RU2103345C1 - Method of hydrolyzate preparing and their using for nutrient media preparing for microorganism culturing - Google Patents
Method of hydrolyzate preparing and their using for nutrient media preparing for microorganism culturing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2103345C1 RU2103345C1 RU96112604A RU96112604A RU2103345C1 RU 2103345 C1 RU2103345 C1 RU 2103345C1 RU 96112604 A RU96112604 A RU 96112604A RU 96112604 A RU96112604 A RU 96112604A RU 2103345 C1 RU2103345 C1 RU 2103345C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hydrolyzate
- hydrolysis
- globulins
- ammonia
- blood clots
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологии, а именно к способам получения гидролизатов из отходов вакцинно-сывороточного и инкубаторного производства и использование их при изготовлении накопительных питательных сред для культивирования микроорганизмов и может быть использовано при промышленном приготовлении бактерийных вакцин. The invention relates to microbiology, and in particular to methods for producing hydrolysates from waste vaccine-whey and incubator production and their use in the manufacture of storage media for the cultivation of microorganisms and can be used in the industrial preparation of bacterial vaccines.
Известен способ использования отходов биотехнологических производств как основы ферментационных сред для получения низина, заключающийся в выращивании на ферментационных средах, составленных на основе отходов биотехнологических производств молочнокислого лактококка, как продуцента антибиотика низина (Стоянова Л.П., Егоров Н.С., Баранова И.П., и др. Использование отходов биотехнологических производств как основы ферментационных сред для получения низина. В кн.: Современные достижения биотехнологии. Ставрополь, 1955, с. 77-78). There is a method of using waste from biotechnological industries as the basis of fermentation media for producing nisin, which consists in growing on fermentation media composed of waste from biotechnological industries of lactic acid lactococcus, as a producer of the antibiotic nisin (Stoyanova L.P., Egorov N.S., Baranova I. P., et al. Use of biotechnological production wastes as the basis of fermentation media for obtaining nisin. In the book: Modern achievements of biotechnology. Stavropol, 1955, p. 77-78).
Недостатком данного способа является то, что он требует дополнительного включения в состав сред дрожжевого автолизата, кукурузных экстрактов, обрата, углеводов, свободных аминокислот для достижения стандартных параметров, что делает среду многокомпонентной. The disadvantage of this method is that it requires additional inclusion in the composition of the medium of yeast autolysate, corn extracts, skim milk, carbohydrates, free amino acids to achieve standard parameters, which makes the environment multicomponent.
Известен способ получения ферментативного гидролизата и питательная среда для культивирования клеток эукариотов, включающая обработку белоксодержащего сырья, разведенного водой, медицинским панкреатином или нативной поджелудочной железой свиньи, в щелочной зоне pH 7,6-7,8 в присутствии хлороформа при 37-38oC в течение 6-7 сут, прогревание при 90oC в течение 5-10 мин, последующее осаждение высокомолекулярных соединений, фильтрование целевого продукта, при этом фермент растворяют в воде в соотношении 1:25 и перед осаждением высокомолекулярных соединений проводят обработку гидролизата 20-22%-ным раствором хлористого кальция. Питательная среда для культивирования клеток эукариотов включает аминокислотную основу, комплекс витаминов, раствор Хенкса и сыворотку крови крупного рогатого скота, при этом в качестве аминокислотной основы используют ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота при следующем соотношении компонентов, об.%:
Ферментативный гидролизат обезжиренной, обезвоженной мозговой ткани крупного рогатого скота - 0,15 - 0,20
Комплекс витаминов - 0,0001 - 0,00012
Сыворотка крови крупного рогатого скота - 5 - 10
Раствор Хенкса - Остальное
(см. патент РФ N 2020153 кл. C 12 N 5/00, C 12 P 21/06).A known method for producing an enzymatic hydrolyzate and a culture medium for culturing eukaryotic cells, including the processing of protein-containing raw materials diluted with water, medical pancreatin or native pig pancreas, in an alkaline zone of pH 7.6-7.8 in the presence of chloroform at 37-38 o C in for 6-7 days, a heating at 90 o C for 5-10 min, the subsequent deposition of high-molecular compounds filtering the target product, wherein the enzyme is dissolved in water in a ratio of 1:25 and before the deposition of high soy Inonii processing performed hydrolyzate 20-22% solution of calcium chloride. The culture medium for the cultivation of eukaryotic cells includes an amino acid base, a complex of vitamins, Hanks solution and cattle blood serum, while an enzymatic hydrolyzate of fat-free, dehydrated brain tissue of cattle is used as the amino acid base in the following ratio of components, vol.%:
Enzymatic hydrolyzate of fat-free, dehydrated brain tissue of cattle - 0.15 - 0.20
Vitamin Complex - 0.0001 - 0.00012
Serum of cattle - 5 - 10
Hanks Solution - Else
(see RF patent N 2020153 C. C 12 N 5/00, C 12 P 21/06).
Недостатком данного способа и питательной среды является то, что он ограничен использованием гидролизатов только из мозговой ткани крупного рогатого скота и применением на их основе питательных сред для культивирования эукариотов в виде гетероплоидных и диплоидных перевиваемых линий клеток тканей. The disadvantage of this method and the nutrient medium is that it is limited to the use of hydrolysates only from the brain tissue of cattle and the use of nutrient media for culturing eukaryotes in the form of heteroploid and diploid transplantable tissue cell lines.
Наиболее близким к предлагаемому способу получения гидролизатов и принятые авторами за прототип является способ получения гидролизата белков крови ферментативного сухого (ГБК-С) для питательных сред тканевых культур клеток из отходов сывороточного производства, включающий измельчение 300 кг сгустков крови, соединение полученной массы с 480 л деминерализованной воды, нагревания ее до 80oC и выдержки в течение 30 мин, охлаждении до 50oC, установление pH 7,5±0,1 путем добавления 20%-ного раствора гидроокиси натрия, 1,5% хлороформа, добавление 200 л ферментного препарата и осуществление гидролиза в течение 48-60 ч при 40-42oC, постоянно осуществляя коррекцию pH среды в пределах указанного значения. Гидролиз завершен, если через 48-60 ч в нем отсутствует нерасщепленный белок, а накопление аминного азота достигает не менее 600 мг%. (Временное наставление по применению гидролизата, белков крови ферментативного сухого (ГБК-С) для питательных сред тканевых культур клеток, утвержденного зам.начальника Главного управления ветеринарии МСХ СССР 30.08.91.).Closest to the proposed method for producing hydrolysates and adopted by the authors as a prototype is a method for producing a hydrolyzate of enzymatic dry blood proteins (GBK-C) for culture media of tissue cell cultures from whey waste, including grinding 300 kg of blood clots, combining the resulting mass with 480 l of demineralized water, heating it to 80 o C and holding for 30 minutes, cooled to 50 o C, setting pH 7.5 ± 0.1 by adding 20% sodium hydroxide solution, 1.5% chloroform, adding 200 l farms ntnogo preparation and implementation of hydrolysis for 48-60 hours at 40-42 o C, continuously performing the correction of the medium pH to the specified value. Hydrolysis is completed if after 48-60 hours there is no unsplit protein in it, and the accumulation of amine nitrogen reaches at least 600 mg%. (Temporary instruction on the use of hydrolyzate, enzymatic dry blood proteins (GBK-S) for culture media of tissue cell cultures, approved by the deputy head of the Main Veterinary Administration of the Ministry of Agriculture of the USSR on 30.08.91.).
