RU2108750C1

RU2108750C1 - Method for diagnosing chronic endometritis

Info

Publication number: RU2108750C1
Application number: RU95116328A
Authority: RU
Inventors: Л.В. Посисеева; Е.Л. Бойко; Н.Ю. Борзова; А.И. Малышкина; Н.В. Шехлова
Original assignee: Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства МЗ и МП РФ
Priority date: 1995-09-25
Filing date: 1995-09-25
Publication date: 1998-04-20

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves determining soluble leukocyte antigen level in menstrual blood. The soluble leukocyte antigen level being equal to 640 mcg/l, chronic endometritis diagnosis is set. EFFECT: simple method of high accuracy. 1 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, может быть использовано для диагностики хронического эндометрита по содержанию некоторых растворимых белков в менструальной крови. The invention relates to medicine, namely to obstetrics and gynecology, can be used to diagnose chronic endometritis by the content of some soluble proteins in menstrual blood.

Воспалительные заболевания внутренних половых органов чаще возникают в молодом возрасте и у 65-77,8% больных принимают тяжелое, затяжное течение, что ведет к потере трудоспособности женщин и бесплодию [1 и 2]. Inflammatory diseases of the internal genital organs more often occur at a young age and in 65-77.8% of patients they take a severe, protracted course, which leads to women's disability and infertility [1 and 2].

Частота хронических эндометритов (ХЭ), по данным различных авторов, варьирует в широких пределах - от 0,2 до 66,3%, составляя в среднем 14% [3 и 4]. По-видимому, такой широкий диапазон частоты ХЭ можно объяснить использованием различных морфологических критериев при постановке диапазона. В последние годы наблюдается тенденция к увеличению частоты ХЭ, что связано с широким использованием внутриматочной контрацепции, ростом числа абортов и различных внутриматочных манипуляций, в том числе и эндоскопических методов исследования. The frequency of chronic endometritis (CE), according to various authors, varies widely - from 0.2 to 66.3%, averaging 14% [3 and 4]. Apparently, such a wide range of CE frequencies can be explained by the use of various morphological criteria in setting the range. In recent years, there has been a tendency to increase the incidence of CE, which is associated with the widespread use of intrauterine contraception, an increase in the number of abortions and various intrauterine manipulations, including endoscopic research methods.

В качестве прототипа избран метод гистологического исследования соскоба эндометрия. Соскоб эндометрии целесообразно производить в конце фазы секреции (на 5 - 6 день подъема базальной температуры). Полученный материал фиксируют в 15%-ном растворе формалина, окрашивают гематоксилин-зозином. Хронический эндометрит выявляется на основании наличия плазматических клеток и наклонности к преимущественно очаговому скоплению мелкоклеточного инфильтрата [5 и 6]. As a prototype, a method of histological examination of endometrial scraping was selected. Endometrial scraping is advisable to produce at the end of the secretion phase (on the 5th-6th day of basal temperature rise). The resulting material is fixed in a 15% formalin solution, stained with hematoxylin-zosin. Chronic endometritis is detected on the basis of the presence of plasma cells and a tendency to predominantly focal accumulation of small cell infiltrate [5 and 6].

Недостатками способа-прототипа являются:
1. Основным условием способа является осуществление тотального соскоба эндометрия (точность метода в этом случае 90,1 - 95%), при биопсии (локальном заборе) эндометрия точность способа не превышает 64%.The disadvantages of the prototype method are:
1. The main condition of the method is the implementation of total scraping of the endometrium (the accuracy of the method in this case is 90.1 - 95%), with a biopsy (local sampling) of the endometrium, the accuracy of the method does not exceed 64%.

2. Метод не позволяет проводить исследования в динамике. 2. The method does not allow research in dynamics.

3. Биопсия эндометрия травматична, может сопровождаться осложнениями, представляющими опасность не только для здоровья, но и жизни женщины:
перфорацией матки,
кровотечением,
повреждением кишечника, мочевого пузыря,
образованием синехий в полости матки,
формированием истмико-цервикальной недостаточности,
инфекционными осложнениями,
осложнениями при проведении анестезиологического пособия и др.3. An endometrial biopsy is traumatic, may be accompanied by complications that are dangerous not only for health but also for a woman’s life:
uterine perforation
bleeding
damage to the intestines, bladder,
the formation of synechia in the uterine cavity,
the formation of isthmic-cervical insufficiency,
infectious complications
complications during anesthetic management, etc.

