RU2109057C1 - Method of avermectin preparing - Google Patents
Method of avermectin preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2109057C1 RU2109057C1 RU94025291A RU94025291A RU2109057C1 RU 2109057 C1 RU2109057 C1 RU 2109057C1 RU 94025291 A RU94025291 A RU 94025291A RU 94025291 A RU94025291 A RU 94025291A RU 2109057 C1 RU2109057 C1 RU 2109057C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- avermectins
- avermectin
- extraction
- organic solvent
- water
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и касается получения микробиологическим методом авермектина - антибиотика сельскохозяйственного назначения. The invention relates to biotechnology and for obtaining the microbiological method of avermectin - an antibiotic for agricultural purposes.
Авермектин, обладающий противопаразитарной активностью, был открыт и запатентован как таковой в 1978 г и был первоначально назван "веществом С-076". Avermectin, which has antiparasitic activity, was discovered and patented as such in 1978 and was originally called the “C-076 substance”.
Один из способов его получения заключается в том, что после выращивания культуры продуцента вида Streptomyces avermetilis культуральную жидкость подкисляют до значения pH 1,5 - 6,0, экстрагируют несмешивающимся с водой растворителем при нагревании, декантируют экстракт, удаляют экстрагент и получают целевой продукт [1]. One of the ways to obtain it is that after growing a culture of a producer of the species Streptomyces avermetilis, the culture fluid is acidified to a pH of 1.5 - 6.0, extracted with a water-immiscible solvent when heated, the extract is decanted, the extractant is removed and the desired product is obtained [1 ].
В результате получают суммарный препарат авермектина, поскольку продуценты синтезируют группу антибиотиков авермектинового ряда, которые несколько отличаются по химической структуре. The result is a total preparation of avermectin, since the producers synthesize a group of antibiotics of the avermectin series, which differ somewhat in chemical structure.
Наиболее близким к предложенному по технической сущности является способ получения авермектина, позволяющий выделить отдельные компоненты авермектинового комплекса. Closest to the proposed technical essence is a method of producing avermectin, which allows you to select the individual components of the avermectin complex.
Этот способ-прототип состоит в том, что культуру-продуцент вида Sterptomyces avermitilis выращивают в питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отделяют мицелий, экстрагируют его смешивающимся с водой растворителем, экстракт концентрируют, подкисляют до значения pH примерно 4 и экстрагируют органическим растворителем, не смешивающимся с водой, с последующим разделением при необходимости компонентов авермектинового комплекса хроматографическим методом [2]. This prototype method consists in the fact that a producer culture of the species Sterptomyces avermitilis is grown in a nutrient medium containing carbon, nitrogen and mineral salts, the mycelium is separated, extracted with a water-miscible solvent, the extract is concentrated, acidified to a pH of about 4 and extracted an organic solvent not miscible with water, followed by separation, if necessary, of the components of the avermectin complex by chromatographic method [2].
Описанный способ позволяет получать кроме суммарного препарат более простые смеси компонентов или индивидуальные авермектины путем одной или нескольких процедур хроматографической очистки. The described method allows to obtain in addition to the total preparation simpler mixtures of components or individual avermectins by one or more chromatographic purification procedures.
Однако, как было установлено, полученные известными способами авермектины содержат значительные количества примесей в частности липидов и/или жирных кислот, которые в данных условиях хроматографической очистки отделить не удается. However, it was found that the avermectins obtained by known methods contain significant amounts of impurities, in particular lipids and / or fatty acids, which cannot be separated under the given chromatographic purification conditions.
Цель изобретения - получить авермектины с пониженным содержанием балластных веществ и тем самым повысить удельную активность авермектинов. The purpose of the invention is to obtain avermectins with a low content of ballast substances and thereby increase the specific activity of avermectins.
Поставленная цель была достигнута в результате того, что повторную экстракцию исходного первичного экстракта осуществляют в щелочных условиях. The goal was achieved as a result of the re-extraction of the initial primary extract is carried out under alkaline conditions.
