RU2133272C1 - Strain of bacterium lactobacillus fermentum 90-ts-4(21) used for preparing eubiotic preparation for using in gynecological practice - Google Patents
Strain of bacterium lactobacillus fermentum 90-ts-4(21) used for preparing eubiotic preparation for using in gynecological practice Download PDFInfo
- Publication number
- RU2133272C1 RU2133272C1 RU98110985A RU98110985A RU2133272C1 RU 2133272 C1 RU2133272 C1 RU 2133272C1 RU 98110985 A RU98110985 A RU 98110985A RU 98110985 A RU98110985 A RU 98110985A RU 2133272 C1 RU2133272 C1 RU 2133272C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- fermentum
- preparation
- eubiotic
- variant
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Настоящее изобретение относится к биотехнологии и касается создания усовершенствованного штамма L.fermentum 90-TS-4, который может быть использован для получения эубиотиков - бактерийных препаратов на основе живых культур микроорганизмов. The present invention relates to biotechnology and relates to the creation of an improved strain of L.fermentum 90-TS-4, which can be used to obtain eubiotics - bacterial preparations based on live cultures of microorganisms.
Эубиотические препараты на основе лактобактерий широко применяются для коррекции дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта и мочеполовой системы [Кашковская Н.В. и др. в кн. "Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция". Горький, 1988; Квасников Е.И., Нестеренко О.А. "Молочнокислые бактерии и пути их использования". М., 1975, с. 266-272]. В гинекологической практике возникновение дисбактериоза влагалища характеризуется резким снижением количества лактофлоры и бурным развитием условно- патогенных микроорганизмов, что приводит к развитию вагинозов и вагинитов, в том числе и кандидозов. В настоящее время вагинозы являются острой проблемой в гинекологии, в связи с большой частотой встречаемости в обшей популяции женщин до 65% и трудностью в лечении. Основным средством восстановления нормальной микрофлоры в этих случаях является применение эубиотических препаратов [Кира Е.Ф. с соавт. "Применение эубиотиков для лечения бактериального вагиноза". Ж. антиб. и химиотер., 1994, т.39, N 2-3, с.31-35]. Lactobacillus-based eubiotic preparations are widely used for the correction of dysbiotic conditions of the gastrointestinal tract and genitourinary system [N. Kashkovskaya and others in the book. "Human autoflora is normal and pathological and its correction." Gorky, 1988; Kvasnikov E.I., Nesterenko O.A. "Lactic acid bacteria and their use." M., 1975, p. 266-272]. In gynecological practice, the occurrence of vaginal dysbiosis is characterized by a sharp decrease in the number of lactoflora and rapid development of opportunistic microorganisms, which leads to the development of vaginosis and vaginitis, including candidiasis. Currently, vaginosis is an acute problem in gynecology, due to the high frequency of occurrence in the general population of women up to 65% and the difficulty in treatment. The main means of restoring normal microflora in these cases is the use of eubiotic drugs [Kira E.F. et al. "The use of eubiotics for the treatment of bacterial vaginosis." G. antib. and chemother., 1994, T. 39, N 2-3, S. 31-35].
В настоящее время в России наиболее широко применяются препараты лактобактерин (на основе L.fermentum 90-TS-4 и L.plantarum 8RA3) и ацилакт с использованием L.addophilus. [Анкирская А.С. "Бактериальный вагиноз". Ж. акуш. и гинекол. , 1995, N 6, с. 13-16]. Изначально эти препараты были предложены для лечения дисбактериоза кишечника, в дальнейшем их стали использовать в гинекологии. В практической гинекологии использование того или иного эубиотического препарата, как правило, осуществляется эмпирически. Currently, the most widely used drugs in Russia are lactobacterin (based on L.fermentum 90-TS-4 and L.plantarum 8RA3) and acylact using L.addophilus. [Ankirskaya A.S. "Bacterial vaginosis." J. Akush. and gynecol. , 1995, N 6, p. 13-16]. Initially, these drugs were proposed for the treatment of intestinal dysbiosis, later they began to be used in gynecology. In practical gynecology, the use of one or another eubiotic drug, as a rule, is carried out empirically.