4. Не исключена опасность инфицирования гепатитом, СПИДом. 4. The risk of infection with hepatitis, AIDS is not excluded.

5. Биопсия эндометрия производится в специально оборудованном кабинете для малых гинекологических операций. Женщина освобождается от работы, что связано с экономическим ущербом. 5. An endometrial biopsy is performed in a specially equipped room for small gynecological operations. A woman is relieved of work due to economic damage.

6. Требуются специализированные методики и оборудование для патоморфологических подразделений. 6. Specialized techniques and equipment for pathomorphological units are required.

7. Данный способ продолжается по времени (гистологическое исследование проводится в течение 5 - 7 дн), что приводит к несвоевременности лечения. 7. This method continues in time (histological examination is carried out within 5 - 7 days), which leads to untimely treatment.

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе. These disadvantages can be eliminated in the proposed method.

Целью изобретения является повышение точности и упрощение диагностики хронического эндометрита у женщин по содержанию растворимого антигена лейкоцитов-2 (РАЛ-2) в менструальной крови. The aim of the invention is to increase the accuracy and simplify the diagnosis of chronic endometritis in women by the content of soluble leukocyte-2 antigen (RAL-2) in menstrual blood.

Поставленная цель достигается тем, что в менструальной крови женщины определяется содержание РАЛ-2 и при его уровне от 640 мкг/мл и выше диагностируется наличие хронического эндометрита в 76,9% случаев. This goal is achieved by the fact that the content of RAL-2 is determined in the woman’s menstrual blood and, with its level of 640 μg / ml or higher, the presence of chronic endometritis is diagnosed in 76.9% of cases.

Новизна изобретения заключается в том, что впервые предлагается диагностика хронического эндометрита у женщин по определению РАЛ-2 в менструальной крови. Ранее исследования менструальной крови женщин на РАЛ-2 с целью диагностики воспалительных процессов матки не проводились. The novelty of the invention lies in the fact that for the first time a diagnosis of chronic endometritis in women is proposed by the definition of RAL-2 in menstrual blood. Previously, studies of the menstrual blood of women on RAL-2 in order to diagnose inflammatory processes of the uterus were not conducted.

Растворимый антиген лейкоцитов-2 (РАЛ-2) впервые описан в 1982 г. Д.Д. Петруниным и соавт. [7]. Этот гликопротеин с молекулярной массой 90000±7000 Д и электрофоретической подвижностью альфа-2 глобулинов выдерживают нагревание до 100^oC в течение 1 ч. В большом количестве РАЛ-2 содержится в экстрактах органов, богатых лимфоидной тканью, а также в сперме. В эндометрии, в менструальной крови и слизи цервикального канала РАЛ-2 обнаруживается в небольшом количестве, причем его показатели не зависят от фазы менструального цикла и функции яичников [8].The soluble leukocyte-2 antigen (RAL-2) was first described in 1982. Petrunin et al. [7]. This glycoprotein with a molecular weight of 90,000 ± 7,000 D and electrophoretic mobility of alpha-2 globulins can withstand heating up to 100 ^o C for 1 hour. A large amount of RAL-2 is contained in extracts of organs rich in lymphoid tissue, as well as in semen. In the endometrium, in the menstrual blood and mucus of the cervical canal, RAL-2 is found in a small amount, and its indicators do not depend on the phase of the menstrual cycle and ovarian function [8].

Важным свойством РАЛ-2, как и большинства других антигенов системы РАЛ, является его высокая устойчивость к ферментативным воздействиям. Имея высокую резистентность к действию протеолитических ферментов, РАЛ-2 может выполнить свою биологическую функцию в очагах деструкции и воспаления, где концентрируются лизосомальные протеолитические энзимы из лейкоцитов [9]. При хроническом сальпингоофорите содержание РАЛ-2 в сыворотке крови женщин возрастает [10 и 11]. An important property of RAL-2, like most other antigens of the RAL system, is its high resistance to enzymatic influences. Having high resistance to the action of proteolytic enzymes, RAL-2 can fulfill its biological function in the foci of destruction and inflammation, where lysosomal proteolytic enzymes from leukocytes are concentrated [9]. In chronic salpingo-oophoritis, the content of RAL-2 in the blood serum of women increases [10 and 11].

