RU2123862C1 - Method of preparing standard positive sera for control over quality of test-systems designed for antibody assay - Google Patents
Method of preparing standard positive sera for control over quality of test-systems designed for antibody assay Download PDFInfo
- Publication number
- RU2123862C1 RU2123862C1 RU96106118A RU96106118A RU2123862C1 RU 2123862 C1 RU2123862 C1 RU 2123862C1 RU 96106118 A RU96106118 A RU 96106118A RU 96106118 A RU96106118 A RU 96106118A RU 2123862 C1 RU2123862 C1 RU 2123862C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sera
- antibodies
- immune sera
- immune
- antigens
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к технологии приготовления эталонных сывороток для контроля качества тест-систем и может быть использовано в медицине, биотехнологии и иммунологии. The invention relates to a technology for the preparation of reference sera for quality control of test systems and can be used in medicine, biotechnology and immunology.
Известно, что для оценки диагностических тест-систем, предназначенных для определения антител, главным инструментом служат панели стандартных сывороток, содержащих и не содержащих специфические антитела. It is known that for the evaluation of diagnostic test systems designed to detect antibodies, the main tool is a panel of standard sera containing and not containing specific antibodies.
Основной проблемой при создании панели эталонных сывороток, особенно содержащих специфические антитела, служит выбор конкретных репрезентативных образцов. Следует подчеркнуть, что сыворотки, содержащие специфические антитела, существенно отличаются по своим характеристикам в зависимости от стадии развития инфекционного заболевания. Так, в частности, в начальной стадии ВИЧ-инфекции происходит первичное накопление вируса в клетках-мишенях, при этом антитела к вирусным белкам отсутствуют и возможна постановка диагноза только с использованием методов определения вирусного антигена или вирусных нуклеиновых кислот. В дальнейшем при формировании иммунного ответа на образованный антиген происходит появление антител к вирусным белкам. Когда уровень антител превышает уровень синтеза вирусных белков и свободный антиген перестает выявляться, в сыворотке тестируется наличие антител только к определенным вирусным белкам. При финальных стадиях заболевания, когда иммунная система человека уже не отвечает в достаточной степени выработке защитных антител, наблюдается обратный процесс, т.е. вирус размножается, но уровень антител недостаточен для связывания всех вирусных белков: в этой ситуации также определяется свободный вирусный антиген и низкий титр специфических антител. The main problem in creating a panel of reference sera, especially those containing specific antibodies, is the choice of specific representative samples. It should be emphasized that sera containing specific antibodies differ significantly in their characteristics depending on the stage of development of the infectious disease. So, in particular, in the initial stage of HIV infection, primary accumulation of the virus occurs in target cells, while antibodies to viral proteins are absent and a diagnosis can only be made using methods for determining the viral antigen or viral nucleic acids. Subsequently, the formation of an immune response to the formed antigen results in the appearance of antibodies to viral proteins. When the level of antibodies exceeds the level of synthesis of viral proteins and the free antigen ceases to be detected, the presence of antibodies to only certain viral proteins is tested in the serum. In the final stages of the disease, when the human immune system does not sufficiently respond to the production of protective antibodies, the reverse process is observed, i.e. the virus multiplies, but the antibody level is insufficient to bind all viral proteins: in this situation, a free viral antigen and a low titer of specific antibodies are also determined.
Задача создания панелей эталонных сывороток является актуальной для диагностики вируса иммунодефицита человека, вирусных гепатитов и определения других антител. The task of creating reference serum panels is relevant for the diagnosis of human immunodeficiency virus, viral hepatitis and the determination of other antibodies.
Вследствие большого разнообразия возбудителей вирусных гепатитов дифференциальная диагностика различных нозологических форм, прогноз исхода инфекции, эффективная профилактика и лечение, решение многих научных, эпидемиологических и экологических задач представляют собой сложную проблему. Только выявление специфических вирусных маркеров (в том числе антител) с применением современных иммунологических диагностикумов позволяет успешно преодолевать имеющиеся трудности. Due to the wide variety of viral hepatitis pathogens, differential diagnosis of various nosological forms, prognosis of the outcome of infection, effective prevention and treatment, and the solution of many scientific, epidemiological, and environmental problems are a complex problem. Only the identification of specific viral markers (including antibodies) using modern immunological diagnostics can successfully overcome the difficulties.
