RU2139344C1

RU2139344C1 - Method of preparing nutrient medium for salmonella culturing

Info

Publication number: RU2139344C1
Application number: RU97122257A
Authority: RU
Inventors: Л.С. Бузолева; Г.П. Сомов
Original assignee: Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН
Priority date: 1997-12-23
Filing date: 1997-12-23
Publication date: 1999-10-10

Abstract

FIELD: microbiology. SUBSTANCE: nutrient medium has bentonite clay and phosphate buffer at pH 7.4. An adsorption of organic substances that are easily assimilated by bacteria occurs owing to the presence of active centers on bentonites surface. EFFECT: increased yield of bacterial mass. 1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам приготовления питательных сред для культивирования сальмонелл. The invention relates to microbiology, in particular to methods for preparing culture media for the cultivation of Salmonella.

Известен способ приготовления питательной среды для культивирования сальмонелл (Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М., 1978, С.362). Среда обогащения "М" (магниевая среда с малахитовым зеленым в прописи Г.П.Калины и В.Л.Шигановой). При этом поэтапно готовят три раствора:
Раствор А:
Пептон отечественный (семипалатинский) - 0,42 г
Хлорид Na - 0,7 г
Фосфат K - 0,15 г
Дрожжевой диализат - 0,9 мл
Дистиллированная вода - 89 мл
Раствор Б:
Хлорид Mg - 0,36 г
Дистиллированная вода - 9 мл
Раствор В:
Бриллиантовый зеленый (водный р-р 0,5%) - 0,09 мл
Затем эти растворы смешивают и стерилизуют при t=100^oC в течение 30 мин.A known method of preparing a nutrient medium for the cultivation of salmonella (Labinskaya AS Microbiology with the technique of microbiological research. M., 1978, S.362). Enrichment medium "M" (magnesium medium with malachite green in the recipe of G.P. Kalina and V.L. Shiganova). In this case, three solutions are prepared in stages:
Solution A:
Peptone domestic (Semipalatinsk) - 0.42 g
Na Chloride - 0.7 g
Phosphate K - 0.15 g
Yeast Dialysate - 0.9 ml
Distilled Water - 89 ml
Solution B:
Mg Chloride - 0.36 g
Distilled Water - 9 ml
Solution B:
Diamond green (water solution of 0.5%) - 0.09 ml
Then these solutions are mixed and sterilized at t = 100 ^o C for 30 minutes

Недостатком данного способа приготовления питательной среды является ее многокомпонентность, сложность приготовления и использование в качестве питательной основы ценных пищевых продуктов (пептон, дрожжи). The disadvantage of this method of preparing a nutrient medium is its multicomponent nature, the complexity of preparation and the use of valuable food products (peptone, yeast) as a nutritional basis.

Наиболее близким к заявляемому решению является способ приготовления питательной среды для культивирования энтеробактерий (SU a.c.N 1708834, МПК C 12 1/20, 1990). При этом берут следующие компоненты:
Фосфорнокислый двузамещенный Na, г - 8,2 - 8,7
Фосфорнокислый однозамещенный K, г - 2,2 - 2,7
Гуминовая кислота, г - 0,01- 0,04
разводят в 100 мл дистиллированной воды, затем доводят объем до 1000 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 минут.Closest to the claimed solution is a method of preparing a nutrient medium for the cultivation of enterobacteria (SU acN 1708834, IPC C 12 1/20, 1990). In this case, the following components are taken:
Disodium phosphate disubstituted Na, g - 8.2 - 8.7
Phosphate monosubstituted K, g - 2.2 - 2.7
Humic acid, g - 0.01-0.04
diluted in 100 ml of distilled water, then bring the volume to 1000 ml and sterilized in an autoclave at 0.5 ATM for 30 minutes.

В качестве питательной основы здесь используют непищевое сырье - гуминовую кислоту. Однако получение гуминовой кислоты требует больших технических затрат, поэтому данный способ дорогостоящий, а ростовые свойства в отношении сальмонелл недостаточно высокие. As a nutrient base, non-food raw materials are used here - humic acid. However, obtaining humic acid requires large technical costs, therefore, this method is expensive, and the growth properties in relation to Salmonella are not high enough.

Задача, решаемая изобретением - получение недорогой питательной среды из непищевого сырья с повышенными ростовыми свойствами в отношении сальмонелл. The problem solved by the invention is to obtain an inexpensive nutrient medium from non-food raw materials with increased growth properties against salmonella.

