RU2139343C1 - Питательная среда для выделения возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом, вызываемого кишечной палочкой 0157:н7 (сорбитол e.coli 0157:н7агар) - Google Patents

Питательная среда для выделения возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом, вызываемого кишечной палочкой 0157:н7 (сорбитол e.coli 0157:н7агар) Download PDF

Info

Publication number
RU2139343C1
RU2139343C1 RU97118081/13A RU97118081A RU2139343C1 RU 2139343 C1 RU2139343 C1 RU 2139343C1 RU 97118081/13 A RU97118081/13 A RU 97118081/13A RU 97118081 A RU97118081 A RU 97118081A RU 2139343 C1 RU2139343 C1 RU 2139343C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sorbitol
agar
medium
pathogen
hemolytic
Prior art date
Application number
RU97118081/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU97118081A (ru
Inventor
М.В. Храмов
А.П. Шепелин
Н.И. Ажермачева
Г.М. Савельева
Original Assignee
Государственный научный центр прикладной микробиологии
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственный научный центр прикладной микробиологии filed Critical Государственный научный центр прикладной микробиологии
Priority to RU97118081/13A priority Critical patent/RU2139343C1/ru
Publication of RU97118081A publication Critical patent/RU97118081A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2139343C1 publication Critical patent/RU2139343C1/ru

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение касается медицинской микробиологии и может быть использовано для выявления кишечной палочки 0157 : H7 в объектах окружающей среды, пищевых продуктах и от больных людей. Среда содержит в качестве белкового компонента панкреатический гидролизат рыбной муки, в качестве углеводного компонента - сорбитол, кроме этого, экстракт пекарных дрожжей, натрия сульфит, натрия хлорид, натрия фосфат, фуксин основной в качестве красителя и агар микробиологический и воду при определенном соотношении компонентов. Изобретение обеспечивает возможность использовать среду в полевых условиях для первичного выделения и дифференциации возбудителя геморрагического колита. Среда проста в приготовлении, улучшает дифференциацию за счет появления металлического блеска колоний. 1 табл.

