fractions 22-26 contain a mixture of 20-hydroxyecdysone and inocosterone enriched with 20-hydroxyecdysone; fractions 27-32 - a mixture of 20-hydroxyecdysone, inocosterone and macisterone A, enriched with inocosterone; fractions 33-39 - a mixture of 20-hydroxyecdysone, inocosterone, macisterone A and ecdysone enriched with inocosterone; fractions 40-46 - a mixture of ecdysteroids enriched with ecdysone 10 times more compared to the original mixture; fraction 47 - a mixture of macisterone C, augosterone C, dacrichainansterone.
По результатам анализа фракции объединяются и упариваются. According to the results of the analysis, the fractions are combined and evaporated.
Дальнейшее выделение индивидуальных веществ ведется известным способом оф-препаративной ВЭЖХ. Further isolation of individual substances is carried out in a known manner by off-preparative HPLC.
После препаративной ВЭЖХ выделено:
20-гидроксиэкдизона - 3,6 г (Тпл=241-242oC),
инокостерона - 0,5 г (Тпл=255oC),
экдизона - 0,2 г (Тпл=237-238oC).After preparative HPLC, the following were isolated:
20-hydroxyecdysone - 3.6 g (T PL = 241-242 o C),
inocosterone - 0.5 g (T PL = 255 o C),
ecdysone - 0.2 g (T PL = 237-238 o C).
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99106350A RU2155599C1 (en) | 1999-03-29 | 1999-03-29 | Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99106350A RU2155599C1 (en) | 1999-03-29 | 1999-03-29 | Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2155599C1 true RU2155599C1 (en) | 2000-09-10 |
Family
ID=20217795
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99106350A RU2155599C1 (en) | 1999-03-29 | 1999-03-29 | Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2155599C1 (en) |
-
1999
- 1999-03-29 RU RU99106350A patent/RU2155599C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ALEKSEEVA L. et al. A convenient method for ecdysteroids concentration. X111-th Ecdysone Workshop. Jena, July 27-31, 1998. Programme and abstracts. p.16. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Forrest et al. | Pteridines from Drosophila. I. Isolation of a yellow pigment1 | |
| Yokota et al. | Purification and separation of eight steroidal plant-growth regulators from Dolichos lablab seed | |
| Francis et al. | Droplet counter-current chromatography of anthocyanins | |
| CN109912604B (en) | Quinazolinone alkaloid compound, preparation method thereof and application thereof in preparation of liver X receptor agonist | |
| RU2155599C1 (en) | Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part | |
| JP2003519504A (en) | Taxol and taxane production | |
| CN108250273A (en) | Knob not Kangding high efficiency separation and purification method | |
| CN112321664B (en) | Method for extracting, separating and purifying inonotus obliquus alcohol | |
| CN110174469B (en) | Detection method of three diarrheic shellfish poisoning types OA, DTX1 and DTX2 in seaweed | |
| CN109609568B (en) | Method for preparing swainsonine by solid fermentation | |
| JPH01501624A (en) | Method for enriching and/or isolating cardiotonic glycosides using non-polar adsorption resins | |
| Chu et al. | High performance liquid chromatographic preparation of alternariol, alternariol methyl ether, and altenuene | |
| CN108341845B (en) | Method for preparing morroniside from dogwood extract | |
| Lee et al. | Combined florisil, droplet counter-current, and high performance liquid chromatographies for the preparative isolation and purification of azadirachtin from neem (Azadirachta Indica) seeds | |
| RU2082168C1 (en) | Method of detection and quantitative determination of ecdisteroids in plant objects | |
| IT8322555A1 (en) | Procedure for the purification of S-adenosyl-L-methionine | |
| RU2123855C1 (en) | Method of preparing 20-hydroxyecdysone from an ecdysteroids mixture | |
| Rasmussen et al. | Preparative low-pressure chromatography of antibiotics on a column of diol-bonded silica gel | |
| Shimada et al. | Utility of cyclodextrin in mobile phase for high performance liquid chromatographic separation of cardenolides | |
| RU2138509C1 (en) | METHOD OF PREPARING ECDYSTEROIDS OF PLANT SERRATULA: α-ECDYSONE, β-ECDYSONE, AND INOCOSTERONE | |
| Morin | A cheap and practical procedure for medium-performance liquid chromatography | |
| CN105131053B (en) | A kind of isolation and purification method of xanthomycin A component | |
| TWI615387B (en) | Preparative isolation and purification of 4-acetyl antroquinonol b (4-aaqb) from the mycelium of antrodia cinnamomea using high performance centrifugal partition chromatography (hpcpc) by one-step | |
| CN106117032A (en) | Vitacampher isolation and purification method | |
| RU2186056C1 (en) | Method of separation of tryptophan and phenylalanine mixture |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100330 |