RU2097762C1 - Reagent kit for determination of primary aromatic amines in solutions and biological fluids - Google Patents
Reagent kit for determination of primary aromatic amines in solutions and biological fluids Download PDFInfo
- Publication number
- RU2097762C1 RU2097762C1 SU5056564A RU2097762C1 RU 2097762 C1 RU2097762 C1 RU 2097762C1 SU 5056564 A SU5056564 A SU 5056564A RU 2097762 C1 RU2097762 C1 RU 2097762C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- determination
- solution
- solutions
- standard
- reagents
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к методам определения химических веществ в растворах и биологических жидкостях. The invention relates to methods for determining chemicals in solutions and biological fluids.
Известно, что выполнение любой методики количественного определения веществ состоит из двух основных этапов: приготовления растворов веществ, необходимых для определения и серии последовательных операций в соответствии с методикой. It is known that the implementation of any methodology for the quantitative determination of substances consists of two main stages: preparation of solutions of substances necessary for determination and a series of sequential operations in accordance with the methodology.
Выполнение первой части весьма трудоемко, требует особо точных измерений и высокой квалификации от исполнителя, что может осуществляться ни в каждой производственной и исследовательской лаборатории. The implementation of the first part is very time-consuming, requires particularly accurate measurements and high qualifications from the contractor, which can be done in any production and research laboratory.
Вместе с тем, от качества выполнения этой работы во многом зависит конечный результат анализа, поэтому для многих широко используемых методик биохимического анализа соответствующие реактивы изготавливаются в специализированных лабораториях и продаются в виде наборов. Такие наборы существуют в продаже для определения ряда веществ в крови с целью диагностики при обследовании больных. Такие наборы имеются для определения общего белка, сахара, холестерина, мочевины, кальция, фосфора, железа. At the same time, the final result of the analysis largely depends on the quality of this work, therefore, for many widely used methods of biochemical analysis, the corresponding reagents are made in specialized laboratories and sold in sets. Such kits are commercially available for determining a number of substances in the blood for the purpose of diagnosis during examination of patients. Such kits are available for determining total protein, sugar, cholesterol, urea, calcium, phosphorus, and iron.
Вместе с тем, имеется еще много методик, используемых в клинической биохимии, для которых не существует соответствующих наборов реактивов, что значительно затрудняет и замедляет обследование больных, снижает точность и сопоставимость получаемых результатов. Это особенно негативно сказывается при определении показателей, используемых в качестве генетических маркеров, поскольку при этом необходимы массовые популяционные обследования в различных регионах при хорошей сопоставимости результатов. К таким тестам относится и определение N-ацетилтрансферазной активности (КФ 2.3.1.5; N-AT). Она определяется по степени ацетилирования сульфадимезина и некоторых других сульфаниламидов. At the same time, there are many more methods used in clinical biochemistry for which there are no corresponding sets of reagents, which significantly complicates and slows down the examination of patients, reduces the accuracy and comparability of the results. This is especially negative for determining the indicators used as genetic markers, since mass population surveys in different regions are necessary with good comparability of the results. These tests also include the determination of N-acetyltransferase activity (EC 2.3.1.5; N-AT). It is determined by the degree of acetylation of sulfadimesin and some other sulfonamides.
Количественное определение сульфаниламидов необходимо и в других случаях, связанное с их применением в лечебных целях. Данная методика может быть использована и для определения других первичных ароматических аминов, применяемых в различных областях народного хозяйства и оказывающих воздействие на организм человека. A quantitative determination of sulfonamides is also necessary in other cases associated with their use for medicinal purposes. This technique can also be used to determine other primary aromatic amines used in various areas of the national economy and affecting the human body.
Известен метод определения сульфаниламидлов и первичных ароматических аминов, который используется при выявлении N АТ активности (Буловская Л.Н. Борисенко Г. Н. Дробаченко О.А. Определение фенотипа N-ацетилтрансферазной активности. Лабораторное дело, 1989, N 10, с.28 30). A known method for the determination of sulfonamides and primary aromatic amines, which is used to detect N AT activity (Bulovskaya L.N. Borisenko G.N. Drobachenko O.A. Determination of the phenotype of N-acetyltransferase activity. Laboratory, 1989, N 10, p. 28 thirty).