Было показано, что в процессе повторной экстракции несмешивающимся с водой органическим растворителем исходного первичного экстракта в щелочной среде удается избавиться от значительного количества балластных веществ, которые не удаляются на дальнейших этапах хроматографической очистки. It was shown that in the process of re-extraction with a water-immiscible organic solvent of the initial primary extract in an alkaline medium, it is possible to get rid of a significant amount of ballast substances that are not removed at further stages of chromatographic purification.
Сущность предложенного способа состоит в следующем. The essence of the proposed method is as follows.
Культуру-продуцент вида Streptomyces avermitilis выращивают в оптимальных для роста условия на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли. A producer culture of the species Streptomyces avermitilis is grown under optimal growth conditions on a nutrient medium containing carbon, nitrogen, and mineral salts.
Традиционными методами отделяют мицелий, экстрагируют его смешивающимся с водой органическим растворителем, например, ацетоном и экстракт предпочтительно упаривают полностью или частично. Концентрат подщелачивают до значения pH 8,0 - 12,0 и экстрагируют органическим растворителем, не смешивающимся с водой, например, этилацетатом. By traditional methods, the mycelium is separated, extracted with a water-miscible organic solvent, for example, acetone, and the extract is preferably evaporated completely or partially. The concentrate is made alkaline to pH 8.0 - 12.0 and extracted with an organic solvent which is not miscible with water, for example, ethyl acetate.
Вторичный экстракт может быть непосредственно подвергнут хроматографии, но можно его упарить и остаток растворить в свежей порции того же или другого растворителя или в смеси растворителей. The secondary extract can be directly chromatographed, but it can be evaporated and the residue dissolved in a fresh portion of the same or another solvent or in a mixture of solvents.
Могут быть использованы любые известные системы растворителей для разделения авермектинов хроматографическими методами, например система хлороформ : метанол (80 - 100) : 1. Any known solvent system can be used to separate avermectins by chromatographic methods, for example, the chloroform: methanol (80-100): 1 system.
Приемлемо использование различных вариантов хроматографического разделений, в частности классической изократической хроматографии. Acceptable use of various options for chromatographic separation, in particular classical isocratic chromatography.
В качестве носителя могут быть использованы традиционные материалы, например силикагель. As the carrier, conventional materials, for example silica gel, can be used.
Существенное преимущество предложенного способа перед известными состоит в том, что полученные на стадии экстракционной очисти препараты авермектинов имеют в 6 - 10 раз более высокую удельную активность по сравнению с авермектинами, получаемыми известным способом. Для получения авермектинов с такой активностью по известному способу приходится осуществлять несколько этапов хроматографической очистки. В зависимости от использованных методов хроматографического разделения, авермектины, полученные известным способом, имеют удельную активность 150 - 500 мкг/мг после двух- или трехкратной хроматографии, в то время как средняя удельная активность авермектинов, выделенных предложенным способом, предусматривающим лишь однократную хроматографическую обработку экстракта, составляет величину не менее 900 мкг/мг. A significant advantage of the proposed method over the known ones is that the avermectins obtained at the extraction purification stage have a 6–10 times higher specific activity compared to the avermectins obtained by the known method. To obtain avermectins with such activity by a known method, it is necessary to carry out several stages of chromatographic purification. Depending on the chromatographic separation methods used, the avermectins obtained in a known manner have a specific activity of 150-500 μg / mg after two or three times chromatography, while the average specific activity of avermectins isolated by the proposed method, which involves only a single chromatographic processing of the extract, is not less than 900 mcg / mg.
То, что проведение этапа повторной экстракции авермектинов в условиях щелочной среды является ключевым моментом предложенного способа вытекает из данных таблицы. The fact that the stage of re-extraction of avermectins in an alkaline environment is a key point of the proposed method follows from the table.