Крайне желательным является включение в панель сывороток с различными параметрами, включая сыворотки с низкой концентрацией антител к отдельным вирусным белкам, которые характеризуют в первую очередь начальные инфекции. Подбор таких сывороток является достаточно сложной задачей, поскольку это предусматривает выявление и наблюдение за широким кругом контактных лиц (для начальной стадии инфекции) и получение достаточных количеств материала для исследования и дальнейшего использования в качестве стандартных образцов. It is highly desirable to include in the panel sera with various parameters, including serums with a low concentration of antibodies to individual viral proteins, which characterize primarily initial infections. The selection of such sera is a rather difficult task, since it involves the identification and observation of a wide range of contact persons (for the initial stage of infection) and the receipt of sufficient quantities of material for research and further use as standard samples.
Важной характеристикой используемых сывороток служит содержание антител к индивидуальным белкам ВИЧ. По требованиям ВОЗ сыворотка считается положительной, если в ней содержатся антитела к одному из белков оболочки ВИЧ - gp160/120 или gp41 (ген env) и антитела к одному из белков гена gag (p55, p24, p17). Как правило, наиболее сложными для выявления антител в диагностических тестах являются сыворотки, которые характеризуются невысоким уровнем антител к белкам гена gag и содержат в основном антитела к оболочечнным белкам. Именно такие сыворотки характерны для ранних стадий инфекций, наиболее важных при диагностике [1]. An important characteristic of the sera used is the content of antibodies to individual HIV proteins. According to WHO requirements, serum is considered positive if it contains antibodies to one of the coat proteins of the HIV gp160 / 120 or gp41 (env gene) and antibodies to one of the proteins of the gag gene (p55, p24, p17). As a rule, the most difficult to detect antibodies in diagnostic tests are sera, which are characterized by a low level of antibodies to the gag gene proteins and contain mainly antibodies to enveloped proteins. It is these sera that are characteristic of the early stages of infections, the most important for diagnosis [1].
Всемирной организацией Здравоохранения (ВОЗ) рекомендуется использование панели положительных на ВИЧ сывороток (40-50 образцов) и отрицательных, предварительно охарактеризованных методом иммунного блотинга и в различных иммуноферментных тест-системах [2,3]. The World Health Organization (WHO) recommends the use of a panel of HIV-positive sera (40-50 samples) and negative ones that have been previously characterized by immune blotting and in various enzyme immunoassay systems [2,3].
Известно, что в Российской Федерации для аттестации коммерческих тест-систем используются национальные диагностические панели сывороток, состоящие из 50 положительных и 40 отрицательных сывороток (ОСО 42-28-145-88) [4]. Способ получения таких панелей включает подбор сывороток, содержащих специфические антитела ко всем основным белкам тестируемого антигена ВИЧ-1 и имеющих разную концентрацию этих антител. It is known that in the Russian Federation for the certification of commercial test systems, national diagnostic serum panels are used, consisting of 50 positive and 40 negative sera (OSO 42-28-145-88) [4]. A method for producing such panels involves the selection of sera containing specific antibodies to all major proteins of the HIV-1 antigen tested and having different concentrations of these antibodies.
Недостатками данного способа получения панели сывороток [4] является низкая чувствительность изготовляемых положительных панелей сывороток, т.к. они составлены из нативных сывороток, имеющих в основном высокие титры (1-2 сыворотки из 50 с низким содержанием антител). Такая панель нативных специфических сывороток не позволяет проконтролировать истинный показатель чувствительности тест-систем, т. к. высоким титрам нативных сывороток соответствуют очень высокие значения оптических плотностей (ОП) в иммуноферментном анализе (ИФА). Панель оказывается малоэффективной в области значений ОП, близких к критическим значениям (ОПкрит) при дискриминации ложноположительных сывороток, имеющих значения ОП, близкие или совпадающие с ОПкрит.The disadvantages of this method of obtaining a panel of sera [4] is the low sensitivity of the manufactured positive panels of sera, because they are made up of native sera having mostly high titers (1-2 sera from 50 with a low antibody content). Such a panel of native specific sera does not allow to control the true indicator of the sensitivity of test systems, since high titers of native sera correspond to very high values of optical densities (OD) in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The panel is ineffective in the range of OD values close to critical values (OD crit ) when discriminating against false-positive sera having OD values close to or coinciding with OD crit .
Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ получения эталонных сывороток для контроля качества тест-систем, предназначенных для определения антител, включающий приготовление иммунных сывороток, содержащих специфические антитела к основным белкам тестируемого антигена и имеющих разную концентрацию этих антител, причем наибольшее количество сывороток приготавливают с концентрациями антител, близкими к их минимальной концентрации в иммунных сыворотках, служащей границей между положительными и отрицательными исследуемыми сыворотками, а наименьшее количество сывороток - с концентрациями антител, близкими к концентрациям их в нативных иммунных сыворотках [5] . Причем разную концентрацию специфических антител в сыворотках получают путем разведения нативных иммунных сывороток отрицательной сывороткой, не содержащей антитела к тестируемому антигену. Использование разведенных положительных сывороток позволяет получить образцы этих сывороток с заданной низкой концентрацией антител к тестируемому антигену, что характеризуется низкой оптической плотностью в иммуноферментных тест-системах. The closest analogue (prototype) is a method of obtaining reference sera for the quality control of test systems designed to determine antibodies, including the preparation of immune sera containing specific antibodies to the main proteins of the test antigen and having different concentrations of these antibodies, with the largest number of serums being prepared with concentrations antibodies close to their minimum concentration in immune sera, which serves as the boundary between positive and negative studied and sera, and the smallest number of sera - with antibody concentrations close to their concentrations in native immune sera [5]. Moreover, different concentrations of specific antibodies in sera are obtained by diluting native immune sera with negative serum that does not contain antibodies to the test antigen. The use of diluted positive sera allows one to obtain samples of these sera with a given low concentration of antibodies to the test antigen, which is characterized by a low optical density in enzyme immunoassay test systems.
Однако данный способ имеет следующие недостатки. Спектр антител разведенных положительных сывороток характеризуется, как правило, сохранением антител к тем же белкам, что и в исходной нативной позитивной сыворотке, но в меньшей концентрации. В то же время важно иметь сыворотки не только с низкой концентрацией антител, но и сыворотки с антителами преимущественно к тем же белкам, которые преобладают на разных стадиях вирусной инфекции. Например, спектр антител разведенных ВИЧ-положительных сывороток характеризуется преобладанием антител к белкам гена gag и с небольшим количеством антител к наиболее ценным при постановке диагноза ВИЧ-инфекция - белкам гена env. Таким образом, полученные предлагаемым способом эталонные положительные сыворотки методом разведения исходных нативных сывороток имеют недостаточную чувствительность, изначально ограничены уже имеющимся соотношением антител к различным белкам вируса и при разведении антитела, исходно присутствующего в небольшой концентрации, могут не выявляться в иммуноблоте. However, this method has the following disadvantages. The antibody spectrum of diluted positive sera is typically characterized by the retention of antibodies to the same proteins as in the original native positive serum, but at a lower concentration. At the same time, it is important to have serums not only with a low concentration of antibodies, but also serums with antibodies mainly to the same proteins that prevail at different stages of the viral infection. For example, the antibody spectrum of diluted HIV-positive sera is characterized by a predominance of antibodies to the gag gene proteins and with a small number of antibodies to the most valuable HIV diagnosis - env gene proteins. Thus, the reference positive sera obtained by the proposed method by diluting the original native sera have insufficient sensitivity, are initially limited by the already existing ratio of antibodies to various proteins of the virus and, when diluted, initially present in small concentrations, may not be detected in the immunoblot.
Задачей предлагаемого изобретения является создание такого способа, который позволил бы приготавливать более высокочувствительные панели эталонных положительных сывороток, имеющих разную концентрацию и представительство антител к вирусным белкам и пригодных для использования в качестве стандартных образцов при изготовлении и аттестации коммерческих диагностических тест-систем. The objective of the invention is the creation of such a method that would make it possible to prepare more highly sensitive panels of reference positive sera having different concentrations and representation of antibodies to viral proteins and suitable for use as standard samples in the manufacture and certification of commercial diagnostic test systems.