Для определения по этому методу приготовляют следующие растворы: 20% трихлоруксусная кислота (ТХУ), 0,2% натрий азотистокислый (свежеприготовленный! ), 0,1% аммоний сульфвминовокислый и 0,1% N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорид (НЭД) и стандартный раствор анализируемого вещества в концентрации 180 мкмоль/л. The following solutions are prepared for determination by this method: 20% trichloroacetic acid (TCA), 0.2% sodium nitrite (freshly prepared!), 0.1% ammonium sulfonic acid and 0.1% N- (I) -naphthylenediamine dihydrochloride (NED) and a standard solution of the analyte in a concentration of 180 μmol / l.
Приготовленные растворы используют в следующем порядке в ходе определения: к 0,1 мл цельной крови, сыворотки или другой исследуемой жидкости приливают 1,4 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 20% трихлоруксусной кислоты для осаждения белков. Пробы центрифугируют. В центрифугате определяют путем диазотирования натрием азотистокислым и азосочетания с N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлоридом сульфаниламиды или другие ароматические амины, которые содержались в пробе. The prepared solutions are used in the following order during the determination: 1.4 ml of distilled water and 0.5 ml of 20% trichloroacetic acid are added to 0.1 ml of whole blood, serum or other test liquid to precipitate proteins. Samples are centrifuged. In a centrifugate, sulfanilamides or other aromatic amines that are contained in the sample are determined by diazotization with sodium nitrous acid and azo coupling with N- (I) -naphthylethylenediamine dihydrochloride.
Однако комплектование реактивов для этой методики затруднено тем, что требует объединения разнообразных дефицитных реактивов, основной реагент НЭД импортируется, а аммоний сульфаминовокислый изготавливается по заказу. However, the completion of reagents for this technique is complicated by the fact that it requires combining a variety of scarce reagents, the main NED reagent is imported, and ammonium sulfamic acid is made to order.
Целью изобретения является повышение точности метода, стандартизация, унификация, упрощение, что достигается путем комплектования набора реактивов с соответствующей инструкцией их использования для количественного определения сульфаниламидов и других первичных ароматических аминов. Набор содержит в соответствующих упаковках: навеску трихлоруксусной кислоты (ТХУ), которая при растворении в 50 мл дистиллированной воды дает раствор, осаждающий белки; полоски бумаги с натрием азотистокислым, приспособленные для получения раствора диазотирования непосредственно перед определением (ex tempore); навеску аммония сульфаминовокислого, которая при растворении в 25 мл дистиллированной воды дает раствор для связывания избытка натрия азотистокислого; раствор N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорида (NЭД) для получения окрашенного азосоединения; полоски бумаги, содержащие 0,018 мкмоль стандартного анализируемого амина. The aim of the invention is to improve the accuracy of the method, standardization, unification, simplification, which is achieved by completing a set of reagents with appropriate instructions for their use for the quantitative determination of sulfonamides and other primary aromatic amines. The kit contains in appropriate packages: a portion of trichloroacetic acid (TCA), which when dissolved in 50 ml of distilled water gives a solution that precipitates proteins; strips of paper with sodium nitrite, adapted to obtain a diazotization solution immediately before determination (ex tempore); a sample of ammonium sulfamic acid, which, when dissolved in 25 ml of distilled water, gives a solution for binding excess sodium nitrate; a solution of N- (I) -naphthylethylenediaminodihydrochloride (NED) to obtain a colored azo compound; strips of paper containing 0.018 μmol of the standard analyzed amine.
Авторы впервые предлагают комплектование набора реактивов для определения в растворах, биологических жидкостях соединений, относящихся к первичным ароматическим аминам. The authors for the first time propose completing a set of reagents for determining compounds related to primary aromatic amines in solutions, biological fluids.
Полный комплект реактивов освобождает от необходимости поиска дефицитных реактивов: N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорида и аммония сульфаминовокислого, полностью исключает взвешивание реактивов. Используя предлагаемый набор реактивов, легко приготавливают необходимые растворы, добавляя известные объемы дистиллированной воды по инструкции. A complete set of reagents eliminates the need to search for deficient reagents: N- (I) -naphthylenediamine dihydrochloride and ammonium sulfamic acid, completely eliminates the weighting of reagents. Using the proposed set of reagents, the necessary solutions are easily prepared by adding known volumes of distilled water according to the instructions.