Из всех эубиотиков, применяемых в гинекологии наиболее целесообразно использование лактобактерина на основе штамма L.fermentum 90-TS-4, поскольку этот штамм исходно выделен из влагалища женщины, обладает высокой активностью кислотообразования и способностью продуцировать лизоцим [Ленцнер А.А. с соавт. "О способности лактобацилл микрофлоры человека продуцировать лизоцим". Ж. микробиол., 1975, N 8, с. 77-81]. Of all the eubiotics used in gynecology, it is most advisable to use lactobacterin based on the L.fermentum 90-TS-4 strain, since this strain was originally isolated from the woman’s vagina, has high acid formation activity and the ability to produce lysozyme [Lenzner A.A. et al. "On the ability of human lactobacilli to produce lysozyme." J. microbiol., 1975, N 8, p. 77-81].
Однако при исследовании адгезивных свойств этот штамм был отнесен к среднеадгезивным [Брилис В. И. с соавт. "Адгезивные и гемагглютинационные свойства лактобацилл". Ж. микробиол., 1982, N 9, с. 75-78]. However, in the study of adhesive properties, this strain was classified as medium-adhesive [Brilis V.I. et al. "Adhesive and hemagglutination properties of lactobacilli." J. microbiol., 1982, N 9, p. 75-78].
Задачей изобретения является создание варианта производного штамму L. fermentum 90-TS-4, который обладает высокими адгезивными свойствами к вагинальному эпителию. The objective of the invention is to provide a variant of the derivative of the strain L. fermentum 90-TS-4, which has high adhesive properties to vaginal epithelium.
Технический результат состоит в получении варианта штамма L.fermentum 90-TS-4 с выраженной экспрессией адгезина, сходного с таковым у C.albicans. The technical result consists in obtaining a variant strain L.fermentum 90-TS-4 with pronounced expression of adhesin, similar to that of C. albicans.
Указанная цель достигается путем селекции варианта штамма L.fermentum 90-TS-4 по признаку агглютинации конканавалином-А из исходной популяции. This goal is achieved by selection of a variant strain L.fermentum 90-TS-4 on the basis of agglutination with concanavalin-A from the original population.
Штамм L. fermentum 90-TS-4(21) депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под регистрационным номером Б-7573. The strain L. fermentum 90-TS-4 (21) was deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms under registration number B-7573.
В основе патентуемого варианта штамма лежат следующие положения. Нами впервые показано, что конканавалин-А-зависимая субпопуляция отличается от конканавалин-А-независимой по активности адгезии на вагинальном эпителии, кроме того, экспрессия конканавалин-А-зависимого адгезина у выделенного варианта коррелирует с агглютинацией иммунной сывороткой. The patented variant of the strain is based on the following provisions. We have shown for the first time that concanavalin-A-dependent subpopulation is different from concanavalin-A-independent in adhesion activity on the vaginal epithelium, in addition, expression of concanavalin-A-dependent adhesin in the isolated variant correlates with agglutination by immune serum.
Сущность патентуемого решения. Известно, что некоторые лактобактерии агглютинируются в присутствии конканавалина-А. Этот признак характеризует наличие на их поверхности адгезина, сходного с аналогичным у C.albicans. [В кн. "Адгезины микроорганизмов". М., 1985]. Основываясь на этих данных, после рассева музейного штамма L. fermentum 90-TS-4 проводился отбор колоний по признаку агглютинации с конканавалином-А. Отобранные колонии кон-А-позитивных клонов оценивались в развернутой реакции агглютинации с конканавалином-А. Отобраны варианты, агглютинирующиеся с конканавалином-А в концентрации не ниже 10 мкг/мл. Из них отбирались культуры, агглютинирующиеся иммунной сывороткой в титре не ниже 1:2560. Из всех клонов был отобран вариант L. fermentum 90-TS-4(21), который агглютинируется конканавалином-А в концентрации 7 мкг/мл и иммунной сывороткой в титре 1:2560. Адгезивные свойства полученного варианта оценивали в модели адгезии на влагалищных эпителиальных клетках по следующей методике:
1. Эпителиальные клетки трижды отмывали 10 мл физиологического раствора, интенсивно ресуспендируя и центрифугируя при 1000 об/мин в течение 2 мин. Из отмытых клеток готовили стандартную взвесь 104 кл/мл.The essence of the patented solution. Some lactobacilli are known to agglutinate in the presence of concanavalin-A. This trait characterizes the presence of adhesin on their surface, similar to that of C. albicans. [In the book. "Adhesins of microorganisms." M., 1985]. Based on these data, after sieving the museum strain L. fermentum 90-TS-4, colonies were selected based on agglutination with concanavalin-A. Selected colonies of con-A-positive clones were evaluated in a detailed agglutination reaction with concanavalin-A. Variants agglutinating with concanavalin-A at a concentration of not less than 10 μg / ml were selected. Of these, cultures were selected that were agglutinated with immune serum in a titer of at least 1: 2560. Of all the clones, a variant of L. fermentum 90-TS-4 (21) was selected, which is agglutinated with concanavalin-A at a concentration of 7 μg / ml and immune serum in a titer of 1: 2560. The adhesive properties of the obtained variant were evaluated in the adhesion model on vaginal epithelial cells according to the following procedure:
1. Epithelial cells were washed three times with 10 ml of physiological saline, intensively resuspending and centrifuging at 1000 rpm for 2 minutes A standard suspension of 10 4 cells / ml was prepared from the washed cells.
