RU2126043C1 - Method of preparing autochthon microorganism strains bank for recovery of human intestine microbiocenosis - Google Patents
Method of preparing autochthon microorganism strains bank for recovery of human intestine microbiocenosis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2126043C1 RU2126043C1 RU97112279A RU97112279A RU2126043C1 RU 2126043 C1 RU2126043 C1 RU 2126043C1 RU 97112279 A RU97112279 A RU 97112279A RU 97112279 A RU97112279 A RU 97112279A RU 2126043 C1 RU2126043 C1 RU 2126043C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- species
- samples
- strains
- bifidobacterium
- lactobacillus
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области микробиологии и медицины и может быть использовано для профилактики и лечения дисбактериоза кишечника человека или животного. The invention relates to the field of microbiology and medicine and can be used for the prevention and treatment of human or animal intestinal dysbiosis.
Полный спектр нормальной кишечной микрофлоры является необходимым звеном во многих метаболических реакциях макроорганизма и, прежде всего, предотвращает развитие патогенных и условно патогенных микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте. Микрофлора участвует в осуществлении печеночно-кишечной циркуляции важнейших компонентов желчи; ферменты флоры в дистальной части кишечника инактивируют биологически активные соединения (биогенные амины), выделяющиеся организмом с пищеварительными соками; кишечная флора утилизирует непереваренные пищевые вещества с образованием аминов, органических кислот и других соединений, влияющих на обмен веществ в организме. Одной из важнейших функций нормальной кишечной микрофлоры является ее участие в формировании иммунологической реактивности макроорганизма. В результате антигенной стимуляции (аутофлорой), прежде всего кишечными бактериями, в организме создается общий пул иммуноглобулинов. The full spectrum of normal intestinal microflora is a necessary link in many metabolic reactions of a macroorganism and, first of all, prevents the development of pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms in the gastrointestinal tract. Microflora is involved in the implementation of the hepatic-intestinal circulation of the most important components of bile; enzymes of the flora in the distal intestine inactivate biologically active compounds (biogenic amines) secreted by the body with digestive juices; intestinal flora utilizes undigested food substances with the formation of amines, organic acids and other compounds that affect the metabolism in the body. One of the most important functions of normal intestinal microflora is its participation in the formation of the immunological reactivity of a macroorganism. As a result of antigenic stimulation (autoflora), primarily by intestinal bacteria, a common pool of immunoglobulins is created in the body.
Известен способ профилактики дисбактериоза кишечника новорожденных детей, включающий введение ребенку через 30-120 мин после рождения орально, однократно штаммы бифидобактерий в дозе 108 - 109 микробных тел, полученных от матери (авт. св. 1743607, кл. А 61 К 35/74, опубл. 1992). Такая методика эффективна для профилактики дисбактериоза кишечника ребенка, рожденного путем кесарева сечения [1].A known method for the prevention of intestinal dysbiosis in newborns, including the introduction of a baby 30-120 minutes after birth orally, once the strains of bifidobacteria at a dose of 10 8 - 10 9 microbial bodies received from the mother (ed. St. 1743607, class A 61 K 35 / 74, publ. 1992). This technique is effective for the prevention of intestinal dysbiosis in a child born by caesarean section [1].
Однако для профилактики дисбактериоза используется не весь спектр здоровой микрофлоры кишечника, а только монокультура бифидобактерий. Кроме того, указанная культура бактерий не адаптирована к кишечнику ребенка, может там не прижиться, так как взята не из кишечника этого ребенка (т.е. не является аутоштаммом), вследствие чего данный метод профилактики недостаточно эффективен. При оральном введении бактерий часть их гибнет при прохождении различных отделов желудочно-кишечного тракта. However, for the prevention of dysbiosis, not the whole spectrum of healthy intestinal microflora is used, but only a monoculture of bifidobacteria. In addition, the indicated bacterial culture is not adapted to the intestines of the child; it may not take root there, since it was not taken from the intestines of this child (i.e., it is not an auto-strain), as a result of which this method of prevention is not effective enough. With the oral administration of bacteria, some of them die during the passage of various sections of the gastrointestinal tract.