Поставленная задача решается следующим образом: при приготовлении питательной среды бентонитовую глину смешивают с фосфатным буфером, имеющим pH 7,4, настаивают раствор 3-5 часов, затем фильтруют его и дистиллированной водой доводят до 1 л. Стерилизуют текучим паром дважды (100^oC 30 мин). При этом для приготовления 1 л питательной среды исходные компоненты берут в следующем соотношении, г/л:
Na фосфорнокислый двузамещенный - 8,2 - 8,7
K фосфорнокислый однозамещенный - 2,2 - 2,7
Бентонитовая глина - 100 - 150
Дистиллированная вода - До 1 л
Питательная среда слегка опалесцирует, не имеет специфического запаха, pH среды 7,4. В полученную питательную среду дозированно вносят суспензию бактерий с целью накопления биомассы. Заражающая доза 1000 микробных клеток в 1 мл среды. Пробирки с инокулированной питательной средой инкубируют в термостате при 37^oC. 3атем, для определения прироста бактериальной массы, производят серийные высевы бактерий на чашки Петри с дифференциально-диагностическими средами (Плоскирева, висмут-сульфитный агар) с учетом необходимых разведений.The problem is solved as follows: when preparing a nutrient medium, bentonite clay is mixed with phosphate buffer having a pH of 7.4, the solution is insisted for 3-5 hours, then it is filtered and adjusted to 1 liter with distilled water. Sterilized with fluid steam twice (100 ^° C. for 30 minutes). Moreover, for the preparation of 1 liter of nutrient medium, the starting components are taken in the following ratio, g / l:
Na phosphate disubstituted - 8.2 - 8.7
K phosphate monosubstituted - 2.2 - 2.7
Bentonite clay - 100 - 150
Distilled Water - Up to 1 L
The nutrient medium slightly opalescent, has no specific odor, pH 7.4. A suspension of bacteria is metered into the resulting nutrient medium in order to accumulate biomass. The infectious dose of 1000 microbial cells in 1 ml of medium. Tubes with inoculated nutrient medium are incubated in a thermostat at 37 ^o C. Then, to determine the growth of the bacterial mass, serial bacteria are plated on Petri dishes with differential diagnostic media (Ploskireva, bismuth-sulfite agar) taking into account the necessary dilutions.

Испытания среды проведены со штаммом Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium. Tests of the medium were carried out with a strain of Salmonella enteritidis and Salmonella typhimurium.

Результаты роста сальмонелл на различных питательных средах приведены в таблице. Из приведенных данных видно, что прирост сальмонелл в заявляемой питательной среде, содержащей Na фосфорнокислого двузамещенного 8,2 - 8,7 г, К фосфорнокислого однозамещенного 2,2 - 2,7 г, бентонитовую глину 100 - 150 г на 40-50% выше по сравнению с прототипом. Процесс приготовления питательной среды прост, не требует специального оборудования и реактивов. Применение предлагаемой среды для культивирования сальмонелл в микробиологической промышленности и микробиологических исследованиях позволяет снизить себестоимость целевого продукта и повысить выход бактериальной массы. The results of the growth of salmonella on various nutrient media are shown in the table. From the above data it is seen that the increase in salmonella in the claimed nutrient medium containing Na phosphate disubstituted 8.2 - 8.7 g, K phosphate monosubstituted 2.2 - 2.7 g, bentonite clay 100 - 150 g 40-50% higher compared to the prototype. The process of preparing a nutrient medium is simple, does not require special equipment and reagents. The use of the proposed environment for the cultivation of salmonella in the microbiological industry and microbiological research can reduce the cost of the target product and increase the yield of bacterial mass.

Бентонитовые глины относятся к минералам группы монтмориллонита, которые характеризуются как присутствием в их составе большого разнообразия химических элементов: Si, Al, Mg, Ca, Na, K, Fe, P и в меньших количествах: Ba, Cu, B, Mn, Ag, Cr и т.д., так и являясь хорошим природным адсорбентом, значительно обогащены органическими веществами. В медицинской микробиологии благодаря их адсорбционным свойствам их используют в качестве коагулянтов бактерий (SU, а.с. N 1585335, НИ C 12 1/04, "Способ выделения иерсиний"). Bentonite clays belong to the montmorillonite group minerals, which are characterized by the presence in their composition of a wide variety of chemical elements: Si, Al, Mg, Ca, Na, K, Fe, P and in smaller quantities: Ba, Cu, B, Mn, Ag, Cr, etc., being a good natural adsorbent, are significantly enriched in organic substances. In medical microbiology, due to their adsorption properties, they are used as bacterial coagulants (SU, a.s. N 1585335, NI C 12 1/04, "Method for the isolation of Yersinia").

