RU2273661C2 - Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157 - Google Patents
Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2273661C2 RU2273661C2 RU2004105096/13A RU2004105096A RU2273661C2 RU 2273661 C2 RU2273661 C2 RU 2273661C2 RU 2004105096/13 A RU2004105096/13 A RU 2004105096/13A RU 2004105096 A RU2004105096 A RU 2004105096A RU 2273661 C2 RU2273661 C2 RU 2273661C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- distilled water
- medium
- sorbitol
- agar
- sodium hydroxide
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для клинических и эпидемиологических исследований. Способ предусматривает смешивание, г/л: панкреатического гидролизата рыбной муки 22,0-27,0, натрия хлорида - 4,0-6,0, агара - 14,5-15,5, сорбита - 9,0-11,0 и дистиллированной воды - до 1 л. После нагревания и расплавления агара устанавливают рН 7,2+0,2 и в полученную среду добавляют 18-22 мл индикатора, состоящего из, г/л: кислого фуксина - 4,5-5,5, бромтимолового синего 3,5-4,5, гидроксида натрия (1%-ный раствор) - 150-170,0 мл и дистиллированная вода - до 1 л. При этом кислый фуксин предварительно растворяют в 1%-ном растворе гидроксида натрия и к полученному раствору добавляют бромтимоловый синий и дистиллированную воду. Изобретение обеспечивает повышение четкости изменения цвета колоний на дифференциальной среде, сокращение срока инкубации и более длительное хранение готовой для употребления среды.
Description
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для клинических и эпидемиологических исследований.
Известен способ приготовления питательней среды (Среды бактериологические для клинических и эпидемиологических исследований. Каталог. М., 2001. - С.54), которая готовится по следующей схеме: смешиваются панкреатический гидролизат казеина, панкреатический гидролизат мясной муки, желчная соль, натрий хлористый, сорбит, нейтральный красный, фиолетовый красный, агар, полученная смесь добавляется в дистиллированную воду, кипятится 2-3 мин до расплавления, фильтруется, охлаждается до температуры 45-50°С и разливается в чашки Петри. Среда используется в течение 24-48 ч после приготовления.
Также известен способ приготовления питательной среды (Энтеробактерии: Руководство для врачей / Авт. И.В.Голубева, В.А.Килессо, Б.С.Киселева и др.; Под ред. В.И.Покровского. - М., Медицина, 1985. - С.265 - прототип), включающий смешивание панкреатического гидролизата рыбного сырья, натрия хлорида, агара, сорбита, индикатора, растворение их в дистиллированной воде, нагрев смеси до кипячения, розлив на порции. Среда используется в день приготовления.
Известные способы приготовления питательных сред имеют ряд недостатков:
1) они являются сложными и для их приготовления необходимы дорогостоящие и дефицитные компоненты;
2) полученные среды чувствительны к свету и теплу и сами по себе могут изменять свой цвет, в результате чего в одинаково красный цвет окрашиваются как сорбитположительные, так и сорбитотрицательные колонии эшерихий, что ставит диагностику Е. coli 0157 недостоверной;
3) ввиду цветовой нестабильности готовые среды рекомендуется использовать в день приготовления;
4) бактерии со слабой ферментативной активностью могут ошибочно быть учтены как сорбит(-), т.к. для этих вариантов требуется более продолжительная инкубация, в процессе которой изменяется цвет самой среды.
Техническим решением задачи является обеспечение доступности, упрощение приготовления среды, повышение четкости изменения цвета колоний на дифференциальной среде, сокращение срока инкубации и более длительный срок хранения готовой для употребления среды.
Поставленная задача достигается тем, что в способе приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157, включающем смешивание панкреатического гидролизата рыбного сырья, натрия хлорида, агара, сорбита, индикатора, растворение их в дистиллированной воде, нагрев смеси до кипячения, розлив на порции, в качестве панкреатического гидролизата рыбного сырья используют панкреатический гидролизат кильки при следующем соотношении компонентов, г/л:
панкреатический гидролизат кильки | 22,0-27,0 |
натрия хлорид | 4,0-6,0 |
агар | 14,5-15,5 |
сорбит | 9,0-11,0 |
дистиллированная вода | остальное |
после нагревания и расплавления агара устанавливают рН 7,0-7,4, а индикатор, состоящий из кислого фуксина, бромтимолового синего, 1%-ного раствора гидроксида натрия и дистиллированной воды при следующем соотношении компонентов, г/л:
кислый фуксин | 4,5-5,5 |
бромтимоловый синий | 3,5-4,5 |
1%-ный раствор гидроксида натрия | 150,0-170,0 мл |
дистиллированная вода | остальное |
добавляют в полученную среду в количестве 18-22 мл, при этом предварительно кислый фуксин растворяют в 1 %-ном растворе гидроксида натрия и к полученному раствору добавляют бромтимоловый синий и дистиллированную воду.