Известен способ получения и применения комплексного бактерийного препарата для коррекции дисбиоза кишечника, включающий выделение из организма человека и наработку биомассы аутоштамма лактобактерий или кишечной палочки с последующим соединением микроорганизма с основой. В качестве основы используют активированный уголь, поверхность частиц которого соединяют с микробными клетками в концентрации на 1 мм2 2,1•103 - 105. При этом активированный уголь используют в виде порошка с размером частиц менее 30 мкм. Полученный препарат вводят орально в организм человека три раза в течение нескольких суток в дозе (0,3-1,0)•102 микр. кл. /г (патент РФ 2017486, кл. А 61 К 31/00, опубл. 1994) [2].There is a method of producing and using a complex bacterial preparation for the correction of intestinal dysbiosis, including the isolation of lactobacilli or E. coli autostrain from the human body and the production of biomass, followed by the connection of the microorganism with the base. Activated carbon is used as a base, the particle surface of which is connected with microbial cells at a concentration of 1 mm 2 2.1 • 10 3 - 10 5 . In this case, activated carbon is used in the form of a powder with a particle size of less than 30 microns. The resulting drug is administered orally into the human body three times for several days at a dose of (0.3-1.0) • 10 2 mic. class / g (RF patent 2017486, class A 61 K 31/00, publ. 1994) [2].
Однако для профилактики дисбактериоза используется не весь спектр здоровой микрофлоры кишечника человека, а только монокультура лактобактерий или кишечной палочки, вследствие чего снижается эффективность профилактики дисбактериоза. However, for the prevention of dysbacteriosis, not the whole spectrum of healthy microflora of the human intestine is used, but only a monoculture of lactobacilli or Escherichia coli, which reduces the effectiveness of the prevention of dysbiosis.
Известен способ лечения дисбактериоза кишечника человека, включающий отбор проб фекалий из организма, титрование исследуемого материала стерильным физиологическим раствором, засев его из различных разведений на питательные среды, идентификацию, отбор аутоштаммов нормальной кишечной микрофлоры, содержащей бифидо- и лактобактерии, раздельную наработку биомассы каждого вида бактерий с последующим их смешиванием, кратковременным хранением при температуре +4-7oС и периодическим оральным введением смеси указанных аутоштаммов в кишечник человека в процессе лечения дисбактериоза после проведения антибиотикотерапии (авт.св. 1286212, кл. А 61 К 35/74, опубл. 1987) [3].A known method of treating human intestinal dysbacteriosis, including sampling feces from the body, titration of the test material with sterile physiological saline, inoculating it from various dilutions on nutrient media, identification, selection of auto-strains of normal intestinal microflora containing bifidobacteria and lactobacilli, separate production of biomass of each type of bacteria with their subsequent mixing, short-term storage at a temperature of + 4-7 o C and periodic oral administration of a mixture of these auto-strains in the intestine person in the treatment of dysbiosis after antibiotic therapy (ed. St. 1286212, class A 61 K 35/74, publ. 1987) [3].
Однако для лечения дисбактериоза используется не весь спектр здоровой микрофлоры кишечника человека, а только аутоштаммы бифидо- и лактобактерий, вследствие чего снижается эффективность лечения дисбактериоза. Кроме того, отбор аутоштаммов производится перед проведением антибиотикотерапии, когда нормальная часть (здоровая) микрофлоры человека находится в угнетенном состоянии. При оральном введении бактерий часть их гибнет при прохождении различных отделов желудочно-кишечного тракта, что также снижает эффективность лечения дисбактериоза и увеличивает сроки выздоровления организма. However, for the treatment of dysbacteriosis, not the entire spectrum of healthy microflora of the human intestine is used, but only autostrain of bifidobacteria and lactobacilli, as a result of which the effectiveness of the treatment of dysbacteriosis is reduced. In addition, the selection of auto-strains is carried out before antibiotic therapy, when the normal part (healthy) of the microflora of a person is in a depressed state. With the oral administration of bacteria, some of them die during the passage of various parts of the gastrointestinal tract, which also reduces the effectiveness of the treatment of dysbiosis and increases the healing time of the body.
Из источников научно-технической и патентной информации не известна постановка задачи, связанная с созданием и использованием банка аутохтонных штаммов микроорганизмов для восстановления кишечного микробиоценоза человека. From the sources of scientific, technical and patent information, the problem statement related to the creation and use of a bank of autochthonous strains of microorganisms for the restoration of human intestinal microbiocenosis is not known.
Таким образом, разработка способа получения банка аутохтонных штаммов микроорганизмов для восстановления кишечного микробиоценоза человека является новой задачей, а ее решение, предлагаемое в настоящих материалах заявки, не известно из современного уровня техники (за исключением способов отбора и кратковременного хранения отдельных видов аутоштаммов микроорганизмов, преимущественно бифидо- и/или лактобактерий [2,3] для лечения дисбактериозов различной этиологии), не имеет прототипа и соответствует всем критериям охраноспособности изобретения. Thus, the development of a method for producing a bank of autochthonous strains of microorganisms for the restoration of human intestinal microbiocenosis is a new task, and its solution proposed in the present application materials is not known from the current level of technology (with the exception of methods for the selection and short-term storage of certain types of auto-strains of microorganisms, mainly bifido - and / or lactobacilli [2,3] for the treatment of dysbacterioses of various etiologies), does not have a prototype and meets all the criteria for protection and gaining.