Способ осуществляется следующим образом. У женщин в 1-2 день менструации забирают до 15 капель менструальной крови путем введения во влагалище ложкообразного или двустворчатого зеркала, на котором скапливается кровь, находящаяся во влагалище и стекающая из наружного зева шейки матки. Зеркало извлекается, менструальная кровь с него сливается в пробирку. Женщина может собрать менструальную кровь в чистую склянку самостоятельно в домашних условиях и хранить до проведения исследования в обычной морозильной камере при температуре ниже 0^oC. При проведении исследования менструальную кровь размораживают при комнатной температуре. Исследование РАЛ-2 осуществляется методом двойной иммунодиффузии в агаре со стандартной тест-системой против РАЛ-2. Способ полуколичественный. Перед производством анализа готовится ряд разведений исследуемой менструальной крови в дистиллированной воде в лунках полиэтиленовой матрицы соответственно 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1: 128, 1:256. Реакцию проводят на обезжиренных предметных стеклах, залитых расплавленным 1%-ным раствором агара типа "Дифко" с 2,5%-ным раствором поваренной соли из расчета 5 мл геля на один анализ. При застывании агара в нем пробивают лунки специальным стандартным штампом "семерка". На одном стекле делают две "семерки". Агар из лунок удаляют тонкой иглой. В центральную лунку каждой из "семерок" с помощью пастеровской пипетки заливают антисыворотку против РАЛ-2, в две противолежащие - раствор стандартного антигена, а в оставшиеся четыре - исследуемую менструальную кровь в разных разведения. Стекла помещают в чашки Петри с влажной средой. Иммунопроявление длится 18 - 24 ч. Результаты читаются на следующий день в проходящем свете. Учитывается последний подгиб линии прицепитации возле лунки с соответствующим разведением исследуемой крови. Это разведение умножается на чувствительность метода - 5 мкг/мл. Таким образом, получают полуколичественную оценку результата. Полученный результат сравнивают с нормативными показателями РАЛ-2 менструальной крови женщин. При постановке реакции на РАЛ-2 на один анализ используется одно предметное стекло с агаром.The method is as follows. In women, on the 1-2 day of menstruation, up to 15 drops of menstrual blood are taken by introducing a spoon-shaped or bivalve mirror into the vagina, on which blood is stored in the vagina and draining from the external pharynx of the cervix. The mirror is removed, menstrual blood is drained from it into a test tube. A woman can collect menstrual blood in a clean bottle on her own at home and store until the study in a normal freezer at a temperature below 0 ^o C. During the study, menstrual blood is thawed at room temperature. The study of RAL-2 is carried out by double immunodiffusion method in agar with a standard test system against RAL-2. The method is semi-quantitative. Before the analysis, a series of dilutions of the studied menstrual blood in distilled water in the wells of the polyethylene matrix is prepared, respectively 1: 1, 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1:16, 1:32, 1:64, 1: 128, 1 : 256. The reaction is carried out on fat-free slides filled with molten 1% Difco type agar solution with 2.5% sodium chloride solution at the rate of 5 ml of gel per analysis. When the agar hardens, the holes are punched with a special standard stamp "seven". Two "sevens" are made on one glass. Agar is removed from the wells with a thin needle. Using a Pasteur pipette, an antiserum against RAL-2 is poured into the central well of each of the “sevens”, a solution of standard antigen is put into two opposite ones, and the studied menstrual blood is diluted in different dilutions in the remaining four. Glasses are placed in Petri dishes with a moist environment. Immunological manifestation lasts 18-24 hours. The results are read the next day in transmitted light. The last fold of the line of attachment near the well with the appropriate dilution of the test blood is taken into account. This dilution is multiplied by the sensitivity of the method - 5 μg / ml. Thus, a semi-quantitative assessment of the result is obtained. The result obtained is compared with the normative indicators of RAL-2 of menstrual blood of women. When stating the reaction to RAL-2 for one analysis, one glass slide with agar is used.