Приготовленные растворы хранятся в холодильнике 4oC и используются для последующих определений, кроме того, наличие в наборе полосок хроматографической бумаги с известным содержанием стандартов и натрия азотистокислого полностью исключает не только их отвешивание в день опыта, но и напрасный расход реактивов по известному способу, когда неиспользованный остаток, растворенного нитрита и стандарта не может быть повторно использован и выливается. Нанесенные же на бумажку и высушенные они хранятся длительно. Уменьшение объемов в известном способе ведет к потере точности приготовления раствора из-за малых количеств взвешиваемого вещества.The prepared solutions are stored in a 4 o C refrigerator and used for subsequent determinations, in addition, the presence of chromatographic paper strips with a known content of standards and sodium nitrate completely eliminates not only their weighing on the day of the experiment, but also the wasted reagents according to the known method, when unused residue, dissolved nitrite and standard cannot be reused and poured. Put on a piece of paper and dried, they are stored for a long time. The decrease in volume in the known method leads to a loss of accuracy in the preparation of the solution due to the small quantities of suspended substance.
Авторы полностью описывают приготовление реактивов, ход определения и расчет результатов в прилагаемой к набору инструкции. Набор рассчитан на 100 определений. Результаты при определении с использованием набора имеют прекрасные совпадения в параллельных пробах, хорошую воспроизводимость метода и соответствие результатам при известном исследовании. Набор компактен, удобен для перевозок, что значительно расширяет и облегчает возможности его использования в лабораториях, различных по оснащению, и особенно при массовых популяционных исследованиях. The authors fully describe the preparation of reagents, the process of determining and calculating the results in the instructions attached to the set. The set is designed for 100 definitions. The results when determined using the kit have excellent coincidences in parallel samples, good reproducibility of the method, and consistency with the results of a well-known study. The kit is compact, convenient for transportation, which greatly expands and facilitates the possibilities of its use in laboratories that are different in equipment, and especially in mass population studies.
Набор состоит из пяти флаконов, содержащих следующие компоненты:
Флакон N 1 трихлоруксусная кислота (10 г)
Флакон N 2 полоски хроматографической бумаги, содержащие 4 мг нитрита натрия
Флакон N 3 аммоний сульфаминовокислый (250 мг)
Флакон N 4 раствор N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорида (4 мл 0,1%)
Флакон N 5 полоски хроматографической бумаги, содержащие определяемый сульфаниламид или другой ароматический амин в дозе 0,0180 мкмоль.The kit consists of five vials containing the following components:
Bottle N 1 trichloroacetic acid (10 g)
Bottle N 2 strips of chromatographic paper containing 4 mg of sodium nitrite
Bottle N 3 ammonium sulfamic acid (250 mg)
Bottle N 4 solution of N- (I) -naphthylethylenediaminodihydrochloride (4 ml 0.1%)
Bottle No. 5 strips of chromatographic paper containing detectable sulfanilamide or other aromatic amine in a dose of 0.0180 μmol.
Реактивы после их неполного использования хранятся в холодильнике. Reagents after incomplete use are stored in the refrigerator.
Определение сульфаниламидов и первичных ароматических аминов согласно инструкции, прилагаемой к набору, осуществляется следующим образом:
Приготовление реактивов из набора:
Содержимое флакона N 1 растворяем количественно в 50 мл дистиллированной воды.The determination of sulfonamides and primary aromatic amines according to the instructions attached to the kit is carried out as follows:
Preparation of reagents from the kit:
The contents of the bottle N 1 dissolve quantitatively in 50 ml of distilled water.
Содержимое флакона N 3 растворяем в 25 мл дистиллированной воды. The contents of the bottle N 3 dissolve in 25 ml of distilled water.
1 мл раствора (NЭД) из флакона N 4 разводим в 10 раз. 1 ml of solution (NED) from bottle N 4 diluted 10 times.