Задачей предлагаемого изобретения является создание впервые способа получения банка аутохтонных штаммов микроорганизмов, который позволил бы получать более стойкий и выраженный лечебно-профилактический эффект при его применении путем одновременного воздействия на различные звенья нарушенного бактериоценоза кишечника человека за счет использования более полного спектра нормальной (здоровой) аутохтонной микрофлоры кишечника. The objective of the invention is to create for the first time a method of obtaining a bank of autochthonous strains of microorganisms, which would make it possible to obtain a more persistent and pronounced therapeutic and prophylactic effect when it is applied by simultaneously affecting various parts of the disturbed bacteriocenosis of the human intestine by using a more complete spectrum of normal (healthy) autochthonous microflora intestines.
Указанная задача решается тем, что в способе получения банка аутохтонных штаммов микроорганизмов для восстановления кишечного микробиоценоза человека, согласно изобретению, производят отбор проб фекалий из одного и того же организма в период его клинически здорового состояния, начиная с 7-15 дня после рождения и в течение всей жизни периодически не чаще 1 раза в год, из проб выделяют и идентифицируют аутоштаммы нормальной кишечной микрофлоры, биомассу каждого вида бактерий раздельно нарабатывают на селективных питательных средах до титра не менее 103 - 109 кл/мл, полученные биомассы объединяют и добавляют стабилизирующий состав, полученную смесь разделяют на образцы, каждый из которых консервируют, хранят в течение жизни человека с периодическим контролем биотитра.This problem is solved by the fact that in the method of obtaining a bank of autochthonous strains of microorganisms for the restoration of human intestinal microbiocenosis, according to the invention, feces are sampled from the same organism during its clinically healthy state, starting from 7-15 days after birth and during throughout life, periodically no more than 1 time per year, autostrains of normal intestinal microflora are isolated and identified from the samples, the biomass of each bacterial species is separately produced on selective nutrient media up to the titer and not less than 10 3 - 10 9 cells / ml, the obtained biomass is combined and the stabilizing composition is added, the resulting mixture is divided into samples, each of which is canned, stored during the life of a person with periodic monitoring of the biotiter.
После 7-15 дня после рождения человека заканчивается формирование его кишечной микрофлоры. Использование банка аутохтонных штаммов микроорганизмов, включающего весь спектр нормальной кишечной аутомикрофлоры человека, обеспечивает комплексное биологическое действие (при введении смеси штаммов в кишечник), направленное на ускорение нормализации микробиоценоза. After 7-15 days after the birth of a person, the formation of his intestinal microflora ends. The use of a bank of autochthonous strains of microorganisms, which includes the entire spectrum of normal human intestinal auto-microflora, provides a complex biological effect (with the introduction of a mixture of strains into the intestine) aimed at accelerating the normalization of microbiocenosis.
В грудном возрасте до 1 года в качестве нормальной кишечной микрофлоры выделяют преимущественно бифидобактерии вида Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium brevis, Bifidobacterium infantis и лактобактерии вида Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti. In infancy up to 1 year, mainly bifidobacteria of the species Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium brevis, Bifidobacterium infantis and lactobacilli of the species Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti are mainly isolated as normal intestinal microflora.
В возрасте старше 1 года в качестве нормальной кишечной микрофлоры выделяют преимущественно бифидобактерии вида Bifidobacterium longum, Bifidobacterium adolescentis, лактобактерии вида Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti, Lactobacillus plantarum, штаммы бактерий Escherichia coli и молочнокислые стрептококки преимущественно вида Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Streptococcus avium, Streptococcus salivarius и Streptococcus bovis. Bifidobacterium longum, Bifidobacterium adolescentis, lactobacillus Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti, Lactobacillus plantarum, Streptocococcus lactobococcus Streptococcus, Streptococcus bacteria, Streptococcus bacteria, Streptococcus bacteria salivarius and Streptococcus bovis.
Для создания банка аутохтонных штаммов микроорганизмов необходимо иметь образцы штаммов разного периода жизни человека для получения препаратов более широкого спектра и комплексного действия. To create a bank of autochthonous strains of microorganisms, it is necessary to have samples of strains of different periods of a person's life in order to obtain preparations of a wider spectrum and complex action.
Объединение биомассы аутоштаммов каждого вида осуществляют в равных соотношениях. При этом обеспечивается снижение потерь биологической активности отдельных штаммов в смеси в процессе консервации и хранения. Combining the biomass of autostrains of each species is carried out in equal proportions. This ensures a decrease in the loss of biological activity of individual strains in the mixture during conservation and storage.