Недостатком данного способа и питательной среды (ПС) является то, что в качестве сырья использовались отходы только сывороточного производства в виде цельной крови и ее сгустков от крупного рогатого скота. Гидролиз сырья осуществлялся без предварительной химической обработки аммиаков, в результате чего не достигалось полного гидролиза, причем применялась только поджелудочная железа свиньи. The disadvantage of this method and nutrient medium (PS) is that only whey production waste in the form of whole blood and its clots from cattle was used as raw material. Hydrolysis of raw materials was carried out without preliminary chemical treatment of ammonia, as a result of which complete hydrolysis was not achieved, and only the pancreas of the pig was used.
Наиболее близкой по ростовым свойствам питательной средой для культивирования микроорганизмов и принятая авторами за прототип является питательная среда на основе перевара Хоттингера, получаемая из ферментативных гидролизатов мяса и другого белковосодержащего сырья, имеющая следующий состав: аминокислотную основу, общий азот 1100-1200 мг%. (Виноградова И.Н. Производственные питательные среды. В кн.: Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. М.: Медгиз, 1962, с. 339-384). The closest growth medium nutrient medium for the cultivation of microorganisms and adopted by the authors as a prototype is a nutrient medium based on the Hottinger digest, obtained from enzymatic hydrolysates of meat and other protein-containing raw materials, having the following composition: amino acid base, total nitrogen 1100-1200 mg%. (Vinogradova I.N. Production culture media. In the book: Guide to Microbiology, Clinic and Epidemiology of Infectious Diseases. M: Medgiz, 1962, p. 339-384).
Недостатком данной питательной среды является высокая стоимость. Целью изобретения является достижение полного гидролиза и снижение себестоимости продукта и питательной среды для культивирования микроорганизмов. The disadvantage of this nutrient medium is the high cost. The aim of the invention is to achieve complete hydrolysis and reduce the cost of the product and the nutrient medium for the cultivation of microorganisms.
Поставленная цель достигается тем, что в способе получения гидролизатов включающем обработку белоксодержащего сырья ферментативным гидролизом нативной поджелудочной железой свиньи в щелочной зоне pH 7,5 в присутствии хлороформа в течение 48-60 ч при 40-42oC с добавлением 20%-ного раствора гидроокиси натрия, с последующим отделением от нерастворимых примесей, инактированием фермента, нейтрализацией до pH 7,0-7,2, сушкой целевого продукта, причем в качестве белоксодержащего сырья используют отходы вакцинно-сывороточного и инкубаторного производства в виде глобулинов, куриных эмбрионов, сгустков крови, фибрина и перед ферментативным гидролизом проводят аммиачный, причем сырье предварительно измельчают, растворяют в деминерализованной воде в соотношении для глобулинов 1:1,5, для куриных эмбрионов и фибрина 1:5, для сгустков крови 1:1,6, при этом обработку осуществляют 26%-ным водным раствором аммиака из расчета 19 мл раствора на 1 л смеси, в течение двух часов при 120oC, при этом аммиачный гидролизат охлаждают до 45oC, доводят pH до 7,0 двууглекислым натрием, причем ферментативный гидролиз проводят нативной поджелудочной железой крупного рогатого скота из расчета 200-256,4 г/л для глобулинов и сгустков крови и 83,3-166,6 г/л для куриных эмбрионов и фибрина в присутствии хлороформа при 42-43oC в течение 6-7 сут для глобулинов, 6 сут для куриных эмбрионов и фибрина и 4-5 сут для сгустков крови, при этом конечное накопление в целевом продукте азота в соотношении 500-700 мг%. Питательная среда для культивирования микроорганизмов включает аминокислотную основу, общий азот, при этом в качестве аминокислотной основы используют аммиачно-ферментативный гидролизат глобулинов, куриных эмбрионов, сгустков крови и фибрина при следующем соотношении химических соединений:
Общий азот - 1100 - 1200 мг%
Аминный азот - 200 - 220 мг%
Пептон - 1-0-2,0%
Триптофан - 80 - 200 мг%
Хлорид натрия - 0,6 - 1,2 мг%
Аммонийные соли - 0,04 - 0,1 мг%
Для реализации поставленной цели использовались белковые компоненты крови не только крупного рогатого скота, но и других видов сельскохозяйственных животных. Кроме сгустков крови подвергали ферментативному гидролизу фибрин крови, глобулины сыворотки крови, а также куриные эмбрионы, как отходы вакцинно-инкубаторного производства.This goal is achieved in that in a method for producing hydrolysates comprising treating protein-containing raw materials by enzymatic hydrolysis of a native pig pancreas in an alkaline zone of pH 7.5 in the presence of chloroform for 48-60 hours at 40-42 o C with the addition of a 20% hydroxide solution sodium, followed by separation from insoluble impurities, inactivation of the enzyme, neutralization to pH 7.0-7.2, drying of the target product, and waste protein-whey and incubator production are used as protein-containing raw materials ammonia is carried out in the form of globulins, chicken embryos, blood clots, fibrin and before enzymatic hydrolysis, and the raw materials are pre-crushed, dissolved in demineralized water in a ratio of 1: 1.5 for globulins, for chicken embryos and fibrin 1: 5, for blood clots 1: 1.6, the treatment is carried out with a 26% aqueous ammonia solution based on a 19 ml solution per 1 liter of mixture, for two hours at 120 o C, while the ammonia hydrolyzate is cooled to 45 o C, the pH is adjusted to 7 , Sodium bicarbonate, wherein enzymatic hydrolysis of the wire it is native to the cattle pancreas at the rate of 200-256.4 g / l for globulins and blood clots and 83.3-166.6 g / l for chicken embryos and fibrin in the presence of chloroform at 42-43 o C for 6 -7 days for globulins, 6 days for chicken embryos and fibrin and 4-5 days for blood clots, with a final accumulation of nitrogen in the target product in the ratio of 500-700 mg%. The nutrient medium for the cultivation of microorganisms includes an amino acid base, total nitrogen, and the ammonia-enzymatic hydrolyzate of globulins, chicken embryos, blood clots and fibrin is used as the amino acid base in the following ratio of chemical compounds:
Total nitrogen - 1100 - 1200 mg%
Amine nitrogen - 200 - 220 mg%
Peptone - 1-0-2.0%
Tryptophan - 80 - 200 mg%
Sodium Chloride - 0.6 - 1.2 mg%
Ammonium salts - 0.04 - 0.1 mg%
To achieve this goal, the protein components of the blood were used not only in cattle, but also in other types of farm animals. In addition to blood clots, they were subjected to enzymatic hydrolysis of blood fibrin, serum globulins, and also chicken embryos as waste from vaccine-incubator production.