Существенными отличиями способа-прототипа от заявленного способа являются:
Во-первых, предложен диагностический параметр в виде РАЛ-2 менструальной крови, соответствующий при хроническом эндометрите 640 мкг/мл и выше.Significant differences of the prototype method from the claimed method are:
Firstly, a diagnostic parameter in the form of RAL-2 menstrual blood is proposed, which is suitable for chronic endometritis of 640 μg / ml and higher.

Во-вторых, используется другая биологическая среда - менструальная кровь (в способе-прототипе используется соскоб слизистой оболочки матки). Secondly, another biological medium is used - menstrual blood (in the prototype method, scraping of the uterine mucosa is used).

Существо способа поясняется следующими примерами:
Пример 1. Пациента А, 25 лет, обратилась к врачу акушеру-гинекологу по поводу вопроса о контрацепции. На основании клинических и лабораторных данных, акушерско-гинекологического анамнеза поставлен диагноз: практически здорова. Проведено ультразвуковое исследование - патологии органов малого таза не выявлено. При гистологическом исследовании соскоба эндометрия выявлен секреторно-менструальный эндометрий. Согласно заявляемому способу в менструальной крови проведено исследование содержания РАЛ-2, значение этого показателя составило 10 мкг/мл. Дано заключение: противопоказаний для внутриматочной контрацепции не выявлено. Излучен катамнез пациентки, патологических изменений не было.The essence of the method is illustrated by the following examples:
Example 1. Patient A, 25 years old, consulted an obstetrician-gynecologist regarding the issue of contraception. Based on the clinical and laboratory data, obstetric and gynecological history, the diagnosis was made: almost healthy. An ultrasound scan was performed - no pathology of the pelvic organs was detected. A histological examination of endometrial scraping revealed a secretory-menstrual endometrium. According to the claimed method in the menstrual blood, a study of the content of RAL-2 was carried out, the value of this indicator was 10 μg / ml. Conclusion is given: no contraindications for intrauterine contraception have been identified. The patient's follow-up radiation was emitted; there were no pathological changes.

Пример 2. Больная С., 25 лет, имеющая в анамнезе один самопроизвольный выкидыш, обратилась к врачу акушеру-гинекологу с жалобами на периодические боли внизу живота, слизисто-желтоватые бели из половых путей. При осмотре: шейка матки чистая, без дефектов; наружный зев сомкнут. Матка не увеличена, плотная, чуть болезненная при пальпации. Придатки не увеличены. Выделения слизистые. В клинических и биологических анализах крови и мочи патологии не выявлено, в мазках - III степень чистоты влагалища, гонококк и трихомонады не обнаружены. При проведении ультразвукового исследования патологии со стороны органов малого таза не выявлено. Проведенное на 22 день цикла гистологическое исследование эндометрий средней фазы секреции, хронический эндометрит. Взята менструальная кровь и согласно предлагаемому способу проведено исследование содержания РАЛ-2. Концентрация белка в менструальной крови равна 640 мкг/мл. Заключение: у больной С. - хронический эндометрит. Example 2. Patient S., 25 years old, with a history of one spontaneous miscarriage, went to the obstetrician-gynecologist with complaints of recurrent pain in the lower abdomen, mucous-yellowish whites from the genital tract. On examination: the cervix is clean, free of defects; the external pharynx is closed. The uterus is not enlarged, dense, slightly painful on palpation. Appendages are not enlarged. Mucous discharge. In clinical and biological analyzes of blood and urine, pathology was not detected, in smears - III degree of purity of the vagina, gonococcus and Trichomonas were not found. When conducting an ultrasound examination of the pathology from the pelvic organs was not detected. Conducted on the 22nd day of the cycle, a histological examination of the endometrium of the middle phase of secretion, chronic endometritis. Menstrual blood was taken and, according to the proposed method, a study of the content of RAL-2 was conducted. The concentration of protein in menstrual blood is 640 mcg / ml. Conclusion: in patient S. - chronic endometritis.