В качестве стабилизирующего состава используют сахарозо-желатиновую или сахарозо-крахмальную защитную среду в количестве 5-10 мас.% от биомассы смеси аутоштаммов. При снижении концентрации стабилизатора в биомассе значительно увеличиваются потери биологической активности в процессе ее сушки и при последующем хранении. As a stabilizing composition, a sucrose-gelatin or sucrose-starch protective medium is used in an amount of 5-10 wt.% Of the biomass of the mixture of auto-strains. With a decrease in the concentration of stabilizer in biomass, the loss of biological activity during drying and subsequent storage increases significantly.
Консервацию полученных образцов смеси аутоштаммов производят лиофилизацией. Preservation of the obtained samples of the mixture of auto-strains is performed by lyophilization.
В процессе хранения после контроля биотитра дополнительно объединяют в равных соотношениях часть образцов аутоштаммов бактерий, выделенных из нормальной кишечной микрофлоры человека в разные периоды его жизни, вследствие чего повышается биологическая активность препарата и приживляемость аутобактерий в кишечнике человека. During storage, after controlling the biotitre, a portion of the samples of bacterial auto-strains isolated from the normal intestinal microflora of a person at different periods of his life is additionally combined in equal proportions, as a result of which the biological activity of the drug and the survival rate of autobacteria in the human intestine increase.
Использование всего спектра нормальной (здоровой) аутохтонной микрофлоры кишечника позволяет воздействовать на различные звенья нарушенного бактериоценоза кишечника в процессе лечения дисбактериоза или предотвратить нарушения бактериоценоза кишечника при профилактике указанного заболевания. The use of the entire spectrum of normal (healthy) autochthonous intestinal microflora allows you to act on various parts of the disturbed intestinal bacteriocenosis during the treatment of dysbiosis or to prevent intestinal bacteriocenosis disturbances in the prevention of this disease.
Технология приготовления банка образцов аутохтонных штаммов микроорганизмов приведена в примерах 1-4. The technology for preparing a bank of samples of autochthonous strains of microorganisms is shown in examples 1-4.
Пример 1. Для формирования банка аутохтонных штаммов микроорганизмов отбирают пробы фекалий человека не ранее чем на 7-15 день после его рождения. Исследуемый материал титруют стерильным физиологическим раствором, делая последовательно десятикратные разведения до 10-8. Из различных разведений указанный материал засевают на питательные среды Блаурокка, Сабура, Эндо, Калины, МРС-4, кровяной агар с полимиксином для определения исходных уровней кишечных палочек, лактобактерий, бифидобактерий, энтерококков, стафилококков и других бактерий с последующей идентификацией и отбором аутоштаммов нормальной кишечной микрофлоры, соответствующей грудному возрасту ребенка и содержащей бифидо- и лактобактерии. Через двое суток материал из изолированных колоний лактобактерий (Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti), выросших на среде МРС-4, а также из изолированных колоний бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium brevis, Bifidobacterium infantis), выросших на среде Блаурокка, вновь пересевают на соответствующие селективные питательные среды. Выросшие через двое суток после второго пассажа изолированные колонии бифидо- и лактобактерий пересевают (раздельно) соответственно на вышеуказанные питательные среды Блаурокка, МРС-4 и культивируют по стандартным методикам для получения биомассы микроорганизмов. Например, биомасса бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium brevis, Bifidobacterium infantis ) имеет титр не менее 109 кл/мл, биомасса лактобактерий (Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti) - 109 - 1010 кл/мл. Далее биомассу каждого вида аутохтонных штаммов микроорганизмов вводят в равных соотношениях в реактор и перемешивают для получения смеси. В полученную смесь добавляют сахарозо-желатиновую защитную среду (стабилизирующий состав) в количестве 5-10 % от объема смеси биомассы. Биомассу аутоштаммов разливают в ампулы и сушат стандартным методом лиофилизации с последующей герметизацией и хранением при температуре не выше минус 18oС для обеспечения сохранения активности препарата в течение длительного периода времени, например в течение периода жизни человека. Периодически (не реже 1 раза в год) контролируют (проверяют) биотитр одного или нескольких образцов банка аутоштаммов микроорганизмов путем пассажей на селективных питательных средах смеси аутоштамов и титрования