Бумажки со стандартными дозами испытуемого вещества измельчают и экстрагируют дистиллированной водой в объеме 1,5 мл. Papers with standard doses of the test substance are crushed and extracted with distilled water in a volume of 1.5 ml.
Ход определения. The course of determination.
К пробе с исследуемым материалом добавляем до 1,5 мл дистиллированной воды, приливаем 0,5 мл 20% ТХУ и центрифугируем 20 мин 3000 об/мин. К 0,5 мл центрифугата приливаем 0,1 мл 4 н. соляной кислоты. (В состав набора не входит, т. к. имеется в каждой лаборатории). Пробы охлаждаются в течение 30 мин при 4oC. В этот период полоска с нитритом из флакона N 2 измельчается и экстрагируется в объеме 2 мл дистиллированной воды. 0,1 мл этого раствора используется для диазотирования охлажденной пробы в течение 4 мин. Избыток нитрита натрия связывается 0,1 мл 1% аммония сульфаминовокислого. Для получения окрашенного азопроизводного через 2 мин прибавляют 0,2 мл NЭД. Полоски со стандартом анализируемого вещества измельчаются и приливается 1,5 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 20% ТХУ. Дальнейшее определение стандартного раствора проводилось в 0,5 мл центрифугата аналогично, как описано для исследуемых растворов. После прибавления NЭД стандартные и анализируемые пробы оставляются на один час в темноте и фотометрируются на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм при толщине слоя 1 см против контрольной пробы на реактивы.We add up to 1.5 ml of distilled water to the sample with the test material, add 0.5 ml of 20% TCA and centrifuge for 20 minutes at 3000 rpm. To 0.5 ml of a centrifugate, pour 0.1 ml of 4 N. of hydrochloric acid. (The kit is not included, because it is available in each laboratory). Samples are cooled for 30 min at 4 o C. During this period, a strip of nitrite from a bottle of N 2 is crushed and extracted in a volume of 2 ml of distilled water. 0.1 ml of this solution is used to diazotize the cooled sample for 4 minutes. Excess sodium nitrite binds to 0.1 ml of 1% ammonium sulfamic acid. To obtain a colored azo derivative, 0.2 ml of NED is added after 2 minutes. Strips with a standard analyte are crushed and poured into 1.5 ml of distilled water, 0.5 ml of 20% TCA. Further determination of the standard solution was carried out in 0.5 ml of a centrifugate in the same way as described for the studied solutions. After the addition of NED, the standard and analyzed samples are left for one hour in the dark and photometric on a photoelectric colorimeter at a wavelength of 540 nm at a layer thickness of 1 cm against the control sample for reagents.
Для определения ацетилированных производных первичных ароматических аминов необходимо проводить гидролиз после добавления соляной кислоты в течение 45 мин на кипящей водяной бане. To determine the acetylated derivatives of primary aromatic amines, it is necessary to carry out hydrolysis after adding hydrochloric acid for 45 minutes in a boiling water bath.
Результаты рассчитывают по формуле:
где C концентрация анализируемого амина, ммоль/л;
Dоп и Dст оптические плотности опытной и стандартной проб;
0,180 ммоль/л концентрация стандартного раствора.The results are calculated by the formula:
where C is the concentration of the analyzed amine, mmol / l;
D op and D article the optical density of the experimental and standard samples;
0.180 mmol / L standard solution concentration.
Пример 1. Определение сульфадимезина в растворе. Example 1. Determination of sulfadimezin in solution.