В предлагаемом изобретении бентонитовые глины применяют в качестве основы для питательных сред, т.к. благодаря наличию большого количества активных центров на поверхности минерала природные бентониты способны адсорбировать простые органические вещества (аминокислоты, липиды, углеводы) легкоусвояемые бактериями в отличие от гуминовых кислот, представляющих собой непостоянного состава смесь простых и сложных органических веществ, не всегда доступных для питания бактерий. In the present invention, bentonite clays are used as a basis for nutrient media, because Due to the presence of a large number of active centers on the surface of the mineral, natural bentonites are capable of adsorbing simple organic substances (amino acids, lipids, carbohydrates) easily digestible by bacteria, unlike humic acids, which are an unstable composition, a mixture of simple and complex organic substances that are not always available for the nutrition of bacteria.

Сущность изобретения поясняется примерами. The invention is illustrated by examples.

Пример 1. Example 1

Для приготовления 1 л питательной среды 125 г измельченной бентонитовой глины заливают до 1 л фосфатно-буферным раствором, содержащим г/л: Na фосфорнокислый двузамещенный -8,5, К фосфорнокислый однозамещенный - 2,5, настаивают 4 часа. Полученный настой фильтруют, доводят до 1 л дистиллированной водой. Стерилизуют текучим паром дважды (100^oC в течение 30 минут).To prepare 1 l of nutrient medium, 125 g of crushed bentonite clay is poured up to 1 l with a phosphate-buffered solution containing g / l: Na phosphate disubstituted -8.5, K phosphate monosubstituted-2.5, insist 4 hours. The resulting infusion is filtered, adjusted to 1 liter with distilled water. Sterilized with steam twice (100 ^o C for 30 minutes).

Полученная питательная среда слегка опалесцирует, не имеет специфического запаха, pH среды 7,4. The resulting nutrient medium slightly opalescent, has no specific odor, pH 7.4.

За сутки культивирования количество S.enteritidis составило 480±48, S. typhimurium - 364±28. During the day of cultivation, the number of S.enteritidis was 480 ± 48, S. typhimurium - 364 ± 28.

Пример 2. Example 2

Питательную среду готовят аналогично примеру 1. Состав питательной среды: г/л Na фосфорнокислый двузамещенный - 8,2; К фосфорнокислый однозамещенный - 2,2; бентонитовая глина - 100; дистиллированная вода - до 1 л. Бентонитовую глину настаивают 3 часа. Полученная питательная среда слегка опалесцирует, не имеет специфического запаха, pH среды 7.4. За сутки культивирования количество S.enteritidis составило 565±34, S.typhimurium - 512±30. The nutrient medium is prepared analogously to example 1. The composition of the nutrient medium: g / l Na phosphate disubstituted - 8.2; K phosphate monosubstituted - 2.2; bentonite clay - 100; distilled water - up to 1 liter. Bentonite clay is insisted for 3 hours. The resulting nutrient medium slightly opalescent, does not have a specific odor, pH 7.4. During the day of cultivation, the number of S.enteritidis was 565 ± 34, S.typhimurium - 512 ± 30.

Пример 3. Example 3

Питательную среду готовят аналогично примеру 1. Состав питательной среды: г/л Na фосфорнокислый двузамещенный - 8,7; К фосфорнокислый однозамещенный - 2,7, бентонитовая глина - 150, дистиллированная вода - до 1 л. Бентонитовую глину настаивают 5 часов. Питательная среда слегка опалесцирует, не имеет специфического запаха, pH среды 7,4. Испытание среды аналогично примеру 1. За сутки культивирования количество S.enteritidis составило 572±16, S.typhimurium - 515±25. The nutrient medium is prepared analogously to example 1. The composition of the nutrient medium: g / l Na phosphate disubstituted - 8.7; K phosphate monosubstituted - 2.7, bentonite clay - 150, distilled water - up to 1 liter. Bentonite clay is insisted for 5 hours. The nutrient medium slightly opalescent, has no specific odor, pH 7.4. The test environment is similar to example 1. During the day of cultivation, the number of S.enteritidis was 572 ± 16, S.typhimurium - 515 ± 25.

Claims

A method of preparing a nutrient medium for the cultivation of Salmonella, comprising mixing the components of the medium and its sterilization, characterized in that the preparation of the nutrient medium is carried out by mixing bentonite clay with a phosphate buffer having a pH of 7.4, infusion for 3 to 5 hours, followed by filtration, this to prepare 1 liter of nutrient medium, the starting components are taken in the following ratio, g / l:
Disubstituted sodium phosphate - 8.2 - 8.7
Potassium phosphate monosubstituted - 2.2 - 2.7
Bentonite clay - 100 - 150
Distilled Water - Up to 1 L