RU2120300C1 - Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума - Google Patents
Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума Download PDFInfo
- Publication number
- RU2120300C1 RU2120300C1 SU5030686A RU2120300C1 RU 2120300 C1 RU2120300 C1 RU 2120300C1 SU 5030686 A SU5030686 A SU 5030686A RU 2120300 C1 RU2120300 C1 RU 2120300C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- diagnosticum
- yersiniosis
- antigens
- serovariants
- preparing
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, в частности может применяться в производстве диагностических препаратов, а также в клинике для серологической диагностики заболевания, вызываемого бактериями. Сущность способа состоит в том, что для изготовления диагностикума к возбудителю иерсиниоза предложена сенсибилизация формалинизированных эритроцитов смесью антигенов, экстрагируемых мочевиной, одномоментно в течение 1 ч при температуре 56oC. Предлагаемый диагностикум выявляет четыре вида антител одномоментно, что позволяет экономить антиген в 2-4 раза, время проведения одного анализа в 4 раза, объем материала в 4 раза по сравнению с известными диагностикумами, где используется последовательное определение антител к каждому антигену в отдельности.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к производству диагностических препаратов, и может быть использовано в медицине для серологической диагностики заболевания, вызываемого бактериями вида.
Известен способ получения бидиагностикума, заключающийся в одновременной сенсибилизации формализированных эритроцитов барана смесью антигенов типа Буавена-Ленди, выделенных из возбудителя иерсиниоза серовариантов 03 и 09 [1] . Однако диагностикум, полученный этим способом, не позволяет выявлять в сыворотках крови больных людей специфические антитела к возбудителю иерсиниоза других серовариантов (05,27; 06,30), патогенных для человека.
Известен способ получения диагностикумов на основе антигенов, экстрагируемых мочевиной из возбудителя иерсиниоза серовариантов 03; 09; 05,27; и 06,30 [2].
Однако для определения иерсиниозных антител, в сыворотках крови больных людей необходимо получение четырех индивидуальных диагностических препаратов путем сенсибилизации формализированных эритроцитов барана антигенами возбудителя иерсиниоза каждого сероварианта в отдельности. Применение таких диагностикумов для выявления антител к возбудителю иерсиниоза, патогенных для человека серовариантов 03; 09; 05,27; и 06,30 предусматривает постановку РНГА с каждым из них, что в свою очередь требует взятия значительного количества крови у больного для проведения одного анализа, а также увеличения времени, материальных и трудовых затрат (особенно при проведении массового серологического обследования).
Цель изобретения - сокращение времени изготовления диагностикума и упрощение способа тестирования антител к возбудителю иерсиниоза серовариантов 03; 09; 05,27; 06,30, обеспечивающее возможность одномоментного проведения исследования в малом объеме материала с помощью РНГА.
Цель достигается путем сенсибилизации формалинизированных эритроцитов одномоментно смесью антигенов, экстрагируемых мочевиной из возбудителя иерсиниоза серовариантов 03; 09; 05,27; 06,30 в течение 2-х часов при температуре 56oC.
Преимущества заявляемого способа по сравнению с прототипом и признаки, обеспечивающие эти преимущества, представлены в табл. 1.
Предлагаемый диагностикум выявляет четыре вида антител одномоментно, что позволяет экономить антиген в 2-4 раза, время проведения одного анализа в 4 раза, объем материала в 4 раза по сравнению с известными диагностикумами, где используется последовательное определение антител к каждому антигену в отдельности.
Способ получения диагностикума включает в себя следующие этапы: выделение антигена, сенсибилизация эритроцитов антигенами, лиофилизация готового препарата.
Пример 1 (оптимальный вариант)
Для получения антигенов используют штаммы V. enterocolitica 741 0:9; 896 0:3; 742 0:6,30; 738 0:5,27. Антигены возбудителя иерсиниоза выделяют из бактериальной массы, выращенной при температуре 29oC в течение 24 часов и обезвоженной ацетоном.