Приготовляют, как описано в инструкции, к набору реактивы. К 0,1 мл анализируемого раствора сульфадимезина приливают 1,4 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 20% ТХУ. Перемешивают, центрифугируют. К 0,5 мл центрифугата приливают по 0,1 мл 4 н. соляной кислоты, охлаждают 30 мин 4oC. В это время полоску с нитритом натрия измельчают и приливают к ней 2,0 мл дистиллированной воды. К охлажденным пробам приливают 0,1 мл раствора нитрита натрия для диазотирования. Через 4 мин приливают 0,1 мл аммония сульфаминовокислого, связывая избыток нитрита натрия и через 2 мин приливают 0,2 мл раствора NЭД, разведенного в 10 раз. Пробы помещают в темноту на час. Фотометрируют при длине волны 540 нм, с толщиной слоя 1 см. Полоску со стандартной дозой сульфадимезина (СД) 0,018 мкмоль измельчают, экстрагируют в 1,5 мл воды, приливают 0,5 мл ТХУ и далее определение проводят аналогично анализируемому веществу. Концентрация сульфадимезина составила 0,179±0,005 ммоль/л, что соответствует действительности, так как анализируемый раствор сульфадимезина был приготовлен растворением 5 мг в 100 мл (0,180 ммоль/л).Prepare, as described in the instructions, for a set of reagents. 1.4 ml of distilled water and 0.5 ml of 20% TCA are added to 0.1 ml of the analyzed sulfadimesin solution. Mix, centrifuged. To 0.5 ml of a centrifugate is added 0.1 ml of 4 N. hydrochloric acid, cooled for 30 min 4 o C. At this time, a strip of sodium nitrite is crushed and 2.0 ml of distilled water are added to it. 0.1 ml of sodium nitrite solution is poured to the cooled samples for diazotization. After 4 minutes, 0.1 ml of ammonium sulfamic acid is poured, linking the excess sodium nitrite, and after 2 minutes, 0.2 ml of NED diluted 10 times is added. Samples are placed in the dark for an hour. Photometry at a wavelength of 540 nm, with a layer thickness of 1 cm. A strip with a standard dose of sulfadimesin (SD) 0.018 μmol is ground, extracted with 1.5 ml of water, 0.5 ml of TCA are added and then the determination is carried out similarly to the analyte. The concentration of sulfadimezin was 0.179 ± 0.005 mmol / L, which is true, since the analyzed sulfadimesin solution was prepared by dissolving 5 mg in 100 ml (0.180 mmol / L).
Параллельно проводили определение концентрации сульфадимезина известным методом. Данные эксперимента приведены в таблице. In parallel, the concentration of sulfadimesin was determined by a known method. The experimental data are shown in the table.
Пример 2. Определение СД в сыворотке крови. Example 2. Determination of diabetes in blood serum.
Реактивы приготовляют согласно инструкции. К 0,1 мл сыворотки приливают 1,4 мл дистиллированной воды, 0,5 мл ТХУ. Пробы центрифугируют 30 мин 3000 об/мин. Центрифугат разливают по 0,5 мл в две пробирки, приливают по 0,1 мл 4 н. соляной кислоты. Одну из пробирок гидролизуют 45 мин на кипящей водяной бане. Все пробирки помещают на 30 мин в холодильник 4oC. После чего диазотируют 4 мин с 0,1 мл раствора натрия азотистокислого, приготовленного по инструкции из набора. Затем приливают 0,1 мл аммония сульфаминовокислого и через 2 мин по 0,2 мл раствора NЭД. Стандартные пробы сульфадимезина готовят аналогично, используя полоски со стандартной дозой сульфадимезина 0,018 мкмоль. Пробы помещают в темноту на один час и фотометрируют при длине волны 540 нм.Reagents are prepared according to the instructions. To 0.1 ml of serum is poured 1.4 ml of distilled water, 0.5 ml of TCA. Samples are centrifuged for 30 minutes at 3000 rpm. The centrifuge is poured into 0.5 ml in two tubes, poured into 0.1 ml of 4 N. of hydrochloric acid. One of the tubes is hydrolyzed for 45 minutes in a boiling water bath. All tubes are placed for 30 min in a refrigerator of 4 o C. After which they are diazotized for 4 min with 0.1 ml of sodium nitrate solution prepared according to the instructions from the kit. Then 0.1 ml of ammonium sulfamic acid is poured and after 2 minutes 0.2 ml of NED solution. Standard sulfadimezin samples are prepared in the same way using strips with a standard dose of sulfadimesin 0.018 μmol. Samples are placed in the dark for one hour and photometric at a wavelength of 540 nm.
