RU2088934C1

RU2088934C1 - Method for prognosticating inflammatory complications after extraction of cataract

Info

Publication number: RU2088934C1
Application number: RU93032704A
Authority: RU
Inventors: Э.В. Егорова; И.Э. Иошин; Т.И. Власова; А.И. Толчинская; Л.В. Ковальчук; Л.В. Панковская; Т.А. Крайнова
Original assignee: Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза"
Priority date: 1993-06-23
Filing date: 1993-06-23
Publication date: 1997-08-27

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: before performing cataract extraction, patient's lacrimal fluid is subjected to analysis in order to determine individual level of tumor necrosis α factor of that specific patient. If factor concentration is at least 4.8 ng/ml, development of inflammatory postoperative complications is prognosticated. EFFECT: higher precision of immunological prognosis.

Description

Изобретение относится к медицине, в частности офтальмологии, и предназначено для предоперационной диагностики возможности воспалительных осложнений после экстракции катаракты. The invention relates to medicine, in particular ophthalmology, and is intended for preoperative diagnosis of the possibility of inflammatory complications after cataract extraction.

Известен способ прогнозирования воспалительных осложнений (авт. св. N 1649442 от 15.05.91), взятый нами за прототип, заключающийся в определении в слезной жидкости больных с увеальной катарактой до операции уровня S-антител. Обнаружение S-антител в концентрации 1:32 и более является неблагоприятным фактором, который обусловливает высокий риск воспалительных осложнений после экстракции катаракты. Однако, в случаях катаракты другой этиологии (глаукомы, диабет) при отсутствии S-антител в слезной жидкости больных до операции отмечается высокий процент воспалительных осложнений, что отражает недостаточную информативность способа. A known method for predicting inflammatory complications (ed. St. N 1649442 from 05.15.91), taken as a prototype, which consists in determining the level of S antibodies in the lacrimal fluid of patients with uveal cataract before surgery. Detection of S-antibodies at a concentration of 1:32 or more is an unfavorable factor that causes a high risk of inflammatory complications after cataract extraction. However, in cases of cataract of another etiology (glaucoma, diabetes) in the absence of S-antibodies in the lacrimal fluid of patients before surgery, a high percentage of inflammatory complications is noted, which reflects the lack of information of the method.

Частота воспалительных осложнений после экстракции осложненной катаракты при сочетанной патологии глаза (диабет, глаукома, пигментная дистрофия сетчатки) по данным литературы сохраняется на высоком уровне 3-12% Доказана значительная роль цитокинов в регуляции иммунного ответа и развитии послеоперационных осложнений. The frequency of inflammatory complications after extraction of complicated cataracts with a combined eye pathology (diabetes, glaucoma, retinal pigment dystrophy) according to the literature remains at a high level of 3-12%. A significant role of cytokines in the regulation of the immune response and the development of postoperative complications is proved.

Целью изобретения является отбор до операции больных с высоким риском воспалительных послеоперационных осложнений и определение тактики предоперационной противовоспалительной терапии для снижения риска осложнений; повышение точности способа иммунологического обследования больных. The aim of the invention is the selection before surgery of patients with a high risk of inflammatory postoperative complications and the determination of tactics of preoperative anti-inflammatory therapy to reduce the risk of complications; improving the accuracy of the method of immunological examination of patients.

Цель достигается тем, что в способе прогнозирования воспалительных осложнений после экстракции катаракты проводят иммунологическое исследование слезной жидкости с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) на наличие одного из цитокинов фактора некроза опухолей α человека ФНО_α и при обнаружении в концентрации не менее 4,8 нг/мл прогнозируют развитие воспалительного осложнения.The goal is achieved in that in a method for predicting inflammatory complications after cataract extraction, an immunological study of the lacrimal fluid is carried out using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence of one of the cytokines of tumor necrosis factor α human TNF _α and when detected at a concentration of at least 4.8 ng / ml predict the development of inflammatory complications.

Способ осуществляют следующим образом. The method is as follows.