Поставленная задача решается тем, что в способе получения эталонных положительных сывороток для контроля качества тест-систем, предназначенных для определения антител, включающем приготовление иммунных сывороток, содержащих специфические антитела к основным белкам тестируемого антигена и имеющих разную концентрацию этих антител, причем наибольшее количество сывороток приготавливают с концентрациями антител, близкими к их минимальной концентрации в иммунных сыворотках, служащей границей между положительными и отрицательными исследуемыми сыворотками, а наименьшее количество сывороток - с концентрациями антител, близкими к концентрациям их в нативных иммунных сыворотках, согласно изобретению представительство и разную концентрацию специфических антител в иммунных сыворотках получают путем истощения иммунных сывороток инкубацией с соответствующими антигенами, отличающимися по наличию и их концентрации в реакционной смеси в течение времени и условиях инкубации, достаточных для связывания антител с антигенами. Иммунные сыворотки инкубируют с таким представительством вирусных антигенов, которые обеспечивают минимально необходимый спектр антител в иммунных сыворотках, достаточный для признания их серопозитивными. The problem is solved in that in the method of obtaining reference positive sera for the quality control of test systems designed to determine antibodies, including the preparation of immune sera containing specific antibodies to the main proteins of the test antigen and having different concentrations of these antibodies, the largest amount of serum being prepared with antibody concentrations close to their minimum concentration in immune sera, which serves as the boundary between positive and negative studies serum, and the smallest number of sera - with antibody concentrations close to their concentrations in native immune sera, according to the invention, the representation and different concentration of specific antibodies in immune sera is obtained by depleting immune sera by incubation with the corresponding antigens that differ in their presence and their concentration in the reaction mixtures over time and incubation conditions sufficient to bind antibodies to antigens. Immune sera are incubated with such a representation of viral antigens that provide the minimum necessary spectrum of antibodies in immune sera sufficient to be recognized as seropositive.
Предложенный способ конструирования эталонных сывороток методом истощения иммунных сывороток инкубацией с вирусными антигенами имеет большие возможности для создания разнообразных сывороток с заранее заданными параметрами, так как вариации определяются представительством вирусных белков в используемых антигенах, а также наличием и концентрацией антител в иммунных сыворотках. Этот подход, базирующийся на реакции антиген-антитело, является общим для различных вирусных и бактериальных антигенов, где степень соответствия между антигенной детерминантой и антигенсвязывающей областью активного центра антитела (иммунологическая специфичность) определяется химической и пространственной комплементарностью, а специфичность взаимодействия характеризуется аффинностью антител. The proposed method for constructing reference sera by the method of depletion of immune sera by incubation with viral antigens has great potential for creating a variety of sera with predetermined parameters, since the variations are determined by the representation of viral proteins in the antigens used, as well as the presence and concentration of antibodies in the immune sera. This approach, based on the antigen-antibody reaction, is common for various viral and bacterial antigens, where the degree of correspondence between the antigenic determinant and the antigen-binding region of the active center of the antibody (immunological specificity) is determined by chemical and spatial complementarity, and the specificity of the interaction is characterized by the affinity of the antibodies.
В предлагаемом способе приготовления эталонных положительных сывороток моделируются процессы, происходящие в организме инфицированного человека, где представительство антител к различным белкам вируса регулируется двумя основными факторами: 1) уровнем накопления индивидуальных вирусных белков и 2) гуморальным иммунным ответом, т.е. уровнем образования антител к индивидуальным белкам (эпитопам этих белков вируса). В реальной ситуации определяемый иммуноферментными тест-системами титр антител определяется соотношением между уровнем накопления вирусных антигенов и антител к этим антигенам и представляет собой некую суммарную характеристику. In the proposed method for preparing reference positive sera, the processes occurring in the body of an infected person are simulated, where the representation of antibodies to various proteins of the virus is regulated by two main factors: 1) the level of accumulation of individual viral proteins and 2) a humoral immune response, i.e. the level of formation of antibodies to individual proteins (epitopes of these virus proteins). In a real situation, the antibody titer determined by the enzyme immunoassay system is determined by the ratio between the level of accumulation of viral antigens and antibodies to these antigens and represents a certain summary characteristic.