Новизна заявленного предложения состоит в том, что разработан способ приготовления дифференциально-диагностической среды. Полученная данным способом среда стабильна при воздействии солнечного или электрического света, обладает четким дифференцирующим свойством, позволяющим достоверно различать сорбит(-) и сорбит(+) бактерии. Вследствие чего полученная среда может использоваться для первичной дифференциации Е.coli 0157 от других серотипов кишечной палочки, поскольку в 70-80% случаев является сорбит(-).
Способ приготовления питательной среды для выявления E.coli 0157 осуществляется следующим образом.
Первоначально сухие ингредиенты среды разводят в воде и доводят до кипения, фильтруют, после чего устанавливается рН 7,0-7,4, вводится индикатор, затем готовая среда разливается по флаконам и автоклавируется при 0,5 атм в течение 20 мин. Расплавленную и охлажденную до 45-50°С среду разливают в чашки Петри. Готовая среда имеет оливково-зеленый цвет, прозрачная на просвете. На данной среде штаммы кишечной палочки расщепляющие сорбит уже через 15-18 ч после посева, образуют непрозрачные желтого или оранжевого цвета колонии с изменением цвета среды вокруг колоний из оливково-зеленого в желто-оранжевую. Сорбит(-) E.coli (0157) к тому же сроку образует непрозрачные зеленовато-голубые колонии на фоне неизмененной, оливково-зеленого цвета среды.
Пример конкретного осуществления способа приготовления питательной среды для выявления E.coli 0157
25 г Панкреатического гидролизата кильки, 5 г натрия хлорида, 13,5 г агара, 10 г сорбита перемешивают, добавляют до 1000 мл дистиллированной воды и нагревают до кипения и расплавления агара. После чего полученную массу фильтруют, контролируют рН (7,0-7,4) и добавляют 20 мл предварительно приготовленного индикатора. Затем масса разливается по колбам или флаконам и автоклавируется при 0,5 атм в течение 20 мин.
Индикатор готовится по прописи: 0,5 г кислого фуксина растворяется в 16 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия, к полученному раствору добавляют 84 мл дистиллированной воды и 0,4 г бромтимолового синего.
Количественные значения ввода в среду сорбита, кислого фуксина и бромтимолового синего подобраны экспериментально. При вводе сорбита в количестве 0,5-0,7% - реакция нечеткая (слабо отличаются сорбит(+) колонии от сорбит(-), не происходит изменения окраски среды вокруг колоний). При применении кислого фуксина меньше 0,5% - все колонии Е.coli бледные и не отличаются друг от друга, а в случае увеличения свыше 0,5% - все колонии, напротив, приобретают окраску от светло-красного до интенсивно-красного цвета. При введении бромтимолового синего ниже 0,4% - среда имеет слегка зеленоватую окраску и не меняет своего цвета в процессе роста на ней колоний, поэтому разницы между Е.coli, усваивающими и не усваивающими сорбит, практически установить не удается. В случае добавления бромтимолового синего больше 0,4% - среда приобретает очень темный сине-зеленый цвет, колонии Е.coli, выросшие в данных условиях, трудно различаются.
Готовая для употребления среда может храниться без изменения своих свойств в течение 7 дней, в то время как среды, приготовленные по известным способам, - 1-2 дня, т.к. при более длительном хранении самопроизвольно меняют свой цвет.
Удовлетворительного результата добиваемся за счет оптимизации ввода в базовую питательную среду необходимого объема углевода (сорбита) и объема индикаторов, не влияющих на рост бактерий, но позволяющих дифференцировать выросшие колонии Е.coli по заданному признаку. Цвет полученной среды - оливково-зеленый. При положительной реакции (утилизация сорбита) - колонии окрашиваются в цвет в диапазоне от желтого до оранжевого (в зависимости от биохимической активности штамма), при этом среда вокруг них также желтеет. При отрицательной реакции, когда сорбит не ферментируется (E.coli 0157), - колонии окрашиваются в зеленовато-голубой цвет, среда вокруг них не изменяется, т.е. остается оливково-зеленого цвета. Кроме того, цветовую дифференциацию сорбит(+) от сорбит(-) кишечных палочек, осуществляемую предлагаемым способом, можно осуществлять уже спустя 15-18 ч после посева материала, в то время как известными способами только через 24-26 ч и даже более.