2. Суточную культуру лактобактерий трижды отмывали 5 мл физиологического раствора и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 мин. Готовили взвесь лактобактерий соответствующую 5 ед. по оптическому стандарту мутности. 2. The daily culture of lactobacilli was washed three times with 5 ml of physiological saline and centrifuged at 4000 rpm for 10 minutes. A suspension of lactobacilli was prepared corresponding to 5 units. according to the optical turbidity standard.
3. К 1 мл взвеси эпителиальных клеток добавляли 1 мл взвеси лактобактерий и инкубировали 30 мин при 37oC на встряхивателе.3. To 1 ml of a suspension of epithelial cells was added 1 ml of a suspension of lactobacilli and incubated for 30 min at 37 o C on a shaker.
4. После инкубации клетки трижды отмывали 10 мл физиологического раствора и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 2 мин. 4. After incubation, the cells were washed three times with 10 ml of physiological saline and centrifuged at 1000 rpm for 2 minutes.
5. Готовили мазки, окрашенные генциановым фиолетовым в течение 1 мин и подсчитывали количество адгезировавшихся лактобактерий на 50 эпителиальных клетках. 5. Prepared smears stained with gentian violet for 1 min and counted the number of adherent lactobacilli on 50 epithelial cells.
Штамм имеет следующие характеристики. The strain has the following characteristics.
Морфология. Неподвижные грамположительные палочки длиной от 0,7 до 5 мкм, располагающиеся беспорядочными скоплениями и отдельными короткими цепочками. Morphology. Fixed gram-positive sticks with a length of 0.7 to 5 microns, located in random clusters and individual short chains.
Культурально-физиологические признаки. Cultural and physiological signs.
1. На плотной среде МРС-4 через 48 ч образуют выпуклые, беловатые, полупрозрачные с неровным краем колонии в диаметре 1-2 мм. 1. On a solid MPC-4 medium, after 48 hours, they form convex, whitish, translucent colonies with an uneven edge in a diameter of 1-2 mm.
2. На жидкой среде МРС-1 растет в виде гомогенного белого осадка на дне пробирки, возможно образование равномерной мути. 2. On a liquid medium, MPC-1 grows in the form of a homogeneous white precipitate at the bottom of the tube, the formation of a uniform turbidity.
3. Укол в МРС агаре дает хороший рост по всему уколу. 3. An injection in MRS agar gives good growth throughout the injection.
4. Отношение к температуре и pH среды. Оптимум роста при 37oС и pH среды 6,4.4. Relation to temperature and pH. The optimum growth at 37 o C and a pH of 6.4.
Биохимические свойства. Biochemical properties.
Хорошо ферментирует глюкозу с образованием кислоты и газа, разлагает мальтозу, лактозу, галактозу, мелибиозу, слабо сахарозу и маннозу. Сорбит, целлобиозу, рамнозу, салицин и маннит не сбраживает. It ferments glucose well with the formation of acid and gas, decomposes maltose, lactose, galactose, melibiosis, weakly sucrose and mannose. Sorbitol, cellobiose, rhamnose, salicin and mannitol does not ferment.
Серологические свойства. Serological properties.
Штамм в развернутой реакции агглютинации агглютинируется конканавалином-А в концентрации не менее 7 мкг/мл и иммунной сывороткой, полученной на штамм L.fermentum 90-TS-4 в титре не ниже 1:2560. The strain in the expanded agglutination reaction is agglutinated with concanavalin-A at a concentration of at least 7 μg / ml and the immune serum obtained for L.fermentum 90-TS-4 strain in a titer of at least 1: 2560.