Способ иллюстрируется следующими графическими материалами. The method is illustrated by the following graphic materials.
На фиг. 1 приведен иммуноблот, на котором представлен спектр белков некоторых исследованных антигенов, где:
1 - лизат Т;
2 - лизат инактивированного очищенного вируса;
3 - концентрат культуральной жидкости;
4 - лизат 11;
На фиг. 2 изображена электрофореграмма положительной сыворотки А-7 после истощения вирусными препаратами, где:
1 - исходная сыворотка А-7
2 - сыворотка (1:8) + АГ N6;
3 - сыворотка (1:8) + лизат 11;
4 - сыворотка (1:4) + лизат очищенного вируса;
5 - сыворотка (1:4) + лизат М;
6 - сыворотка (1:8) + лизат М;
7 - сыворотка (1:3) + лизат RF;
8 - сыворотка (1:16) + лизат RF.In FIG. 1 shows an immunoblot, which presents the protein spectrum of some of the investigated antigens, where:
1 - lysate T;
2 - lysate of inactivated purified virus;
3 - concentrate of the culture fluid;
4 -
In FIG. 2 shows the electrophoregram of positive serum A-7 after depletion of viral preparations, where:
1 - source serum A-7
2 - serum (1: 8) + AH N6;
3 - serum (1: 8) +
4 - serum (1: 4) + lysate of purified virus;
5 - serum (1: 4) + lysate M;
6 - serum (1: 8) + lysate M;
7 - serum (1: 3) + RF lysate;
8 - serum (1:16) + RF lysate.
Приведенные ниже примеры подробно раскрывают сущность изобретения. The following examples detail the essence of the invention.
Пример 1. Способ получения эталонных положительных сывороток для контроля качества тест-систем на ВИЧ-1. Example 1. A method of obtaining a reference positive serum for quality control of test systems for HIV-1.
Для осуществления способа ВИЧ-положительную сыворотку в различных разведениях смешивают с охарактеризованными в иммуноблоте антигенами ВИЧ-1. To implement the method, HIV-positive serum in various dilutions is mixed with the HIV-1 antigens characterized in the immunoblot.
В работе используют штамм ЭКВ, выделенный от больного лимфоаденопатией, поддерживаемый в хронически инфицированных этим штаммом клетках линии U-937 (линия клеток ГКВ 4005), депонированный в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского, депонент N 4005. In this work, an ECV strain isolated from a patient with lymphadenopathy is used, maintained in cells of the U-937 line (GKV 4005 cell line) chronically infected with this strain, deposited in the State Virus Collection of the Virology Institute D.I. Ivanovsky, depositor N 4005.
Кроме того, используют штамм HIV-1/RF, поддерживаемый в виде хронически инфицированной этим штаммом линии клеток Н-9, полученный из Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН России. In addition, they use the HIV-1 / RF strain, maintained in the form of the H-9 cell line chronically infected with this strain, obtained from the State Virus Collection of the Institute of Virology named after D.I. Ivanovsky of the Academy of Medical Sciences of Russia.
При получении эталонных сывороток исследуют различные вирусные антигены: препараты культуральной жидкости, концентрированные ультрафильтрацией через мембранные фильтры "Milipore", образцы вируса, очищенного центрифугированием в градиенте сахарозы, и в препаратах вирусных белков, солюбилизированных из мембран инфицированных клеток (лизаты). Спектр белков в некоторых из исследованных антигенов представлен на иммуноблоте (на фиг. 1). When obtaining reference sera, various viral antigens are examined: culture fluid preparations concentrated by ultrafiltration through Milipore membrane filters, samples of virus purified by sucrose gradient centrifugation, and viral protein preparations solubilized from the membranes of infected cells (lysates). The spectrum of proteins in some of the studied antigens is presented on the immunoblot (Fig. 1).