Description

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано для выявления кишечной палочки 0157:Н7 в объектах окружающей среды, пищевых продуктах и от больных людей.
Этиологическая роль Е. coli 0157:Н7 как возбудителя геморрагического колита установлена сравнительно недавно. Тем не менее вспышки и спорадические случаи острых кишечных инфекций, вызываемых Е. coli 0157:Н7, уже зарегистрированы в большинстве стран мира: США, Канаде, Великобритании и Японии.
Не менее тревожная обстановка сложилась в Российской Федерации. В течение 1994-95 гг. зарегистрировано 35 вспышек острых кишечных инфекций водного и 137 вспышек пищевого характера, в результате которых заболело свыше 19 тыс. человек. В первом квартале 1996 г в России произошло 16 вспышек острых кишечных инфекций. Около 60% заболевших составили дети до 14 лет, при этом более половины из них в возрасте до 2 лет. Этиология большинства случаев острых кишечных инфекций, в том числе осложненных гемолитико-уремическим синдромом, остается невыясненной. С большой вероятностью можно предположить, что среди нерасшифрованных острых кишечных инфекций имеет место инфекция, вызываемая энтерогеморрагическими Е. coli серотипа 0157:Н7.
Большую озабоченность вызывает быстрый рост заболеваемости и высокая смертность (до 2,5%).
Сложная санитарно-эпидемическая ситуация в России (завоз мяса, мясных и молочных продуктов из-за рубежа, широкая сеть частных предприятий торговли и питания) требует более тщательного проведения бактериологического контроля с применением специальных питательных сред с целью быстрого обнаружения возбудителя данного заболевания и пресечения завоза возбудителя с продуктами питания из-за заграницы.
В России в настоящий момент отсутствуют питательные среды для выделения кишечной палочки 0157:1-Н7 - возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом. Угроза заноса данного возбудителя в Россию и появление вспышки данного заболевания внутри страны являются предпосылками для создания такой среды.
Ведущими зарубежными фирмами Difco, bioLife, Merck выпускаются среды для выделения кишечной палочки 0157:Н7 Mac Conkey Sorbitol Agar, Fluorocult E. coli 0157:Н7 agar (1, 2, 3).
Наиболее близкой по назначению к предлагаемой среде является Mac Conkey Sorbitol Agar, выпускаемой фирмами bioLife (2), состоящей из следующих компонентов, г/л:
Peptomeat - 17,0
Peptocomplex - 3,0
Bile Salts N 3 - 5,0
D-Sorbitol - 10,0
Sodium chloride - 5,0
Neutral Red - 0,03
Cristal Violet - 0,001
MUG - 0,1
Agar Bios LL - 14,5
Использование этой среды позволяет четко дифференцировать штаммы серогруппы 0157:Н7 от других эшерихий.
Недостатками этой среды являются многокомпонентный состав, включающий дорогостоящие мясные казеиновые перевары и экстракты, а также среда требует автоклавирования, что затрудняет ее использование в полевых условиях. Отсутствие этих сред на российском рынке не обеспечивает достаточного опыта работы с этой средой в практике здравоохранения.
В связи с вышеизложенным задачей изобретения является создание отечественной питательной среды из дешевых компонентов, обеспечивающей возможность использовать среду в полевых условиях с целью первичного выделения и дифференциации возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом - кишечной палочки 0157:Н7, отражающей условия и стереотипы работы наших диагностических лабораторий и сводящей до минимума перестройку производственного процесса при выпуске среды.
Поставленная задача решается сбалансированностью компонентного состава среды, содержащей в качестве белкового компонента панкреатический гидролизат рыбной муки, в качестве углеводного компонента - сорбитол, кроме этого, экстракт пекарных дрожжей, натрия сульфит, натрия хлорид, натрия фосфат, фуксин основной в качестве красителя и агар микробиологический при следующем соотношении компонентов, г/л:
панкреатический гидролизат рыбной муки - 10,0-14,0
экстракт пекарных дрожжей - 0,8-1,2
сорбитол - 8,0-12,0
натрия хлорид - 3,0-4,0
натрия сульфит - 0,75-0,85
натрия фосфат - 0,45-0,55
фуксин основной - 0,18-0,22
агар микробиологический - 8,0-12,0
дистиллированная вода - остальное
Количественное соотношение компонентов позволяет обеспечивать хорошую первичную дифференциацию штаммов серогруппы Е. coli 0157:H7 от других эшерихий через 16-18 часов. Производство панкреатического гидролизата рыбной муки и экстракта пекарных дрожжей налажено в отделении "Питательные среды" ГНЦ ПМ, поэтому выпускать данную среду в условиях уже имеющихся производств ГНЦ ПМ возможно без изменения технологических процессов и дополнительных материальных затрат.
Пример 1.
Для приготовления питательной среды берут следующие навески компонентов, г/л:
панкреатический гидролизат рыбной муки - 12,0
экстракт пекарных дрожжей - 1,0
сорбитол - 10,0
натрия хлорид - 3,4
натрия сульфит - 0,8
натрия фосфат - 0,5
фуксин основной - 0,2
агар микробиологический - 10,0
дистиллированная вода - остальное
Навески тщательно перемешивают в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения и кипятят в течение 2-3 мин до полного растворения агара. Охлаждают до 45-50oС и разливают в чашки Петри слоем 5-7 мм. Перед посевом чашки со средой подсушивают в течение 30 мин при комнатной температуре.
Эффективность среды проверяли на следующих тест-штаммах: Е. coli 0157:Н7 (NN 904, 1282, 120, 212, 214); Е. coli 3912/41 (055:K59); Shigella dysenteriae 1 1362; Salmonella paratyphi A, B; Salmonella typhimurium 79; S. aureus Wood-46; S. faecalis.
Микробную взвесь каждого из тест-штамма, приготовленного в стерильном 0,9%-ном растворе хлорида натрия с концентрацией, соответствующей 10 единицам по стандарту мутности путем десятикратных разведений доводили до концентрации 100 м.к./мл. На чашку Петри со средой засевали по 0,1 мл микробной взвеси каждого из тест-штамма из разведения с концентрацией 100 м.к./мл. Посевы инкубировали при температуре (37±1)oC в течение 18-20 ч. Учет результатов проводили визуально. Через 18-20 ч культивирования колонии тест-штамма Е. coli 0157:Н7 были бесцветные, круглые, диаметром 1,5-2,0 мм; колонии тест-штаммов Е. coli 3912/41 (055:K59), Salmonella paratyphi А, В, Salmonella typhimurium 79 - малиновые, с металлическим блеском, круглые, ровные, диаметром 1,5-2,5 мм, колонии тест-штамма Shigella dysenteriae 1 1362 - розовые, мелкие, круглые, диаметром до 1,0 мм. Рост S. aureus Wood-46 и S. faecalis полностью отсутствует.
Пример 2.
Для приготовления питательной среды берут следующие навески компонентов, г/л:
панкреатический гидролизат рыбной муки - 10,0
экстракт пекарных дрожжей - 0,8
сорбитол - 8,0
натрия хлорид - 3,0
натрия сульфит - 0,75
натрия фосфат - 0,45
фуксин основной - 0,18
агар микробиологический - 8,0
дистиллированная вода - остальное
Приготовление и биологический контроль среды проводили в соответствии с примером 1. Результаты контроля представлены в таблице.
Пример 3.
Для приготовления питательной среды берут следующие навески компонентов, г/л:
панкреатический гидролизат рыбной муки - 14,0
экстракт пекарных дрожжей - 1,2
сорбитол - 12,0
натрия хлорид - 4,0
натрия сульфит - 0,85
натрия фосфат - 0,55
фуксин основной - 0,22
агар микробиологический - 12,0
дистиллированная вода - остальное
Приготовление и биологический контроль среды проводили в соответствии с примером 1. Результаты контроля представлены в таблице.
Из таблицы видно, что предлагаемая питательная среда обладает хорошими ростовыми свойствами, высокой точностью дифференциации штаммов серогруппы Е. coli 0157:Н7 от других энтеробактерий, подавляет рост стафилококка и стрептококка.
Нарушение количественного соотношения компонентов среды ведет к резкому ухудшению показателей качества предложенной среды и затрудняет дифференциацию.
Таким образом, по сравнению со средой-прототипом предлагаемая среда имеет ряд преимуществ:
не содержит дорогостоящих мясных и казеиновых переваров и экстрактов;
улучшает дифференциацию за счет появления металлического блеска колоний;
проста в приготовлении: не требует автоклавирования, достаточно 3 минут кипячения;
возможно применение в полевых условиях;
не меняет стереотипов работы диагностических лабораторий практического здравоохранения.
Источники информации принятые во внимание
1. Difco, Laboratories PO BOX 331058 Detroit Mi 48232-7058 USA, 1992, р. 3.
2. BioLife Manual, Second edition, printed in Italy, by INGRAF, Milan, 1991, p. 88.
3. Microbiology Manual, Merck, 1996, p. 316.

