RU2112540C1

RU2112540C1 - Способ получения фитоэкдизонов

Info

Publication number: RU2112540C1
Application number: RU96103063A
Authority: RU
Inventors: Т.А. Шаталова; Э.Т. Оганесян; Ю.Г. Пшуков
Original assignee: Пятигорская государственная фармацевтическая академия
Priority date: 1996-02-16
Filing date: 1996-02-16
Publication date: 1998-06-10

Abstract

Способ предназначен для получения фитоэкдизонов, используемых для проведения экспресс - анализа сырья и получаемых из него лекарственных препаратов. Измельченные корневища с корнями левзеи менее 0,25 мм однократно экстрагируют 70%= ным эталоном при постоянном перемешивании в течение 4 ч при комнатной температуре при суммарном соотношении сырья и экстрагента 1:10. Экстракт сливают, фильтруют. Извлечение высушивают и последовательно обрабатывают сначала 4-мя порциями этилацетата при суммарном соотношении извлечения и экстрагента 1:10 до отрицательной реакции с 1%=ным раствором хлорида железа (+3), затем 3-мя порциями 95%=ного эталона при суммарном соотношении извлечения и экстрагента 1:7 в присутсвии оксида аллюминия 2-й степени активности по Брокману при суммарном соотношении извлечения и сорбента 1:3,5. Спиртовые извлечения, полученные путем 3-кратной экстракции, объединяют. Их используют для проведения количественного анализа суммы фитоэкдизонов. Способ упрощает и удешевляет процесс получения продукта и повышает его выход.

Description

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и биотехнологии, а именно к лабораторным способам выделения биологически активных веществ из растительного сырья, в частности к технологии получения образцов фитоэкдизонов, используемых для проведения экспресс-анализа сырья и получаемых из него лекарственных препаратов.

Известен способ получения экдизонов из растения рода Rhaponticum, основанный на экстракции сырья 70%-ным этанолом, удалении из первичного экстракта сопутствующих веществ с использованием жидкостной экстракции, очистке полученного продукта колоночной адсорбционной хроматографией на оксиде алюминия и силикагеле и последующей кристаллизации [5,7].

Способ продолжителен и реализуется за 60 ч [2,5,7].

Известен способ выделения фитоэкдизонов растений рода Serratula, который принят за прототип [6]. Способ основан на получении водного извлечения из надземной части растений рода Serratula при температуре не выше 100^oC в течение 1 ч, разделении сопутствующих веществ и конечного продукта путем пропускания экстракта через слой гидрофобного сорбента, очистке. Выход продукта 75%. Степень чистоты 88,2-99,8%. Способ реализуется за 10-15 ч.

Недостатком указанного способа является использование воды в качестве растворителя. Растворимость фитоэкдизонов [экдистерона] в воде равна 0,19 г/100 мл [7].

Оптимальными экстрагентами для получения фитоэкдизонов [экдистерона] являются метанол, 70%-ный этанол [4,5] и 95%-ный этанол, растворимость экдистерона в перечисленных растворителях равна 7,5; 6; 1; 2,8 г/100 мл [7].

Способы экстрагирования фитоэкдизонов Rhaponticum carthamoides данными растворителями положены в основу промышленных регламентов на получение таблеток "Экдистен" [7] и экстракта левзеи жидкого [3].

Кроме того, известно, что водные извлечения из корней и корневищ имеют низкую микробиологическую устойчивость и в отличие от извлечений из надземной части растений получаются в результате длительного нагревания при температуре не ниже 100^oC [1]
Задачей изобретения является упрощение способа с одновременным сокращением до минимума потерь фитоэкдизона в процессе их выделения, а также снижение удельного расхода органических растворителей и энергозатрат.

Отличительными существенными признаками являются использование 70%-ного этанола в качестве растворителя на стадии первичной экстракции без применения нагревания, применение избирательной экстракции на стадии разделения сопутствующих веществ и конечного продукта, одновременность осуществления процесса разделения и очистки.

Первичная экстракция исходного растительного сырья 70%-ным этанолом без нагревания позволяет:
- увеличить выход и предотвратить процесс термического разложения фитоэкдизонов;
- получить сумму фитоэкдизонов Rhaponticum carthamoides, соответствующую по составу сумме фитоэкдизонов, содержащейся в экстракте левзеи жидком, что дает возможность использовать предлагаемый метод выделения и для анализа препаратов, получаемых из Rhaponticum carthamoides.

Применение избирательной экстракции позволяет осуществить процесс разделения сопутствующих веществ и фитоэкдизонов без использования стадий сорбционной фильтрации через активированный уголь и элюирования конечного продукта органическими растворителями.

Способ осуществляется следующим образом.