стандартным методом каждого штамма. В случае снижения биотитра находящегося на хранении препарата весь объем сухой биомассы активируют путем пассажей на дифференцированной питательной среде до максимального увеличения биотитра. Далее в биомассу добавляют стабилизатор, разливают в ампулы и сушат методом лиофилизации и продолжают хранить при температуре не выше минус 18oС.Example 1. To form a bank of autochthonous strains of microorganisms, human feces are sampled no earlier than 7-15 days after his birth. The test material is titrated with sterile saline, making ten-fold dilutions in succession up to 10 -8 . From various dilutions, this material is seeded on nutrient media Blaurock, Sabur, Endo, Kalina, MRS-4, blood agar with polymyxin to determine the initial levels of colibacillus, lactobacilli, bifidobacteria, enterococci, staphylococci and other bacteria with subsequent identification and selection of normal intestinal autoenostomas microflora corresponding to the infant's age and containing bifidobacteria and lactobacilli. Two days later, the material from isolated colonies of lactobacilli (Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti) grown on MPC-4 medium, as well as from isolated colonies of bifidobacteria (Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium brevis, Bifidobacterium infantis) grown on a new breed, selectively nutrient media. Isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli, grown two days after the second passage, are subcultured (separately), respectively, on the above-mentioned nutrient media Blaurock, MPC-4 and cultivated according to standard methods for producing biomass of microorganisms. For example, the biomass of bifidobacteria (Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium brevis, Bifidobacterium infantis) has a titer of at least 10 9 cells / ml, the biomass of lactobacilli (Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti) - 10 9 - 10 10 cells / ml. Next, the biomass of each type of autochthonous strains of microorganisms is introduced in equal proportions into the reactor and mixed to obtain a mixture. A sucrose-gelatin protective medium (stabilizing composition) is added to the resulting mixture in an amount of 5-10% of the volume of the biomass mixture. Autostrain biomass is poured into ampoules and dried by the standard lyophilization method, followed by sealing and storage at a temperature not exceeding minus 18 o C to ensure that the drug remains active for a long period of time, for example, during a person’s life. Periodically (at least 1 time per year), the biotiter of one or several samples of the bank of autostrains of microorganisms is monitored (by passages on selective nutrient media of a mixture of autostams and titrated using the standard method of each strain). In the case of a decrease in the biotitre of the stored preparation, the entire volume of dry biomass is activated by passages on a differentiated nutrient medium to the maximum increase in biotitre. Next, a stabilizer is added to the biomass, poured into ampoules and dried by lyophilization and continued to be stored at a temperature not exceeding minus 18 o C.
Пример 2. Следующий отбор проб фекалий у этого же человека производят в возрасте 1-2 лет, т.е. после его грудного вскармливания, а затем в возрасте 4-5 лет и т. д. в течение всей жизни. Технология получения смеси биомассы аутоштаммов микроорганизмов аналогична примеру 1. Отличием является лишь то, что видовой состав нормальной кишечной микрофлоры у детей с увеличением возраста и у взрослых людей изменяется и стабилизируется численность представителей главной флоры - бифидобактерий на уровне 108 - 1011 микробных клеток в 1 г испражнений. Преобладающие у детей раннего возраста виды B. bifidum, B. brevis, B. infantis и другие вытесняются более распространенными у детей старшего возраста и взрослых видами: B. longum, B. adolescentis и др.Example 2. The following sampling of feces from the same person is performed at the age of 1-2 years, i.e. after breastfeeding, and then at the age of 4-5 years, etc. throughout life. The technology for producing a mixture of biomass of autostrain of microorganisms is similar to Example 1. The only difference is that the species composition of normal intestinal microflora in children with increasing age and in adults changes and the number of representatives of the main flora, bifidobacteria, stabilizes at 10 8 - 10 11 microbial cells in 1 g bowel movements. The species B. bifidum, B. brevis, B. infantis and others prevailing in young children are replaced by the more common species in older children and adults: B. longum, B. adolescentis, etc.