Claims (1)
- Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157, включающий смешивание панкреатического гидролизата рыбного сырья, натрия хлорида, агара, сорбита, индикатора, растворение их в дистиллированной воде, нагрев смеси до кипячения, розлив на порции, отличающийся тем, что в качестве панкреатического гидролизата рыбного сырья используют панкреатический гидролизат кильки при следующем соотношении компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат кильки 22,0-27,0 Натрия хлорид 4,0-6,0 Агар 14,5-15,5 Сорбит 9,0-11,0 Дистиллированная вода Остальное после нагревания и расплавления агара устанавливают рН 7,0-7,4, а индикатор, состоящий из кислого фуксина, бромтимолового синего, 1%-ного раствора гидроксида натрия и дистиллированной воды при следующем соотношении компонентов, г/л:Кислый фуксин 4,5-5,5 Бромтимоловый синий 3,5-4,5 1%-ный раствор гидроксида натрия 150,0-170,0 мл Дистиллированная вода Остальное добавляют в полученную среду в количестве 18-22 мл, при этом предварительно кислый фуксин растворяют в 1%-ном растворе гидроксида натрия и к полученному раствору добавляют бромтимоловый синий и дистиллированную воду.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004105096/13A RU2273661C2 (ru) | 2004-02-20 | 2004-02-20 | Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004105096/13A RU2273661C2 (ru) | 2004-02-20 | 2004-02-20 | Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2004105096A RU2004105096A (ru) | 2005-07-27 |
RU2273661C2 true RU2273661C2 (ru) | 2006-04-10 |
Family
ID=35843394
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004105096/13A RU2273661C2 (ru) | 2004-02-20 | 2004-02-20 | Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2273661C2 (ru) |
-
2004
- 2004-02-20 RU RU2004105096/13A patent/RU2273661C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Энтеробактерии. Руководство для врачей под ред. акад. АМН СССР В.И.ПОКРОВСКОГО. - М.: Медицина, 1985, с.265. СИДОРОВ М.А. и др. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. - М.: Колос, 1995, с.220-221. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2004105096A (ru) | 2005-07-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2342435C2 (ru) | Селективная культуральная среда для выделения и выявления видов рода streptococcus | |
CN100392096C (zh) | 双相罗氏培养基及其制备方法 | |
Ali et al. | Evaluation of siderophore produced by different clinical isolate Pseudomonas aeruginosa | |
CN102262110A (zh) | 一种指示微生物生长的显色颗粒及制备方法 | |
CN101914613A (zh) | 生化和酶反应试验筛检4种肠道病原菌的试剂盒和筛选方法 | |
RU2275429C2 (ru) | Питательная смесь и способ идентификации и раннего определения количества грамотрицательных микроорганизмов | |
US6130057A (en) | Method for differentiating microorganisms in a sample | |
RU2273661C2 (ru) | Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157 | |
RU2681285C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ ВИДА Brucella neotomae | |
CN101643713A (zh) | 军团菌选择性分离培养基 | |
AU2011298206B2 (en) | Use of a beta-glucosidase activator for detecting and/or identifying C. difficile | |
EP1088896A2 (en) | Chromogenic media containing blood or hemin | |
RU2387714C2 (ru) | Способ приготовления питательной среды для выявления синегнойной палочки | |
RU2825461C1 (ru) | Способ промышленного получения сухой питательной среды для выделения и культивирования Lactobacillus iners и других представителей вагинальной микробиоты | |
RU2415922C1 (ru) | Питательная среда для культивирования лактобактерий | |
WO2001081615A1 (es) | Composicion y metodo para la deteccion y el recuento temprano y diferenciado de microorganismos gram-negativos | |
Genta et al. | Biochemical identification of most frequently encountered bacteria that cause food spoilage | |
RU2233885C2 (ru) | Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл | |
CN109355226A (zh) | 用于军团菌的增菌培养和分离培养的双相培养基及其制备方法 | |
SU1703695A1 (ru) | Питательна среда дл дифференциации энтеропатогенных эшерихий | |
SU1751199A1 (ru) | Питательна среда дл выделени патогенных стафилококков | |
RU2041947C1 (ru) | Питательная среда для выделения дифтерийного микроба | |
SU1758076A1 (ru) | Питательна среда дл вы влени сальмонелл | |
SU1010129A1 (ru) | Питательна среда дл дифференциации флуоресцирующих псевдомонад от неферментирующих грамотрицательных бактерий | |
RU2101342C1 (ru) | Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060221 |