RU2153171C1

RU2153171C1 - Method for diagnosing the cases of pollenosis

Info

Publication number: RU2153171C1
Application number: RU99115307A
Authority: RU
Inventors: А.В. Каргаполов; М.А. Демидова
Original assignee: Тверская медакадемия; Каргаполов Александр Васильевич; Демидова Марина Александровна
Priority date: 1999-07-19
Filing date: 1999-07-19
Publication date: 2000-07-20

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves carrying out spectrophotometric examination of saliva sample before and after adding pollen extracts to it using 9-cannel spectrophotometer connected to personal computer. Permeability coefficient of 1302-1468 cm^-1 wavelength infrared radiation dropping by 10% and more when compared to control sample before adding a supposed allergen to the saliva sample, the result is considered to be positive. EFFECT: enhanced safety; high degree of reproducibility; usability for a large number of potential allergenic agents.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической аллергологии, и предназначено для диагностики поллинозов. The invention relates to medicine, namely to clinical allergology, and is intended for the diagnosis of pollinosis.

Цель изобретения - повышение точности способа диагностики поллинозов путем выявления аллергенов. The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method for the diagnosis of pollinosis by identifying allergens.

Поллинозы - это аллергические заболевания, вызываемые пыльцой растений. Наиболее эффективным способом лечения поллиноза является устранение контакта пациента с аллергенами (пыльцой растений, вызвавшей сенсибилизацию пациентов). Диагностика поллинозов путем выявления растений, к пыльце которых возникла сенсибилизация, позволяет пациентам избегать мест произрастания этих растений во время их цветения, что в свою очередь предупреждает появление клинических признаков заболевания. Pollinosis is an allergic disease caused by pollen from plants. The most effective way to treat hay fever is to eliminate the patient’s contact with allergens (plant pollen, which caused sensitization of patients). Diagnosis of hay fever by identifying plants with sensitization to pollen allows patients to avoid the growth sites of these plants during flowering, which in turn prevents the onset of clinical signs of the disease.

Существуют различные способы диагностики поллинозов. Наиболее близкими к заявляемому способу является диагностика пыльцевой аллергии путем постановки внутрикожных проб с аллергенами (разведениями экстракта пыльцы растений), а также различных провокационных проб (назальной, конъюктивальной, бронхиальной) [1, 3]. Перечисленные способы являются достаточно информативными, однако существенным недостатком всех перечисленных аллергологических проб с экстрактами пыльцы растений является тот момент, что они проводятся in vivo, поэтому их постановка сопровождается неприятными субъективными ощущениями пациентов, а также риском развития осложнений. Вместе с тем аллергологические пробы являются достаточно трудоемкими, требуют специального обучения медицинского персонала, их проведение возможно только в условиях специализированного аллергологического кабинета. There are various ways to diagnose hay fever. Closest to the claimed method is the diagnosis of pollen allergy by staging intradermal samples with allergens (dilutions of plant pollen extract), as well as various provocative samples (nasal, conjunctival, bronchial) [1, 3]. The listed methods are quite informative, however, a significant drawback of all of the listed allergological samples with plant pollen extracts is the fact that they are carried out in vivo, therefore, their formulation is accompanied by unpleasant subjective sensations of patients, as well as the risk of complications. At the same time, allergological tests are quite laborious, require special training of medical personnel, their carrying out is possible only in the conditions of a specialized allergological office.

В качестве прототипа заявляемого способа известен способ выявления аллергенов при поллинозе путем постановки антиген-индуцированной (в качестве аллергенов используются экстракты пыльцы растений) реакции дегрануляции базофилов in vitro [2]. При этом определяют число дегранулированных базофилов в лейкоцитарной взвеси, окрашенной 0,3% спиртовым раствором нейтрального красного, до и после инкубации с аллергенами. Положительным результатом реакции является увеличение числа дегранулированных базофилов на 15% по сравнению с контролем. Недостатком этого способа является его недостаточная точность, значительная трудоемкость и необходимость работы с кровью пациентов. As a prototype of the proposed method, there is a method of detecting allergens in hay fever by staging antigen-induced (plant pollen extracts are used as allergens) in vitro degranulation of basophils [2]. In this case, the number of degranulated basophils in the leukocyte suspension stained with a 0.3% alcohol solution of neutral red is determined before and after incubation with allergens. A positive result of the reaction is an increase in the number of degranulated basophils by 15% compared with the control. The disadvantage of this method is its lack of accuracy, considerable complexity and the need to work with the blood of patients.