Положительные на антитела к ВИЧ сыворотки человека получают от инфицированных лиц. Исследование сывороток проводят методом непрямого ИФА в тест-системе производства НПО "Вектор" с последующим подтверждением в тест-системе иммуноблот собственного производства. Human serum positive for HIV antibodies are obtained from infected individuals. The study of sera is carried out by the method of indirect ELISA in a test system manufactured by NPO "Vector" followed by confirmation in the test system of an immunoblot of own production.
Сыворотки, не содержащие антител к ВИЧ, получают от здоровых лиц и проверяют аналогичным образом. Sera that do not contain HIV antibodies are obtained from healthy individuals and tested in a similar manner.
Для истощения выбирают три сыворотки: плазма, А-7. Cu, положительные в ИФА и иммуноблоте. Истощение проводят 10-кратным концентратом культуральной жидкости ЭВК/ИРА-3, носящим название АГ N 6, и препаратом вирусных белков, солюбилизированных из мембран инфицированных клеток - лизат N 11 (Л.11). For depletion, three serums are chosen: plasma, A-7. Cu, positive in ELISA and immunoblot. The depletion is carried out with a 10-fold concentrate of culture fluid EVK / IRA-3, called
При выборе вирусных антигенов для истощения руководствуются принципом наименьшего содержания оболочечных белков gp 160/120 и gp 41, как, например, в лизате 11 на фиг. 1. When choosing viral antigens for depletion, they are guided by the principle of the lowest content of
Пример истощения положительной сыворотки А-7 различными вирусными препаратами представлен на фиг. 2. An example of depletion of positive A-7 serum by various viral preparations is shown in FIG. 2.
Из серии предварительных экспериментов выбирают подходящие разведения исходных сывороток:
для плазмы 1:8 и 1:16;
для А-7 1:32 и 1:64;
для Cu 1:16 и 1:32.From a series of preliminary experiments, suitable dilutions of the starting sera are selected:
for plasma 1: 8 and 1:16;
for A-7 1:32 and 1:64;
for Cu 1:16 and 1:32.
В качестве разводящего раствора используют отрицательную сыворотку. Истощение проводят инкубацией с вирусными препаратами в соотношении 1:1 в течение 60 мин при 37oC с последующим определением в тест-системе "Антиген", "РекомбиБест-АнтиВИЧ-1,2" (Вектор-Бест) и иммуноблоте собственного производства.Negative serum is used as diluting solution. The depletion is carried out by incubation with viral preparations in a ratio of 1: 1 for 60 min at 37 o C, followed by determination in the test system "Antigen", "Recombest-AntiVICH-1,2" (Vector-Best) and immunoblot of own production.
После смешивания сывороток с антигенами в указанных соотношениях получен набор "истощенных" сывороток, которые являются ВИЧ-положительными по данным иммуноблота, но существенно отличаются по данным иммуноферментного анализа (табл. 1). В результате удалось получить набор сывороток, содержащих антитела преимущественно к оболочечным белкам ВИЧ и характеризующихся низкими значениями оптической плотности при исследовании их в иммуноферментных тест-системах. After mixing the sera with antigens in the indicated ratios, a set of “depleted” sera was obtained, which are HIV-positive according to immunoblot data, but differ significantly according to the enzyme-linked immunosorbent assay (Table 1). As a result, it was possible to obtain a set of sera containing antibodies mainly to HIV envelope proteins and characterized by low optical density values when they were studied in enzyme-linked immunosorbent assay systems.
Пример 2. Исследование срока хранения эталонных сывороток, полученных предлагаемым способом. Example 2. The study of the shelf life of the reference serum obtained by the proposed method.