Исследуемый материал титруют стерильным физиологическим раствором, делая последовательно десятикратные разведения до 10-8. Из различных разведений указанный материал засевают на питательные среды Блаурокка, Сабура, Эндо, Калины, МРС-4, кровяной агар с полимиксином для определения исходных уровней кишечных палочек, лактобактерий, бифидобактерий, энтерококков, стафилококков и других бактерий с последующей идентификацией и отбором аутоштаммов нормальной кишечной микрофлоры, содержащей бифидо- и лактобактерии, кишечные палочки, молочнокислые стрептококки, молочнокислые палочки. Через двое суток материал, например из изолированных колоний лактобактерий (Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti, Lactobacillus plantarum), выросших на среде МРС-4, из изолированных колоний бифидобактерий (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium adolescentis), выросших на среде Блаурокка, из изолированных колоний энтерококков (Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Streptococcus avium, Streptococcus salivarius и Streptococcus bovis), выросших на среде Калина, из изолированных колоний Escherichia coli (кишечная палочка), выросшей на кровяном агаре с полимиксином, вновь пересевают на соответствующие селективные питательные среды. Выросшие через двое суток после второго пассажа изолированные колонии бифидо- и лактобактерий, энтерококков, кишечных палочек пересевают (раздельно) соответственно на вышеуказанные питательные среды Блаурокка, МРС-4, Калина, кровяной агар с полимиксином и культивируют по стандартным методикам для получения биомассы микроорганизмов. Например, биомасса бифидобактерий имеет титр не менее 109 кл/мл, биомасса лактобактерий 109 - 1010 кл/мл, биомасса Escherichia coli не менее 107 - 108 кл/мл, а биомасса Streptococcus faecium - не менее 109 кл/мл. Далее биомассу каждого вида аутохтонных штаммов микроорганизмов вводят в равных соотношениях в реактор и перемешивают для получения смеси. В качестве стабилизирующего состава может быть использована сахарозо-крахмальная защитная среда, которую вводят в биомассу аутоштаммов в количестве 5-10% от объема последней. Методы консервации, хранения и контроля биотитра смеси аутоштаммов аналогичны примеру 1. Образцы смеси аутоштаммов также хранят в течение всей жизни этого человека.The test material is titrated with sterile saline, making ten-fold dilutions in succession up to 10 -8 . From various dilutions, this material is seeded on nutrient media Blaurock, Sabur, Endo, Kalina, MRS-4, blood agar with polymyxin to determine the initial levels of colibacillus, lactobacilli, bifidobacteria, enterococci, staphylococci and other bacteria with subsequent identification and selection of normal intestinal autoenostomas microflora containing bifidobacteria and lactobacilli, Escherichia coli, lactic streptococci, lactic acid bacilli. After two days, the material, for example, from isolated colonies of lactobacilli (Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti, Lactobacillus plantarum) grown on MPC-4 medium, from isolated colonies of bifidobacteria (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium adolescentis), grown from chickens, Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Streptococcus avium, Streptococcus salivarius, and Streptococcus bovis) grown on Kalina medium from isolated colonies of Escherichia coli (E. coli) grown on blood agar with polymyxin are again subcultured on appropriate selective culture media. Isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli, enterococci, Escherichia coli, grown two days after the second passage, are transplanted (separately), respectively, onto the above nutrient media Blaurock, MPC-4, Kalina, blood agar with polymyxin and cultured according to standard methods for obtaining biomass of microorganisms. For example, the biomass of bifidobacteria has a titer of at least 10 9 cells / ml, the biomass of lactobacilli 10 9 - 10 10 cells / ml, the biomass of Escherichia coli is not less than 10 7 - 10 8 cells / ml, and the biomass of Streptococcus faecium is not less than 10 9 cells / ml Next, the biomass of each type of autochthonous strains of microorganisms is introduced in equal proportions into the reactor and mixed to obtain a mixture. As a stabilizing composition can be used sucrose-starch protective environment, which is introduced into the biomass of auto-strains in the amount of 5-10% of the volume of the latter. The methods of preservation, storage and control of the biotiter of the mixture of auto-strains are similar to example 1. Samples of the mixture of auto-strains are also stored throughout this person's life.
Пример 3. Дополнительно у этого же человека периодически (не чаще 1 раза в год) производят отбор проб фекалий в более старшем возрасте (в возрасте 30-45 лет и старше) в период его клинически здорового состояния и нормального функционирования кишечника. Технология получения образцов смеси биомассы данных аутоштаммов микроорганизмов и методы их консервации и хранения аналогичны примерам 1 и 2. Образцы смеси аутоштаммов микроорганизмов, полученные в примере 3, также хранятся в течение жизни человека. Example 3. Additionally, the same person periodically (no more than 1 time per year) takes samples of feces at an older age (aged 30-45 years and older) during his clinically healthy condition and normal functioning of the intestine. The technology for producing samples of a biomass mixture of data of microorganism autostrains and methods for their conservation and storage are similar to Examples 1 and 2. The samples of a mixture of microorganism autostrains obtained in Example 3 are also stored during human life.
Пример 4. В процессе хранения после контроля биотитра дополнительно объединяют в равных соотношениях часть образцов аутоштаммов бактерий, выделенных из нормальной кишечной микрофлоры человека в разные периоды его жизни и приготовленных в соответствии с примерами 1, 2 или 2, 3 или 1-3, вследствие чего повышается биологическая активность смеси вновь полученных образцов аутоштаммов микроорганизмов и приживляемость аутобактерий в кишечнике человека. Example 4. In the storage process after controlling the biotitre, a portion of the samples of bacterial auto-strains isolated from normal human intestinal microflora in different periods of his life and prepared in accordance with examples 1, 2 or 2, 3 or 1-3 is additionally combined in equal proportions, as a result of which increases the biological activity of the mixture of newly obtained samples of auto-strains of microorganisms and the survival rate of autobacteria in the human intestine.