Как видно из представленных в таблице данных (см. графы 5 и 7), полнота экстракции авермектинов в кислой и щелочной среде практически одинакова, однако препарат авермектина, полученный в щелочных условиях имеет на порядок большую удельную активность (сравни графы 4 и 6), что свидетельствует о значительно меньшем количестве балластных веществ в полученных предлагаемым способом препаратах авермектина. При этом процентное соотношение авермектинов в первичном экстракте и конечном препарате не меняется. As can be seen from the data presented in the table (see
Предложенный способ в равной мере может быть использован для получения суммарного препарата авермектина, определенных фракций авермектинов или индивидуальных авермектинов. The proposed method can equally be used to obtain the total preparation of avermectin, certain fractions of avermectins or individual avermectins.
Пример 1. Культуру Streptomyces avermitilis шт. 1051-3 выращивают в колбах объемом 750 мл, заполненных 100 мл питательной среды, содержащей, мас. %: глюкоза 4,5; лактоза 2,0; соевая мука 2,0; натрий хлористый 0,1; дрожжевой экстракт 0,25, при 28 ± 1oC в течение 168 ч. Общий объем полученной культуральной жидкости составил 2350 мл. После фильтрации на воронке Бюхнера было получено 529 г влажной биомассы. К полученной пасте приливают 500 мл ацетона. Общий объем экстракционной системы оказался приблизительно равным 1 л. Первичную экстракцию проводят при периодическом взбалтывании системы в течение 1 ч, а затем биомассу отделяют фильтрованием. Всего было получено 620 мл ацетонового экстракта, который содержит 583,3 мг смеси авермектинов. Ацетон отгоняют на роторном испарителе под вакуумом при температуре не выше 50oC и получают 300 мл мутного раствора, к которому добавляют 100 мл этилацетата и около 10 мл 8 %-ного раствора гидроксида натрия; в результате pH системы оказался равным 9,2. Повторную экстракцию проводят при периодическом перемешивании системы в течение 10 - 15 мин. Этилацетатный слой отделяют, а водную фазу дважды экстрагируют порциями этилацетата по 50 мл. Этилацетатные растворы объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и фильтруют. После упаривания экстракта было получено 1,54 г масла, содержащего 554,2 мг (36 мас. %) смеси авермектинов, которое было растворено в 4 мл смеси хлороформ : метанол (80 : 1). Раствор был нанесен на хроматографическую колонну длиной 25 см и диаметром 2,5 см, заполненную силикагелем марки L 40/100, которая предварительно была промыта 450 мл хлороформа и 100 мл упомянутой системы. Элюцию целевого продукта проводят системой хлороформ : метанол (80 : 1), причем общий объем элюента составил 560 мл, а скорость его пропускания равнялась 2 мл/мин. Элюат после колонки собирают в пробирки с помощью коллектора фракций, в каждой пробирке по 8 мл. По данным ТСХ авермектины содержатся в пробирках с 10 по 54, т.е. в объеме 360 мл. Элюаты, содержащие авермектины, объединяют, упаривают в вакууме, оставшееся масло растворяют в 3 мл ацетона, добавляют 14 мл гексана и упаривают в вакууме до сухого остатка. Получают 492 мг аморфного порошка белого цвета. Выход авермектинов составил 84,4 % от содержания в культуральной жидкости. Суммарная активность препарата равнялась 952 мкг/мг. В качестве балластных веществ препарат содержит до 2 % олигомицинов A и B.Example 1. Culture Streptomyces avermitilis pcs. 1051-3 grown in 750 ml flasks filled with 100 ml of culture medium containing, by weight. %: glucose 4.5; lactose 2.0; soy flour 2.0; sodium chloride 0.1; yeast extract 0.25, at 28 ± 1 o C for 168 hours. The total volume of the obtained culture fluid was 2350 ml. After filtration on a Buchner funnel, 529 g of wet biomass was obtained. 