Перед ферментативным гидролизом обязательно подвергают аммиачному гидролизу. Необходимость аммиачного гидролиза заключается в том, что свободные глобулины и глобулины, содержащиеся в белках животного и растительного происхождения имеют структуры, в которых пептидные связи, как объекты воздействия протеолитических ферментов, скрыты внутри белка. Это затрудняет ферментолиз белка при воздействии на него ферментами поджелудочной железы. Поэтому глобулиновая фракция белка, не подвергалась полностью ферментному гидролизу, после отваривания материала и фильтрации, переходит в шлам. А в худшем случае она остается в гидролизате и затем при изготовлении питательной среды переходит в бульон и плохо используется микроорганизмами. В таком случае добиться прозрачности бульона, как необходимого показателя среды, не представляется возможным, даже при осаждении растворами кислот. Before enzymatic hydrolysis is necessarily subjected to ammonia hydrolysis. The need for ammonia hydrolysis is that free globulins and globulins contained in animal and plant proteins have structures in which peptide bonds, as objects of the action of proteolytic enzymes, are hidden inside the protein. This makes protein fermentolysis difficult when exposed to pancreatic enzymes. Therefore, the globulin fraction of the protein, was not subjected to complete enzymatic hydrolysis, after boiling the material and filtering, it passes into the sludge. And in the worst case, it remains in the hydrolyzate and then in the manufacture of the nutrient medium passes into the broth and is poorly used by microorganisms. In this case, it is not possible to achieve transparency of the broth as a necessary indicator of the medium, even when precipitated with acid solutions.
Для более полного высвобождения аминокислот глобулиновой фракции белка в способе предлагается предварительно воздействовать на нее 26% водным раствором аммиака, т.е. осуществить первый этап работы - аммиачный гидролиз. For a more complete release of amino acids of the globulin fraction of the protein, the method proposes to preliminarily expose it to 26% aqueous ammonia, i.e. to carry out the first stage of work - ammonia hydrolysis.
По окончании аммиачного гидролиза глобулинов, куриных эмбрионов кровяных сгустков, фибрина, полученный гидролизат нейтрализовали растворами соляной или ортофосфорной кислот до значения pH 7,0. Полученный таким образом аммиачный гидролизат подвергали вторичному этапу гидролиза - воздействию ферментами поджелудочной железы. Ферментативный гидролизат осуществляли с применением поджелудочных желез крупного рогатого скота и он был более длительным, в течение 96-168 ч. Для поддержания значения pH на уровне 7,5±0,1 использовали вместо 20%-ного раствора едкого натра 26%-ный раствор двууглекислого натрия. At the end of the ammonia hydrolysis of globulins, chicken blood clot embryos, fibrin, the resulting hydrolyzate was neutralized with hydrochloric or phosphoric acid solutions to a pH of 7.0. Thus obtained ammonia hydrolyzate was subjected to the secondary stage of hydrolysis - exposure to pancreatic enzymes. The enzymatic hydrolyzate was carried out using cattle pancreas and was longer for 96-168 hours. To maintain the pH value of 7.5 ± 0.1, instead of a 20% sodium hydroxide solution, a 26% solution was used sodium bicarbonate.
Сущность способа заключается в следующем. Для высвобождения аминокислот из белковосодержащих отходов вакцинно-сывороточного и инкубаторного производства - глобулинов, куриных эмбрионов, сгустков крови, фибрина, крови, подвергали их воздействию 26%-ным водным раствором аммиака, т.е. осуществляли первый этап работы, аммиачный (химический) гидролиз, гидролизуемый субстрат - куриные эмбрионы, сгустки крови и фибрин измельчали на мясорубке. Предварительно сырье разводили деминерализованной водой в соотношении: для глобулина 1:1,5, для куриных эмбрионов и фибрина 1:5, для сгустков крови 1: 1,6. К подготовленному таким образом сырью добавляли 26%-ный водный раствор аммиака из расчета 19 мл указанного раствора аммиака на 1 л смеси и воды. Гидролиз проводили в течение 2 ч при температуре 120oC и давлении в 1 атм.The essence of the method is as follows. To release amino acids from protein-containing wastes of vaccine-serum and incubator production - globulins, chicken embryos, blood clots, fibrin, blood, they were exposed to 26% aqueous ammonia solution, i.e. carried out the first stage of work, ammonia (chemical) hydrolysis, hydrolyzable substrate - chicken embryos, blood clots and fibrin were crushed in a meat grinder. Previously, the raw materials were diluted with demineralized water in the ratio: for globulin 1: 1.5, for chicken embryos and fibrin 1: 5, for blood clots 1: 1.6. To the raw material thus prepared was added a 26% aqueous ammonia solution based on 19 ml of said ammonia solution per 1 liter of mixture and water. The hydrolysis was carried out for 2 hours at a temperature of 120 o C and a pressure of 1 ATM.
По окончании аммиачного гидролиза гидролизат охлаждали до 40oC, доводили pH гидролизуемого материала до 7,0 раствором соляной кислоты и приступали ко второму этапу работ-ферментативному гидролизу с применением ферментов поджелудочной железы крупного рогатого скота. Для этого в реактор к аммиачному гидролизату добавляли двууглекислый натрий, фарш поджелудочных желез крупного рогатого скота и хлороформ в следующих количествах (см. табл.1).At the end of the ammonia hydrolysis, the hydrolyzate was cooled to 40 ° C, the pH of the hydrolyzable material was adjusted to 7.0 with hydrochloric acid, and the second stage of enzymatic hydrolysis using enzymes of the pancreas of cattle was started. For this, sodium bicarbonate, minced cattle pancreas, and chloroform in the following amounts were added to the ammonia hydrolyzate in the reactor (see Table 1).
Ферментативный гидролиз осуществляли при температурах 42-43oC в течение 6-7 сут - для глобулинов, 6 сут - для куриных эмбрионов и фибрина, 4-5 сут - для сгустков крови.Enzymatic hydrolysis was carried out at temperatures of 42-43 o C for 6-7 days for globulins, 6 days for chicken embryos and fibrin, 4-5 days for blood clots.
В конечном гидролизате сырья получено следующее соотношение основных химических соединений (см. табл.2). In the final hydrolyzate of the feedstock, the following ratio of the main chemical compounds was obtained (see table 2).
По завершению гидролиза гидролизаты глобулинов, куриных эмбрионов, сгустков крови и фибрина использовали при изготовлении питательных сред для культивирования листерий, сальмонелл, пастерелл и других микроорганизмов, используемых в биологической промышленности с целью приготовления вакцин для профилактики листериоза сельскохозяйственных животных, сальмонеллеза и других заболеваний животных и птиц. Upon completion of the hydrolysis, the hydrolysates of globulins, chicken embryos, blood clots and fibrin were used in the manufacture of culture media for the cultivation of listeria, salmonella, pasteurella and other microorganisms used in the biological industry to prepare vaccines for the prevention of listeriosis of farm animals, salmonellosis and other diseases of animals and birds .