Измельченные корневища с корнями левзеи (менее 0,25 мм) однократно экстрагируют 70%-ным этанолом при постоянном перемешивании в течение 4 ч при комнатной температуре (при суммарном соотношении сырья и экстрагента 1:10). Экстракт сливают, фильтруют. Часть извлечения наносят на полоску фильтровальной бумаги, которую затем подсушивают в токе теплого воздуха. Бумага с нанесенным извлечением последовательно обрабатывается сначала 4-мя порциями этилацетата [9] (при суммарном соотношении извлечения и экстрагента 1:10) до отрицательной реакции с 1%-ным раствором хлорида железа (+3). С целью очистки (отделения) целевого продукта от кумаринов бумагу обрабатывают 3-мя порциями 95%-ного этанола (при суммарном соотношении извлечения и экстрагента 1:7) в присутствии оксида алюминия 2-й степени активности по Брокману (при суммарном соотношении извлечения и сорбента 1:3,5). Элюирование проводится в одной и той же пробирке с использованием центрифуги (режим работы каждый раз 6 тыс/об мин, по 10 мин каждый раз).

Спиртовые извлечения, полученные путем 3-кратной экстракции, объединяют и используют для количественной оценки суммы фитоэкдизонов.

Пример. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц < 0,25 мм. Около 5,0 г корневищ с корнями левзеи (точная навеска) помещают в предварительно взвешенную коническую колбу с притертой пробкой емкостью 100 мл, добавляют 50 мл 70%-ного этанола и взвешивают (точная навеска). Экстрагирование проводят при интенсивном взбалтывании в течение 4 ч. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр и определяют его объем.

Параллельно определяют влажность сырья. Все измерения проводят с точностью до 0,0001 г.

Два 1 мл фильтрата помещают на полоску бумаги для хроматографии (марка "Ленинградская быстрая") размером 1х10 см, которую затем подсушивают в токе теплого воздуха. Бумагу помещают в центрифужную пробирку и последовательно обрабатывают 4-мя порциями этилацетата (по 5 мл каждый раз) до отрицательной реакции с 1%-ным раствором хлорида железа [+3] или отсутствия сине-голубой флуоресценции в УФ-свете. Элюирование проводят в центрифуге (по 10 мин, 6 тыс. об/мин). Затем при нагревании удаляют остатки этилацетата и в ту же пробирку насыпают 7 г оксида алюминия для хроматографии (2-я степень активности, нейтральный). Экдизоны элюируют тремя порциями (по 6, 4, 4 мл) 95%-ного этанола. Элюирование проводят в центрифуге (по 10 мин, 6 тыс. об/мин). Элюат используют для проведения количественного анализа сырья на содержание суммы фитоэкдизонов.

Выход фитоэкдизонов из взятой пробы фильтрата равен 99,9% по отношению к количеству содержащихся в ней фитоэкдизонов. Состав продукта: 98% экдистерона и 1,9% экдизонов.

Список литературы:
1. Государственная фармакопея 11 изд : B 2 т.-М.: Медицина, 1987-1989. -2т.

2. Временная фармакопейная статья 42-1714-87 Экдистерон.

3. Фармакопейная статья 42-2707-90. Корневище с корнями рапонтикума сафлоровидного (левзеи сафлоровидной).

4. Фармакопейная статья 42-1995-83. Экстракт левзеи жидкий.

5. А. с. 1312774 СССР. Тонизирующее средство//Абубакиров Н.К., Султанов М.Б., Сыров В.Н. и др.

6. Патент 2063763 РФ "Способ получения α- и β- - экдизонов /Володин В.В. , Лукша В.Г., Пунегов., Тюкавин Ю.А.//БИ. -1996. -N 20. -С.164.

7. Маматханов А.У., Шамсутдинов М. -Р.И., Шакиров Т.Т. Выделение экдистерона из корней Rhaponticum carthamoides//Химия природных соединений. -1980. -N 4.-С 528-530.

8. Куракина О. И. Булаев В.М. Экдистен - новое тонизирующее вещество в таблетках по 0,005 г. //Новые лекарственные препараты. -1990. -N 6. -С. 16-18.

9. Юрьев Ю. К. Практические работы по органической химии: B 2т. -М.: Московский университет, 1961. -Т.1. -С.67.

Claims

Способ получения экдизонов, включающий экстрацию измельченного растительного сырья, разделение конечного продукта и сопутствующих веществ и очистку, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют тонкоизмельченные менее 0,25 мм корневища с корнями левзеи, которые однократно экстрагируют 70%-ным этанолом при постоянном перемешивании в течение 4 ч при комнатной температуре при соотношении 1 мас.ч. сырья : 10 об.ч. экстрагента, полученный экстракт высушивают, отделение экдизонов проводят четырехкратной обработкой этилацетатом при объемном соотношении экстракта и суммарного количества этилацетата 1:10 соответственного, а затем проводят очистку экдизонов путем обработки экстракта тремя порциями 95%-ного этанола при объемном соотношении экстракта и суммарного количества этанола 1:7 в присутствии сорбента - окиси алюминия второй степени активности по Брокману при соотношении 1 об.ч. экстракта : 3,5 мас.ч. сорбента.