Для получения антигенов используют штаммы V. enterocolitica 741 0:9; 896 0:3; 742 0:6,30; 738 0:5,27. Антигены возбудителя иерсиниоза выделяют из бактериальной массы, выращенной при температуре 29oC в течение 24 часов и обезвоженной ацетоном.
Для этого 1,2 г сухой массы бактерий суспендируют в 40 мл 0,1М натрий-фосфатно-солевого буфера (ФСБ) pH 7,4 и нагревают на водяной бане при 100oC в течение 1 часа при периодическом перемешивании. Для отделения осадка суспензию в течение 20 минут центрифугируют при 6000 об/мин.
Осадок суспендируют в 30 мл 0,1М ФСБ и выдерживают при 60oC в течение 10 минут. После чего осадок отделяют центрифугированием при указанном выше режиме и повторяют его обработку 20 мл 0,1М ФСБ при температуре 60oC в течение 10 минут. Осадок отделяют центрифурированием. Для экстракции целевого антигена осадок суспендируют в 40 мл 2,5М раствора мочевины и выдерживают при температуре 37oC в течение 72 часов. Взвесь центрифугируют при 6000 об/мин 30 мин. Супернатант, представляющий раствор антигена, диализуют против воды до pH 6,5 и лиофильно высушивают.
Сенсибилизацию эритроцитов барана проводят раствором сенситина, содержащим антигены, полученные из возбудителя иерсиниоза 4-х сероваров (09; 03; 05,27; 06,30).
Раствор сенситина готовят следующим образом: смешивают по 3,2 мг каждого антигена, полученную смесь растворяют в 8 мл 0,15М ФСБ pH 7,2, добавляя по каплям 0,1N раствор едкого натра до pH 8. Затем объем сенситина доводят до 20 мл 0,15М ФСБ pH 7,2.
Для сенсибилизации к 20 мл раствора сенситина прибавляют 20 мл 5%-ной взвеси формалинизированных эритроцитов в 0,15М ФСБ pH 7,2. Процесс сенсибилизации проводят при температуре 56oC в течение 1 час. Сенсибилизующая доза составляет по 80 мкг каждого из 4-х антигенов на 1 мл 2,5% взвеси формалинизированных эритроцитов.
После трехкратного отмывания 0,85%-ным раствором хлорида натрия pH 7,2 (центрифугирование при 1500 об/мин 10 минут) осадок сенсибилизированных эритроцитов суспендируют в защитной среде и лиофилизуют.
Контроль сенсибилизации проводят в РНГА с сыворотками крови кроликов, иммунизированных возбудителем иерсиниоза тех серовариантов, антигены которых используются для получения диагностикума.
В результате получают 50 мл поливалентного иерсиниозного антигенного диагностикума. Титры специфической активности полидиагностикума в РНГА с гипериммунными кроличьими сыворотками к возбудителю иерсиниоза серовариантов 09; 03; 05,27 и 06,30 представлены в табл. 2.
Пример 2
Выделение антигенов и приготовление сенситина проводят как в примере 1. Сенсибилизацию формализированных эритроцитов осуществляют при температуре 45oC в течение 30 мин. Изменение параметров сенсибилизации снижает специфическую активность полидиагностикума (табл. 2).
Выделение антигенов и приготовление сенситина проводят как в примере 1. Сенсибилизацию формализированных эритроцитов осуществляют при температуре 45oC в течение 30 мин. Изменение параметров сенсибилизации снижает специфическую активность полидиагностикума (табл. 2).
Пример 3.
Выделение и приготовление сенситина проводят как в примере 1. Сенсибилизацию осуществляют при температуре 62oC в течение 2 ч. Увеличение температуры и времени процесса сенсибилизации приводит к уменьшению специфической активности полидиагностикума, полученного при данном режиме сенсибилизации (табл. 2).
Источники информации
1. Королюк А.М. и др. //Тез. Всес. науч.-практич. конфер. "Иерсиниозы". Владивосток, 1989, ч. 2, с. 106-107.