Конкретное выполнение способа получения гидролизатов из отходов вакцинно-сывороточного и инкубаторского производства отражено следующих примерах. The specific implementation of the method of producing hydrolysates from waste vaccine-serum and incubator production is reflected in the following examples.
Пример 1. Гидролиз глобулинов. Для более глубокого гидролиза глобулинов работы проводили в два этапа: первый - аммиачный гидролиз, второй - ферментативный гидролиз, с применением сырой или замороженной поджелудочной железа крупного рогатого скота. Example 1. Hydrolysis of globulins. For deeper hydrolysis of globulins, the work was carried out in two stages: the first - ammonia hydrolysis, the second - enzymatic hydrolysis, using raw or frozen pancreas of cattle.
Первый этап - аммиачный (химический) гидролиз глобулинов. Брали диализованный (обессоленный) глобулин, в котором не более 0,2% сернокислого аммония, 6,0-7,8% белка и pH 5,8-6,0, в количестве 200 л, добавляли в нему 300 л деминерализованной воды (соотношение глобулина и воды 1:1,5), вливали 9,5 л 26%-ного водного раствора аммиака из расчета 19 мл 26%-ного раствора аммиака на 1 л смеси глобулина и воды. Аммиачный гидролиз глобулинов проводили при температуре в гидролизуемом продукте 120oC в течение 2 ч. По окончанию аммиачного гидролиза глобулинов охлаждали реактор до температуры 45oC.The first stage is the ammonia (chemical) hydrolysis of globulins. We took dialyzed (desalted) globulin, in which not more than 0.2% ammonium sulfate, 6.0-7.8% protein and pH 5.8-6.0, in an amount of 200 l, 300 l of demineralized water was added to it ( the ratio of globulin and water is 1: 1.5), 9.5 liters of a 26% aqueous ammonia solution are poured from the calculation of 19 ml of a 26% ammonia solution per 1 liter of a mixture of globulin and water. Ammonia hydrolysis of globulins was carried out at a temperature in the hydrolyzable product of 120 o C for 2 hours. At the end of ammonia hydrolysis of globulins, the reactor was cooled to a temperature of 45 o C.
Аммиачный гидролизат обычно имеет щелочную реакцию, pH которой находится в пределах 10,5-11,5. Поэтому гидролизат нейтрализовали до значения pH 7,0 раствором соляной кислоты. Это необходимо делать для того, чтобы последующий ферментолиз глобулинов проходил успешно. The ammonia hydrolyzate usually has an alkaline reaction, the pH of which is in the range of 10.5-11.5. Therefore, the hydrolyzate was neutralized to pH 7.0 with a hydrochloric acid solution. This must be done so that subsequent fermentolysis of globulins is successful.
Второй этап - гидролиз нейтрализованного аммиачного гидролизата глобулинов ферментами поджелудочной железы. The second stage is the hydrolysis of the neutralized ammonia hydrolyzate of globulins by pancreatic enzymes.
К нейтрализованному аммиачному гидролизату глобулинов добавляли 3,4-5,0 кг двууглекислого натрия (17-25 г на 1 л глобулина), 100 кг фарша из очищенных поджелудочных желез крупного рогатого скота (500 г фарша поджелудочных желез на 1 л глобулина) и 1,5% хлороформа к гидролизуемой смеси 42-43oC, в течение шести-семи суток. Через двое суток после начала гидролиза отбирали пробу гидролизата и определяли в ней pH, количество аминного азота, пептона, триптофана, общего азота и хлористого натрия. При снижении pH в гидролизате ниже 7,0 добавляли двууглекислый натрия до значения pH 7,2-7,4.To the neutralized ammonia hydrolyzate of globulins was added 3.4-5.0 kg of sodium bicarbonate (17-25 g per 1 liter of globulin), 100 kg of minced meat from purified pancreas of cattle (500 g of minced pancreas per 1 liter of globulin) and 1 , 5% chloroform to a hydrolyzable mixture of 42-43 o C, for six to seven days. Two days after the start of hydrolysis, a hydrolyzate sample was taken and the pH, amount of amine nitrogen, peptone, tryptophan, total nitrogen and sodium chloride were determined in it. With a decrease in pH in the hydrolyzate below 7.0, sodium bicarbonate was added to a pH of 7.2-7.4.
По истечении времени ферментативного гидролизата глобулинов в пробах гидролизата при значении pH 6,3-7,27 получены и являются стандартными параметрами следующие соотношения химических соединений:
Аминный азот - 650 - 700 мг%
Пептоны - 1,75 - 3,2%
Триптофан - 80 - 95 мг%
Общий азот - 560 - 760 мг%
Хлорид натрия - 1,01 - 1,28%
Аммонийные соли - 0,036 - 0,1%
Гидролизат глобулинов отваривали 20-30 мин, отстаивали 30 мин и фильтровали. Гидролизат глобулинов готов для использования при изготовлении накопительных питательных сред для микроорганизмов. Гидролизат глобулинов консервируют хлороформом.After the time of the enzymatic hydrolyzate of globulins in the samples of the hydrolyzate at pH 6.3-7.27, the following ratios of chemical compounds were obtained and are standard parameters:
Amine nitrogen - 650 - 700 mg%
Peptones - 1.75 - 3.2%
Tryptophan - 80 - 95 mg%
Total nitrogen - 560 - 760 mg%
Sodium Chloride - 1.01 - 1.28%
Ammonium salts - 0.036 - 0.1%
The globulin hydrolyzate was boiled for 20-30 minutes, settled for 30 minutes and filtered. The globulin hydrolyzate is ready for use in the manufacture of storage media for microorganisms. The globulin hydrolyzate is preserved with chloroform.
Пример 2. Гидролиз тканей куриных эмбрионов. Для более глубокого гидролизата тканей куриных эмбрионов работы проводили в два этапа: первый - аммиачный гидролиз, второй - ферментативный гидролиз, с применением сырой или замороженной поджелудочной железы крупного рогатого скота. Example 2. Hydrolysis of tissue of chicken embryos. For a deeper hydrolyzate of chicken embryo tissues, the work was carried out in two stages: the first was ammonia hydrolysis, the second was enzymatic hydrolysis using raw or frozen cattle pancreas.