По своим морфологическим, культурально-физиологическим и биохимическим свойствам штамм L.fermentum 90-TS-4(21) не отличается от исходного музейного штамма L.fermentum 90-TS-4. According to its morphological, cultural, physiological and biochemical properties, the strain L.fermentum 90-TS-4 (21) does not differ from the original museum strain L.fermentum 90-TS-4.
Изобретение иллюстрируется примером, который характеризует адгезивные свойства штамма. The invention is illustrated by an example that characterizes the adhesive properties of a strain.
Пример 1. Изучение адгезивных свойств разных субпопуляций штамма L.fermentum 90-TS-4 в реакции агглютинации с конканавалином-А и иммунной сывороткой. Example 1. The study of the adhesive properties of different subpopulations of the strain L.fermentum 90-TS-4 in the agglutination reaction with concanavalin-A and immune serum.
Развернутая реакция агглютинации ставилась в микробиологических планшетах для серологических реакций по стандартной методике с суточными культурами, выращенными на МРС-1. Исследуемые культуры: музейный вариант штамма L. fermentum 90-TS-4, конканавалин-А-позитивный вариант L.fermentum 90-TS-4(21) и конканавалин-А-независимый L.fermentum 90-TS-4(10). Результаты приведены в таблице 1. The expanded agglutination reaction was placed in microbiological plates for serological reactions according to the standard method with daily cultures grown on MPC-1. The studied cultures: a museum variant of the strain L. fermentum 90-TS-4, concanavalin-A-positive variant L.fermentum 90-TS-4 (21) and concanavalin-A-independent L.fermentum 90-TS-4 (10). The results are shown in table 1.
Пример 2. Изучение адгезивных свойств разных вариантов штамма L.fermentum 90-TS-4 на клетках, влагалищного эпителия. Example 2. The study of the adhesive properties of different variants of the strain L.fermentum 90-TS-4 on the cells of the vaginal epithelium.
Исследование адгезии на влагалищных эпителиальных клетках проводили по методике, описанной выше. В качестве исследуемых штаммов взяты кон-А-зависимый и кон-А-независимый варианты штамма L.fermentum 90-TS-4. Результаты приведены в таблице 2. The study of adhesion to vaginal epithelial cells was carried out according to the method described above. Con-A-dependent and con-A-independent variants of the strain L.fermentum 90-TS-4 were taken as the studied strains. The results are shown in table 2.
Приведенные в таблице 2 данные показывают, что кон-А-зависимый вариант L.fermentum 90-TS-4(21) является более высокоадгезивным. The data in table 2 show that the con-A-dependent variant L.fermentum 90-TS-4 (21) is more highly adhesive.
Промышленная применимость. Свойства штамма L.fermentum 90-TS-4(21) стабильны и не меняются при хранении и в процессе культивирования. При изучении динамики роста исходного штамма и предлагаемого варианта показано, что L. fermentum 90-TS-4(21) является более продуктивным: обладает высокой скоростью роста с большим накоплением биомассы по сравнению с исходным музейным вариантом. Industrial applicability. The properties of the strain L.fermentum 90-TS-4 (21) are stable and do not change during storage and during cultivation. When studying the growth dynamics of the initial strain and the proposed option, it was shown that L. fermentum 90-TS-4 (21) is more productive: it has a high growth rate with a large biomass accumulation in comparison with the original museum variant.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98110985A RU2133272C1 (en) | 1998-06-11 | 1998-06-11 | Strain of bacterium lactobacillus fermentum 90-ts-4(21) used for preparing eubiotic preparation for using in gynecological practice |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98110985A RU2133272C1 (en) | 1998-06-11 | 1998-06-11 | Strain of bacterium lactobacillus fermentum 90-ts-4(21) used for preparing eubiotic preparation for using in gynecological practice |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2133272C1 true RU2133272C1 (en) | 1999-07-20 |
Family
ID=20207045
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98110985A RU2133272C1 (en) | 1998-06-11 | 1998-06-11 | Strain of bacterium lactobacillus fermentum 90-ts-4(21) used for preparing eubiotic preparation for using in gynecological practice |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2133272C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7244424B2 (en) | 2001-06-29 | 2007-07-17 | University Of Tartu | Strain of micro-organism Lactobacillus fermentum ME-3 as novel anti-microbiol and anti-oxidative probiotic |