Пример 3. Больная А., 30 лет, с первичным бесплодием в течение 5 лет. Обратилась на прием к врачу акушеру-гинекологу с жалобами на отсутствие беременности, периодические боли внизу живота и в области крестца, межменструальные кровянистые выделения из половых путей. При осмотре: шейка матки без дефектов, чистая; наружный зев сомкнут. Матка не увеличена, подвижная, плотноватая, при пальпации чуть болезненная. Придатки не увеличены, выделения слизистые. В клинических и биохимических анализах крови и мочи патологии не выявлено, в мазках - II степень чистоты влагалища, гонококк и трихомонады не обнаружены. При ультразвуковом исследовании патологии со стороны органов малого таза не выявлено. Обследование способом-прототипом: при гистологическом исследовании соскоба эндометрия выявлена ранняя фаза секреции, хронический эндометрит. При обследовании заявленным способом: РАЛ-2 в менструальной крови обнаружен в концентрации 1:256, что составляет 1280 мкг/мл. Заключение: хронический эндометрит. Example 3. Patient A., 30 years old, with primary infertility for 5 years. I went to an obstetrician-gynecologist to see a doctor with complaints of a lack of pregnancy, periodic pain in the lower abdomen and in the sacral region, intermenstrual bleeding from the genital tract. On examination: the cervix is defective, clean; the external pharynx is closed. The uterus is not enlarged, mobile, dense, a little painful on palpation. The appendages are not enlarged, the discharge is mucous. In clinical and biochemical analyzes of blood and urine pathology was not detected, in smears - II degree of purity of the vagina, gonococcus and Trichomonas were not found. An ultrasound examination of the pathology of the pelvic organs was not detected. Examination by the prototype method: a histological examination of endometrial scraping revealed an early phase of secretion, chronic endometritis. When examining the claimed method: RAL-2 in menstrual blood was found at a concentration of 1: 256, which is 1280 mcg / ml. Conclusion: chronic endometritis.

Преимущества заявляемого способа. The advantages of the proposed method.

1. Высокая точность прогноза - 76,9%. 1. High forecast accuracy - 76.9%.

2. Абсолютная безопасность и доступность метода связана с исследованием менструальной крови на РАЛ-2, позволяющее в динамике оценивать результаты лечения. 2. The absolute safety and accessibility of the method is associated with the study of menstrual blood on RAL-2, which allows the dynamics to evaluate the results of treatment.

3. Простота и доступность использования тест-систем на РАЛ-2 позволяют широко его использовать в практическом здравоохранении. 3. The simplicity and accessibility of the use of test systems on RAL-2 make it possible to widely use it in practical health care.

Как видно из таблицы, точность заявляемого способа 76,9%, прототипа 66,7%. Применение данного способа позволяет достичь поставленную цель - осуществить диагностику ХЭ с точностью до 76,9% и контролировать эффективность лечения. As can be seen from the table, the accuracy of the proposed method is 76.9%, prototype 66.7%. The application of this method allows to achieve the goal - to diagnose CE with an accuracy of 76.9% and to monitor the effectiveness of treatment.

Таким образом, заявляемый способ диагностики хронического эндометрита у женщин обеспечивает, наряду с высокой точностью и простотой выполнения, полную безопасность для женщины и доступность использования по сравнению со способом-прототипом. Thus, the claimed method for the diagnosis of chronic endometritis in women provides, along with high accuracy and ease of implementation, complete safety for women and the availability of use in comparison with the prototype method.

Использование предлагаемого способа позволит своевременно начать полноценное лечение, что будет способствовать снижению частоты воспалительных заболеваний гениталий и нарушений репродуктивной функции женщины. Using the proposed method will allow you to start a full-fledged treatment in a timely manner, which will help to reduce the frequency of inflammatory diseases of the genitals and impaired reproductive function of women.

Список литературы. List of references.

1. Бодяжина В.И. Хронические неспецифические воспалительные заболевания женских половых органов. -М.: Медицина, 1978, с. 319. 1. Bodyazhina V.I. Chronic non-specific inflammatory diseases of the female genital organs. -M .: Medicine, 1978, p. 319.

2. Кейт Л и Бергер Г. Причины инфекционных заболеваний малого таза. //Репродуктивное здоровье. /Под ред. Кейта Л. и др. Пер. с англ. - М.: Медицина, 1988. т.1, - гл. 1, с. 123 - 231. 2. Kate L and Berger G. Causes of infectious diseases of the pelvis. // Reproductive health. / Ed. Keita L. et al. Per. from English - M.: Medicine, 1988.V. 1, - ch. 1, p. 123 - 231.