При изучении срока годности полученных сывороток было выявлено, что они стабильны при хранении при -10oC в течение не менее 3-х месяцев. Использование предложенных эталонных сывороток позволяет эффективно оценить качество коммерческих тест-систем для определения антител. Как видно из таблицы 1, в тест-системе "Антиген" все полученные сыворотки выявляются как положительные, а в тест-системе "РекомбиБест-антиВИЧ-1,2" оптическая плотность существенно ниже и сыворотка N 10 не выявляется, т.к. имеет пограничное значение оптической плотности. Данные по сроку хранения сывороток представлены в таблице 2, из которой видно, что в тест-системе "Антиген" все сыворотки тестируются как положительные, в то время как тест-система РекомбиБест-антиВИЧ 1, 2 не выявляет 7 из 12 полученных сывороток. При проверке этих сывороток в тест-системе "Рекомбинант ВИЧ-1,2 ДС/М" производства г. Бердск не выявляется только сыворотка N 10. Проведенные исследования наглядно показывают применимость полученных сывороток для контроля качества тест-систем.When studying the shelf life of the obtained sera, it was found that they are stable when stored at -10 o C for at least 3 months. Using the proposed reference sera allows you to effectively assess the quality of commercial test systems for determining antibodies. As can be seen from table 1, in the Antigen test system, all serums obtained are detected as positive, and in the Recombibest-antiVICH-1,2 test system, the optical density is significantly lower and
Пример 3. Способ получения эталонных положительных сывороток для контроля качества тест-систем на гепатит А. Example 3. A method of obtaining a reference positive serum for quality control of test systems for hepatitis A.
В случае инфекционного гепатита А маркером для ранней дифференциальной диагностики являются антитела IgM. Сыворотку, содержащую антитела IgM к вирусу гепатита А в разведениях 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80, инкубировали с антигеном вируса гепатита А, полученным культивированием вируса в перевиваемой культуре клеток почек зеленой мартышки. Инкубацию проводили в течение 60 минут при 37oC при соотношении препаратов 1:1 с последующим определением в тест-системе ВЕКТОГЕП-А-IgM (произв-во ГНЦ ВБ "Вектор")
Как видно из таблицы 3, при соответствующем подборе соотношений препаратов можно получить сыворотки, имеющие значения оптической плотности, близкие к критическому значению.In the case of infectious hepatitis A, IgM antibodies are a marker for early differential diagnosis. Serum containing hepatitis A virus IgM antibodies at dilutions of 1:10, 1:20, 1:40 and 1:80 was incubated with the hepatitis A virus antigen obtained by culturing the virus in a transplanted green monkey kidney cell culture. Incubation was carried out for 60 minutes at 37 o C with a drug ratio of 1: 1, followed by determination in the VECTOGEP-A-IgM test system (manufactured by the SSC VB "Vector")
As can be seen from table 3, with the appropriate selection of drug ratios, you can get serum having optical density values close to the critical value.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет по сравнению с известными аналогами приготавливать более высокочувствительные наборы эталонных положительных сывороток, имеющих разную концентрацию и представительство антител к вирусным белкам и пригодных для использования в качестве стандартных образцов при изготовлении и аттестации коммерческих диагностических тест-систем. Thus, the proposed method allows, in comparison with known analogues, to prepare more highly sensitive sets of reference positive sera having different concentrations and representative antibodies to viral proteins and suitable for use as standard samples in the manufacture and certification of commercial diagnostic test systems.
Источники патентной и научно-технической информации:
1. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А. СПИД, Москва, 1992, с. 141.Sources of patent and scientific and technical information:
1. Khaitov R.M., Ignatiev G.A. AIDS, Moscow, 1992, p. 141.
2. Carrett A.J., Saegroatt V., Suprun E.N. et al.,(1988) Wld. Hlth. Org. Rep., v.66, p. 44-50. 2. Carrett A.J., Saegroatt V., Suprun E.N. et al., (1988) Wld. Hlth. Org. Rep., V. 66, p. 44-50.
3. Report of the WHO Meeting on Criteria for Evaluation and Standartization of Diagnostic Tests for the Detection of HIV Antibody, Stockholm, 1987. 3. Report of the WHO Meeting on Criteria for Evaluation and Standartization of Diagnostic Tests for the Detection of HIV Antibody, Stockholm, 1987.
4. Воробьева М.С., Шаламберидзе Т.Л., Федорова Г.М. и др. Вопр. Вирусол. - 1990, N2,-с.125-127. 4. Vorobyeva MS, Shalamberidze T.L., Fedorova G.M. and others. Q. Virusol. - 1990, N2, p. 125-127.