Claims (1)

  1. Питательная среда для выделения возбудителя гемморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом, содержащая источник азотного питания, сорбитол, натрия хлорид, краситель, агар микробиологический, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что в качестве источника азотного питания содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, в качестве красителя - фуксин основной и дополнительно содержит экстракт пекарных дрожжей, натрия сульфит и натрия фосфат при следующем соотношении компонентов, г/л:
    Панкреатический гидролизат рыбной муки - 10,0 - 14,0
    Экстракт пекарных дрожжей - 0,8 - 1,2
    Сорбитол - 8,0 - 12,0
    Натрия хлорид - 3,0 - 4,0
    Натрия сульфит - 0,75 - 0,85
    Натрия фосфат - 0,45 - 0,55
    Фуксин основной - 0,18 - 0,22
    Агар микробиологический - 8,0 - 12,0
    Дистиллированная вода - Остальное
RU97118081/13A 1997-10-31 1997-10-31 Питательная среда для выделения возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом, вызываемого кишечной палочкой 0157:н7 (сорбитол e.coli 0157:н7агар) RU2139343C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU97118081/13A RU2139343C1 (ru) 1997-10-31 1997-10-31 Питательная среда для выделения возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом, вызываемого кишечной палочкой 0157:н7 (сорбитол e.coli 0157:н7агар)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU97118081/13A RU2139343C1 (ru) 1997-10-31 1997-10-31 Питательная среда для выделения возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом, вызываемого кишечной палочкой 0157:н7 (сорбитол e.coli 0157:н7агар)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU97118081A RU97118081A (ru) 1999-07-20
RU2139343C1 true RU2139343C1 (ru) 1999-10-10

Family

ID=20198603

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU97118081/13A RU2139343C1 (ru) 1997-10-31 1997-10-31 Питательная среда для выделения возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом, вызываемого кишечной палочкой 0157:н7 (сорбитол e.coli 0157:н7агар)

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2139343C1 (ru)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2189253C1 (ru) * 2001-04-09 2002-09-20 Государственный научный центр прикладной микробиологии Диагностикум для идентификации escherichia coli o157 : h7 и способ его получения
RU2273661C2 (ru) * 2004-02-20 2006-04-10 Кубанский государственный аграрный университет Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157
RU2283348C1 (ru) * 2005-01-21 2006-09-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации Питательная среда для обнаружения и предварительной идентификации escherichia coli
RU2340676C2 (ru) * 2006-11-27 2008-12-10 Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ) Способ выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки e. coli o157:h7 в биологическом материале от животных
RU2425877C1 (ru) * 2010-02-26 2011-08-10 Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФГУН ГНЦ ПМБ) ШТАММ БАКТЕРИОФАГА Escherichia coli V32 ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ Escherichia coli СЕРОГРУППЫ О157
RU2433185C2 (ru) * 2004-03-11 2011-11-10 Дженентек, Инк. Способ получения полипептидов