-
1998
- 1998-06-11 RU RU98110985A patent/RU2133272C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ленцнер А.А. и др. О способности лактобацилл микрофлоры человека продуцировать лизоцим. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - М.: Медицина, 1975, N8, c.77-81. Брилис В.И. и др. Адгезивные и гемагглютинационные свойства лактобацтилл. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - М.: Медицина, 1982, N9, c.75-78. Анкирская А.С. Бактериальный вагиноз. Акушерство и гинекология. - М.: Медицина, 1995, N6, c.13-16. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7244424B2 (en) | 2001-06-29 | 2007-07-17 | University Of Tartu | Strain of micro-organism Lactobacillus fermentum ME-3 as novel anti-microbiol and anti-oxidative probiotic |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108004187A (en) | A kind of lactobacillus gasseri and its application for being used to prepare vagina antibacterial medicines | |
| CN107299065A (en) | A kind of Lactobacillus plantarum and its application for preparing vagina antibacterial medicines | |
| CN108004188A (en) | A kind of Lactobacillus rhamnosus and its application for being used to prepare vagina antibacterial medicines | |
| CN107267415A (en) | A kind of lactobacillus reuteri and its application for preparing vagina antibacterial medicines | |
| CN109266584A (en) | One plant of cilium type Lactobacillus rhamnosus and application thereof with mast cell activity adjustment effect | |
| Roach et al. | Lactobacilli isolated from the stomach of conventional mice | |
| Amies et al. | A description of Haemophilus vaginalis and its L forms | |
| Panessa-Warren et al. | Exosporial membrane plasticity of Clostridium sporogenes and Clostridium difficile | |
| RU2133272C1 (en) | Strain of bacterium lactobacillus fermentum 90-ts-4(21) used for preparing eubiotic preparation for using in gynecological practice | |
| CN116606766A (en) | Preparation method and application of lactobacillus amylovorus extracellular vesicles | |
| RU2482177C1 (en) | Lactobacillus plantarum BACTERIA STRAIN HAVING WIDE RANGE OF ANTAGONISTIC ACTIVITY WITH RESPECT TO PATHOGENS AND OPPORTUNISTIC PATHOGENS | |
| RU2298032C2 (en) | Bacillus subtilis 1719 BACTERIUM STRAIN AS PRODUCER OF ANTAGONISTICALLY ACTIVE BIOMASS IN RELATES TO PATHOGENIC MICROORGANISMS, AS WELL AS PROTEOLYTIC, AMYLOLYTIC, AND LIPOLYTIC ENZYMES | |
| RU2148640C1 (en) | Strain of bacterium bifidobacterium adolescentis 2f1 for preparing bacterial preparations normalizing microflora in vagina microbiocenosis disorder | |
| GB2108384A (en) | Immunobiological preparations and processes for their production | |
| RU2151606C1 (en) | Strain of bacterium bifidobacterium longum z4 for preparing bacterial preparations normalizing microflora in vagina microbiocenosis disorder | |
| SU1661214A1 (en) | Strain of bacteria serratia marcescens- a producer of endonuclease | |
| JP6190512B1 (en) | Method for producing lactic acid bacteria that control M cells | |
| SU747887A1 (en) | Lactobacillus acidophilus 574 strain as bacteriocid a574 producent | |
| JP2630391B2 (en) | A new strain belonging to Lactobacillus and method for its isolation and propagation | |
| Smith | Bacteria with their coats off: spheroplasts, protoplasts and L-forms | |
| RU2704423C1 (en) | Bacterial strain bifidobacterium longum icis-505 - producer of biologically active substances possessing antipersistent activity with respect to opportunistic and pathogenic bacteria and yeast fungi | |
| KR20040024739A (en) | Bifidobacterium infantis MAEIL-K9 strain and health-promoting food containing the same | |
| RU2083663C1 (en) | STRAIN OF BACTERIUM KLEBSIELLA PNEUMONIAE-232 - A PRODUCER OF β --HEMOLYSIN | |
| CN117264842A (en) | Bacillus subtilis AJQ03 separated from eel intestinal tracts and application thereof | |
| RU2482176C1 (en) | Lactobacillus rhamnosus BACTERIA STRAIN HAVING WIDE RANGE OF ANTAGONISTIC ACTIVITY WITH RESPECT TO PATHOGENS AND OPPORTUNISTIC PATHOGENS |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080612 |