5. Канев А.И., Гутова Е.А., Ломанова Г.А. и др. Вопр. вирусол.-1993, N 2,- с. 86-89, (прототип). 5. Kanev A.I., Gutova E.A., Lomanova G.A. and others. Q. virusol.-1993,
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96106118A RU2123862C1 (en) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | Method of preparing standard positive sera for control over quality of test-systems designed for antibody assay |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96106118A RU2123862C1 (en) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | Method of preparing standard positive sera for control over quality of test-systems designed for antibody assay |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU96106118A RU96106118A (en) | 1998-06-10 |
| RU2123862C1 true RU2123862C1 (en) | 1998-12-27 |
Family
ID=20178657
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96106118A RU2123862C1 (en) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | Method of preparing standard positive sera for control over quality of test-systems designed for antibody assay |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2123862C1 (en) |
-
1996
- 1996-03-28 RU RU96106118A patent/RU2123862C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Канев А.И., Гутова Е.А. и др. Вопросы вирусологии, 1993, N 2, с. 86-89. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kelen et al. | Rapid detection of Australia/SH antigen and antibody by a simple and sensitive technique of immunoelectronmicroscopy | |
| JPH04330098A (en) | Hcv-specific peptide, agent therefor, and use thereof | |
| US4921787A (en) | Detection of antibodies to human immunodeficiency virus by agglutination of antigen coated latex | |
| US6492104B1 (en) | EIA test using nondenatured HIV antigen for early detection of HIV infection | |
| Zekeng et al. | Prevalence of HIV-1 subtype O infection in Cameroon: preliminary results | |
| JPH07509557A (en) | Methods and kits for antibody detection in seronegative patients | |
| JP3271666B2 (en) | Discrimination between antibodies against HTLV-I, HTLV-II or related retrovirus, detection of novel peptides, antibodies and immunoassay kit | |
| Dorn et al. | Analysis of genetic variability within the immunodominant epitopes of envelope gp41 from human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) group M and its impact on HIV-1 antibody detection | |
| WO1991013360A1 (en) | NEW HIV p24 PEPTIDES, DIAGNOSTIC ANTIGENS AND DISCRIMINATIVE IMMUNOASSAY METHOD | |
| EP2856163A1 (en) | Method for diagnosing and differentiating hiv-2 infections | |
| Walther et al. | Evaluation of HIV-1/HIV-2 immunoblots for detection of HIV-2 antibodies | |
| RU2123862C1 (en) | Method of preparing standard positive sera for control over quality of test-systems designed for antibody assay | |
| EP0196873B1 (en) | Diagnostic testing for micro-organisms | |
| Lelie et al. | Evaluation of three second‐generation and three confirmatory assays for antibodies to human immunodeficiency virus | |
| KR0168447B1 (en) | T-lymphotropic retrovirus monoclonal antibodies | |
| Vallari et al. | Rapid assay for simultaneous detection and differentiation of immunoglobulin G antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) group M, HIV-1 group O, and HIV-2 | |
| RU2283497C1 (en) | IMMUNOENZYMATIC TEST SYSTEM FOR IDENTIFYING THE SPECTRUM OF ANTIBODIES TO HIV 1 AND 2 AND DETECTING ANTIGEN HIV 1 (p24) NAMED "DS-IEA-ANTI-HIV 1 AND 2, HIV 1 GROUP O-SPECTRUM+AG p24 HIV 1" | |
| Norrby et al. | Site-directed enzyme-linked immunosorbent assay with a synthetic simian immunodeficiency virus SIVmac peptide identifying antibodies against the HIV-2 transmembrane glycoprotein | |
| WO1996040763A2 (en) | Peptides for hiv-1 detection | |
| Devito et al. | Seroreactivity to HIV-1 V3 subtypes A to H peptides of Argentinian HIV-positive sera | |
| Xu et al. | An immuno-dot blot assay for the detection of antibody to HIV | |
| CN115627264B (en) | anti-Malneffei mannan protein hybridoma cell strain and application thereof | |
| US20030207261A1 (en) | Method and composition for the diagnosis of equine infectious anemia virus disease by using the recombinant capsid protein virus (P26) | |
| RU2051688C1 (en) | Method of antibody assay to individual human retroviral proteins | |
| de Andrade et al. | Integrative Biomedical Sciences |