Совокупность хранимых образцов препаратов, полученных в соответствии с примерами 1-4, представляет собой банк аутохтонных штаммов микроорганизмов, используемый для восстановления кишечного микробиоценоза человека. The set of stored samples of preparations obtained in accordance with examples 1-4, is a bank of autochthonous strains of microorganisms used to restore human intestinal microbiocenosis.
Способы применения банка образцов аутохтонного препарата приведены в примерах 5 и 6. Methods of using a bank of samples of an autochthonous preparation are given in examples 5 and 6.
Пример 5. Для профилактики или лечения дисбактериозов одну из ампул с образцом смеси аутоштаммов, полученным, например, по примерам 1-3, вскрывают, смесь аутоштаммов активируют путем пассажей на дифференцированной питательной среде. Пассирование аутоштамов прекращают в логарифмической фазе роста не ранее 7 ч после их инокуляции на дифференцированную питательную среду. Далее активированный препарат в жидкой форме вводят в организм ректально в область прямой кишки при помощи зонда в дозе не менее 105 - 107 каждого вида микробных кл. на 1 кг массы тела в течение 2-3 дней. При этом препарат, содержащий аутохтонные штаммы нормальной кишечной микрофлоры, минуя желудок непосредственно попадает в кишечник человека, вследствие чего предотвращается снижение его биотитра.Example 5. For the prevention or treatment of dysbacteriosis, one of the ampoules with a sample of a mixture of auto-strains obtained, for example, in examples 1-3, is opened, a mixture of auto-strains is activated by passages on a differentiated nutrient medium. Passaging of auto-strains is stopped in the logarithmic growth phase not earlier than 7 hours after their inoculation on a differentiated nutrient medium. Next, the activated drug in liquid form is injected into the body rectally into the rectal region using a probe in a dose of at least 10 5 - 10 7 of each type of microbial cells. per 1 kg of body weight for 2-3 days. At the same time, a preparation containing autochthonous strains of normal intestinal microflora, bypassing the stomach, directly enters the human intestines, as a result of which its biotiter decreases.
Пример 6. Для лечения дисбактериоза кишечника человека, например после проведения антибиотиокотерапии, лучевой терапии и т.п., когда происходит полное или частичное уничтожение его нормальной кишечной микрофлоры, берут образец аутоштаммов, полученный по примеру 4 из кишечника организма в разные периоды жизни человека. Пассирование аутоштаммов прекращают в логарифмической фазе роста не ранее 7 ч после их инокуляции на дифференцированную питательную среду. Далее активированный препарат в жидкой форме вводят в организм ректально в область прямой кишки при помощи зонда в дозе не менее 107 - 109 каждого вида микробных кл. на 1 кг массы тела в течение 4-5 дней. При этом препарат, содержащий аутохтонные штаммы нормальной кишечной микрофлоры, минуя желудок, непосредственно попадает в кишечник человека, вследствие чего предотвращается снижение его биотитра.Example 6. For the treatment of human intestinal dysbiosis, for example, after antibiotic therapy, radiation therapy, etc., when its normal intestinal microflora is completely or partially destroyed, a sample of autostrains obtained according to Example 4 from the intestine of the body at different periods of human life is taken. Passaging of auto-strains is stopped in the logarithmic phase of growth no earlier than 7 hours after their inoculation on a differentiated nutrient medium. Next, the activated drug in liquid form is injected into the body rectally into the rectal region using a probe in a dose of at least 10 7 - 10 9 of each type of microbial cells. per 1 kg of body weight for 4-5 days. At the same time, a preparation containing autochthonous strains of normal intestinal microflora, bypassing the stomach, directly enters the human intestines, as a result of which its biotiter decreases.
Повышение эффективности предлагаемого способа профилактики и лечения дисбактериозов по сравнению с известными аналогами состоит в одновременном его воздействии на различные звенья нарушенного бактериоценоза кишечника за счет использования более полного спектра нормальной (здоровой) аутохтонной микрофлоры кишечника, вводимой ректально в кишечник человека. Improving the effectiveness of the proposed method for the prevention and treatment of dysbacteriosis in comparison with known analogues consists in its simultaneous effect on various parts of the impaired bacteriocenosis of the intestine due to the use of a more complete spectrum of normal (healthy) autochthonous intestinal microflora introduced rectally into the human intestine.