Первый этап - аммиачный (химический) гидролиз тканей куриных эмбрионов. 200 кг измельченных куриных эмбрионов, предварительно собранных как отходы вакцинно-инкубаторного производства, заливали 1000 л деминерализованной воды. К полученному объему в 1200 л смеси эмбрионального фарша и воды (соотношение 1:5) добавляли 19 л 26%-ного водного раствора аммиака из расчета на 1 кг куриных эмбрионов 95 мл указанного раствора аммиака, или (при расчете на воду) на 1 л воды 19 мл 26%-ного водного раствора аммиака, проводили подогревание продукта до температуры 120oC и осуществляли аммиачный гидролиз в течение 2 ч. В период проведения гидролиза периодически вели перемешивание гидролизуемой смеси.The first stage is ammonia (chemical) hydrolysis of chicken embryo tissues. 200 kg of crushed chicken embryos, previously collected as waste from vaccine-incubator production, were poured into 1000 l of demineralized water. To the obtained volume of 1200 l of a mixture of embryonic minced meat and water (1: 5 ratio) was added 19 l of a 26% aqueous ammonia solution based on 1 kg of chicken embryos 95 ml of the indicated ammonia solution, or (calculated on water) per 1 l water 19 ml of a 26% aqueous ammonia solution, the product was heated to a temperature of 120 ° C and ammonia hydrolysis was carried out for 2 hours. During the hydrolysis period, the hydrolyzable mixture was stirred periodically.
По окончанию гидролиза охлаждали гидролизат до 45oC.At the end of the hydrolysis, the hydrolyzate was cooled to 45 o C.
Аммиачный гидролизат тканей куриных эмбрионов обычно имеет щелочную реакцию, pH которой находится в пределах 9,0-9,7. Поэтому гидролизат тканей куриных эмбрионов нейтрализовали до значения pH 7,0 раствором соляной кислоты. Это необходимо делать для того, чтобы последующий ферментолиз эмбриональной ткани проходил успешно. The ammonia hydrolyzate of chicken embryo tissue usually has an alkaline reaction, the pH of which is in the range of 9.0-9.7. Therefore, the hydrolyzed tissue of chicken embryos was neutralized to a pH value of 7.0 with a hydrochloric acid solution. This must be done so that subsequent fermentolysis of the embryonic tissue is successful.
Второй этап - гидролиз нейтрализованного гидролизата эмбриональной ткани ферментами поджелудочной железы. The second stage is the hydrolysis of the neutralized hydrolyzate of the embryonic tissue by pancreatic enzymes.
К нейтрализованному гидролизату эмбриональной ткани добавляли 2,6-3,0 кг двууглекислого натрия (13-15 г двууглекислого натрия на 1 кг куриных эмбрионов, или 2,16-2,5 г двууглекислого натрия на 1 л аммиачного гидролизата эмбриональной ткани), 100-200 кг фарша из очищенных поджелудочных желез крупного рогатого скота (0,5-1,0 кг фарша поджелудочных желез на 1 кг куриных эмбрионов, или 83,3-166,6 г фарша поджелудочных желез на 1 л аммиачного гидролизита эмбриональной ткани) и 1-1,5% хлороформа. Гидролиз вели при температуре в гидролизуемой смеси 42-43oC. Гидролиз осуществлялся в течение 6 сут. Через двое суток отбирали пробу гидролизата и определяли в ней pH, количество аминного азота, пептона, триптофана, общего азота и хлористого натрия. При снижении pH в гидролизате ниже 7,0, добавляли двууглекислый натрий pH 7,2-7,4.2.6-3.0 kg of sodium bicarbonate was added to the neutralized hydrolyzate of embryonic tissue (13-15 g of sodium bicarbonate per 1 kg of chicken embryos, or 2.16-2.5 g of sodium bicarbonate per 1 liter of ammonia hydrolyzate of embryonic tissue), 100 -200 kg of minced meat from cleaned pancreas of cattle (0.5-1.0 kg of minced pancreas per 1 kg of chicken embryos, or 83.3-166.6 g of minced pancreas per 1 liter of ammonia hydrolysis of fetal tissue) and 1-1.5% chloroform. Hydrolysis was carried out at a temperature in the hydrolyzable mixture 42-43 o C. Hydrolysis was carried out for 6 days. After two days, a hydrolyzate sample was taken and the pH, amount of amine nitrogen, peptone, tryptophan, total nitrogen and sodium chloride were determined in it. With a decrease in pH in the hydrolyzate below 7.0, sodium bicarbonate pH 7.2-7.4 was added.
По истечении ферментативного гидролиза эмбриональной ткани в пробах гидролизата при значении pH 6,5-6,8 получены и являются стандартными параметрами следующие соотношения химических соединений:
Амминный азот - 600 - 650 мг%
Пептон - 2,2 - 3,0%
Триптофана - 80 - 122 мг%
Общий азот - 1100 - 1200 мг%
Хлористый натрий - 1,01 - 1,03%
Аммонийные соли - 0,036 - 0,1%
Гидролизат эмбриональной ткани отваривали в течение 30-40 мин отстаивали 30 мин и фильтровали. Гидролизат эмбриональной ткани готов для использования при изготовлении накопительных сред для микроорганизмов.After the enzymatic hydrolysis of embryonic tissue in the samples of the hydrolyzate at a pH value of 6.5-6.8, the following ratios of chemical compounds were obtained and are standard parameters:
Amminous nitrogen - 600 - 650 mg%
Peptone - 2.2 - 3.0%
Tryptophan - 80 - 122 mg%
Total nitrogen - 1100 - 1200 mg%
Sodium Chloride - 1.01 - 1.03%
Ammonium salts - 0.036 - 0.1%
The hydrolyzate of the embryonic tissue was boiled for 30-40 minutes, settled for 30 minutes and filtered. The embryonic tissue hydrolyzate is ready for use in the manufacture of storage media for microorganisms.
Гидролизат эмбриональной ткани консервируют хлороформом. The embryonic tissue hydrolyzate is preserved with chloroform.
Пример 3. Гидролиз кровяных сгустков. Для более глубокого гидролиза сгустков крови работы проводились в два этапа: первый - аммиачный гидролиз, второй - ферментативный гидролиз, с применением сырой или замороженной поджелудочной железы крупного рогатого скота. Example 3. Hydrolysis of blood clots. For deeper hydrolysis of blood clots, the work was carried out in two stages: the first - ammonia hydrolysis, the second - enzymatic hydrolysis, using raw or frozen pancreas of cattle.
Первый этап - аммиачный (химический) гидролиз кровяных сгустков. 300 кг измельченных сгустков крови, предварительно собранных как отходы сывороточного производства, и полученную массу заливали 480 л деминерализованной воды. К полученному объему в 780 л смеси фарша кровяных сгустков и воды (соотношение 1: 1,6) добавляли 14,8 л 26%-ного водного раствора аммиака из расчета 19 мл указанного раствора аммиака на 1 л смеси фарша из кровяных сгустков и воды, проводили подогревание продукта до 120oC и осуществляли гидролиз используемой массы в течение 2 ч. В период проведения гидролиза периодически вели перемешивание гидролизуемой смеси.The first stage is ammonia (chemical) hydrolysis of blood clots. 300 kg of crushed blood clots, previously collected as waste whey production, and the resulting mass was poured into 480 l of demineralized water. To the obtained volume of 780 l of a mixture of minced blood clots and water (ratio 1: 1.6) was added 14.8 l of a 26% aqueous ammonia solution based on 19 ml of this ammonia solution per 1 l of a mixture of minced blood clots and water, the product was heated to 120 ° C and the used mass was hydrolyzed for 2 hours. During the hydrolysis period, the hydrolyzable mixture was stirred periodically.