500 ml of acetone are added to the resulting paste. The total volume of the extraction system was approximately equal to 1 liter. The primary extraction is carried out with periodic shaking of the system for 1 h, and then the biomass is separated by filtration. In total, 620 ml of acetone extract was obtained, which contains 583.3 mg of avermectin mixture. Acetone is distilled off on a rotary evaporator under vacuum at a temperature not exceeding 50 ° C. and 300 ml of a turbid solution are obtained, to which 100 ml of ethyl acetate and about 10 ml of an 8% sodium hydroxide solution are added; as a result, the pH of the system was 9.2. Repeated extraction is carried out with periodic stirring of the system for 10 to 15 minutes. The ethyl acetate layer was separated, and the aqueous phase was extracted twice with 50 ml portions of ethyl acetate. Ethyl acetate solutions were combined, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. After evaporating the extract, 1.54 g of an oil was obtained containing 554.2 mg (36 wt.%) Of the avermectin mixture, which was dissolved in 4 ml of a mixture of chloroform: methanol (80: 1). The solution was applied to a chromatographic column 25 cm long and 2.5 cm in diameter, filled with L 40/100 silica gel, which had previously been washed with 450 ml of chloroform and 100 ml of the above system. The elution of the target product is carried out with a system of chloroform: methanol (80: 1), and the total volume of the eluent was 560 ml, and its transmission rate was 2 ml / min. The eluate after the column is collected in test tubes using a fraction collector, in each tube of 8 ml. According to TLC, avermectins are contained in tubes from 10 to 54, i.e. in a volume of 360 ml. The eluates containing avermectins are combined, evaporated in vacuo, the remaining oil is dissolved in 3 ml of acetone, 14 ml of hexane are added and evaporated in vacuo to a dry residue. Obtain 492 mg of an amorphous white powder. The yield of avermectins was 84.4% of the content in the culture fluid. The total activity of the drug was 952 μg / mg. As ballast substances, the preparation contains up to 2% of oligomycin A and B.
Пример 2. 340 мл культуральной жидкости, полученной в условиях примера 1, фильтруют на воронке Бюхнера, получают 120 г влажной пасты. К полученной пасте добавляют 120 мл ацетона и выдерживают 1 ч при периодическом взбалтывании, затем отфильтровывают. Получают 150 мл водно-ацетонового экстракта авермектинов, который упаривают в вакууме в роторном испарителе при температуре не выше 60oC. Получают мутный раствор объемом 90 мл с величиной pH 6,0. К полученному раствору приливают 100 мл этилацетата, интенсивно встряхивают и образовавшуюся стойкую суспензию разрушают путем добавления 3н. раствора щелочи. Смесь расслаивается при величине pH 9,5. Этилацетатный слой отделяют, а водную фазу дважды экстрагируют 50 мл этилацетата. Этилацетатные растворы объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия, осушитель отделяют фильтрованием, этилацетат отгоняют в вакууме при температуре не выше 45oC до получения вязкого остатка. Получают 345 мг вязкого масла, в котором содержится 138 мг (40%) смеси авермектинов, в том числе, %: A1 7,2; A2 8,9; B1 1,6; и B2 12,3. Полученное масло растворяют в 10 мл системы растворителей хлороформ-метанол (80 : 1) и с помощью насоса наносят на колонку с силикагелем (25 • 150 мм), предварительно прокачав через нее 450 мл хлороформа и приблизительно 100 мл системы. Вещества с колонки элюируют системой хлороформ-метанол (80 : 1) со скоростью 1,8 мл/мин. Фракции отбирают через 5 мин с помощью