В негидролизованных пробах определяют концентрацию свободного сульфадимезина в сыворотке в ммоль/л. Расчет концентрации осуществляется по формуле:
Оптические плотности параллельных негидролизованных проб анализируемой сыворотки: 0,198; 0,180; 0,240, в среднем 0,194±0,008 ммоль/л. Оптическая плотность стандарта сульфадимезина 0,179. Концентрация свободного сульфадимезина в сыворотке при расчете составила 0,195±0,008.In non-hydrolyzed samples, the concentration of free sulfadimesin in serum is determined in mmol / L. Calculation of concentration is carried out according to the formula:
Optical densities of parallel non-hydrolyzed samples of the analyzed serum: 0.198; 0.180; 0.240, on average 0.194 ± 0.008 mmol / L. The optical density of the standard sulfadimezin 0.179. The concentration of free sulfadimezin in serum in the calculation was 0.195 ± 0.008.
В гидролизованных пробах определяют концентрацию общего (ацетилированного и свободного) сульфадимезина в сыворотке крови обследуемого. Оптическая плотность гидролизованных проб составила: 0,311; 0,310; 0,325, в среднем 0,315±0,005, при оптической плотности стандарта 0,179. Концентрация общего сульфадимезина в сыворотке при расчете равнялась 0,317±0,005 ммоль/л. In hydrolyzed samples, the concentration of total (acetylated and free) sulfadimesin in the blood serum of the subject is determined. The optical density of the hydrolyzed samples was: 0.311; 0.310; 0.325, on average 0.315 ± 0.005, with an optical density of 0.179 standard. The concentration of total sulfadimezin in serum in the calculation was 0.317 ± 0.005 mmol / L.
Пример 3. Определение концентрации парааминобензойной кислоты (ПАБК) в растворе. Example 3. Determination of the concentration of para-aminobenzoic acid (PABA) in solution.
Анализируемый раствор ПАБК приготовлен растворением навески 1,37 мг в 100 мл, концентрация 0,100 ммоль/л. The analyzed PABA solution was prepared by dissolving a 1.37 mg sample in 100 ml, a concentration of 0.100 mmol / L.
Реактивы из набора готовят аналогично первым примером. К 0,1 мл анализируемого раствора ПАБК приливают 1,4 мл дистиллированной воды, 0,5 мл ТХУ. В центрифугате определяют концентрацию ПАБК по инструкции к набору. The reagents from the kit are prepared similarly to the first example. 1.4 ml of distilled water and 0.5 ml of TCA are added to 0.1 ml of the analyzed PABA solution. In a centrifugate, the concentration of PABA is determined according to the instructions for the kit.
В качестве стандарта служат полоски из набора, содержащие по 0,018 мкмоль парааминобензойной кислоты. Strips from the kit containing 0.018 µmol of para-aminobenzoic acid are used as a standard.
Концентрация анализируемого раствора составила 0,100±0,004, что соответствует действительности. The concentration of the analyzed solution was 0.100 ± 0.004, which is true.
Для сопоставления концентрацию ПАБК в анализируемом растворе определяли и известным методом. Данные эксперимента представлены в таблице. For comparison, the concentration of PABA in the analyzed solution was determined by a known method. The experimental data are presented in the table.
Пример 4. Определение бензидина в сыворотке крови. Example 4. Determination of benzidine in serum.
Растворы реактивов готовят аналогично, согласно инструкции: ТХУ количественно растворяют в 50 мл дистиллированной воды; аммоний сульфаминовокислый в 25 мл; NЭД разводят в 10 раз. К 0,1 мл сыворотки приливают 1,4 мл дистиллированной воды, 0,5 мл ТХУ. Центрифугируют. Центрифугат разливают по 0,5 мл в две пробирки, приливают по 0,1 мл 4 н. соляной кислоты. Одну из пробирок помещают на 45 мин на кипящую водяную баню для гидролиза ацетилированного бензидина. Все пробы ставят на 30 мин в холодильник 4oC. Диазотируют с 0,1 мл свежеприготовленного раствора нитрита натрия, полученного экстракцией полоски с натрием азотистокислым в 2,0 мл дистиллированной воды по инструкции. Через 4 мин приливают по 0,1 мл аммония сульфаминовокислого и через 2 мин по 0,2 мл раствора NЭД. Пробы тщательно перемешивают при каждом добавлении реактивов. Стандарт бензидина готовят аналогично пробам, используя полоски со стандартной дозой 0,018 мкмоль. Пробы ставят в темное место и через час фотометрируют.Reagent solutions are prepared similarly, according to the instructions: TCA is quantitatively dissolved in 50 ml of distilled water; ammonium sulfamic acid in 25 ml; NED is bred 10 times. To 0.1 ml of serum is poured 1.4 ml of distilled water, 0.5 ml of TCA. Centrifuged. The centrifuge is poured into 0.5 ml in two tubes, poured into 0.1 ml of 4 N. of hydrochloric acid. One of the tubes is placed for 45 minutes in a boiling water bath to hydrolyze acetylated benzidine. All samples are placed for 30 min in a refrigerator of 4 o C. Diazotized with 0.1 ml of a freshly prepared solution of sodium nitrite obtained by extraction of a strip with sodium nitrite in 2.0 ml of distilled water according to the instructions. After 4 minutes, 0.1 ml of ammonium sulfamic acid is poured and after 2 minutes, 0.2 ml of NED solution. Samples are thoroughly mixed with each addition of reagents. The benzidine standard is prepared similarly to samples using strips with a standard dose of 0.018 μmol. Samples are placed in a dark place and photometric after an hour.