Авторы предлагают оригинальный способ диагностики поллинозов путем проведения спектрофотометрического исследования слюны пациентов. Преимуществом предложенного способа по сравнению с существующими является его достаточная точность, которая достигается определением коэффициента пропускания инфракрасного излучения слюной до и после инкубации слюны с экстрактами пыльцы растений. Достоинством способа являются: простота и быстрота выполнения исследования (в среднем 5 минут на 1 пробу); небольшое количество биологического материала (0,1 мл слюны) для постановки одной пробы; возможность проведения исследования с любым числом аллергенов; объектом исследования является слюна, что обеспечивает легкость ее забора пациентами самостоятельно без участия медицинских работников; постановка реакции с аллергеном осуществляется in vitro, что делает метод безопасным для больных. The authors suggest an original method for the diagnosis of pollinosis by spectrophotometric studies of patients' saliva. An advantage of the proposed method over existing ones is its sufficient accuracy, which is achieved by determining the transmittance of infrared radiation from saliva before and after incubation of saliva with plant pollen extracts. The advantages of this method are: simplicity and speed of research (on average 5 minutes per 1 test); a small amount of biological material (0.1 ml of saliva) for the production of one sample; the ability to conduct research with any number of allergens; the object of the study is saliva, which ensures the ease of its collection by patients on their own without the participation of medical personnel; the reaction with the allergen is carried out in vitro, which makes the method safe for patients.

Способ осуществляется следующим образом. Пациентом утром натощак в стерильные флаконы осуществляется забор слюны в объеме 3-5 мл. Спектрофотометрическое исследование слюны осуществляется с помощью 9-канального спектрофотометра, соединенного с персональным компьютером. Вначале проводится постановка контрольной пробы. С этой целью 0,1 мл слюны помещается в специальную микрокювету; определение пропускания слюной инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 проводится в динамике в течение 60 секунд (с интервалом в 6 секунд), результаты определения фиксируются в персональном компьютере. Для постановки опытной пробы к 0,1 мл слюны добавляют 0,01 мл раствора экстракта пыльцы растений в концентрации 10^-7 - 10^-10 и повторно проводят определение пропускания слюной инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1. Для каждой пробы вычисляют коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1, сравнивают результаты опытных и контрольных проб.The method is as follows. The patient in the morning on an empty stomach in sterile vials saliva is taken in the amount of 3-5 ml. Spectrophotometric study of saliva is carried out using a 9-channel spectrophotometer connected to a personal computer. Initially, a control sample is set up. To this end, 0.1 ml of saliva is placed in a special microcuvette; the salivary transmission of infrared radiation with a wavelength of 1302-1468 cm ^{-1 is} carried out in dynamics for 60 seconds (with an interval of 6 seconds), the results of the determination are recorded in a personal computer. To set up a test sample, 0.1 ml of saliva is added with a solution of pollen extract of plants at a concentration of 10 ^-7 - 10 ^-10 to 0.1 ml of saliva and the transmission of infrared radiation with a wavelength of 1302-1468 cm ^-1 is determined again. For each sample, the transmittance of infrared radiation with a wavelength of 1302-1468 cm ^{-1 is} calculated, the results of experimental and control samples are compared.

Положительной считается реакция, при которой коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 слюной при добавлении экстракта пыльцы или других предполагаемых аллергенов снижается на 10% и более по сравнению с контролем.A positive reaction is considered in which the transmittance of infrared radiation with a wavelength of 1302-1468 cm ^-1 saliva when adding pollen extract or other suspected allergens is reduced by 10% or more compared with the control.

Пример 1. Пациентка М., 34 года проходила обследование в аллергологическом кабинете поликлиники N 1 городской больницы N 4. г. Твери с диагнозом: поллиноз, риноконъюнктивит. В процессе постановки внутрикожных аллергологических проб у пациентки была выявлена сенсибилизация к пыльце луговых трав. Спектрофотометрическое исследование слюны показало, что в контрольной пробе коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 был равен 53,4; после добавления к слюне экстрактов пыльцы растений в опытных пробах коэффициент пропускания инфракрасного излучения составил: для пыльцы полыни, одуванчика и подсолнечника - 51,4; для пыльцы березы, ольхи, орешника - 57,3; для пыльцы луговых трав - 35,4. На основании анализа полученных данных было выявлено, что при добавлении к слюне экстракта пыльцы луговых трав коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 снизился более чем на 10%, в остальных опытных пробах этого не отмечалось. Результаты спектрофотометрического исследования слюны подтвердили наличие сенсибилизации к пыльце луговых трав.Example 1. Patient M., 34 years old, was examined in the allergology room of the polyclinic N 1 of the city hospital N 4. The city of Tver was diagnosed with hay fever, rhinoconjunctivitis. In the process of setting intradermal allergological samples, the patient revealed sensitization to pollen of meadow herbs. Spectrophotometric study of saliva showed that in the control sample the transmittance of infrared radiation with a wavelength of 1302-1468 cm ^-1 was equal to 53.4; after adding extracts of plant pollen to saliva in experimental samples, the transmission coefficient of infrared radiation was: for pollen of wormwood, dandelion and sunflower - 51.4; for pollen of birch, alder, hazel - 57.3; for grass pollen - 35.4. Based on the analysis of the data obtained, it was found that when the meadow grass pollen extract was added to the saliva, the transmittance of infrared radiation with a wavelength of 1302-1468 cm ^-1 decreased by more than 10%, this was not observed in other experimental samples. The results of spectrophotometric studies of saliva confirmed the presence of sensitization to pollen of meadow herbs.