коллектора фракций (объем 9 мл). Процесс разделения контролируют методом ТСХ на пластинках фирмы Мерк с люминофором F254 в системе растворителей хлороформ : метанол (19 : 0,5), нанося по 4 мкл элюата. Близкие по компонентному составу фракции объединяют. Из пробирок 10 - 18 после упаривания элюата и переосаждения осадка из смеси растворителей ацетон : гексан (3 : 14) получают 50 мг смеси авермектинов A1 и A2 с соотношением 1 : 1,2, из пробирок 19 - 21 выделяют 6 мг смеси авермектинов A1, A2 и B1 с примерно равным соотношением компонентов между собой, из пробирок 22 - 31 получают 62 мг смеси авермектинов B1 и B2 с соотношением компонентов между собой 1 : 1, из пробирок 32 - 43 - 16 мг авермектина B2. Суммарный выход авермектинов составил 97 % от взятого для хроматографического разделения количества (138 мг). Таким образом, было получено 50 мг суммарного препарата авермектинов A с удельной активностью 950 мкг/мг и 62 мг суммарного препарата авермектинов B с удельной активностью 970 мкг/мг.Example 2. 340 ml of the culture fluid obtained in the conditions of example 1, filtered on a Buchner funnel, get 120 g of wet paste. To the resulting paste add 120 ml of acetone and incubated for 1 h with occasional shaking, then filtered. Get 150 ml of water-acetone extract of avermectins, which is evaporated in vacuum in a rotary evaporator at a temperature not exceeding 60 o C. Get a turbid solution of 90 ml with a pH value of 6.0. 100 ml of ethyl acetate are poured into the resulting solution, vigorously shaken and the resulting stable suspension is destroyed by adding 3N. alkali solution. The mixture exfoliates at a pH of 9.5. The ethyl acetate layer was separated, and the aqueous phase was extracted twice with 50 ml of ethyl acetate. The ethyl acetate solutions are combined, dried over anhydrous sodium sulfate, the desiccant is separated by filtration, ethyl acetate is distilled off in vacuo at a temperature not exceeding 45 o C to obtain a viscous residue. Get 345 mg of a viscous oil, which contains 138 mg (40%) of a mixture of avermectins, including,%: A 1 7.2; A 2 8.9; B 1 1.6; and B 2 12.3. The resulting oil was dissolved in 10 ml of a solvent system of chloroform-methanol (80: 1) and, using a pump, applied to a column of silica gel (25 • 150 mm), after which 450 ml of chloroform and approximately 100 ml of the system were pumped through it. Substances from the column are eluted with the chloroform-methanol system (80: 1) at a rate of 1.8 ml / min. Fractions were collected after 5 minutes using a fraction collector (9 ml volume). The separation process is controlled by TLC on Merck plates with phosphor F 254 in a solvent system of chloroform: methanol (19: 0.5), applying 4 μl of eluate. Fractions close in component composition are combined. From test tubes 10 to 18, after evaporation of the eluate and reprecipitation of the precipitate from a solvent mixture of acetone: hexane (3: 14), 50 mg of a mixture of avermectins A 1 and A 2 with a ratio of 1: 1.2 are obtained, 6 mg of a mixture of avermectins are isolated from test tubes 19 - 21 A 1 , A 2 and B 1 with an approximately equal ratio of components to each other, from tubes 22 - 31 receive 62 mg of a mixture of avermectins B 1 and B 2 with a ratio of components between themselves 1: 1, from tubes 32 - 43 - 16 mg of avermectin B 2 . The total yield of avermectins amounted to 97% of the amount taken for chromatographic separation (138 mg). Thus, 50 mg of the total preparation of avermectins A with a specific activity of 950 μg / mg and 62 mg of the total preparation of avermectins B with a specific activity of 970 μg / mg were obtained.