По окончанию гидролиза, гидролизат охлаждали до 45oC.At the end of hydrolysis, the hydrolyzate was cooled to 45 o C.
Аммиачный гидролизат сгустков крови обычно имеет щелочную реакцию, pH которой находится в пределах 10,5-11,5. Поэтому гидролизат нейтрализовали до значения pH 7,0 раствором соляной кислоты. Это необходимо делать для того, чтобы последующий ферментативный гидролиз сгустков крови проходил успешно. The ammonia hydrolyzate of blood clots usually has an alkaline reaction, the pH of which is in the range of 10.5-11.5. Therefore, the hydrolyzate was neutralized to pH 7.0 with a hydrochloric acid solution. This must be done in order for subsequent enzymatic hydrolysis of blood clots to proceed successfully.
Второй этап - гидролиз нейтрального аммиачного гидролизата сгустков крови ферментами поджелудочной железы. The second stage is the hydrolysis of a neutral ammonia hydrolyzate of blood clots by pancreatic enzymes.
К нейтрализованному гидролизату сгустка крови добавляли 3,9-4,5 кг двууглекислого натрия (13-15 г двууглекислого натрия на 1 кг кровяных сгустков, или 5,0-5,77 г на 1 л аммиачного гидролизата кровяных сгустков), 200 кг фарша из очищенных поджелудочных желез крупного рогатого скота (0,67 кг фарша поджелудочных желез на 1 кг кровяных сгустков или 256 4 г фарша поджелудочных желез на 1 л аммиачного гидролизата сгустков крови) и 1-1,5% хлороформа. Гидролиз вели при температуре в гидролизуемой смеси 42-43oC в течение 4-5 сут. Через двое суток после начала гидролиза отбирали пробу гидролизата и определяли в ней pH, количество аминного азота, пептона, белка, триптофана, общего азота и хлористого натрия. При снижении pH ниже 7,0 добавляли двууглекислый натрий до значения pH 7,2-7,4.3.9-4.5 kg of sodium bicarbonate (13-15 g of sodium bicarbonate per 1 kg of blood clots, or 5.0-5.77 g per 1 l of ammoniac hydrolyzate of blood clots), 200 kg of minced meat were added to the neutralized hydrolyzate of a blood clot from purified cattle pancreas (0.67 kg of pancreas forcemeat per 1 kg of blood clots or 256 4 g of pancreas forcemeat per 1 liter of ammonia hydrolyzed blood clots) and 1-1.5% chloroform. Hydrolysis was carried out at a temperature in the hydrolyzable mixture of 42-43 o C for 4-5 days. Two days after the start of hydrolysis, a hydrolyzate sample was taken and the pH, amount of amine nitrogen, peptone, protein, tryptophan, total nitrogen and sodium chloride were determined in it. With a decrease in pH below 7.0, sodium bicarbonate was added to a pH of 7.2-7.4.
По истечении ферментативного гидролиза сгустков крови в пробах гидролизата при значении pH 4,5-4,7 получены и являются стандартными параметрами следующие соотношения химических соединений:
Амминный азот - 500 - 700 мг%
Пептона - 2,6 - 3,0%
Триптофан - 100,0 - 120,0 мг%
Общий азот - 1200 - 1400 мг%
Хлорид натрия - 1,0 - 1,2
Аммонийные соли - 0,03 - 0,1 \
Гидролизат сгустков крови отваривали в течение 30-40 мин, отстаивали 30 мин и фильтровали. Гидролизат сгустков крови готов для использования при изготовлении сред для микроорганизмов.After the enzymatic hydrolysis of blood clots in the samples of the hydrolyzate at a pH value of 4.5-4.7, the following ratios of chemical compounds were obtained and are standard parameters:
Ammin nitrogen - 500 - 700 mg%
Peptone - 2.6 - 3.0%
Tryptophan - 100.0 - 120.0 mg%
Total nitrogen - 1200 - 1400 mg%
Sodium Chloride - 1.0 - 1.2
Ammonium salts - 0.03 - 0.1 \
The hydrolyzate of blood clots was boiled for 30-40 minutes, settled for 30 minutes and filtered. The hydrolyzate of blood clots is ready for use in the manufacture of media for microorganisms.
Гидролизат из сгустков крови консервируют хлороформом. The hydrolyzate from blood clots is preserved with chloroform.
Пример 4. Гидролиз фибрина. Фибрин в виде плотных сгустков получают после дефирибринирования крови. Для более глубокого гидролиза фибрина работы проводились в два этапа: первый - аммиачный гидролиз второй - ферментативный гидролиз, с применением сырой или замороженной поджелудочной железы крупного рогатого скота. Оба этапа работы проводили в полном соответствии с технологией гидролиза тканей куриных эмбрионов, изложенной в примере 2, и полным соответствием всех количественных показателей. Example 4. Hydrolysis of fibrin. Fibrin in the form of dense clots is obtained after defiribrination of blood. For deeper hydrolysis of fibrin, the work was carried out in two stages: the first - ammonia hydrolysis; the second - enzymatic hydrolysis, using raw or frozen pancreas of cattle. Both stages of the work were carried out in full accordance with the technology of hydrolysis of tissue of chicken embryos, described in example 2, and full compliance with all quantitative indicators.
Гидролиз фибрина осуществляли в течение 6 сут. По истечении ферментативного гидролизата фибрина пробы гидролизата исследовали. В пробах гидролизата при значении pH 6,5-6,8 должны быть следующие соотношения химических соединений:
Аминный азот - 600 - 700 мг%
Пептон - 2,3 - 3,0%
Триптофан - 80 - 120 мг%
Общий азот - 740 мг%
Остальной гидролизат фибрина отваривали в течение 30 - 40 минут, отстаивали 30 минут и фильтровали. Гидролизат фибрина готов для использования при изготовлении накопительных сред для микроорганизмов.Hydrolysis of fibrin was carried out for 6 days. After the enzymatic fibrin hydrolyzate expired, the hydrolyzate samples were examined. In samples of the hydrolyzate at a pH of 6.5-6.8, the following ratios of chemical compounds should be:
Amine nitrogen - 600 - 700 mg%
Peptone - 2.3 - 3.0%
Tryptophan - 80 - 120 mg%
Total nitrogen - 740 mg%
The remaining fibrin hydrolyzate was boiled for 30-40 minutes, settled for 30 minutes and filtered. The fibrin hydrolyzate is ready for use in the manufacture of storage media for microorganisms.
Гидролизат фибрина консервировали хлороформом. The fibrin hydrolyzate was preserved with chloroform.