Пример 2. Пациент Ш., 26 лет проходил обследование в аллергическом кабинете поликлиники N 1 городской больницы N 4. г. Твери с диагнозом: бронхиальная астма, средней тяжести, ремиссия. В процессе постановки внутрикожных аллергологических проб у пациента была выявлена сенсибилизация к пыльце луговых трав и домашней пыли. Спектрофотометрическое исследование слюны показало, что в контрольной пробе коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 был равен 42,8; после добавления к слюне экстрактов пыльцы растений в опытных пробах коэффициент пропускания инфракрасного излучения составил: для пыльцы полыни, одуванчика и подсолнечника - 44,7; для пыльцы березы, ольхи, орешника - 49,3; для пыльцы луговых трав - 32,2. На основании анализа полученных данных было выявлено, что при добавлении к слюне экстракта пыльцы луговых трав коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 снизился более чем на 10%. Результаты спектрофотометрического исследования слюны подтвердили наличие сенсибилизации к пыльце луговых трав. Дополнительная постановка пробы с экстрактом домашней пыли также показала снижение коэффициента пропускания слюной инфракрасного излучения до 36,7 (более чем на 10%), что подтвердило сенсибилизацию к домашней пыли.Example 2. Patient Sh., 26 years old, was examined in the allergy room of the polyclinic N 1 of the city hospital N 4. The city of Tver was diagnosed with bronchial asthma, moderate severity, remission. In the process of setting intradermal allergological samples, the patient revealed sensitization to pollen of meadow herbs and house dust. Spectrophotometric study of saliva showed that in the control sample the transmittance of infrared radiation with a wavelength of 1302-1468 cm ^-1 was equal to 42.8; after adding extracts of plant pollen to saliva in experimental samples, the transmission coefficient of infrared radiation was: for pollen of wormwood, dandelion and sunflower - 44.7; for pollen of birch, alder, hazel - 49.3; for pollen of meadow herbs - 32.2. Based on the analysis of the obtained data, it was found that when the meadow pollen extract was added to the saliva, the transmittance of infrared radiation with a wavelength of 1302-1468 cm ^-1 decreased by more than 10%. The results of spectrophotometric studies of saliva confirmed the presence of sensitization to pollen of meadow herbs. An additional sample with house dust extract also showed a decrease in the salivary transmittance of infrared radiation to 36.7 (more than 10%), which confirmed sensitization to house dust.

Список литературы
1. Зисельсон А.Д. Поллиноз у детей. - М., 1989,159 с.List of references
1. Ziselson A.D. Hay fever in children. - M., 1989.159 p.

2. Новиков Д.К., Доценко Э.А., Жаков Г.Я. Применение прямого теста дегрануляции базофилов для диагностики аллергии // Лабораторное дело, 1990, N 9, с. 58-61. 2. Novikov D.K., Dotsenko E.A., Zhakov G.Ya. The use of a direct test of basophil degranulation for the diagnosis of allergies // Laboratory, 1990, N 9, p. 58-61.

3. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., Артомасова А.В. Аллергические заболевания. - М., 1991, с. 197-207. 3. Pytsky V.I., Adrianova N.V., Artomasova A.V. Allergic diseases. - M., 1991, p. 197-207.

Claims

A method for the diagnosis of hay fever, including an in vitro allergological test, characterized in that they determine the transmittance of infrared radiation with a wavelength of 1302 - 1468 cm ^-1 for 60 s with an interval of 6 s in a control sample of 0.1 ml of saliva and in the experimental sample 5 minutes after the addition of plant pollen extract to saliva, the presence of sensitization to the test substance is determined by reducing the transmittance of infrared radiation for the experimental saliva sample compared to the control saliva by 10% or more.