Пример 3. Водно-ацетоновый экстракт авермектинов объемом 480 мл, полученный из 1390 мл культуральной жидкости (384 г биомассы) упаривают на роторном испарителе под вакуумом при температуре не выше 50oC в 2,4 раза. К полученному мутному раствору объемом 200 мл добавляют 100 мл этилацетата и добавлением 10 мл 10 %-ного раствора гидроксида натрия доводят pH до значения 9 - 10. Раствор встряхивают, этилацетатный слой отделяют, а водную фазу дважды экстрагируют 50 мл этилацетата. Этилацетатные растворы объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и отфильтровывают. После отгонки этилацетата получают 1,5 г масла, в котором содержится 450 мг (30 %) авермектинов, в том числе, %: A1 3,3; A2 7,0; B1 15,7 и B2 4,0.Example 3. Water-acetone extract of avermectins with a volume of 480 ml, obtained from 1390 ml of culture fluid (384 g of biomass) is evaporated on a rotary evaporator under vacuum at a temperature of not higher than 50 o C 2.4 times. To the resulting cloudy solution with a volume of 200 ml, 100 ml of ethyl acetate was added and the pH was adjusted to 9 to 10 by adding 10 ml of a 10% sodium hydroxide solution. The solution was shaken, the ethyl acetate layer was separated, and the aqueous phase was extracted twice with 50 ml of ethyl acetate. Ethyl acetate solutions were combined, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. After distillation of ethyl acetate, 1.5 g of oil are obtained, which contains 450 mg (30%) of avermectins, including%: A 1 3.3; A 2 7.0; B 1 15.7 and B 2 4.0.
Полученную смесь авермектинов растворяют 4 мл системы хлороформ-метанол (100 : 1) и с помощью насоса наносят на колонку 25 • 250 мм, заполненную суспензией силикагеля в абс. EtOH, через которую предварительно прокачивают 290 мл системы хлороформ : метанол (100 : 1). Вещества с колонки элюируют со скоростью 1,8 мл/мин, отбирают в пробирки через 5 мин (объем 9 мл). Процесс разделения контролируют методом ТСХ, как это представлено в примере 2. Пробирки с одинаковым компонентным составом объединяют по фракциям. Растворители после объединения фракций полностью удаляют в вакууме, остаток переосаждают из смеси ацетон-гексан. Фракция 1 (пробирки 7 - 9) общей массой 2,1 мг содержит, %: A1 46,9 и A2 9,6. Фракция 2 (пробирки 10 -12) массой 49,2 мг содержит, %: A1 44 и A2 52. Фракция 3 (пробирки 13 - 19) массой 65,6 мг представляет собой 100 % смесь авермектинов A1 и A2 с соотношением между собой 1 : 2, соответственно. Фракция 4 (пробирки 20 - 21) массой 16,1 мг на 98 % состоит из A2, а в качестве примеси содержит около 2 % A1. Промежуточная фракция 5 (пробирки 22 - 23) массой 15,1 мг представляет собой смесь авермектинов, состоящую, %: A1 1,8; A2 36,7 и (B1 + B2) 61,5. Фракция 6 (пробирки 24 - 40) массой 206 мг состоит на 98 % из авермектинов B1 и B2 и, наконец, фракция 7 (пробирки 41 - 64) массой 25,5 мг представляет собой чистый авермектин B2. Таким образом, было получено 16,1 мг индивидуального авермектина A2 с удельной активностью 980 мкг/мг и 25,5 мг индивидуального авермектина B2 с удельной активностью 975 мкг/мг.The resulting mixture of avermectins is dissolved in 4 ml of a chloroform-methanol system (100: 1) and, using a pump, applied to a 25 x 250 mm column filled with a suspension of silica gel in abs. EtOH, through which 290 ml of the chloroform: methanol system (100: 1) were previously pumped. Substances from the column are eluted at a rate of 1.8 ml / min, taken into test tubes after 5 min (volume 9 ml). The separation process is controlled by TLC, as shown in example 2. Tubes with the same component composition are combined in fractions. After combining the fractions, the solvents were completely removed in vacuo, the residue was reprecipitated from acetone-hexane. Fraction 1 (
В доступной научно-технической и в патентной литературе не было обнаружено сведений о проведении экстракции авермектинов в щелочной среде. Производные авермектина, например, 22-гидрокси-авермектины также рекомендовано экстрагировать в кислой среде [3] . Более того, имеются указания, что при значениях pH выше 7,0 имеет место разложение авермектина и по этой причине рекомендуется остатки после экстракции авермектинов обрабатывать щелочью, чтобы инактивировать не извлеченные авермектины и улучшить условия труда, поскольку авермектины являются токсичными продуктами [1]. In the available scientific, technical and patent literature, no information was found on the extraction of avermectins in an alkaline medium. Derivatives of avermectin, for example, 22-hydroxy-avermectins, are also recommended to be extracted in an acidic medium [3]. Moreover, there are indications that decomposition of avermectin takes place at pH values above 7.0, and for this reason it is recommended that residues after extraction of avermectins be treated with alkali in order to inactivate unrecovered avermectins and improve working conditions, since avermectins are toxic products [1].