3. Савельева Г. М. и Антонова Л.В. Острые воспалительные заболевания внутренних половых органов женщин. - М.: Медицина 1987, с.158. 3. Savelyeva G. M. and Antonova L.V. Acute inflammatory diseases of the internal genital organs of women. - M .: Medicine 1987, p. 158.

4. Бодяжина В.И., Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология. - М.: Медицина, 1990 с.316-319. 4. Bodyazhina V.I., Smetnik V.P., Tumilovich L.G. Non-operative gynecology. - M .: Medicine, 1990 p. 316-319.

5. Волкова О.В. и Елецкий Ю.И. Основы гистологии с гистологической технической. - М.: Медицина, 1992, 202 с. 5. Volkova OV and Yeletsky Yu.I. Fundamentals of histology with histological technical. - M.: Medicine, 1992, 202 p.

6. Петрова Е. Н. Гистологическая диагностика заболеваний матки. - М.: Медицина, 1959, с. 93-94. 6. Petrova E. N. Histological diagnosis of uterine diseases. - M.: Medicine, 1959, p. 93-94.

7. Петрунин Д.Д. Лопухин Ю.М., Молоденков М.Н. и Олефиренко Г.А. Иммунохимическая идентификация термостабильного альфа-гликопротеина в сыворотках крови при некоторых заболеваниях с патологией иммунной системы. - Бюлл. экспер. биол, 1982, N 4 с. 66-68. 7. Petrunin D.D. Lopukhin Yu.M., Molodenkov M.N. and Olefirenko G.A. Immunochemical identification of thermostable alpha-glycoprotein in blood serum in some diseases with pathology of the immune system. - Bull. an expert. Biol, 1982, N 4 S. 66-68.

8.Шевченко О.П., Пшеничников Т.Я., Волков Н.И. и Петрунин Д.Д. Иммунологические исследования антигенов индометрия. - Иммунология, 1985. N 3, c. 73 - 74. 8. Shevchenko O.P., Pshenichnikov T.Ya., Volkov N.I. and Petrunin D.D. Immunological studies of indometry antigens. - Immunology, 1985. N 3, c. 73 - 74.

9. Петрунин Д.Д. и Лопухин Ю.М. Сравнительное иммунохимическое и физико-химическое излучение системы растворимых антигенов лейкоцитов человека. - Гематология и трансфузиология, 1985, Т 11, с. 3 - 7. 9. Petrunin D.D. and Lopukhin Yu.M. Comparative immunochemical and physico-chemical radiation of a system of soluble human leukocyte antigens. - Hematology and transfusiology, 1985, T 11, p. 3 - 7.

10. Стрижова Н.В. Гаспарян Н.Н., Петрунина Ю.А. и Туменова С.К. Сравнительное иммунохимическое излучение системы растворимых антигенов лейкоцитов у женщин с хроническим сальпингофоритом в стадии ремиссии. - Акушерство и гинекология, 1987, N 3, с. 44 - 46. 10. Strizhova N.V. Gasparyan N.N., Petrunina Yu.A. and Tumenova S.K. Comparative immunochemical radiation of a system of soluble leukocyte antigens in women with chronic salpingo-oophoritis in remission. - Obstetrics and gynecology, 1987, N 3, p. 44 - 46.

11. Стрижова Н.В. Петрунина Ю.А. и Гаспарян Н.Н. Иммунохимическое излучение системы растворимых антигенов лейкоцитов у больных с обострением хронического сальпингоофорита. Акушерство и гинекология, 1984, N 2, с. 58 - 59. 11. Strizhova N.V. Petrunina Yu.A. and Gasparyan N.N. Immunochemical radiation of a system of soluble leukocyte antigens in patients with exacerbation of chronic salpingo-oophoritis. Obstetrics and Gynecology, 1984, N 2, p. 58 - 59.

Claims

A method for diagnosing chronic endometritis by determining an immunochemical parameter, characterized in that the level of soluble leukocyte-2 antigen (RAL-2) is determined as an immunochemical parameter in menstrual blood and chronic endometritis is diagnosed at a level of RAL-2 equal to or higher than 640 μg / ml .