Забор слезной жидкости проводится меланжером за 1 сут до операции. Постановка реакции осуществляется на стандартном планшете из 96 микрокювет с помощью иммуноферментного набора на основе моноклональных антител к ФНОa человека (ВНИИ особо чистых препаратов, г. Санкт-Петербург). В начале на стенки полистероловых кювет наносят 1-е антитела к ФНО_α в разведении 1:100 и фиксируют их с помощью буфера для иммобилизации антител в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем удаляют из ячеек жидкость путем отсасывания и промывают плату отмывочным буфером. Исследуемые образцы слезной жидкости вносят в лунки планшетов в разведении 1:100 и 1:200 (не менее 2-х параллелей) в объеме 50 мкл. В ячейки A₂ A₁₀ и B₂ B₁₀ вносят по 50 мкл стандарта ФНО_α, раститрованного кратно двум в буфере набора, начиная с концентрации 4 нг/мл. Инкубируют микроплату 1 ч при комнатной температуре и непрерывном встряхивании, после чего вновь отмывают буферным раствором.The tear fluid is taken by the melanger 1 day before the operation. The reaction is carried out on a standard plate of 96 microcuvettes using an enzyme-linked immunosorbent assay based on monoclonal antibodies to human TNF-a (All-Russian Research Institute for High-Purity Preparations, St. Petersburg). At the beginning, the first antibodies to TNF _α at a dilution of 1: 100 are applied to the walls of polystyrene cuvettes and fixed with a buffer to immobilize antibodies for 1 h at room temperature. Then, the liquid is removed from the cells by suction and the board is washed with washing buffer. The studied samples of tear fluid are added to the wells of the plates at a dilution of 1: 100 and 1: 200 (at least 2 parallels) in a volume of 50 μl. In cell A ₁₀ and A ₂ B ₂ B ₁₀ is made by 50 l of standard TNF _α, rastitrovannogo multiple of two buffer sets, starting with a concentration of 4 ng / ml. The microplate was incubated for 1 h at room temperature and continuously shaken, after which it was again washed with buffer solution.

Затем в каждую ячейку вносят по 50 мкл 2-ых антител к ФНО_α в разведении 1:100, лечебным ферментом (пероксидаза хрена) и вновь инкубируют 1 ч при комнатной температуре и встряхивании. Отмывают микроплату и дважды промывают планшету дистиллятом.Then, 50 μl of 2 antibodies to TNF _α at a dilution of 1: 100, with a treatment enzyme (horseradish peroxidase) are added to each well and incubated again for 1 h at room temperature and shaken. Wash the microplate and rinse the plate twice with distillate.

Готовят раствор ОРД (ортофенил диалина) и 3% H₂O₂ и вносят по 50 мкл этого раствора в каждую ячейку. Инкубируют 10-15 мин в темноте при комнатной температуре. Реакцию останавливают 1-молярным раствором H₂SO₄, внеся в ячейку по 50 мкл. Определяют оптическую плотность раствора при длине волне 490 нм на любом автоматическом считывателе, установив O поглощения по ячейке A. Составляют калибровочную кривую по стандарту ФНО_α и рассчитывают по ней концентрацию монокина в образце.A solution of ORD (orthophenyl dialine) and 3% H ₂ O _{2 is} prepared and 50 μl of this solution is added to each well. Incubated for 10-15 minutes in the dark at room temperature. The reaction is stopped with a 1 molar solution of H ₂ SO ₄ , adding 50 μl to the cell. The optical density of the solution is determined at a wavelength of 490 nm on any automatic reader by setting the absorbance O for cell A. A calibration curve is prepared according to the TNF standard _α and the monokine concentration in the sample is calculated from it.

Обоснованием для предлагаемого способа являются результаты, полученные при обследовании 50 больных с осложненной катарактой на фоне глаукомы, диабета и др. The rationale for the proposed method are the results obtained from the examination of 50 patients with complicated cataracts against the background of glaucoma, diabetes, etc.

По известному способу (определение уровней S-антител в слезной жидкости) неблагоприятный прогноз воспалительных осложнений был отменен у 4-х больных (8%) из 50. By a known method (determination of S-antibody levels in the tear fluid), an unfavorable prognosis of inflammatory complications was canceled in 4 patients (8%) out of 50.

После неосложненной экстракции катаракты у 50 больных в 13 случаях (26%) отмечены воспалительные осложнения в виде экссудативной реакции с появлением феномена Тиндаля и нитей фибрина во влаге передней камеры. After uncomplicated cataract extraction in 50 patients in 13 cases (26%), inflammatory complications were noted in the form of an exudative reaction with the appearance of the Tyndall phenomenon and fibrin filaments in the moisture of the anterior chamber.