Предлагаемый способ обеспечивает комплексное биологическое действие, направленное на ускорение нормализации микробиоценоза, ускорение восстановления морфологической структуры слизистой оболочки и клеточных факторов местного иммунитета, коррекцию иммунобиологической реактивности и ряд показателей гомеостаза, повышение неспецифической резистентности к неблагоприятным медикаментозным, алиментарным, экологическим, инфекционным и прочим воздействиям. The proposed method provides a complex biological effect aimed at accelerating the normalization of microbiocenosis, accelerating the restoration of the morphological structure of the mucous membrane and cellular factors of local immunity, correction of immunobiological reactivity and a number of indicators of homeostasis, increasing nonspecific resistance to adverse drug, alimentary, environmental, infectious and other influences.
Промышленная применимость. Изобретение может быть использовано в медицине и микробиологии. Industrial applicability. The invention can be used in medicine and microbiology.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97112279A RU2126043C1 (en) | 1997-07-29 | 1997-07-29 | Method of preparing autochthon microorganism strains bank for recovery of human intestine microbiocenosis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97112279A RU2126043C1 (en) | 1997-07-29 | 1997-07-29 | Method of preparing autochthon microorganism strains bank for recovery of human intestine microbiocenosis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2126043C1 true RU2126043C1 (en) | 1999-02-10 |
Family
ID=20195420
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU97112279A RU2126043C1 (en) | 1997-07-29 | 1997-07-29 | Method of preparing autochthon microorganism strains bank for recovery of human intestine microbiocenosis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2126043C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3760054A1 (en) | 2019-07-02 | 2021-01-06 | Pepticus s.r.o. | A method of preparing an individual probiotic composition according to analysis of the microbiome and medical history for human or veterinary use |
-
1997
- 1997-07-29 RU RU97112279A patent/RU2126043C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3760054A1 (en) | 2019-07-02 | 2021-01-06 | Pepticus s.r.o. | A method of preparing an individual probiotic composition according to analysis of the microbiome and medical history for human or veterinary use |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6428783B1 (en) | Bank of autochthonous strains of microorganisms and methods of its use for recovery of intestinal microbiocenosis of the men | |
| Lee et al. | Evaluation of probiotic treatment in a neonatal animal model | |
| EP0554418B1 (en) | Intestine colonizing lactobacilli | |
| JP3186202B2 (en) | Parent organism | |
| EP0555618B1 (en) | Dietetic and/or pharmaceutical compositions containing lyophilized lactic bacteria | |
| CN108883139A (en) | Composition comprising bacterium bacterial strain | |
| RU2460778C1 (en) | Method for producing autoprobiotic of enterocuccus faecium being representative of indigenic host intestinal microflora | |
| CN113215035A (en) | Preparation of bifidobacterium longum and bifidobacterium animalis and application thereof in anti-aging | |
| RU2287335C1 (en) | Preparation "bacstitatin" for treating diseases of gastrointestinal tract | |
| WO2003039260A2 (en) | Probiotic compositions | |
| AU2002348340A1 (en) | Probiotic compositions | |
| RU2303058C2 (en) | Agent "biobalans-k" for treatment of intestine infections complicated with dysbacteriosis | |
| CN110835615B (en) | Active substance of bifidobacterium lactis GKK2, composition containing same and application of active substance and composition in promoting longevity | |
| US3988440A (en) | Remedy for treating gastritis, gastric and duodenal ulcers | |
| CN116855413B (en) | Bioactive substance for regulating human body microecological balance prepared from lactobacillus rhamnosus YSs069 and application thereof | |
| RU2126043C1 (en) | Method of preparing autochthon microorganism strains bank for recovery of human intestine microbiocenosis | |
| CN115838649A (en) | Microbial composition for intestinal flora blending and preparation method thereof | |
| CN105343132B (en) | Composition, the drug and preparation method thereof for treating colitis | |
| CN114181855A (en) | Intestinal flora preparation for directional proliferation and intestinal flora transplantation, and preparation method and application thereof | |
| US5077063A (en) | Process for preparing lactic-acid products | |
| Zinsser et al. | A Textbook of Bacteriology: A Practical Treatise for Students and Practitioners of Medicine and Public Health | |
| RU2505304C2 (en) | Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli | |
| RU2176668C1 (en) | Strain of bacterium lactobacillus acidophilus nv ep 317/402 "narine" tnci used for preparing curative-prophylactic preparations for intestine microflora normalization | |
| RU2152792C1 (en) | Dietetic absorbable composition that is able to improve biological equilibrium of intestine tract microflora | |
| CN109536424A (en) | A kind of Lactobacillus brevis and its application |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130730 |