1. Королюк А.М. и др. //Тез. Всес. науч.-практич. конфер. "Иерсиниозы". Владивосток, 1989, ч. 2, с. 106-107.
2. Дзадзиева М.Ф. и др. Авторское свидетельство N 1489377, G 01 N 33/531 "Способ получения диагностикума для выявления иерсиниозов".
Claims (1)
- Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума для выявления антител к возбудителю иерсиниоза путем сенсибилизации эритроцитов смесью антигенов и использования серовариантов 05,27 и 06,30, экстрагированных мочевиной, отличающийся тем, что дополнительно используют сероварианты 03 и 09, при этом получают смесь всех названных серовариантов в равных дозах в течение 1 ч при температуре 56oC.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5030686 RU2120300C1 (ru) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5030686 RU2120300C1 (ru) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2120300C1 true RU2120300C1 (ru) | 1998-10-20 |
Family
ID=21598559
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU5030686 RU2120300C1 (ru) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2120300C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2754465C1 (ru) * | 2020-11-30 | 2021-09-02 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) при клостридиозах животных |
-
1992
- 1992-03-04 RU SU5030686 patent/RU2120300C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Королюк А.М. и др. Тезисы Всесоюзной научно-практической конференции "Иерсиниозы". Владивосток, 1989, ч.2, с.106 - 107. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2754465C1 (ru) * | 2020-11-30 | 2021-09-02 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) при клостридиозах животных |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4372945A (en) | Antigen compounds | |
US4816253A (en) | Novel mutant strain of Listeria monocytogenes and its use in production of IgM antibodies and as an immunotherapeutic agent | |
US4567041A (en) | Mutant strain of Listeria monocytogenes and its use in production of IgM antibodies and as an immunotherapeutic agent | |
Lyampert et al. | Study on streptococcus group A antigens common with heart tissue elements | |
Lyampert et al. | Immunological phenomena associated with cross-reactive antigens of micro-organisms and mammalian tissues | |
EP0018579B1 (en) | Babesiosis antigen, vaccine and diagnostic reagent comprising it | |
Casals | Complement-fixation test for diagnosis of human viral encephalitides | |
Kagan et al. | Studies on the serology of trichinosis with hemagglutination, agar diffusion tests and precipitin ring tests | |
Nakhla et al. | Studies on the antigen in β-haemolytic streptococci that cross-reacts with an antigen in human myocardium | |
Mekalanos et al. | Affinity filters, a new approach to the isolation of tox mutants of Vibrio cholerae. | |
US4285930A (en) | Antigens comprising immunostimulant adjuvants and their use in immunotherapy | |
Morris et al. | Characterization of the antibodies detected by the microscopic agglutination test for bovine leptospirosis | |
RU2120300C1 (ru) | Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума | |
Tsang et al. | Serological diagnosis of typhoid fever by counterimmunoelectrophoresis. | |
Molinari et al. | Investigation of secretory immunoglobulins in saliva from germfree mice | |
Schmidt et al. | Immunodiffusion reactions with rubella antigens | |
Perrudet-Badoux et al. | Trichinella infestation in mice genetically selected for high and low antibody production. | |
SU1673973A1 (ru) | Способ диагностики заболеваний растений, вызванных РSеUDомоNаS SYRINGae 1у серогруппы | |
Stinson et al. | Binding of Streptococcus mutans antigens to heart and kidney basement membranes | |
Marquardt et al. | Immunoprecipitating soluble vaccinia virus antigens | |
Semprevivo | Exometabolites of Leishmania donovani promastigotes. I. Isolation and initial characterization | |
RU2062111C1 (ru) | Способ получения диагностикума эритроцитарного сыпнотифозного антигенного сухого | |
RU1792709C (ru) | Способ отбора сырь дл получени антилептоспирозной плазмы | |
RU2145712C1 (ru) | Способ диагностики радиационных поражений организма и способ получения препарата для его осуществления | |
SU908323A1 (ru) | Способ диагностики протейной инфекции |