Как оказалось в результате исследований, в условиях многокомпонентной эктсракционной системы на этапе повторной экстракции авермектинов инактивации последнего в щелочной среде не происходит, что подтверждается данными приведенной таблицы сравнения. As it turned out as a result of research, under the conditions of a multicomponent ectraction system at the stage of repeated extraction of avermectins, inactivation of the latter in an alkaline medium does not occur, which is confirmed by the data in the comparison table.
Изложенное дает основание полагать, что достигнутый полезный результат не вытекал из известного уровня знаний, а заявленное техническое решение соответствует требованиям, предъявляемым к изобретению. The foregoing gives reason to believe that the achieved useful result did not follow from a known level of knowledge, and the claimed technical solution meets the requirements of the invention.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94025291A RU2109057C1 (en) | 1994-07-05 | 1994-07-05 | Method of avermectin preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94025291A RU2109057C1 (en) | 1994-07-05 | 1994-07-05 | Method of avermectin preparing |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94025291A RU94025291A (en) | 1996-05-10 |
| RU2109057C1 true RU2109057C1 (en) | 1998-04-20 |
Family
ID=20158128
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94025291A RU2109057C1 (en) | 1994-07-05 | 1994-07-05 | Method of avermectin preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2109057C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2886640A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-24 | Riga Technical University | Process for isolation of milbemycins A3 and A4 |
-
1994
- 1994-07-05 RU RU94025291A patent/RU2109057C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2886640A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-24 | Riga Technical University | Process for isolation of milbemycins A3 and A4 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94025291A (en) | 1996-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU716524A3 (en) | Method of preparing substances possessing antiparasitic activity | |
| US4160861A (en) | Method for the separation of antibiotic macrolides | |
| DE2634499C2 (en) | Tylosin acyl derivatives, processes for their production and pharmaceutical preparations and animal feed preparations containing these compounds | |
| JP3039780B2 (en) | Production method of immunosuppressants | |
| JPH0320279A (en) | Novel immunosuppressive agent | |
| DE2513855A1 (en) | NEW ANTIBIOTICS, METHODS OF MANUFACTURING AND MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING THESE COMPOUNDS | |
| JPH02142795A (en) | Novel immunosuppressive agent compound | |
| US4594248A (en) | CL-1577-B4 compound, its production and use | |
| JPH04352783A (en) | 12-membered ring macrolide compound | |
| RU2109057C1 (en) | Method of avermectin preparing | |
| US4161583A (en) | Method for the separation and purification of antibiotic macrolides | |
| KR920009510B1 (en) | Process for manufacturing lankacidins | |
| JPH0686682A (en) | Production of 4',7,8-trihydroxyisoflavone | |
| DE2839668C2 (en) | ||
| US4172940A (en) | Purification of C-076 compounds by single column chromatography | |
| US4160083A (en) | Process for the separation of antibiotic macrolides | |
| CH626628A5 (en) | Process for the preparation of an antibiotic | |
| JPS5948992B2 (en) | Antibiotic C-14482A↓1 | |
| PT84447B (en) | Process for the preparation of a macrolide compound and of compositions containing the same | |
| US4296101A (en) | Antibiotic kristenin | |
| CA1113874A (en) | Antibiotic bl580 zeta from streptomyces hydroscopicus | |
| DD298276A5 (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF CYCLOSPORIN A | |
| JPH0120153B2 (en) | ||
| SU1547711A3 (en) | Method of dawnorubicin-hydrochloride | |
| JPH05168488A (en) | Production of macrolide antibiotic |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090706 |