В негидролизованных пробах определяют концентрацию свободного бензидина в сыворотке в ммоль/л. Расчет концентрации осуществляют по формуле:
Оптическая плотность опытных негидролизованных проб в среднем составила 0,375±0,008, стандарта 0,132. Концентрация свободного бензидина в сыворотке при расчете равнялась 0,512±0,010 ммоль/л.In non-hydrolyzed samples, the concentration of serum free benzidine in mmol / L is determined. Calculation of concentration is carried out according to the formula:
The optical density of the experimental non-hydrolyzed samples averaged 0.375 ± 0.008, standard 0.132. The concentration of free benzidine in serum in the calculation was 0.512 ± 0.010 mmol / L.
В гидролизованных пробах определяют концентрацию общего бензидина в сыворотке крови. Средняя оптическая плотность гидролизованных проб составила 0,444±0,009, стандарта 0,132. Концентрация общего бензидина в сыворотке при расчете равнялась 0,606±0,012 ммоль/л. In hydrolyzed samples, the concentration of total benzidine in the blood serum is determined. The average optical density of hydrolyzed samples was 0.444 ± 0.009, standard 0.132. The concentration of total benzidine in serum in the calculation was 0.606 ± 0.012 mmol / L.
Согласно данным, полученным авторами при испытании предлагаемого набора с различными соединениями, относящимися к первичным ароматическим аминам, отмечается повышение точности метода при хорошей сопоставимости и известным способом (таблица). Кроме того, метод позволяет долго сохранять реактивы и использовать их на 100% по мере надобности. По известному методу реактивы готовятся в больших объемах, в частности нитрит натрия и стандарты первичных ароматических аминов. Уменьшение их объемов ведет к снижению точности навески, хранение этих растворов не рекомендуется, так как ведет к распаду нитрита натрия или выпадению в осадок первичного ароматического амина. According to the data obtained by the authors when testing the proposed kit with various compounds related to primary aromatic amines, there is an increase in the accuracy of the method with good comparability and in a known manner (table). In addition, the method allows you to store reagents for a long time and use them 100% as needed. According to the known method, reagents are prepared in large volumes, in particular sodium nitrite and standards of primary aromatic amines. Reducing their volumes leads to a decrease in the accuracy of the sample, the storage of these solutions is not recommended, as it leads to the decomposition of sodium nitrite or precipitation of the primary aromatic amine.