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Mac. Conkey Sorbitol MuG agar. B.: Biolife Manual, second edition, printed in Italy, by INGRAF, Milan, 1991, p.88. *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2189253C1 (ru) * 2001-04-09 2002-09-20 Государственный научный центр прикладной микробиологии Диагностикум для идентификации escherichia coli o157 : h7 и способ его получения
RU2273661C2 (ru) * 2004-02-20 2006-04-10 Кубанский государственный аграрный университет Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157
RU2433185C2 (ru) * 2004-03-11 2011-11-10 Дженентек, Инк. Способ получения полипептидов
RU2283348C1 (ru) * 2005-01-21 2006-09-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации Питательная среда для обнаружения и предварительной идентификации escherichia coli
RU2340676C2 (ru) * 2006-11-27 2008-12-10 Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ) Способ выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки e. coli o157:h7 в биологическом материале от животных
RU2425877C1 (ru) * 2010-02-26 2011-08-10 Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФГУН ГНЦ ПМБ) ШТАММ БАКТЕРИОФАГА Escherichia coli V32 ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ Escherichia coli СЕРОГРУППЫ О157

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Adesiyun et al. Antimicrobial resistance of Salmonella spp. and Escherichia coli isolated from table eggs
Glass et al. Fate of Escherichia coli O157: H7 as affected by pH or sodium chloride and in fermented, dry sausage
Ray Methods to detect stressed microorganisms
Scuderi et al. Foodborne outbreaks caused by Salmonella in Italy, 1991–4
Procura et al. Prevalence, antimicrobial resistance profile and comparison of methods for the isolation of Salmonella in chicken liver from Argentina
Akhtar et al. Prevalence and antibiogram studies of Salmonella enteritidis isolated from human and poultry sources.
RU2139343C1 (ru) Питательная среда для выделения возбудителя геморрагического колита с гемолитико-уремическим синдромом, вызываемого кишечной палочкой 0157:н7 (сорбитол e.coli 0157:н7агар)
Kudaka et al. Characterization of Salmonella isolated in Okinawa, Japan
Kang et al. Biofilm formation and correlations with drug resistance in Mycoplasma synoviae
Mossel et al. Comparison of the effects of liquid medium repair and the incorporation of catalase in MacConkey type media on the recovery of Enterobacteriaceae sublethally stressed by freezing
Jay Production of lysozyme by staphylococci and its correlation with three other extracellular substances
Castellani et al. Fate of pathogenic bacteria in microcosms mimicking human body sites
Lamp et al. Influence of antibiotic and E5 monoclonal immunoglobulin M interactions on endotoxin release from Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa
Rampling et al. Nitrofurantoin resistance in isolates of Salmonella enteritidis phage type 4 from poultry and humans
Shandera et al. An outbreak of bacteremic Campylobacter jejuni infection
RU2530549C1 (ru) Селективная питательная среда для выделения псевдомонад, сухая
Lubis et al. Comparison of Antimicrobial Effectiveness of Orange and Lime’s Extracts on Aeromonas sobria and Aeromonas hydrophila. J Pure Appl Microbiol. 2023; 17 (4): 2431-2436. doi: 10.22207/JPAM. 17.4. 38 The Author (s) 2023
WO2007096375A1 (en) Rapid detection of antimicrobial drug residues
Sharifee et al. Evaluation of antibacterial effect of aqueous, hydro-alcoholic and alcoholic extracts of Morus nigra on gram-positive and gram-negative bacteria
McCRACKEN et al. Antibiotic residues and their recovery from animal tissues
RU2223313C2 (ru) Дифференциально-диагностическая среда для выделения листерий
Gebre Qualitative screening of antibiotic residues and identification of antibiotic resistant Salmonella from raw and ready to eat meat in Thailand
Tagg et al. Morphological changes in a susceptible strain of Streptococcus pyogenes treated with streptocin A
Bozatli et al. Determination of the changes in the gastric fluid endurance of O157 and non-O157 Shiga toxin-producing Escherichia coli during storage of experimentally produced beef frankfurter
Nakamura et al. The lecithinase (a toxin) activity of strains of Clostridium perfringens

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Invention patent assignment

Effective date: 20061115

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20151101