Анализ результатов исследования уровня ФНО_α в слезной жидкости больных до операции, что у 11 (85%) больных из 13 с воспалительными осложнениями в слезной жидкости обнаруживался ФНО_α в концентрации не менее 4,8 нг/мл.Analysis results of the study of TNF _α levels in the tear fluid of patients before surgery, that 11 (85%) of 13 patients with inflammatory complications in the tear fluid detectable TNF _α at a concentration of not less than 4.8 ng / ml.

У 37 больных без воспалительных осложнений ФНО_α в слезной жидкости либо не определен, либо концентрация была ниже 4,8 нг/мл, достоверно меньше, чем у больных с воспалительным осложнениями (P<0,05).In 37 patients without inflammatory complications TNF _α in the tear fluid or is undefined, or concentration was below 4.8 ng / ml, significantly lower than in patients with inflammatory complications (P <0,05).

Пример 1. Больная К. Диагноз: сахарный диабет II типа, осложненная катаракта ОД. До операции острота зрения ОД 0,01 н/к. Example 1. Patient K. Diagnosis: type II diabetes mellitus, complicated cataract OD. Before surgery, visual acuity OD 0.01 n / a.

До операции показатели в слезе: концентрация ФНО_α 5 нг/мл. Проведена неосложненная экстракция катаракты с имплантацией ИОЛ (Т26).Before surgery, indicators in a tear: TNF concentration _α 5 ng / ml. Uncomplicated cataract extraction with IOL implantation (T26) was performed.

В послеоперационном периоде диффузный отек роговицы, десцеметит, нити фибрина во влаге п/камеры. Таким образом высокая концентрация (2,0 нг/мл) ФНО_α до операции отражала высокий риск развития воспалительных осложнений после экстракции катаракты.In the postoperative period, diffuse corneal edema, descemetitis, fibrin filaments in the moisture of the camera. Thus, a high concentration (2.0 ng / ml) of TNF _α before surgery reflected a high risk of developing inflammatory complications after cataract extraction.

Пример 2. Больная П. Диагноз: оперированная глаукома, осложненная катаракта OS. До операции острота зрения OS 0,04 н/к. До операции показатели в слезе: концентрация ФНО_α 0,5 нг/мл. Проведена неосложненная экстракция катаракты с имплантацией ИОЛ (Т26). С первого дня после операции - арреактивное течение, острота зрения через 7 дней после операции 0,4 сф - 1,5 0,8.Example 2. Patient P. Diagnosis: operated glaucoma, complicated cataract OS. Prior to surgery, visual acuity OS 0.04 n / a. Before surgery, indicators in a tear: concentration of TNF _α 0.5 ng / ml. Uncomplicated cataract extraction with IOL implantation (T26) was performed. From the first day after surgery - an arreactive course, visual acuity 7 days after surgery 0.4 sf - 1.5 0.8.

Таким образом при концентрации ФНО_α менее 4,8 нг/мл, а именно 0,5 нг/мл, имело место арреактивное течение п/о периода.Thus, when the concentration of TNF _α less than 4.8 ng / ml, namely 0.5 ng / ml, there was an arreactive flow p / o period.

Способ позволяет осуществить предоперационную иммунодиагностику риска развития воспалительных осложнений после экстракции катаракты. Это имеет важное значение для предоперационной подготовки и выборе метода экстракции катаракты. The method allows for preoperative immunodiagnostics of the risk of developing inflammatory complications after cataract extraction. This is important for preoperative preparation and the choice of cataract extraction method.

Положительный эффект от предлагаемого способа заключается в повышении точности прогноза воспалительных осложнений. Так, по данным способа, взятого за прототип, прогноз осложнений составил 31% (из 13 больных с воспалительными осложнениями у 4 отмечено повышенное содержание S-антител), в то время как при определении уровня ФНО_α в указанной концентрации прогноз развития осложнений составил 85% (у 11 больных из 13 с послеоперационными осложнениями).The positive effect of the proposed method is to increase the accuracy of the prognosis of inflammatory complications. So, according to the method taken as a prototype, the prognosis of complications was 31% (out of 13 patients with inflammatory complications, 4 had a high content of S antibodies), while when determining the level of TNF _α in the indicated concentration, the prognosis for the development of complications was 85% (in 11 patients out of 13 with postoperative complications).

Claims

A method for predicting inflammatory complications after cataract extraction, involving an immunological study, characterized in that the content of human necrosis factor α in a lacrimal fluid is determined and, at a concentration of at least 4.8 ng / ml, the development of inflammatory complications is predicted.