Гидролизаты глобулинов, куриных эмбрионов, сгустков крови и фибрина использовали для приготовления питательных сред для производственных штаммов листерий, сальмонелл, пастерелл и некоторых других микроорганизмов, из которых готовят вакцины для профилактики листериоза сельскохозяйственных животных, сальмонеллеза и пастереллеза животных и птиц и других заболеваний. Hydrolysates of globulins, chicken embryos, blood clots and fibrin were used to prepare nutrient media for the production strains of Listeria, Salmonella, Pasteurella and some other microorganisms, from which vaccines are prepared for the prevention of listeriosis of farm animals, salmonellosis and pasteurellosis of animals and birds and other diseases.
Необходимым условием для приготовления многокомпонентных питательных сред для культивирования указанных микроорганизмов является то, что за основу берут гидролизаты отходов вакцинно-сывороточного и инкубаторного производства, приготовленные по технологиям приведенным в примерах 1-4. Соединяют их в различных соотношениях и разводят деминерализованной водой таким образом, чтобы питательные среды содержали не менее 160-180 мг% аминного азота. К таким средам добавляли предусмотренные инструкциями компоненты, необходимые для культивирования указанных микроорганизмов. A necessary condition for the preparation of multicomponent nutrient media for the cultivation of these microorganisms is that they take as a basis hydrolysates of vaccine-serum and incubator production wastes prepared according to the technologies described in examples 1-4. They are combined in various ratios and diluted with demineralized water so that the nutrient medium contains at least 160-180 mg% of amine nitrogen. The components required by the instructions necessary for the cultivation of these microorganisms were added to such media.
Готовые питательные среды должны быть прозрачными и иметь биохимические показатели, отраженные в примерах 5, 6, 7. Ready-made nutrient media should be transparent and have biochemical parameters reflected in examples 5, 6, 7.
Пример 5. Готовая питательная среда для культивирования листерий штамма АУФ должна быть прозрачной, иметь pH 7,4-7,6, содержать:
Аминный азот - 200 - 220 мг%
Пептон - 1,2 - 2,0%
Триптофан - 80 - 200 мг%
Пример 6. Готовая питательная среда для культивирования сальмонелл - S. dublin N 3, S.typhimurium N 6, S.choleraesuis N 9 должна быть прозрачной, иметь pH 7,4-7,6, содержать:
Аминный азот - 200 - 220 мг%
Пептон - 0,5%
Триптофан - 70 - 80 мг%
Пример 7. Готовая питательная среда для культивирования пастерелл должна быть прозрачной, иметь pH 7,4 - 7,6, содержать:
Аминный азот - 175 - 200 мг%
пептон - 0,5%
Триптофан - 70 - 80 мг%
Приготовленные по описанию в примерах 1-4 технологиям гидролизаты могут быть использованы для приготовления питательных сред не только для культивирования листерий, сальмонелл и пастерелл, но и для культивирования других микроорганизмов.Example 5. Ready nutrient medium for the cultivation of listeria strain AUF should be transparent, have a pH of 7.4-7.6, contain:
Amine nitrogen - 200 - 220 mg%
Peptone - 1.2 - 2.0%
Tryptophan - 80 - 200 mg%
Example 6. Ready nutrient medium for the cultivation of Salmonella - S. dublin N 3, S. typhimurium N 6, S. choraraesuis N 9 should be transparent, have a pH of 7.4-7.6, contain:
Amine nitrogen - 200 - 220 mg%
Peptone - 0.5%
Tryptophan - 70 - 80 mg%
Example 7. Ready nutrient medium for the cultivation of pasteurell should be transparent, have a pH of 7.4 - 7.6, contain:
Amine nitrogen - 175 - 200 mg%
peptone - 0.5%
Tryptophan - 70 - 80 mg%
The hydrolysates prepared as described in Examples 1-4 to the technology can be used for the preparation of culture media not only for the cultivation of Listeria, Salmonella and Pasteurella, but also for the cultivation of other microorganisms.
Таким образом строгое соблюдение условий гидролиза белоксодержащих отходов вакцинно-сывороточного и инкубаторного производства и регулярный контроль физико-химических параметров гидролизата позволяют стандартный продукт, имеющий разброс количественных показателей химических соединений не более 5%. Thus, strict observance of the conditions for the hydrolysis of protein-containing wastes of vaccine-whey and incubator production and regular monitoring of the physicochemical parameters of the hydrolyzate allow a standard product with a quantitative dispersion of chemical compounds of not more than 5%.
При выращивании микроорганизмов в средах, приготовленных на основе гидролизатов, полученных по указанным в примерах 1-4 технологиям, накопление биомассы и количества живых микробных клеток было не ниже, чем в инструктивных, дорогостоящих средах. When growing microorganisms in media prepared on the basis of hydrolysates obtained according to the technologies indicated in Examples 1-4, the accumulation of biomass and the number of living microbial cells was not lower than in instructive, expensive environments.
Применение питательных сред для культивирования листерий, сальмонелл, пастерелл, приготовленных на основе гидролизатов из отходов вакцинно-сывороточного и инкубаторного производства по предлагаемому способу обеспечивает ежегодный экономический эффект не менее 1,5 миллиарда рублей (см. акт испытаний). The use of culture media for the cultivation of Listeria, Salmonella, Pasteurella, prepared on the basis of hydrolysates from waste vaccine-whey and incubator production by the proposed method provides an annual economic effect of at least 1.5 billion rubles (see test report).
По сравнению с прототипом и известными техническими решениями предлагаемое изобретение имеет следующие преимущества:
при изготовлении питательных сред для микроорганизмов используются гидролизаты из более дешевого белковосодержащего сырья - отходов вакцинно-сывороточного и инкубаторного производства взамен дефицитных мясных продуктов;
для более полного высвобождения аминокислот из глобулинов сыворотки крови, куриных эмбрионов, сгустков крови, фибрина предлагается перед ферментативным гидролизом указанных отходов производства применять аммиачный (химический) гидролиз, обеспечивающий раскрытие пептидных связей белковых молекул и они становятся более доступными расщеплению всех белковых фракций при воздействии на них протеолитических ферментов поджелудочной железы;
применение гидролизатов из отходов вакцинно-сывороточного и инкубаторного производства при конструировании питательных сред для выращивания микроорганизмов (листерий, сальмонелл, пастерелл) с целью промышленного изготовления вакцин, обеспечивает ежегодный экономический эффект в сумме 1,5 млрд. рублей.Compared with the prototype and known technical solutions, the invention has the following advantages:
in the manufacture of culture media for microorganisms, hydrolysates are used from cheaper protein-containing raw materials - vaccine-whey and incubator production wastes instead of scarce meat products;
for a more complete release of amino acids from serum globulins, chicken embryos, blood clots, fibrin, it is proposed to use ammonia (chemical) hydrolysis before enzymatic hydrolysis of these production wastes, which ensures the disclosure of peptide bonds of protein molecules and they become more accessible to the cleavage of all protein fractions when exposed to them pancreatic proteolytic enzymes;
the use of hydrolysates from wastes from vaccine-whey and incubator production in the design of nutrient media for growing microorganisms (Listeria, Salmonella, Pasteurell) for the industrial production of vaccines provides an annual economic effect of 1.5 billion rubles.