Таким образом, предлагаемый авторами набор позволяет съэкономить 80% затрат на реактивы нитрита натрия и стандартных растворов. Набор предоставляет дефицитные реактивы: аммоний сульфаминовокислый и N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорид, полный подбор реактивов, отсутствие необходимости взвешивания, простота приготовления растворов, надежное их хранение, полную инструкцию при выполнении определения, что экономит 50% рабочего времени опытного специалиста. Экономическая эффективность от предложенного авторами набора на проведение 1000 анализов в год составит приблизительно 0,5 ставки лаборанта. Thus, the kit proposed by the authors allows you to save 80% of the cost of sodium nitrite reagents and standard solutions. The kit provides scarce reagents: ammonium sulfamic acid and N- (I) -naphthylenediamine dihydrochloride, a complete selection of reagents, no need for weighing, ease of preparation of solutions, their reliable storage, complete instructions for determination, which saves 50% of the working time of an experienced specialist. Cost-effectiveness of the proposed set of authors for 1000 analyzes per year will be approximately 0.5 laboratory assistant rates.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5056564 RU2097762C1 (en) | 1992-05-28 | 1992-05-28 | Reagent kit for determination of primary aromatic amines in solutions and biological fluids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5056564 RU2097762C1 (en) | 1992-05-28 | 1992-05-28 | Reagent kit for determination of primary aromatic amines in solutions and biological fluids |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2097762C1 true RU2097762C1 (en) | 1997-11-27 |
Family
ID=21610500
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5056564 RU2097762C1 (en) | 1992-05-28 | 1992-05-28 | Reagent kit for determination of primary aromatic amines in solutions and biological fluids |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2097762C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001051906A2 (en) * | 1999-12-30 | 2001-07-19 | Institut Molekulyarnoi Biologii Im. V.A. Engelgardta Rossiiskoi Akademii Nauk | Method for quantitative fluid analysis and device for the implementation thereof |
-
1992
- 1992-05-28 RU SU5056564 patent/RU2097762C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Буловская Л.Н. и др. Определение фенотипа N-ацетилтрансферазной активности. Лабораторное дело. - 1989, N 10, с.28 - 30. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001051906A2 (en) * | 1999-12-30 | 2001-07-19 | Institut Molekulyarnoi Biologii Im. V.A. Engelgardta Rossiiskoi Akademii Nauk | Method for quantitative fluid analysis and device for the implementation thereof |
| WO2001051906A3 (en) * | 1999-12-30 | 2002-01-24 | Inst Molekulyarnoi Biolog Im V | Method for quantitative fluid analysis and device for the implementation thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Walters et al. | An ultramicromethod for the determination of conjugated and total bilirubin in serum or plasma | |
| Mohun et al. | Simple methods for measuring serum levels of the glutamic-oxalacetic and glutamic-pyruvic transaminases in routine laboratories | |
| US3485587A (en) | Protein indicator | |
| US4604365A (en) | Immunoprecipitation assay | |
| FI114342B (en) | Method for determination of urinary protein and creatinine | |
| US4078892A (en) | Novel means and method for diagnostic quantitation of serum or plasma bilirubin | |
| EP0222341B1 (en) | A method for immunoassay and reagents therefor | |
| Li et al. | Rapid enzymatic determination of urinary oxalate. | |
| US3890099A (en) | Colorimetric assay for urea | |
| Martinek et al. | Simplified estimation of leucine aminopeptidase (LAP) activity | |
| CN113933502B (en) | Detection card and kit for quantitatively detecting folic acid by immunofluorescence chromatography | |
| US3528777A (en) | Process and compositions for determination of uric acid in blood serum | |
| RU2097762C1 (en) | Reagent kit for determination of primary aromatic amines in solutions and biological fluids | |
| US3558278A (en) | Determination of albumin | |
| CN106546729B (en) | Novel process method for removing serum matrix effect in dry immunofluorescence quantitative detection | |
| Saifer et al. | Rapid system of microchemical analysis for the clinical laboratory | |
| US4211531A (en) | Colorimetric cholesterol assay | |
| Wilson et al. | The automated measurement of ascorbic acid in serum and urine | |
| EP0079962B1 (en) | Immunoprecipitation assay | |
| RU2300771C2 (en) | Method for determination of hemoglobin in biological fluids | |
| Liedtke et al. | Automated calmagite compleximetric measurement of magnesium in serum, with sequential addition of EDTA to eliminate endogenous interference. | |
| US3409508A (en) | Method for analysis of urea in biological fluids | |
| RU2163019C2 (en) | Method for qualitative and quantitative determination of protein in biological fluids | |
| RU2268476C2 (en) | Method for quantitative detecting protein in biological liquids | |
| AF et al. | Simple methods for measuring serum levels of the glutamic-oxalacetic and glutamic-pyruvic transaminases in routine laboratories. |