Claims (2)
Хлорид натрия 1,0 1,2
Аммонийные соли 0,03 0,1
а также, мг%
Общий азот 1100 1400
Аминный азот 200 220
Триптофан 80 200
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что деминерализованную воду смешивают в соотношении 1,5 1,0 для глобулинов, 5 1 для куриных эмбрионов и фибрина, 1,0 1,6 для сгустков крови.Peptone 1 2
Sodium Chloride 1.0 1.2
Ammonium salts 0.03 0.1
as well, mg%
Total nitrogen 1,100 1,400
Amine nitrogen 200 220
Tryptophan 80 200
2. The method according to claim 1, characterized in that the demineralized water is mixed in a ratio of 1.5 to 1.0 for globulins, 5 to 1 for chicken embryos and fibrin, 1.0 to 1.6 for blood clots.
4. Питательная среда для культивирования микроорганизмов, включающая аминокислотную основу, хлорид натрия, отличающаяся тем, что в качестве аминокислотной основы используют аммиачно-ферментативный гидролизат отходов вакцинно-сывороточного производства и инкубаторного производства в виде глобулинов, или куриных эмбрионов, или сгустков крови, или фибрина, полученный путем аммиачного гидролизата измельченных смешанных с деминерализованной водой отходов и последующего гидролиза нативной поджелудочной железой крупного рогатого скота до содержания аминного азота 500 700 мг% при следующем соотношении химических соединений, мас.3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that the ammonia hydrolyzate is cooled to 45 o C, pH is adjusted to 7 with hydrochloric acid, and enzymatic hydrolysis is carried out by the native pancreas of cattle at a rate of 200,256.4 g / l for globulins and blood clots, 83.3 166.6 g / l for chicken embryos and fibrin at 42 43 o C for 6 7 days for globulins, 6 days for chicken embryos and fibrin, 4 5 days for blood clots, with the final the accumulation in the target product of amine nitrogen is not less than 500,700 mg%
4. Nutrient medium for the cultivation of microorganisms, including an amino acid base, sodium chloride, characterized in that the amino acid base used is an ammonia-enzymatic hydrolyzate of waste vaccine-whey production and incubator production in the form of globulins, or chicken embryos, or blood clots, or fibrin obtained by ammonia hydrolyzate of crushed waste mixed with demineralized water and subsequent hydrolysis of cattle by the native pancreas of amine nitrogen content mg 500 700% with the following ratio of chemical compounds, by weight.
Хлорид натрия 1,0 1,2
Аммонийные соли 0,03 0,1
а также, мг%
Общий азот 1100 1400
Аминный азот 200 220
Триптофан 80 200йPeptone 1 2
Sodium Chloride 1.0 1.2
Ammonium salts 0.03 0.1
as well, mg%
Total nitrogen 1,100 1,400
Amine nitrogen 200 220
Tryptophan 80 200th
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96112604A RU2103345C1 (en) | 1996-06-25 | 1996-06-25 | Method of hydrolyzate preparing and their using for nutrient media preparing for microorganism culturing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96112604A RU2103345C1 (en) | 1996-06-25 | 1996-06-25 | Method of hydrolyzate preparing and their using for nutrient media preparing for microorganism culturing |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2103345C1 true RU2103345C1 (en) | 1998-01-27 |
| RU96112604A RU96112604A (en) | 1998-09-20 |
Family
ID=20182280
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96112604A RU2103345C1 (en) | 1996-06-25 | 1996-06-25 | Method of hydrolyzate preparing and their using for nutrient media preparing for microorganism culturing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2103345C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2534355C1 (en) * | 2013-04-16 | 2014-11-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Кавказский федеральный университет" | Method of production of hydrolyzate from fruit and skin of bananas as growth stimulator for cultivation of leptospira |
-
1996
- 1996-06-25 RU RU96112604A patent/RU2103345C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Временное наставление по применению гидролизата белков крови ферментативного сухого (ГБК-С) для питательных сред тканевых культур клеток. - М.: 1991, с.20 - 23. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2534355C1 (en) * | 2013-04-16 | 2014-11-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Кавказский федеральный университет" | Method of production of hydrolyzate from fruit and skin of bananas as growth stimulator for cultivation of leptospira |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102191291B (en) | Method for producing L-ornithine hydrochloride by genetic engineering bacteria | |
| Rimington et al. | Some phosphorus compounds of milk: The liberation of phosphorus from caseinogen by enzymes and other agents | |
| Hartley | The value of Douglas's medium for the production of diphtheria toxin | |
| RU2103345C1 (en) | Method of hydrolyzate preparing and their using for nutrient media preparing for microorganism culturing | |
| US20240166991A1 (en) | Cell culture medium composition containing spirulina hydrolysate, and preparation method therefor | |
| US20070166785A1 (en) | Recombinant calf-chymosin and a process for producing the same | |
| CN115216424A (en) | Culture passage and preservation method of mycoplasma synoviae | |
| RU2352134C1 (en) | Method of manufacturing hydrolizate out of salmons milts | |
| RU2103360C1 (en) | Nutrient medium for culturing eucaryotic cells and method for preparing base of proteolytic hydrolyzate medium | |
| RU2425866C1 (en) | Nutrient medium for submerged cholera vibrio cultivation | |
| RU2295249C2 (en) | Method for production of soybean hydrolyzate | |
| RU2068879C1 (en) | Method of preparing enzymatic hydrolyzate and nutrient medium for eucaryotic cells cultivation | |
| RU1609153C (en) | Method for producing pepton | |
| US3434928A (en) | Process for preparing peptone for bacterial culture | |
| RU2074249C1 (en) | Method of preparing enzyme hydrolyzate from the web-footed muscle tissue and nutrient medium "celat" for eucaryotic cell cultivation | |
| Stickel et al. | Peptic and tryptic digestion products as inexpensive culture mediums for routine bacteriologic work | |
| RU2360962C2 (en) | Nutrient base production method and nutrient base for yersinia and vibrio microorganisms fermentation | |
| SU819166A1 (en) | Method of hydrolyzate production from lactic serum for obtaining culture medium | |
| RU2020153C1 (en) | Method of preparing of enzyme hydrolysate and nutrient medium for cultivation of eucaryotic cells | |
| RU2754364C2 (en) | Method for production of protein hydrolysate | |
| SU1042602A3 (en) | Method for preparing substance 41 200 rp having immunostimulating effect | |
| RU2279470C2 (en) | Method for production of hydrolysate from apiculture products for spirochaeta cultivation | |
| RU2083664C1 (en) | Nutrient medium for plague microbe culturing | |
| RU2546252C2 (en) | Method of producing protein hydrolysate from meat or meat and bone material of mink carcass for parenteral feeding | |
| CN110747176B (en) | Culture method for improving virus titer of porcine epidemic diarrhea viruses |